左室射血分?jǐn)?shù)保留的心力衰竭的生物標(biāo)志物及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及左室射血分?jǐn)?shù)保留的心力衰竭的生物標(biāo)志物及其應(yīng)用。具體地，提供了血管生成素在診斷左室射血分?jǐn)?shù)保留的心力衰竭中的用途、包括檢測(cè)血管生成素血清含量試劑的試劑盒、以及具有檢測(cè)血管生成素含量試劑的芯片或陣列。本發(fā)明證實(shí)了血管生成素可作為左室射血分?jǐn)?shù)保留的心力衰竭的診斷標(biāo)志物，且其特異性高、靈敏度好、診斷結(jié)果準(zhǔn)確可靠、方法簡(jiǎn)便易行，因此具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。
【專利說明】左室射血分?jǐn)?shù)保留的心力衰竭的生物標(biāo)志物及其應(yīng)用
[0001]【【技術(shù)領(lǐng)域】】
本發(fā)明涉及臨床診斷【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地說，涉及左室射血分?jǐn)?shù)保留的心力衰竭的生物標(biāo)志物及其應(yīng)用。
[0002]【【背景技術(shù)】】
心力衰竭(heart failure, HF)是各類心臟疾病發(fā)展的終末階段，嚴(yán)重影響人群健康。隨著認(rèn)識(shí)的不斷加深，人們發(fā)現(xiàn)左室射血分?jǐn)?shù)保留的心力衰竭(HFPEF，左室射血分?jǐn)?shù)^ 50%)患者數(shù)量龐大，約占心力衰竭患者總數(shù)的一半，且死亡率與左室射血分?jǐn)?shù)降低的心力衰竭(HFREF，左室射血分?jǐn)?shù)< 40%)相當(dāng)。另外，還有一類心衰患者左室射血分?jǐn)?shù)介于兩者之間(亦可稱HFPEF亞分類，41%-49%)。然而，目前人們對(duì)射血分?jǐn)?shù)無明顯降低的心衰患者認(rèn)識(shí)非常有限，其診斷和治療措施亟待發(fā)展。
[0003]為了使左室射血分?jǐn)?shù)保留的心力衰竭的診斷更加客觀化，提高診斷的一致性和準(zhǔn)確度，尋找左室射血分?jǐn)?shù)保留的心力衰竭的生物標(biāo)志物、建立有效的檢測(cè)方法是十分必要的。生物標(biāo)志物指可供客觀測(cè)定和評(píng)價(jià)的普通生理或病理或治療過程中的某種特征性的生化指標(biāo)，通過對(duì)它的測(cè)定可以獲知機(jī)體當(dāng)前所處的生物學(xué)過程中的進(jìn)程。生物標(biāo)志物的化學(xué)本質(zhì)可以是DNA、RNA、蛋白或代謝物，一般從體液獲得。將生物標(biāo)志物應(yīng)用于左室射血分?jǐn)?shù)保留的心力衰竭，可以 有效輔助當(dāng)前的診斷方法，減少不確定因素，降低誤診率并有助于指導(dǎo)用藥和康復(fù)過程。
[0004]吉林大學(xué)2009年碩士學(xué)位論文《激活素A在心力衰竭患者血清中的表達(dá)水平變化及其臨床意義》，作者通過檢測(cè)心力衰竭患者血清中ACT-A的表達(dá)水平，探討了其表達(dá)水平變化及臨床意義，結(jié)果顯示ACT-A在心力衰竭患者血清中呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，其表達(dá)水平與心力衰竭程度呈正相關(guān)。然而，上述檢測(cè)血清激活素A水平的方法仍然不能用于左室射血分?jǐn)?shù)保留的心力衰竭的診斷，而且以單一的生物標(biāo)志物作為診斷標(biāo)準(zhǔn)，其診斷誤差相對(duì)較大，而使用多個(gè)生物標(biāo)志物進(jìn)行聯(lián)合診斷將顯著提高準(zhǔn)確率。
