專利名稱：有關(guān)血管生成疾病的治療組合的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及治療有關(guān)主動血管生成疾病的方法、可用于有關(guān)血管生成疾病治療的組合物和該組合物在藥物制備中的用途，該藥物用于有關(guān)主動血管生成疾病的治療。在本發(fā)明的一個方面中，該方法涉及將一氧化氮抑制劑結(jié)合誘發(fā)血管損傷的化合物對哺乳動物給藥。
通過血管生成作用形成新的脈管系統(tǒng)是若干疾病的關(guān)鍵病理特征(J Folkman《新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志》(New England Journal ofMedicine)333，1757-1763，1995)。例如，實體瘤為了生長必須發(fā)展它自己的血液供給，這是氧和養(yǎng)分賴以供應(yīng)的關(guān)鍵；如果這種血液供給被機械地切斷，腫瘤將壞死。新血管形成也是牛皮癬中的皮膚損傷、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者關(guān)節(jié)中的侵襲性血管翳和動脈粥樣硬化斑的臨床特征。視網(wǎng)膜的新血管形成是黃斑變性和糖尿病性視網(wǎng)膜病的病理。在所有這些疾病中，通過破壞新形成的血管內(nèi)皮而逆轉(zhuǎn)新血管形成預(yù)期具有有益的治療作用。
某些化合物已經(jīng)顯示對新形成的實體瘤內(nèi)皮具有血管損傷活性。這些試劑例如包括combretastatin A4磷酸酯(Dark等《癌癥研究》(Cancer Research)57，1829-1834，1997)、combretastatin類似物(例如Ohsumi等在《醫(yī)藥化學(xué)雜志》(J Med Chem)41，3022-32，1998中所述的那些)、黃酮乙酸(例如5，6-二甲基呫噸酮乙酸(Zwi《病理學(xué)》(Pathology)26，161-9，1994))、秋水仙堿(Baguley等《歐洲癌癥雜志》(Eur J Cancer)27，482-7，1991)。不過，有些腫瘤對這些試劑具有抗藥性。
對血管損傷劑具有相對抗藥性的腫瘤的一個特征是它們產(chǎn)生大量一氧化氮的能力。一氧化氮在腫瘤生長中的作用是不清楚的，已有報道說既有腫瘤刺激作用，也有腫瘤抑制作用(Chinje和Stratford《生物化學(xué)測定》(Essays Biochem.)32，61-72，1997)。有人提出5，6-二甲基呫噸酮乙酸的抗腫瘤作用在部分程度上是由一氧化氮的產(chǎn)生所介導(dǎo)的(Thompsen等《癌癥化療藥理學(xué)》(Cancer Chemother Pharmacol.)31，151-5，1992)。
我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，通過與一氧化氮在哺乳動物系統(tǒng)內(nèi)的形成或作用抑制劑治療結(jié)合，能夠提高血管損傷劑的功效。
確切地說，通過與一氧化氮合成酶抑制劑結(jié)合，能夠提高血管損傷劑的功效，這種酶從精氨酸中產(chǎn)生一氧化氮。確切地說，通過用一氧化氮合成酶抑制劑治療，提高血管損傷劑對抗相對耐受其作用的腫瘤的功效。
因此在本發(fā)明的一個方面，我們提供患有有關(guān)主動血管生成的疾病的哺乳動物治療方法，該方法包括治療量或亞治療量的血管損傷劑以及足以增加血管損傷劑作用的量的一氧化氮合成酶抑制劑的聯(lián)合給藥。該方法可用于癌癥(尤其是實體瘤)、牛皮癬、糖尿病性腎病、黃斑變性、動脈粥樣硬化和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等疾病的治療。
