一種利用古尼擬青霉生物轉(zhuǎn)化茶咖啡因的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及食品與飲料營養(yǎng)領(lǐng)域，具體是一種利用古尼擬青霉生物轉(zhuǎn)化茶咖啡因的方法，其特征在于：以古尼擬青霉為出發(fā)菌株，采用茶葉、麩皮、葡萄糖、碳酸鈣、水組成發(fā)酵培養(yǎng)基，生物轉(zhuǎn)化茶咖啡因。本發(fā)明方法以茶葉為主要培養(yǎng)基質(zhì)，將茶葉中咖啡因部分轉(zhuǎn)化為茶堿和1,7二甲基黃嘌呤，豐富了茶葉中的生理活性物質(zhì)，可開發(fā)茶飲料新品種。方法簡單，原料易得，成本低，適合大面積推廣，綠色環(huán)保。
【專利說明】一種利用古尼擬青霉生物轉(zhuǎn)化茶咖啡因的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于食品與飲料營養(yǎng)領(lǐng)域，具體涉及一種茶咖啡因生物轉(zhuǎn)化方法。
【背景技術(shù)】
[0002]生物堿是一類含氮雜環(huán)的堿性天然有機物，廣泛存在于植物體內(nèi)，大多數(shù)具有重要的醫(yī)療價值?？Х纫?、茶堿、1，7 二甲基黃嘌呤和可可堿是黃嘌呤甲基衍生物，它們的母體結(jié)構(gòu)相同，只是甲基取代基的數(shù)目和位置不同。這些天然甲基黃嘌呤類生物堿具有興奮中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心臟和骨骼肌，舒張血管，松弛平滑肌和利尿等生理作用，普遍存在于茶葉、咖啡、可可、糖果等各種食品當(dāng)中。其制品近年來在食品工業(yè)中更是得到了日益廣泛的應(yīng)用，但過量攝入以上四種物質(zhì)均會產(chǎn)生一定的毒副作用。烏龍茶等茶葉中咖啡因含量極高，而其它黃嘌呤甲基衍生物含量極少，或沒有。隨著生活水平的提高，人們越來越追求健康的生活方式，由于咖啡因?qū)μ厥馊巳?如孕婦、兒童、老年人和心臟病、失眠癥、神經(jīng)衰弱者)有一定的危害，近年來國外市場已有很多低咖啡因或脫咖啡因茶飲料，讓這類人群既能享受到飲茶的樂趣，又盡可能減少咖啡因?qū)】祹淼牟焕绊憽Ｒ虼?，脫咖啡因技術(shù)日益受到國內(nèi)外科研人員的重視。
[0003]目前，主要采用直接法去除咖啡因，即通過有機溶劑萃取、水浸提和超臨界CO 2處理等方法。有機溶劑法會改變茶葉的色、香、味、形，尤其是不可避免地存在有機溶劑殘留，對人體健康構(gòu)成危害。水浸提法咖啡因脫除率較低，而且茶葉風(fēng)味受到較大損失。超臨界二氧化碳處理法脫除咖啡因的同時，也脫除了茶中的芳香和風(fēng)味物質(zhì)，使得所生產(chǎn)的脫咖啡因茶的品質(zhì)明顯下降，且過程復(fù)雜，設(shè)備成本較高。國外對微生物降解咖啡因的研究發(fā)現(xiàn)，細菌類的假單胞菌(Pseudomonas)和沙雷氏菌屬(Serraiia genus)以及真菌類的青霉菌(Penicillium sp.),曲霉菌{Aspergillus sp.)降解咖啡因的效果較好。Ramarethinam等人在茶樹葉表面噴灑苔狀細菌ijiacillus licheniformis')懸浮液可以有效降低茶鮮葉的咖啡因含量而不影響茶鮮葉其他有效成分的質(zhì)量。目前，微生物降解咖啡因的研究還沒有實用性進展，于是研制一種利用微生物降解茶葉中咖啡因的方法具有十分重要的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]基于上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種利用古尼擬青霉{Paecilomyces gunnii )生物轉(zhuǎn)化茶葉中咖啡因的方法。