[0005]中國(guó)專利文獻(xiàn)CN200910201045.4，公開了一種用于診斷慢性舒張性心力衰竭的試劑盒，該發(fā)明提供了一種具有預(yù)測(cè)慢性舒張性心力衰竭功能的試劑盒，其特征在于，由細(xì)胞因子及其酶標(biāo)抗體，PH9.6碳酸鹽緩沖液，PH7.4磷酸鹽緩沖液，血清蛋白稀釋液，終止液，四甲基聯(lián)苯胺底物溶液，正常人血清和陽性對(duì)照血清組成，所述的細(xì)胞因子是包括生長(zhǎng)因子、炎癥相關(guān)因子、神經(jīng)元營(yíng)養(yǎng)因子，以及凝血因子等多種細(xì)胞因子類別在內(nèi)的17種細(xì)胞因子。雖然該文獻(xiàn)公開了血管生成素可用于診斷慢性舒張性心力衰竭，但是該文獻(xiàn)并未記載血管生成素的具體結(jié)構(gòu)，本領(lǐng)域技術(shù)人員并不能確定所述的血管生成素究竟是何種物質(zhì)，且該文獻(xiàn)所用于篩選上調(diào)或下調(diào)細(xì)胞因子的樣本量很小，對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，也不能確定這些細(xì)胞因子用于診斷慢性舒張性心力衰竭的可信度，因此，該文獻(xiàn)實(shí)際上并沒有給出血管生成素等17種細(xì)胞因子能用于診斷慢性舒張性心力衰竭的啟示。
[0006]血液中細(xì)胞因子眾多，為篩選疾病診斷的生物標(biāo)志物，需要對(duì)該疾病的發(fā)病機(jī)制和生理生化機(jī)制有透徹的了解，以指導(dǎo)縮小篩選范圍，減少盲目性，增加實(shí)驗(yàn)的可行性。
[0007]總之，仍有必要尋找更多的診斷和評(píng)估左室射血分?jǐn)?shù)保留的心力衰竭的生物標(biāo)志物，同時(shí)還應(yīng)保證生物標(biāo)志物良好的靈敏度和特異度。
[0008]【
【發(fā)明內(nèi)容】
】
本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供血管生成素的一種用途。
[0009]本發(fā)明的再一的目的是，提供一種用于診斷左室射血分?jǐn)?shù)保留的心力衰竭的試劑盒。
[0010]本發(fā)明的另一的目的是，提供所述的用于診斷左室射血分?jǐn)?shù)保留的心力衰竭的試劑盒的用途。
[0011]本發(fā)明的第四個(gè)目的是，提供一種芯片或陣列。
[0012]本發(fā)明的第五個(gè)目的是，提供所述的芯片或陣列的用途。
[0013]為實(shí)現(xiàn)上述第一個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是:
血管生成素的用途，用于制備診斷左室射血分?jǐn)?shù)保留的心力衰竭的試劑或試劑盒。
[0014]所述的血管生成素包含SEQ ID N0.1所示的氨基酸序列。
[0015]為實(shí)現(xiàn)上述第二個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是:
一種用于診斷左室射 血分?jǐn)?shù)保留的心力衰竭的試劑盒，所述的試劑盒包括檢測(cè)血管生成素的血清含量的試劑。
[0016]所述的血管生成素包含SEQ ID N0.1所示的氨基酸序列。
[0017]為實(shí)現(xiàn)上述第三個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是:
如上所述的試劑盒的用途，用于制備診斷左室射血分?jǐn)?shù)保留的心力衰竭的試劑或試劑盒。
[0018]為實(shí)現(xiàn)上述第四個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是:
一種芯片或陣列，所述的芯片或陣列上具有檢測(cè)血管生成素含量的試劑。
[0019]為實(shí)現(xiàn)上述第五個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是:
如上所述的芯片或陣列的用途，其特征在于，用于制備診斷左室射血分?jǐn)?shù)保留的心力衰竭的試劑或試劑盒。
[0020]需要說明的是，如本文所用，所述的血管生成素屬于促血管生成因子，包含147個(gè)氨基酸組成(SEQ ID N0.1)的分泌型堿性蛋白，該蛋白的PubMed編號(hào)為NP_001136.1，網(wǎng)址:http://www.ncb1.nlm.nih.gov/protein/NP_001136.1。