血管損傷劑和一氧化氮合成酶抑制劑既可以一起給藥，也可以單獨給藥。該方法既可以用作單一療法，也可以與其他治療結(jié)合。關(guān)于實體瘤的治療，本發(fā)明化合物既可以與放射療法結(jié)合給藥，也可以與其他抗腫瘤物質(zhì)結(jié)合給藥，例如選自有絲分裂抑制劑，例如長春花堿、紫杉醇和docetaxel；烷化劑，例如順鉑、卡鉑和環(huán)磷酰胺；抗代謝物，例如5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷和羥基脲；嵌入劑，例如阿霉素和博萊霉素；酶，例如門冬酰胺酶；拓撲異構(gòu)酶抑制劑，例如依托泊苷、托泊替康和伊立替康；胸苷酸合成酶抑制劑，例如raltitrexed；生物反應(yīng)改性劑，例如干擾素；抗體，例如edrecolomab；和抗激素，例如他莫昔芬。這樣的聯(lián)合治療可以涉及各治療組分的同時或先后用藥。
血管損傷劑和一氧化氮合成酶抑制劑既可以通過相同的途徑、也可以通過不同的途徑給藥。這樣的給藥途徑包括經(jīng)口、頰、鼻、局部、直腸和腸胃外給藥。該方法的每種組分、即血管損傷劑和一氧化氮合成酶抑制劑可以獨立地以適合于預(yù)期給藥途徑的劑型給藥，這樣的劑型可以利用常規(guī)賦形劑、按常規(guī)方式加以制備。例如關(guān)于口服給藥，藥物組合物可以采取片劑或膠囊劑的形式。關(guān)于鼻給藥或通過吸入給藥，化合物可以適宜地分散為粉末或者分散在溶液中。局部給藥可以是軟膏劑或霜劑，直腸給藥可以是栓劑。關(guān)于腸胃外注射(包括靜脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、血管內(nèi)或輸注)，組合物例如可以采取無菌的溶液、懸液或乳劑的形式。每種組分的優(yōu)選給藥途徑將取決于所治療的疾病。關(guān)于實體瘤，各組分可以有利地一起或單獨分散為靜脈內(nèi)輸液。
血管損傷劑是誘發(fā)新生成的、而不是既定的脈管系統(tǒng)選擇性損傷的化合物。很多這樣的化合物是已知的，可以認為本發(fā)明普遍適用于這樣的試劑。
這樣的試劑包括微管蛋白結(jié)合劑，例如combretastatin及其藥物前體、colchinol及其藥物前體和(Z)-2-甲氧基-5-[2-(3，4，5-三甲氧基苯基)乙烯基]苯胺及其藥物前體；TNF-α誘導(dǎo)劑，例如呫噸酮乙酸，例如二甲基呫噸酮乙酸；和定向于脈管系統(tǒng)的抗體。
可以采用各種抑制一氧化氮在哺乳動物系統(tǒng)內(nèi)的形成或作用的化合物。具體來說，一氧化氮合成酶抑制劑是那些抑制任意形式一氧化氮合成酶的化合物。這樣的試劑包括精氨酸、鳥氨酸、賴氨酸與瓜氨酸的衍生物、S-烷基硫脲和氨基胍類。若一氧化氮合成酶抑制劑是精氨酸的衍生物，它例如可以是NG-取代的L-精氨酸，選自NG-硝基-L-精氨酸及其烷基酯、NG-甲基-L-精氨酸和NG-氨基-L-精氨酸。若一氧化氮合成酶抑制劑是鳥氨酸的衍生物，它例如可以是L-N6-(1-亞氨基乙基)鳥氨酸。若一氧化氮合成酶抑制劑是賴氨酸的衍生物，它例如可以是L-N6-(1-亞氨基乙基)賴氨酸。若一氧化氮合成酶抑制劑是瓜氨酸的衍生物，它例如可以是L-硫代瓜氨酸、L-高硫代瓜氨酸或S-烷基硫代瓜氨酸，例如S-甲基-L-硫代瓜氨酸。
本發(fā)明在進一步的實施方式中提供用于有關(guān)主動血管生成的疾病治療的組合物。本發(fā)明的組合物包含血管損傷劑與一氧化氮合成酶抑制劑的組合，其中血管損傷劑和一氧化氮合成酶抑制劑都是如上文所定義的。
因此，組合物例如可以含有combretastatin衍生物、秋水仙堿衍生物、colchinol衍生物、呫噸酮乙酸衍生物或定向血管的抗體與一氧化氮合成酶抑制劑的組合，后者例如精氨酸衍生物、鳥氨酸衍生物、賴氨酸衍生物、瓜氨酸衍生物、S-烷基硫脲或氨基胍。
可以存在于組合物中的血管損傷劑的特例包括combretastatinA4及其藥物前體(例如combretastatin A4磷酸酯)、(Z)-2-甲氧基-5-[2-(3，4，5-三甲氧基苯基)乙烯基]苯胺及其藥物前體、N-乙酰colchinol及其藥物前體(例如N-乙酰colchinol-O-磷酸酯)和5，6-二甲基呫噸酮乙酸。
可以存在于組合物中的一氧化氮合成酶抑制劑的特例包括精氨酸、鳥氨酸、賴氨酸與瓜氨酸的衍生物、S-烷基硫脲類、氨基胍類和氨基吡啶類。若一氧化氮合成酶抑制劑是精氨酸的衍生物，它例如可以是NG-取代的L-精氨酸，選自NG-硝基-L-精氨酸及其烷基酯、NG-甲基-L-精氨酸和NG-氨基-L-精氨酸。若一氧化氮合成酶抑制劑是鳥氨酸的衍生物，它例如可以是L-N6-(1-亞氨基乙基)鳥氨酸。若一氧化氮合成酶抑制劑是賴氨酸的衍生物，它例如可以是L-N6-(1-亞氨基乙基)賴氨酸。若一氧化氮合成酶抑制劑是瓜氨酸的衍生物，它例如可以是L-硫代瓜氨酸、L-高硫代瓜氨酸或S-烷基硫代瓜氨酸，例如S-甲基-L-硫代瓜氨酸。若一氧化氮合成酶抑制劑是氨基吡啶，它例如可以是2-氨基-4-甲基吡啶。