[0005]本發(fā)明采取的技術(shù)方案如下:
一種利用古尼擬青霉生物轉(zhuǎn)化茶咖啡因的方法，其特征在于:以古尼擬青霉為出發(fā)菌株，采用茶葉、麩皮、葡萄糖、碳酸鈣、水組成發(fā)酵培養(yǎng)基，生物轉(zhuǎn)化茶咖啡因，包括以下步驟:
(O菌種活化:采用古尼擬青霉為出發(fā)菌株，將其劃線接種于試管斜面，培養(yǎng)成熟，準備移種； (2)種子液制備:直接挑取活化后的菌體，接種于裝有150mL馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)液的三角瓶中，搖瓶培養(yǎng)，制備古尼擬青霉種子液；
(3)生物轉(zhuǎn)化過程:將古尼擬青霉種子液添加到滅菌后的發(fā)酵培養(yǎng)基中，在古尼擬青霉生長發(fā)酵作用下，茶葉中的咖啡因部分轉(zhuǎn)化為茶堿和1，7 二甲基黃嘌呤；
所述古尼擬青霉種子液以質(zhì)量百分比5%的接種量，接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，在25-28 °C下恒溫培養(yǎng)20-50d，自然pH值。
[0006]所述發(fā)酵培養(yǎng)基干物質(zhì)的組成為茶葉60 - 85%、麩皮占10-35%、葡萄糖2 — 10%、碳酸鈣I 一 5%，所述水與干物質(zhì)比重為100: (55-75)。
[0007]所述的滅菌為121 1:下，高壓滅菌30_60min。
[0008]本發(fā)明利用古尼擬青霉生物轉(zhuǎn)化茶咖啡因的方法與現(xiàn)有技術(shù)相比，所產(chǎn)生的有益效果是:
本發(fā)明利用古尼擬青霉生物轉(zhuǎn)化茶咖啡因，不僅降低了茶葉中咖啡因的含量，也豐富了茶葉中生理活性物質(zhì)種類。目前，主要采用直接法去除咖啡因，即通過有機溶劑萃取、水浸提和超臨界C O 2處理等方法。這些方法有無法避免的缺陷，如有機溶劑殘留，過程復(fù)雜，設(shè)備成本較高等。本發(fā)明利用古尼擬青霉生物轉(zhuǎn)化茶咖啡因的方法，易于掌握、簡單實用、綠色環(huán)保，適用于規(guī)?；纳a(chǎn)，也適用于食品行業(yè)。對比于現(xiàn)有技術(shù)中的降低咖啡因的做法，本發(fā)明方法的優(yōu)點在于生物轉(zhuǎn)化所具有的的高效性、安全性與經(jīng)濟性等。通過試驗證明，在古尼擬青霉固體發(fā)酵作用下，可以改善茶葉中的生理活性物質(zhì)種類，減少咖啡因在茶葉中的含量，使其部分轉(zhuǎn)化為茶堿和1，7 二甲基黃嘌呤。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0009]附圖1為咖啡因的化學(xué)分子結(jié)構(gòu)式。
[0010]附圖2為1,7 二甲基黃嘌呤的晶體結(jié)構(gòu)。
[0011]附圖3為茶堿的晶體結(jié)構(gòu)。
[0012]附圖4為古尼擬青霉固體發(fā)酵茶咖啡因生物轉(zhuǎn)化的TLC分析。其中字母C代表咖啡因，字母P代表1，7 二甲基黃嘌呤，字母T代表茶堿。I為古尼擬青霉固體發(fā)酵茶提取物的TLC展開圖譜，2、3、4、5依次分別為茶、菌茶培養(yǎng)基、古尼擬青霉接種液的菌茶培養(yǎng)基及古尼擬青霉液體發(fā)酵液與菌絲體混合物的提取物的TLC展開圖譜，用碘化鉍鉀試劑顯色結(jié)果表明，茶的咖啡因(C)經(jīng)古尼擬青霉固體發(fā)酵后，一部分咖啡因轉(zhuǎn)化為茶堿(T)和1，7 二甲基黃嘌呤(P)。