[0021]本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于:本發(fā)明從眾多細(xì)胞因子中篩選出了能用于診斷左室射血分?jǐn)?shù)保留的心力衰竭的生物標(biāo)志物——血管生成素，其特異性高，靈敏度好，診斷結(jié)果準(zhǔn)確可靠，且方法簡(jiǎn)便易行，因此具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。
[0022]【【專利附圖】

【附圖說明】】
附圖1是聚類分析結(jié)果。
[0023]附圖2中，圖2A是進(jìn)一步篩選驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)中HFPEF患者組和16名健康對(duì)照組的血管生成素測(cè)定結(jié)果，圖2B是進(jìn)一步篩選驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)中HFPEF患者亞組的血管生成素測(cè)定結(jié)果。
[0024]附圖3是血管生成素和NT-proBNP水平進(jìn)行相關(guān)性分析結(jié)果。
[0025]附圖4是受試者工作特征(ROC)曲線分析結(jié)果。
[0026]【【具體實(shí)施方式】】
下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明提供的【具體實(shí)施方式】作詳細(xì)說明。
[0027]實(shí)施例1一、研究方法
首先依據(jù)2008年歐洲心臟病學(xué)會(huì)指南標(biāo)準(zhǔn)入選3名HFPEF患者、3名單純高血壓患者、3名健康對(duì)照，檢測(cè)獲得各研究對(duì)象基本臨床特征。
[0028]然后利用人細(xì)胞因子抗體芯片(購(gòu)于美國(guó)RayBiotech公司)檢測(cè)上述9名研究對(duì)象血清中507種細(xì)胞因子表達(dá)水平，初步篩選存在表達(dá)差異的細(xì)胞因子。
[0029]再在初步篩選的基礎(chǔ)上擴(kuò)大研究對(duì)象數(shù)量，進(jìn)一步入選16名HFPEF患者及16名健康對(duì)照，通過檢測(cè)這16名HFPEF患者及16名健康對(duì)照血清，證實(shí)相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)差異。同時(shí)，對(duì)研究對(duì)象跟蹤隨訪2年，探討相關(guān)細(xì)胞因子在疾病診斷和預(yù)后評(píng)估中的作用。
[0030]二、研究結(jié)果 1、患者基礎(chǔ)資料
表1是用于初步篩選差異表達(dá)細(xì)胞因子的9名研究對(duì)象基本臨床特征。
[0031]表1.用于初步篩選的患者基礎(chǔ)資料
【權(quán)利要求】
1.血管生成素的用途，其特征在于，用于制備診斷左室射血分?jǐn)?shù)保留的心力衰竭的試劑或試劑盒。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的血管生成素包含SEQID N0.1所示的氨基酸序列。
3.一種用于診斷左室射血分?jǐn)?shù)保留的心力衰竭的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒包括檢測(cè)血管生成素的血清含量的試劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述的血管生成素包含SEQID N0.1所示的氨基酸序列。
5.權(quán)利要求4所述的試劑盒的用途，其特征在于，用于制備診斷左室射血分?jǐn)?shù)保留的心力衰竭的試劑或試劑盒。
6.一種芯片或陣列，其特征在于，所述的芯片或陣列上具有檢測(cè)血管生成素含量的試劑。
7.權(quán)利要求6所述的芯片或陣列的用途，其特征在于，用于制備診斷左室射血分?jǐn)?shù)保留的心力衰竭的試劑或試劑盒。
【文檔編號(hào)】G01N33/68GK103954769SQ201410167209
【公開日】2014年7月30日 申請(qǐng)日期:2014年4月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月24日
【發(fā)明者】姜紅, 張磊, 虞瑩, 鄒云增 申請(qǐng)人:復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院