組合物可用于治療有關(guān)主動血管生成的疾病，例如實體瘤、牛皮癬、糖尿病性腎病、黃斑變性、動脈粥樣硬化和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
每種組分的相對比例將根據(jù)各血管損傷劑或一氧化氮合成酶抑制劑的特性和所治療的疾病加以確定。
組合物可以包括藥學(xué)上可接受的賦形劑，根據(jù)預(yù)期給藥途徑和標準藥學(xué)實踐進行選擇。組合物可以采取適合于經(jīng)口、頰、鼻、局部、直腸或腸胃外給藥的劑型，可以利用常規(guī)賦形劑、按常規(guī)方式加以制備。例如關(guān)于口服給藥，藥物組合物可以采取片劑或膠囊劑的形式。關(guān)于鼻給藥或通過吸入給藥，化合物可以適宜地分散為粉末或者分散在溶液中。局部給藥可以是軟膏劑或霜劑，直腸給藥可以是栓劑。關(guān)于腸胃外注射(包括靜脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、血管內(nèi)或輸注)，組合物例如可以采取無菌的溶液、懸液或乳劑的形式。
特定疾病的預(yù)防或治療所需本發(fā)明化合物的劑量將因各組分的特性、給藥途徑、劑型和疾病的嚴重性以及化合物是單獨給藥還是與另一種藥物結(jié)合給藥而異。因此，精確劑量將由主治醫(yī)師決定，將取決于組合物中特定的血管損傷劑和NO合成酶抑制劑。不過，所面對的血管損傷劑的劑量例如在10-1000mg/m2體表面積的范圍內(nèi)，優(yōu)選為20-200mg/m2，一氧化氮抑制劑的劑量例如1-1000mg/m2，優(yōu)選為5-500mg/m2。血管損傷劑例如作為無菌注射溶液的單位劑型例如通常含有40-400mg活性成分。一氧化氮合成酶抑制劑例如作為無菌注射溶液的單位劑型例如通常含有10-1000mg活性成分。含有血管損傷劑和一氧化氮合成酶抑制劑例如作為無菌注射溶液的單位劑型例如通常含有40-400mg血管損傷劑和10-1000mg一氧化氮合成酶抑制劑。
本發(fā)明組合物既可以作為單一療法給藥，也可以與其他治療結(jié)合給藥。關(guān)于實體瘤的治療，本發(fā)明化合物既可以與放射療法結(jié)合給藥，也可以與其他抗腫瘤物質(zhì)結(jié)合給藥，例如選自有絲分裂抑制劑，例如長春花堿、紫杉醇和docetaxel；烷化劑，例如順鉑、卡鉑和環(huán)磷酰胺；抗代謝物，例如5氟尿嘧啶、阿糖胞苷和羥基脲；嵌入劑，例如阿霉素和博萊霉素；酶，例如門冬酰胺酶；拓撲異構(gòu)酶抑制劑，例如依托泊苷、托泊替康和伊立替康；胸苷酸合成酶抑制劑，例如raltitrexed；生物反應(yīng)改性劑，例如干擾素；抗體，例如edrecolomab；和抗激素，例如他莫昔芬。這樣的聯(lián)合治療可以涉及各治療組分的同時或先后用藥。
在本發(fā)明進一步的實施方式中，我們提供本發(fā)明組合物在藥物制備中的用途，該藥物用于有關(guān)主動血管生成的疾病的治療。
現(xiàn)在將通過下列實施例對發(fā)明進行闡述，其中將生物測定用于闡述發(fā)明壞死的誘發(fā)將攜帶CaNT或SaS腫瘤的小鼠用供試化合物處理，24小時后切除腫瘤，固定在福爾馬林中，包埋在石蠟中，制作切片，用蘇木精和曙紅染色?；趬乃烂娣e對切片評分如下
對照腫瘤的平均得分是2.0(CaNT)和1.0(SaS)。
實施例1本測定中，可以比較給定劑量單獨給藥的血管損傷劑或一氧化氮合成酶抑制劑的作用與兩種試劑的組合的作用。表1combretastatin A4磷酸酯(CA4P)與L-NG-硝基精氨酸(L-NNA)共同給藥對SaS腫瘤的作用增強
實施例2表2combretastatin A4磷酸酯(CA4P)與2-氨基-4-甲基吡啶(AMP)共同給藥對SaS腫瘤的作用增強
實施例3用熒光染料測量的對抗腫瘤脈管系統(tǒng)的活性下列實驗進一步證明化合物破壞腫瘤脈管系統(tǒng)的能力。