[0013]附圖5為古尼擬青霉固體發(fā)酵茶咖啡因生物轉(zhuǎn)化的HPLC分析。其中字母C代表咖啡因，字母P代表1，7 二甲基黃嘌呤，字母T代表茶堿。I表示3種生物堿的HPLC圖譜，咖啡因、1，7 二甲基黃嘌呤和茶堿保留時間分別為21.307min、12.992 min和11.408 min ；2 - 4依次為古尼擬青霉液體發(fā)酵液與菌絲體混合物、茶培養(yǎng)基質(zhì)及古尼擬青霉固體發(fā)酵茶提取物的HPLC圖譜。HPLC分析表明，茶咖啡因(C)經(jīng)古尼擬青霉發(fā)酵后，轉(zhuǎn)化為茶堿(T)和1，7 二甲基黃嘌呤(P)。
[0014]
【具體實施方式】[0015]下面結(jié)合實施例，進一步闡述本發(fā)明。這些實施舉例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。
[0016]實施例1
一種利用古尼擬青霉生物轉(zhuǎn)化茶咖啡因的方法，其特征在于:以古尼擬青霉為出發(fā)菌株，采用紅茶茶葉、麩皮、葡萄糖、碳酸鈣、水組成發(fā)酵培養(yǎng)基，生物轉(zhuǎn)化茶咖啡因，包括以下步驟:
(O菌種活化:采用古尼擬青霉為出發(fā)菌株，將其劃線接種于試管斜面，培養(yǎng)成熟，準備移種；
(2)種子液制備:直接挑取活化后的菌體，接種于裝有150mL馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)液的三角瓶中，搖瓶培養(yǎng)，制備古尼擬青霉種子液；
(3)生物轉(zhuǎn)化過程:將古尼擬青霉種子液添加到滅菌后的發(fā)酵培養(yǎng)基中，在古尼擬青霉生長發(fā)酵作用下，茶葉中的咖啡因部分轉(zhuǎn)化為茶堿和1，7 二甲基黃嘌呤；
所述古尼擬青霉種子液以質(zhì)量百分比5%的接種量，接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，在25°C下恒溫培養(yǎng)50d，自然pH值。
[0017]所述發(fā)酵培養(yǎng)基干物質(zhì)的組成為紅茶茶葉60g、麩皮占10g、葡萄糖2g、碳酸鈣lg，所述水與干物質(zhì)比重為100:55。
[0018]所述的滅菌為121 °C下，高壓滅菌30min。
[0019]實施例2
一種利用古尼擬青霉生物轉(zhuǎn)化茶咖啡因的方法，其特征在于:以古尼擬青霉為出發(fā)菌株，采用綠茶茶葉、麩皮、葡萄糖、碳酸鈣、水組成發(fā)酵培養(yǎng)基，生物轉(zhuǎn)化茶咖啡因，包括以下步驟:
(O菌種活化:采用古尼擬青霉為出發(fā)菌株，將其劃線接種于試管斜面，培養(yǎng)成熟，準備移種；
(2)種子液制備:直接挑取活化后的菌體，接種于裝有150mL馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)液的三角瓶中，搖瓶培養(yǎng)，制備古尼擬青霉種子液；
(3)生物轉(zhuǎn)化過程:將古尼擬青霉種子液添加到滅菌后的發(fā)酵培養(yǎng)基中，在古尼擬青霉生長發(fā)酵作用下，茶葉中的咖啡因部分轉(zhuǎn)化為茶堿和1，7 二甲基黃嘌呤；
所述古尼擬青霉種子液以質(zhì)量百分比5%的接種量，接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，在26 °C下恒溫培養(yǎng)35d，自然pH值。
[0020]所述發(fā)酵培養(yǎng)基干物質(zhì)的組成為綠茶茶葉70g、麩皮占25g、葡萄糖6g、碳酸鈣3g，所述水與干物質(zhì)比重為100:60。
[0021]所述的滅菌為121 °C下，高壓滅菌45min。
[0022]實施例3
一種利用古尼擬青霉生物轉(zhuǎn)化茶咖啡因的方法，其特征在于:以古尼擬青霉為出發(fā)菌株，采用紅茶茶葉、麩皮、葡萄糖、碳酸鈣、水組成發(fā)酵培養(yǎng)基，生物轉(zhuǎn)化茶咖啡因，包括以下步驟:
