本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術領域，尤其涉及5,7-二苯基-5h-噻唑并[3,2-a]嘧啶-3-乙酰胺類衍生物及其制備方法與作為血管內(nèi)皮生長因子受體-2絡氨酸激酶抑制劑，用于治療和預防各種癌癥的用途。

背景技術：

惡性腫瘤是當今社會威脅人類健康的主要疾病之一，1971年，folkman提出腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與血管生成密切相關。腫瘤的生長和轉移依賴于血管生成所提供的氧和必要的營養(yǎng)物質(zhì)。實體腫瘤形成之初尚無血管生成，腫瘤細胞的營養(yǎng)主要通過彌散獲得，當細胞距離毛細血管200μm以上時，營養(yǎng)將無法通過彌散作用抵達腫瘤細胞，當腫瘤的細胞數(shù)達到1×10⁷個以后，彌散獲取的營養(yǎng)已無法滿足腫瘤存活和生長的需要，此時如再無新的血管生成，腫瘤組織將發(fā)生退化。30多年來，大量的臨床實踐與實驗研究證實：血管生成是腫瘤生長和轉移的先決條件，也是所有惡性腫瘤的共性，抑制腫瘤介導的血管生成可以有效地抑制腫瘤的生長和轉移。

血管生成是一個受眾多調(diào)節(jié)、調(diào)控因子調(diào)節(jié)的復雜生理、病理過程，目前已分離和純化出了20多種血管生成因子和相關因子，至少15種血管生成抑制劑。其中血管內(nèi)皮細胞生長因子(vascularendothetialgrowthfactor，vegf)處于核心地位，是目前已知活性最強、專屬性最高的血管生成因子。血管內(nèi)皮細胞生長因子受體(vascularendothelialgrowthgactorreceptor,vegfr)是vegf特異性的膜受體,具有高親和力。目前，一致的看法是vegfr-2是vegf的促有絲分裂、促血管生成和滲透性改變的主要中介因子。另外，vegfr-2幾乎只特定地在內(nèi)皮細胞上表達，而且內(nèi)皮細胞膜因穩(wěn)定不易突變，通過抑制vegfr-2可專屬、有效地抑制腫瘤細胞血管生成，且不易產(chǎn)生耐藥性。因此，以新生血管為靶點對腫瘤進行治療也成為近年來的研究熱點。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種5,7-二苯基-5h-噻唑并[3,2-a]嘧啶-3-乙酰胺類衍生物，其具有良好的抗腫瘤活性。

本發(fā)明的上述目的是通過如下技術方案來實現(xiàn)的：

一種vegfr-2絡氨酸激酶抑制劑，具有抗腫瘤活性，其特征在于：該化合物為具有通式i的5,7-二苯基-5h-噻唑并[3,2-a]嘧啶-3-乙酰胺類衍生物或其藥學可接受的水合物、鹽，包括其立體異構體或互變異構體；

其中，式i中的r1和r2分別獨立的為氫、甲基、鹵素、羥基、甲氧基、乙酰基、丙酰基、硝基或烷氧基；r3和r4獨立的選自c1-c6的烷基，或r3和r4與他們相連的氮原子一起組成吡咯基，哌啶基，嗎啉基，n-甲基哌嗪，n-（4-溴苯基哌嗪）。

