紫蘇油作為山梨酸鉀抗菌增效劑的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬食品添加劑領(lǐng)域，具體涉及紫蘇油增強(qiáng)山梨酸鉀抗菌活性的作用。
【背景技術(shù)】
[0002] 現(xiàn)如今食品保藏技術(shù)飛速發(fā)展，但是在全球范圍內(nèi)由食源性致病菌造成的食品污 染依然是一個(gè)重要的問題。金黃色葡萄球菌是一種革蘭氏陽(yáng)性菌，廣泛的分布在自然界中， 是最常見的食源性致病菌之一，具有致病力強(qiáng)、感染率高和死亡率高等特點(diǎn)，可引起皮膚感 染和敗血癥等一系列復(fù)雜的臨床癥狀，金黃色葡萄球菌引起的食物中毒是世界性的公共衛(wèi) 生問題。大腸埃希氏菌俗稱大腸桿菌，是一種常見的革蘭氏陰性菌，是一種人和動(dòng)物腸道內(nèi) 的常居菌，但是某些特殊的血清型治病性強(qiáng)，可以造成嚴(yán)重腹瀉和敗血癥。
[0003] 今年來抗生素的濫用導(dǎo)致一些細(xì)菌產(chǎn)生了耐藥性，有細(xì)菌感染引起的感染率和死 亡率居高不下。在這樣的條件下，人們希望找到新的方法來抑制這些食源性致病菌，特別是 大腸桿菌和金黃色葡萄球菌。協(xié)同作為一種可以提高抗菌劑抗菌性的方法近年來受到了關(guān) 注。山梨酸鉀作為一種不飽和脂肪酸，可在體內(nèi)參與新陳代謝，最終被分解為二氧化碳和 水，并且?guī)缀鯖]有毒性，目前山梨酸鉀已經(jīng)成為一種在全球范圍內(nèi)廣泛使用的化學(xué)防腐劑。 但是隨著山梨酸鉀的普遍，山梨酸鉀也許會(huì)像抗生素一樣在自然界中產(chǎn)生相應(yīng)的耐藥性菌 株，從而影響和限制山梨酸鉀的抑菌作用。因此尋找山梨酸鉀抑制食源性致病菌的增效劑， 為新型食品防腐劑的研究開發(fā)奠定基礎(chǔ)。
[0004] 紫蘇為唇形科一年生草本植物，是國(guó)家衛(wèi)生部首批頒布的既是食品又是藥品的60 種中藥之一。紫蘇油是從從紫蘇的干燥成熟果實(shí)中提取所得植物油。經(jīng)氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián) 用法檢測(cè)鑒定，紫蘇油主要含有軟脂酸、亞油酸、α -亞麻酸、硬脂酸、花生一烯酸和花生酸。 其中α -亞麻酸是ω -3系列脂肪酸，有獨(dú)特的保健作用，抗衰老、降血脂、抗癌 、消炎、抗過敏，在體內(nèi)能轉(zhuǎn)化成二十碳五稀酸（ΕΡΑ)和二十二碳六稀酸（DHA),已 成為功能性食品的重要原料。
[0005] 本發(fā)明采用紫蘇油作為一種提高山梨酸鉀食源性致病菌作用的增效劑，為新型食 品防腐劑的研究開發(fā)奠定基礎(chǔ)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是為了解決長(zhǎng)期使用山梨酸鉀防腐劑作為食品防腐劑，產(chǎn)生耐藥菌 株，山梨酸鉀添加量增加的問題，而提供一種山梨酸鉀抗菌增效劑紫蘇油。
[0007] 紫蘇油作為山梨酸鉀抗菌增效劑的應(yīng)用； 所述的菌為大腸桿菌和金黃色葡萄球菌； 所述的應(yīng)用為山梨酸鉀8-16mg/ml和紫蘇油0· 25-lmg/ml ; 一種防腐劑，它包括：山梨酸鉀和紫蘇油，山梨酸鉀和紫蘇油的重量比為：8-16: 0. 25-1 ； 所述的重量比為8: 0.5。
[0008] 本發(fā)明提供了紫蘇油作為山梨酸鉀抗致病菌增效劑的應(yīng)用，以金黃色葡萄球菌 ATCC 29213,大腸桿菌0157 :H7,大腸桿菌25922為對(duì)照用質(zhì)控菌株，8株大腸桿菌食品分離 株，9株金黃色葡萄球菌食品分離株，為試驗(yàn)菌，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，紫蘇油與山梨酸鉀聯(lián)合作用 金黃色葡萄球菌，測(cè)試菌株的FICI值均小于0. 5,說明兩者對(duì)金黃色葡萄球菌具有協(xié)同抗 菌作用。當(dāng)紫蘇油與山梨酸鉀聯(lián)合作用時(shí)，測(cè)試菌株FICI值均小于0. 5,兩者對(duì)大腸桿菌具 有協(xié)同抗菌作用。