(O菌種活化:采用古尼擬青霉為出發(fā)菌株，將其劃線接種于試管斜面，培養(yǎng)成熟，準備移種；
(2)種子液制備:直接挑取活化后的菌體，接種于裝有150 mL馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)液的三角瓶中，搖瓶培養(yǎng)，制備古尼擬青霉種子液；
(3)生物轉(zhuǎn)化過程:將古尼擬青霉種子液添加到滅菌后的發(fā)酵培養(yǎng)基中，在古尼擬青霉生長發(fā)酵作用下，茶葉中的咖啡因部分轉(zhuǎn)化為茶堿和1，7 二甲基黃嘌呤；
所述古尼擬青霉種子液以質(zhì)量百分比5%的接種量，接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，在28 °C下恒溫培養(yǎng)50d，自然pH值。
[0023]所述發(fā)酵培養(yǎng)基干物質(zhì)的組成為紅茶茶葉85g、麩皮占35g、葡萄糖10g、碳酸鈣5g，所述水與干物質(zhì)比重為100:75。
[0024]所述的滅菌為121 °C下，高壓滅菌60min。
[0025]實施例4
一種利用古尼擬青霉生物轉(zhuǎn)化茶咖啡因的方法，其特征在于:以古尼擬青霉為出發(fā)菌株，采用烏龍茶茶葉、麩皮、葡萄糖、碳酸鈣、水組成發(fā)酵培養(yǎng)基，生物轉(zhuǎn)化茶咖啡因，包括以下步驟:
(O菌種活化:采用古尼擬青霉為出發(fā)菌株，將其劃線接種于試管斜面，培養(yǎng)成熟，準備移種；
(2)種子液制備:直接挑取活化后的菌體，接種于裝有150mL馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)液的三角瓶中，搖瓶培養(yǎng)，制備古尼擬青霉種子液；
(3)生物轉(zhuǎn)化過程:將古尼擬青霉種子液添加到滅菌后的發(fā)酵培養(yǎng)基中，在古尼擬青霉生長發(fā)酵作用下，茶葉中的咖啡因部分轉(zhuǎn)化為茶堿和1，7 二甲基黃嘌呤；
所述古尼擬青霉種子液以質(zhì)量百分比5%的接種量，接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，在28 °C下恒溫培養(yǎng)50d，自然pH值。
[0026]所述發(fā)酵培養(yǎng)基干物質(zhì)的組成為烏龍茶茶葉250g、麩皮占100g、葡萄糖20g、碳酸鈣5g，所述水與干物質(zhì)比重為100:75。
[0027]所述的滅菌為121 °C下，高壓滅菌60min。
[0028]實驗I茶葉中生物轉(zhuǎn)化前后咖啡因定量對比的實驗 O以茶葉為主要培養(yǎng)基質(zhì)的古尼擬青霉固體發(fā)酵
以實施例4展開說明，配制茶基質(zhì)固體培養(yǎng)基(配方:250g烏龍茶、IOOg麩皮、20g葡萄糖和5g碳酸鈣)，加水混勻，分裝于250mL的三角瓶，取其中一瓶接種5mL已活化好的古尼擬青霉菌液作為對照，也在121 °C下滅菌30min。培養(yǎng)基冷卻后，接種5mL已活化好的古尼擬青霉菌液，于25 V的恒溫培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)35d。
[0029]2)古尼擬青霉固體發(fā)酵茶有機粗提物的制備
將靜置培養(yǎng)好的古尼擬青霉固體發(fā)酵茶取出，于50°C下烘干、稱取200g，加入甲醇浸泡三次，獲得粗提物12.12g，先將粗提物用乙酸乙酯:水(1:1)萃取后，往水相中加入等體積的正丁醇，正丁醇相用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮蒸干，獲得正丁醇提取物2.53g。
[0030]3)古尼擬青霉固體發(fā)酵茶中的咖啡因、茶堿和1，7 二甲基黃嘌呤的分離