本發(fā)明中應用的術語“鹵素”包括氟、氯或溴。

本發(fā)明還提供了上述化合物用于制備抗腫瘤藥物的用途。

“藥學上可接受的鹽”指保留了式ⅰ化合物的生物效力和性質(zhì)，并與合適的非毒性有機或無機酸或有機或無機堿形成的常規(guī)酸加成鹽或堿加成鹽。酸加成鹽的實例包括醋酸鹽，己二酸鹽，藻酸鹽，天冬氨酸鹽，苯甲酸鹽，苯磺酸鹽，硫酸氫鹽，丁酸鹽，檸檬酸鹽，樟腦酸鹽，樟腦磺酸鹽，環(huán)戊丙酸鹽，二葡萄糖酸鹽，十二烷基硫酸鹽，乙磺酸鹽，富馬酸鹽，葡庚糖酸鹽，甘油磷酸鹽，半硫酸鹽，庚酸鹽，己酸鹽，氫氯酸鹽，氫溴酸鹽，氫碘酸鹽，2-羥基乙磺酸鹽，乳酸鹽，馬來酸鹽，甲磺酸鹽，2-萘磺酸鹽，煙酸鹽，硝酸鹽，草酸鹽，撲酸鹽，果膠酯酸鹽，過硫酸鹽，3-苯基丙酸鹽，苦味酸鹽，新戊酸鹽，丙酸鹽，琥珀酸鹽，硫酸鹽，酒石酸鹽，硫氰酸鹽，甲苯磺酸鹽和十一酸鹽。堿鹽包括銨鹽，堿金屬鹽，例如鈉和鉀鹽，堿土金屬鹽，例如鈣和鎂鹽，有機堿的鹽，例如二環(huán)己胺鹽，n-甲基-d-葡糖胺鹽，和氨基酸的鹽，例如精氨酸，賴氨酸等，而且，堿性含氮基團可以用這樣的試劑季銨化，例如低級烷基鹵化物，如甲基，乙基，丙基和丁基的氯，溴和碘化物；硫酸二烷基酯，如硫酸二甲酯，二乙酯，二丁酯和二戊酯；長鏈鹵化物，如癸基，月桂基，肉豆蔻基和硬脂?；穆?，溴和碘化物；芳烷基鹵化物，如芐基和苯乙基的溴化物等。優(yōu)選用于生成酸加成鹽的酸包括鹽酸和醋酸。

本發(fā)明還提供了上述通式i化合物的制備方法，該方法見下式。

本發(fā)明系統(tǒng)研究和闡釋了所述化合物的結構和制備，所述化合物作為一類新的vegfr-2絡氨酸激酶抑制劑，結構類型新穎，為開發(fā)新型抗腫瘤藥物提供了全新的方向和廣闊的平臺。

具體實施方式

實施例1

5-(4-氯苯基)-7-(4-甲氧基苯基)-3-甲基-5h-噻唑并[3,2-a]嘧啶-2-甲酸的制備

在250ml的圓底燒瓶中加入4-氯苯甲醛0.1mol、硫脲0.1mol、4-甲氧基苯乙酮0.11mol、三甲基氯硅烷0.1mol，乙腈30ml，攪拌，回流反應10h。冷卻，抽濾，濾餅無水乙醇重結晶，得到黃色晶體4-(4-氯苯基)-6-(4-甲氧基苯基)-3,4-二氫嘧啶-2(1h)-硫酮，收率63%。esi-ms(m/z)：331.2(m+h)⁺。

將0.05mol4-(4-氯苯基)-6-(4-甲氧基苯基)-3,4-二氫嘧啶-2(1h)-硫酮加入到10ml10%的koh溶液中，然后滴加0.05mol4-氯乙酰乙酸乙酯，加熱反應1h后，冰水稀釋有大量晶體析出，干燥得4-[4-(4-氯苯基)-6-(4-甲氧基苯基)-1,2,3,4-四氫嘧啶-2-硫]-3-氧代丁酸乙酯，收率48%。

將0.02mol4-[4-(4-氯苯基)-6-(4-甲氧基苯基)-1,2,3,4-四氫嘧啶-2-硫]-3-氧代丁酸乙酯加入到120℃85%ppa中，反應1h，反應結束后冷卻至室溫，加入冰水，有大量固體析出，抽濾，無水乙醇重結晶得到[5-（4-氯苯基）-7-(4-甲氧基苯基)-5h-噻唑并[3,2-a]嘧啶-3-基]-乙酸乙酯，收率49%。

將0.01mol[5-（4-氯苯基）-7-(4-甲氧基苯基)-5h-噻唑并[3,2-a]嘧啶-3-基]-乙酸乙酯加入到2mol/l的naoh中，再加入20ml甲醇，室溫反應2h，減壓除去甲醇，用濃鹽酸調(diào)ph=2，有大量固體析出，抽濾，無水乙醇重結晶得淺黃色粉末[5-(4-氯苯基)-7-(4-甲氧基苯基)-5h-噻唑并[3,2-a]嘧啶-3-基]-乙酸，收率57%，esi-ms(m/z):413.2(m+h)⁺。