按照Smith等人的方法，利用熒光染料Hoechst33342測量攜帶CaNT腫瘤的小鼠中的腫瘤功能性血管體積(《英國癌癥雜志》(Brit J Cancer)57，247-253，1988)。將熒光染料溶解在鹽水中，濃度為6.25mg/ml，腹膜內(nèi)藥物處理后24小時按10mg/kg進行靜脈內(nèi)注射。一分鐘后，殺死動物，切除腫瘤，冷凍；在3種不同的水平下切成10μm切片，利用裝配有表熒光(epifluorescence)的0lympus顯微鏡在UV照明下觀察。通過熒光輪廓鑒別出血管，利用基于Chalkley所述的點評分系統(tǒng)量化血管體積(《國家癌癥研究院雜志》(J Natl Cancer Inst)4，47-53，1943)。所有估計結(jié)果都是在計數(shù)在3種不同水平下切制的切片的最少100個視野的基礎(chǔ)上作出的。
表3combretastat in A4磷酸酯(CA4P)與L-NG-硝基精氨酸(L-NNA)共同給藥對CaNT腫瘤的作用增強
權(quán)利要求
1.用于治療有關(guān)主動血管生成的疾病的組合物，包含血管損傷劑以及一氧化氮在哺乳動物系統(tǒng)中的形成或作用抑制劑。
2.用于損傷通過血管生成所形成的新脈管系統(tǒng)的組合物，包含血管損傷劑與一定量的一氧化氮合成酶抑制劑的組合，該抑制劑的量足以增加血管損傷劑的作用。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的組合物，其中所述血管損傷劑選自微管蛋白結(jié)合劑、TNF-α誘導(dǎo)劑或定向于脈管系統(tǒng)的抗體。
4.根據(jù)權(quán)利要求2和3的組合物，其中一氧化氮合成酶抑制劑選自精氨酸、鳥氨酸、賴氨酸、瓜氨酸、S-烷基硫脲類或氨基胍的衍生物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的組合物，其中一氧化氮合成酶抑制劑是NG-取代的L-精氨酸，選自NG-硝基-L-精氨酸及其烷基酯、NG-甲基-L-精氨酸和NG-氨基-L-精氨酸。
6.根據(jù)權(quán)利要求4的組合物，其中鳥氨酸的衍生物是L-N6-(1-亞氨基乙基)-鳥氨酸。
7.根據(jù)權(quán)利要求4的組合物，其中賴氨酸的衍生物是L-N6-(1-亞氨基乙基)-賴氨酸。
8.根據(jù)權(quán)利要求4的組合物，其中瓜氨酸的衍生物選自L-硫代瓜氨酸、L-高硫代瓜氨酸或S-烷基硫代瓜氨酸，特別是S-甲基-L-硫代瓜氨酸。
9.根據(jù)權(quán)利要求1至8任意一項的組合物，還包含適合于給藥方法的藥學(xué)上可接受的賦形劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求1至9任意一項的組合物，其中該組合物是試劑盒的形式，試劑盒的一部分含有血管損傷劑，試劑盒的第二部分含有一氧化氮抑制劑。
11.含有血管損傷劑的組合物用于制備藥物的用途，所述藥物用于治療有關(guān)主動血管生成的疾病，其特征在于該藥物還含有一定量的一氧化氮抑制劑，該抑制劑的量足以增加血管損傷劑的作用。
12.治療患有有關(guān)主動血管生成的疾病的哺乳動物的方法，所述方法包括血管損傷劑和一定量的一氧化氮抑制劑的給藥，該抑制劑的量足以增加血管損傷劑的作用。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中血管損傷劑和一氧化氮抑制劑是基本上同時但是分開對接受治療的哺乳動物給藥的。
14.一氧化氮形成或作用的抑制劑在制備藥物中的用途，用于增加血管損傷劑的作用。
全文摘要
提供了用于抑制通過血管生成所形成的新脈管系統(tǒng)的組合物,包含血管損傷劑與一氧化氮在哺乳動物系統(tǒng)中的形成或作用抑制劑的組合。還提供了所述組合在藥物中的用途、所述化合物的試劑盒和采用所述物質(zhì)的治療。
文檔編號A61K31/198GK1344159SQ0080509
公開日2002年4月10日 申請日期2000年2月15日 優(yōu)先權(quán)日1999年2月16日
發(fā)明者P·D·戴維斯 申請人:安吉奧金藥物有限公司