取2)所述的古尼擬青霉固體發(fā)酵茶正丁醇相粗提物1.5g，用適量甲醇溶解后經(jīng)凝膠柱(120g)層析，甲醇洗脫，流速約為15-20s/drOp，每管收集3mL，后經(jīng)TLC檢測分析后合并得到組分 GNl (181.4mg)和 GN2 (52.7mg)。
[0031]GNl經(jīng)適量甲醇充分溶解后，用反相硅膠(30g)柱層析，10%、20%、30%、100%的甲醇分別各洗脫500mL，流速控制為12 mL/min，后經(jīng)TLC檢測后，在10%甲醇洗脫出來的組分GNl.l (112.4mg)0 GNl.l (112.5mg)13mg,經(jīng)正相娃膠(0.6g)柱層析,氯仿-甲醇(100:1)洗脫200mL，每試管大約收集10mL，得到的GN.1.1.1 (11.3mg)。GNl.1.1 (11.3mg)用適量甲醇充分溶解后，經(jīng)凝膠柱層析甲醇洗脫，流速約為15-20s/drOp，每管收集3mL，經(jīng)TLC檢測分析后得到純化合物JCN-1 (9.3mg)，經(jīng)核磁共振波譜測定，化合物JCN-1的1H NMR(500MHz，CD3OD): δ 7.86 (s, 1H, H-8)，δ 3.34 (s, N「CH3)，δ 3.52 (s, 1Η, N3-CH3),δ 3.98 (s, 1Η, N7-CH3),化合物 JCN-1 的 13C NMR (500 MHz, CD3OD): δ (149.8，C_2)，δ (153.2, C-4), δ (108.7，C-5), δ (156.7, C_6)，δ (140.2，C_5)， δ (144.0，C_6)，δ (30.1, N「CH3)，δ (33.9，N3-CH3)，δ (28.2，N7-CH3)，經(jīng)與文獻比較將化合物 JCN-1 確定為咖啡因，如圖1所示。
[0032]GN2經(jīng)適量甲醇充分溶解后，用反相硅膠(30g)柱層析，30%、50%、70%、100%的甲醇分別各洗脫500mL，流速控制為12mL/min，經(jīng)TLC檢測后，在30%甲醇洗脫出來的組分GN2.1(39.3mg)。GN2.1 (39.3mg) 27mg，經(jīng)正相硅膠(0.7g)柱層析，石油醚-丙酮(5:1)洗脫500mL，每試管大約收集10mL，經(jīng)TLC檢測分析，合并得到組分GN2.1.1和GN2.1.2。GN2.1.1經(jīng)反相硅膠(IOg)柱層析，10%甲醇洗脫500mL，流速控制為12 mL/min，經(jīng)TLC檢測分析得純化合物JCN-2.1(2.3mg)，經(jīng)晶體衍射分析鑒定，化合物JCN-2.1為1，7 二甲基黃嘌呤，如圖2所示。GN.2.1.2經(jīng)反相硅膠(30g)柱層析，10%甲醇洗脫500mL，流速控制為12mL/min，經(jīng)TLC檢測分析獲得純化合物JCN-2.2( 17.1mg),經(jīng)晶體衍射分析鑒定，化合物JCN-2.2為茶堿，如圖3所示。
[0033]4)古尼擬青霉固體發(fā)酵茶咖啡因生物轉(zhuǎn)化的TLC分析
取培養(yǎng)所用的茶20g、高壓滅活的菌茶培養(yǎng)基20g、高壓滅活含有古尼擬青霉接種液的菌茶培養(yǎng)基20g及古尼擬青霉液體發(fā)酵液與菌絲體混合物(用40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干)，按照2)所述的方法制備這4種提取物作為對照。將古尼擬青霉固體發(fā)酵茶提取物與4種提取物一起作TLC分析，用氯仿:甲醇(10:1)為展開劑，碘化鉍鉀試劑(2 mL的0.6 mo I/L HCl溶液中加入碘化鉍鉀lg，再加水至10 mL，搖勻)為顯色劑，使用時將薄層板浸于碘化鉍鉀試劑溶液中，水沖洗后觀察。結(jié)果如圖4所示，茶的咖啡因經(jīng)古尼擬青霉固體發(fā)酵后，一部分咖啡因轉(zhuǎn)化為茶堿和1，7 二甲基黃嘌呤，豐富了茶葉中生物堿種類，平衡優(yōu)化了茶葉中各生物堿的含量。