實施例2

2-[5-(4-氯苯基)-7-(4-甲氧基苯基)-n,n-二甲基-5h-噻唑并[3,2-a]嘧啶-3-基]-乙酰胺（l1）的制備

10mmol二甲胺鹽酸鹽，10mmol[5-(4-氯苯基)-7-(4-甲氧基苯基)-5h-噻唑并[3,2-a]嘧啶-3-基]-乙酸，20ml二氯甲烷加入到圓底燒瓶中，然后再加入12mmoledci，12mmolhobt和三乙胺10mmol，室溫反應12h后，反應液依次用5%hcl，5%nahco3，飽和nacl溶液洗，干燥后柱層析分離得白色固體，收率40%。

¹h-nmr(300mhz，dmso)，δ(ppm)：7.47(2h，d，j=8.7hz)，7.38(2h，d，j=8.4hz)，7.22(2h，d，j=8.7hz)，6.82(2h，d，j=8.4hz)，6.73(h，d)，6.32(h，s)，6.21(h，d)，4.28(2h，s)，3.82(3h，s)，3.12(3h，s)，3.06(3h，s)；esi-ms(m/z)：440.1(m+h)⁺。

實施例3

2-[5-(4-氯苯基)-7-(4-甲氧基苯基)-n,n-二乙基-5h-噻唑并[3,2-a]嘧啶-3-基]-乙酰胺（l2）的制備

將二甲胺鹽酸鹽用二乙胺替換，合成方法參照實施例2，收率32%。

¹h-nmr(300mhz，dmso)，δ(ppm)：7.50(2h，d，j=8.4hz)，7.36(2h，d，j=8.4hz)，7.25(2h，d，j=8.7hz)，6.80(2h，d，j=8.4hz)，6.72(h，d)，6.32(h，s)，6.20(h，d)，4.28(2h，s)，3.84(3h，s)，3.48(2h，m)，3.32(2h，m)，1.18(3h，t)，1.08(3h，t)；esi-ms(m/z):468.1(m+h)⁺。

實施例4

5-(4-氯苯基)-7-(4-甲氧基苯基)-3-[(1-哌啶-1-羰基)乙基]-5h-噻唑并[3,2-a]嘧啶（l3）的制備

將二甲胺鹽酸鹽用哌啶替換，合成方法參照實施例2，收率30%。

¹h-nmr(300mhz，dmso)，δ(ppm)：7.50(2h，d，j=8.4hz)，7.30(2h，d，j=8.4hz)，7.22(2h，d，j=8.7hz)，6.80(2h，d，j=8.4hz)，6.74(h，d)，6.32(h，s)，6.15(h，d)，4.28(2h，s)，3.84(3h，s)，3.48(2h，m)，3.40(2h，m)，1.60(2h，m)，1.55(2h，m)，1.44(2h，m)，esi-ms(m/z)：480.1(m+h)⁺。

實施例5

2-[5-(4-氯苯基)-7-(4-甲氧基苯基)-5h-噻唑并[3,2-a]嘧啶-3基]-1-嗎啉-4-基-乙酰（l4）的制備

將二甲胺鹽酸鹽用嗎啉替換，合成方法參照實施例2，收率35%。

¹h-nmr(300mhz，dmso)，δ(ppm)：7.49(2h，d，j=8.4hz)，7.28(2h，d，j=8.4hz)，7.14(2h，d，j=8.4hz)，6.87(2h，d，j=8.4hz)，6.72(h，d)，6.32(h，s)，6.12(h，d)，4.28(2h，s)，3.84(3h，s)，3.74(4h，br)，3.68(4h，br)；esi-ms(m/z)：481.1(m+h)⁺。

實施例6

5-(4-氯苯基)-7-(4-甲氧基苯基)-3-[(1-(4-甲基哌嗪)-1-羰基)乙基]-5h-噻唑并[3,2-a]嘧啶（l5）的制備

將二甲胺鹽酸鹽用n-甲基哌嗪替換，合成方法參照實施例2，收率33%。

¹h-nmr(300mhz，dmso)，δ(ppm)：7.54(2h，d，j=8.4hz)，7.30(2h，d，j=8.4hz)，7.12(2h，d，j=8.4hz)，6.68(2h，d，j=8.4hz)，6.71(h，d)，6.32(h，s)，6.02(h，d)，4.28(2h，s)，3.83(3h，s)，3.64(4h，t)，2.46(4h，t)，2.39(3h，d)；esi-ms(m/z)：495.2(m+h)⁺。