[0009]
【附圖說明】
[0010] 圖1金黃色葡萄球菌ATCC29213的殺菌曲線； 圖2大腸桿菌0157 :H7的殺菌曲線。
【具體實(shí)施方式】
[0011] 實(shí)施例1微量稀釋法藥物敏感性實(shí)驗(yàn) 用Muller-Hinton肉湯（MHB)培養(yǎng)基將紫蘇油貯存液進(jìn)行倍比稀釋每孔加入100 μ L。 將過夜培養(yǎng)的待測(cè)菌液用MHB培養(yǎng)基適當(dāng)稀釋后，使得用分光光度計(jì)在600nm波長(zhǎng)處測(cè)得 的金黃色葡萄球菌OD值為0. 4,大腸桿菌的OD值為1，并進(jìn)一步稀釋至濃度為IO6 CFU/mL。 在96孔板中每孔加入100 μ L菌懸液，以MHB作陰性對(duì)照，不加藥物的菌懸液為陽(yáng)性對(duì)照。 混合均勻后放37°C溫箱靜置培養(yǎng)，24 h后觀察結(jié)果。抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的最低濃度為菌株的 MIC值，將每孔的細(xì)菌吹打均勻后移植到MHA平板，菌種不生長(zhǎng)的最低濃度為MBC值，試驗(yàn)重 復(fù)3次，取中位數(shù)為最終值。受試菌包括：8株大腸桿菌食品分離株，9株金黃色葡萄球菌食 品分離株，以及3株對(duì)照用質(zhì)控菌株：金黃色葡萄球菌ATCC 29213,大腸桿菌0157 :H7,大 腸桿菌25922。
[0012] 其結(jié)果如表1、表2。
[0013] 表1結(jié)果表明，當(dāng)兩者聯(lián)合作用時(shí)，其對(duì)金黃色葡萄球菌的MIC有明顯的下降。表 2結(jié)果表明，當(dāng)兩者聯(lián)合作用時(shí)，其對(duì)大腸桿菌MIC值明顯小于單藥時(shí)的MIC值。
[0014] 實(shí)施例2棋盤式微量稀釋實(shí)驗(yàn) 將聯(lián)用的兩種藥物至于96孔微量板上，以二維棋盤的縱向（B-H，山梨酸鉀）和橫 向（2-12,紫蘇油）分別像兩個(gè)方向進(jìn)行倍比稀釋，根據(jù)例1所測(cè)定的兩藥單獨(dú)使用時(shí)受 試菌株的 MIC，將紫蘇油配制成 4XMIC、2XMIC、1XMIC、1/2XMIC、1/4XMIC、1/8XMIC、 1/16XMIC、1/32XMIC、1/64XMIC、1/128XMIC、1/256XMIC 的濃度，山梨酸鉀配制成 4XMIC、2XMIC、I XMIC、1/2XMIC、1/4XMIC、1/8XMIC、1/16XMIC 的濃度，在此我們選用 菌液(濃度為IO5 CFU/mL)來稀釋山梨酸鉀每孔100 PL按依次加入，考察每一種藥物聯(lián)用 時(shí)的MIC，并通過計(jì)算部分抑菌濃度指數(shù)（the fractional inhibitory concentration index, FICI)來判斷兩藥物體外相互作用。FICI值由以下公式計(jì)算：
其中，MICAal°lP MIC Bal°ne分別是化合物A和B單用時(shí)的MIC值，C /°"*和C B_b為兩藥聯(lián) 用時(shí)達(dá)到相同藥效(等效位點(diǎn)）時(shí)各自的濃度。FICI值都判定標(biāo)準(zhǔn)如下：FICI < 0. 5,表明 兩種化合物之間存在協(xié)同作用；〇. 5 < FICK 4表明兩種化合物之間無相關(guān)作用；FICI > 4表明兩種化合物之間存在詰抗作用。其結(jié)果如表3,表4。