[0034]同樣的，對實施例1、2和3也做了相應(yīng)實驗，實驗結(jié)果與實施例4的實驗結(jié)果無明顯差別，故在此不作復(fù)述。
[0035]5)古尼擬青霉固體發(fā)酵茶咖啡因生物轉(zhuǎn)化的HPLC分析
將菌茶分離到的3個化合物咖啡因、茶堿和1，7 二甲基黃嘌呤分別配成I mg/mL甲醇溶液。將4)所述的茶、高壓滅活的菌茶培養(yǎng)基、高壓滅活含有古尼擬青霉接種液的菌茶培養(yǎng)基及古尼擬青霉液體發(fā)酵液與菌絲體混合物的4種提取物，分別用甲醇配成10mg/mL，用
0.2 um有機濾膜過濾后，進行HPLC分析，用含有0.1%甲酸的20%甲醇為洗脫劑，流速為ImL/min，紫外吸收值為270 nm?；衔锟Х纫?、茶堿和1，7 二甲基黃嘌呤的保留時間分別為21.307min、12.992 min和11.408 min。HPLC分析表明如圖5所示，茶咖啡因經(jīng)古尼擬青霉發(fā)酵后，轉(zhuǎn)化為茶堿和1，7 二甲基黃嘌呤。
[0036]同樣的，對實施例1、2和3也做了相應(yīng)實驗，實驗結(jié)果與實施例4的實驗結(jié)果無明顯差別，故在此不作復(fù)述。
【權(quán)利要求】
1.一種利用古尼擬青霉生物轉(zhuǎn)化茶咖啡因的方法，其特征在于:以古尼擬青霉為出發(fā)菌株，采用茶葉、麩皮、葡萄糖、碳酸鈣、水組成發(fā)酵培養(yǎng)基，生物轉(zhuǎn)化茶咖啡因，包括以下步驟: (1)菌種活化:采用古尼擬青霉為出發(fā)菌株，將其劃線接種于試管斜面，培養(yǎng)成熟，準備移種； (2)種子液制備:直接挑取活化后的菌體，接種于裝有150mL馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)液的三角瓶中，搖瓶培養(yǎng)，制備古尼擬青霉種子液； (3)生物轉(zhuǎn)化過程:將古尼擬青霉種子液添加到滅菌后的發(fā)酵培養(yǎng)基中，在古尼擬青霉生長發(fā)酵作用下，茶葉中的咖啡因部分轉(zhuǎn)化為茶堿和1，7 二甲基黃嘌呤。
2.根據(jù)權(quán)利要求1中的一種利用古尼擬青霉生物轉(zhuǎn)化茶咖啡因的方法，其特征在于:所述古尼擬青霉種子液以質(zhì)量百分比5%的接種量，接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，在25-28 °C下恒溫培養(yǎng)20-50d，自然pH值。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2中的一種利用古尼擬青霉生物轉(zhuǎn)化茶咖啡因的方法，其特征在于:所述發(fā)酵培養(yǎng)基干物質(zhì)的組成為茶葉65 - 85%、麩皮占10-35%、葡萄糖2 — 10%、碳酸鈣I 一 5%，所述水與干物質(zhì)比重為100: (55-75)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1中的一種利用古尼擬青霉生物轉(zhuǎn)化茶咖啡因的方法，其特征在于:步驟(3)所述的滅菌為121 1:下，高壓滅菌30-60min。
【文檔編號】A23F3/36GK103431128SQ201310336267
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2013年8月5日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月5日
【發(fā)明者】鄭永標, 黃建忠, 林琳 申請人:福建師范大學(xué)