實施例7

5-(4-氯苯基)-7-(4-甲氧基苯基)-3-[(1-吡咯烷基-1-羰基)乙基]-5h-噻唑并[3,2-a]嘧啶（l6）的制備

將二甲胺鹽酸鹽用四氫吡咯替換，合成方法參照實施例2，收率31%。

¹h-nmr(300mhz，dmso)，δ(ppm)：7.52(2h，d，j=8.4hz)，7.34(2h，d，j=8.4hz)，7.10(2h，d，j=8.4hz)，6.84(2h，d，j=8.4hz)，6.71(h，d)，6.32(h，s)，6.04(h，d)，4.26(2h，s)，3.82(3h，s)，3.48(4h，m)，1.87(4h，m)；esi-ms(m/z):466.1(m+h)⁺。

實施例8

2-[5-(4-氯苯基)-7-(4-甲氧基苯基)-n,n-二正丁基-5h-噻唑并[3,2-a]嘧啶-3-基]-乙酰胺（l7）的制備

將二甲胺鹽酸鹽用二正丁基替換，合成方法參照實施例2，收率52%。

¹h-nmr(300mhz，dmso)，δ(ppm)：7.52(2h,d,j=9.0hz),7.28(2h，d，j=9.0hz)，7.16(2h，d，j=9.0hz)，6.69(2h，d，j=9.0hz)，6.68(h，d)，6.32(h，s)，6.02(h，d)，3.83(3h，s)，3.40(4h，m)，1.61(4h，m)，1.30(4h，m)，0.96(6h，m)；esi-ms(m/z)：524.1(m+h)⁺。

實施例9

5-(4-氯苯基)-7-(4-甲氧基苯基)-3-[1-(4-(4-溴苯基)哌嗪)-1-羰基)乙基]-5h-噻唑并[3,2-a]嘧啶（l8）的制備

將二甲胺鹽酸鹽用1-(4-溴苯基)哌嗪替換，合成方法參照實施例2，收率35%。

¹h-nmr(300mhz，dmso)，δ(ppm)：7.50(2h，d,j=8.4hz),7.40(2h，d，j=8.7hz)，7.16(2h，d，j=8.4hz)，7.02(2h，d，j=8.7hz)，6.96(2h，d，j=8.4hz)，6.86(2h，d，j=8.4hz)，6.71(h，d)，6.32(h，s)，6.02(h，d)，3.80(3h，s)，3.36(4h，t)，3.22(4h，t)，esi-ms(m/z)：635.0(m+h)⁺。

mtt法抗腫瘤活性測定試驗

1.材料的準備：

試劑：含10％胎牛血清的rpml640培養(yǎng)液，0.25％胰蛋白酶消化液，pbs(0.01mol/l，ph7.4)，dmso(分析純)，mtt溶液；

細胞株：人肝癌細胞smmc-7221細胞株。

2.方法：

(1)接種細胞：將對數(shù)生長期的smmc-7221細胞，用0.25％胰蛋白酶消化，用含10％胎小牛血清的1640培養(yǎng)基配成單個細胞懸液，以每孔10⁴個細胞接種到96孔板，每孔體積100ml;

(2)培養(yǎng)細胞：將培養(yǎng)板放入co2孵箱，在37℃，100％相對濕度，含5％co2、95％空氣的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h；

(3)配制5mg／mlmtt溶液：稱取250mgmtt，放入小燒杯中，加50mlpbs溶液，電磁攪拌30min，用0.22μm的微孔濾膜除菌，于4℃保存?zhèn)溆?，l周內(nèi)使用；

(4)給藥：在無菌條件下，將目標化合物10^-7mol／l的混懸液以100μl／孔加入到96孔培養(yǎng)板中，每種化合物設3個平行，每培養(yǎng)板上設3個空白對照孔。放置co2孵箱中在同種條件下繼續(xù)培養(yǎng)；

(5)呈色：培養(yǎng)24h后，每孔加10μlmtt溶液，在培養(yǎng)4h，終止培養(yǎng)，小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，懸浮細胞離心后再吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液。每孔加150μldmso，振蕩10min，使甲臜充分溶解；

(6)比色：選擇570nm波長，在酶聯(lián)免疫監(jiān)測儀上測定各孔光吸收值(od值)。

按照以下公式計算腫瘤細胞生長抑制率：細胞生長抑制率=（1-實驗組od值/對照組od值）x100%。

3.結果：實驗表明，本發(fā)明的上述化合物對smmc-7221腫瘤細胞均有抑制作用，見表1。