表3結(jié)果表明，當(dāng)紫蘇油與山梨酸鉀聯(lián)合作用時(shí)，測(cè)試菌株的FICI值均小于0. 5,兩者 對(duì)金黃色葡萄球菌具有協(xié)同抗菌作用。表4結(jié)果表明，當(dāng)紫蘇油與山梨酸鉀聯(lián)合作用時(shí)，測(cè) 試菌株FICI值均小于0. 5,兩者對(duì)大腸桿菌具有協(xié)同抗菌作用。
[0016] 實(shí)施例3殺囷曲線 根據(jù)例1所測(cè)定的兩藥單獨(dú)使用時(shí)受試菌株的MIC，將山梨酸鉀和紫蘇油分別用菌 液稀釋(菌液濃度為IO6 CFU/mL)，使三組的濃度分別達(dá)到山梨酸鉀（1/2 XMIC)、紫蘇油 (1/2 XMIC)、山梨酸鉀（1/2 XMIC)+紫蘇油（1/2 XMIC)?？瞻讓?duì)照組不加藥物。混合均勻 后放37°C溫箱靜置培養(yǎng)，在第3、6、9、12、24、48小時(shí)取菌液稀釋到適當(dāng)?shù)谋稊?shù)涂到瓊脂板 上，培養(yǎng)24小時(shí)后菌落計(jì)數(shù)。協(xié)同的判定標(biāo)準(zhǔn)為聯(lián)合藥物組的菌落個(gè)數(shù)對(duì)比單藥的菌落個(gè) 數(shù)減少彡21og 1(]CFU/ml。從殺菌曲線可以看出，單獨(dú)加入山梨酸鉀金黃色葡萄球菌和大腸 桿菌的菌落個(gè)數(shù)對(duì)比空白并沒有明顯的降低，而紫蘇油的加入使得菌落個(gè)數(shù)明顯降低，在 第12小時(shí)，聯(lián)合藥物組的菌落個(gè)數(shù)對(duì)比單藥的菌落個(gè)數(shù)減少的量已21og 1(]CFU/ml，并且在 第48小時(shí)聯(lián)合藥物組的菌落個(gè)數(shù)都降為0。金黃色葡萄球菌ATCC29213的殺菌曲線結(jié)果見 圖1，大腸桿菌0157 :H7的殺菌曲線見圖2。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 紫蘇油作為山梨酸鉀抗菌增效劑的應(yīng)用。2. 權(quán)利要求1所述的紫蘇油作為山梨酸鉀抗菌增效劑應(yīng)用，其特征在于：所述的菌為 大腸桿菌和金黃色葡萄球菌。3. 權(quán)利要求1或2所述的紫蘇油作為山梨酸鉀抗菌增效劑應(yīng)用，其特征在于：所述的 應(yīng)用為山梨酸鉀8-16mg/ml和紫蘇油0· 25-lmg/ml。4. 一種防腐劑，它包括：山梨酸鉀和紫蘇油，山梨酸鉀和紫蘇油的重量比為：8-16: 0·25-1〇5. 權(quán)利要求4所述的一種防腐劑，其特征在于：所述的重量比為8: 0. 5。
【專利摘要】本發(fā)明公開了紫蘇油作為山梨酸鉀抗菌增效劑的應(yīng)用，以金黃色葡萄球菌ATCC？29213，大腸桿菌O157：H7，大腸桿菌25922為對(duì)照用質(zhì)控菌株，8株大腸桿菌食品分離株，9株金黃色葡萄球菌食品分離株，為試驗(yàn)菌，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，紫蘇油與山梨酸鉀聯(lián)合作用金黃色葡萄球菌，測(cè)試菌株的FICI值均小于0.5，說明兩者對(duì)金黃色葡萄球菌具有協(xié)同抗菌作用。當(dāng)紫蘇油與山梨酸鉀聯(lián)合作用時(shí)，測(cè)試菌株FICI值均小于0.5，兩者對(duì)大腸桿菌具有協(xié)同抗菌作用。
【IPC分類】A23L3/3481
【公開號(hào)】CN105265995
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510723832
【發(fā)明人】郭娜, 劉宗慧, 孟日增, 黃延軍, 趙星辰, 史冊(cè), 陳向榮
【申請(qǐng)人】吉林大學(xué)
【公開日】2016年1月27日
【申請(qǐng)日】2015年11月1日