專利名稱：復(fù)合酶解輔助提取蜂膠中有效成份的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種蜂膠中有 效成份的提取方法，特別涉及利用復(fù)合酶解輔助提取蜂膠中有效成份的方法。
背景技術(shù)：
蜂膠是蜜蜂從楊樹、樺樹、柳樹以及針葉樹等膠原植物的皮或者嫩芽中采集的樹脂和汁液，與蜜蜂本身的喉腺分泌物混合而成。黃酮類化合物是蜂膠的主要營養(yǎng)成分，蜂膠黃酮具有廣泛的生物學(xué)活性，如抗氧化、抗腫瘤、抗炎癥和調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞等效應(yīng)。蜂膠經(jīng)過提純后得到的蜂膠膏一般含有30%的黃酮類化合物，其中含有比較多的黃酮糖苷類化合物。而研究結(jié)果表明，黃酮苷元清除人體氧自由基的生物活性明顯優(yōu)于黃酮糖苷，黃酮苷元的效價(jià)是黃酮糖苷效價(jià)的7倍。蜂膠中黃酮苷元的化學(xué)成份為楊梅黃酮、槲皮素、芹菜素、 松屬素等。黃酮苷元的生物活性之所以大大優(yōu)于黃酮糖苷，是因?yàn)辄S酮類化合物在動(dòng)物體內(nèi)代謝時(shí)，僅有苷元型黃酮可以直接被吸收進(jìn)入動(dòng)物血液中，而大部分糖苷型的黃酮化合物在人體內(nèi)不能通過小腸壁進(jìn)入到血液中，而是被腸腔內(nèi)微生物通過雜環(huán)裂解方式降解和代謝，其中僅有小部分黃酮在結(jié)腸內(nèi)益生菌分泌的水解酶作用下，產(chǎn)生苷元再重新吸收進(jìn)入血液。黃酮糖苷在動(dòng)物體內(nèi)的生物利用率遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于苷元型黃酮，黃酮苷類物質(zhì)在人體內(nèi)的利用率很低，抗氧化活性也是得不到保證。因此，改善黃酮的構(gòu)型、提高其在血液中的吸收率是提高黃酮類產(chǎn)物生物利用率的重要途徑。改變黃酮苷糖體的構(gòu)型，主要有化學(xué)轉(zhuǎn)化法和生物轉(zhuǎn)化法。目前，國內(nèi)外大多采用化學(xué)法水解黃酮糖苷，通過黃酮的醚化、酯化、?；然瘜W(xué)衍生化反應(yīng)，以改變黃酮的特性，如提高脂溶性，但是這些反應(yīng)程往往屏蔽了黃酮類化合物的主要功能團(tuán)一酚羥基，對抗氧化作用產(chǎn)生不利影響，且加工中容易產(chǎn)生環(huán)境污
^fe ο現(xiàn)在蜂膠產(chǎn)業(yè)化的提取產(chǎn)方法主要是乙醇提取和超臨界C02萃取，這兩種提取方法所提取的蜂膠黃酮類化合物大都是黃酮糖苷類化合物，沒有對其進(jìn)行分子結(jié)構(gòu)的修飾， 因此通過現(xiàn)有技術(shù)提取的蜂膠的營養(yǎng)成份仍然是人體利用率較低的黃酮苷類物質(zhì)。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的本發(fā)明的目的是提供一種可以提高蜂膠中有效成份的生物活性和有效成份品質(zhì)的、反應(yīng)溫和、經(jīng)濟(jì)環(huán)保、反應(yīng)具有高度的專一性和選擇性的利用復(fù)合酶解輔助提取蜂膠中營養(yǎng)成份的方法。技術(shù)方案1、一種復(fù)合酶解輔助提取蜂膠中有效成份的方法，所述提取方法包括以下步驟a)毛膠的預(yù)處理毛膠經(jīng)預(yù)選分級(jí)，去除雜質(zhì)，放入冷藏柜，進(jìn)行冷凍；b)將冷凍后的毛膠進(jìn)行粉碎成顆粒，對粉碎后的顆粒進(jìn)行篩選，對大于20目的顆粒返回冷藏柜；c)將破碎篩選后的毛膠顆粒與一定配比的水和復(fù)合酶的混合液混合，將混合原料鋪在生物酶解床上，調(diào)節(jié)好相應(yīng)的溫濕度、PH值，進(jìn)行生物酶解反應(yīng)；d)酶解過程始終保持原料的均勻，酶解完成后將原料放入浸提釜，加無水乙醇使其濃度達(dá)到75%，使酶滅活，同時(shí)進(jìn)行乙醇提??；e)在常溫下常壓浸提24_48h ；并正反方向不斷攪拌，24_48h后，停止攪拌；靜置
24-48h，放出上清液經(jīng)200目與500兩次過濾，濾液進(jìn)入儲(chǔ)罐；再次加95%乙醇如上述工藝重復(fù)2次，上清液與渣的離心液再經(jīng)兩次過濾，最后合并濾液；浸漬過程中溫度應(yīng)保持在
25-30°C左右，溫度過低溶解度降低導(dǎo)致時(shí)間延長，溶劑用量加大；f)濾液進(jìn)入減壓蒸發(fā)器，采用水浴加熱；濃縮溫度40-50°C，真空度0. 096以上；g)蒸發(fā)出的乙醇蒸氣經(jīng)冷凝器回收注入溶劑回收罐，循環(huán)使用。h)蒸發(fā)后的蜂膠注模成型。所述復(fù)合酶為β -鼠李糖苷酶、β -葡萄糖苷酶、木聚糖酶、果膠酶、α -淀粉酶； 各種酶解參數(shù)如下β -鼠李糖苷酶50-100IU/mg、β -葡萄糖苷酶50-100IU/mg、木聚糖酶 1000-2000IU/mg、果膠酶 20-50IU/mg、α -淀粉酶 10_50IU/mg，加酶總量 0. 5-1. 5%，酶解溫度50-60°C，酶解濕度30-50%，酶解pH 3. 5-5. 0，酶解時(shí)間12_24h。所述浸提釜選用配回流冷凝器的反應(yīng)釜，乙醇提取時(shí)加入乙醇的比例為按照重量酶解后毛膠與95%的乙醇比例為1 4到1 8之間。有益效果本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，其顯著優(yōu)點(diǎn)是1、將酶解蜂膠技術(shù)與醇提蜂膠技術(shù)相結(jié)合運(yùn)用到生產(chǎn)實(shí)際中，工藝簡單，工藝參數(shù)范圍準(zhǔn)確，易實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化；2、所提取蜂膠的營養(yǎng)成份中提高了楊梅黃酮、槲皮素、芹菜素、松屬素等黃酮苷元的含量；3、可以明顯提高蜂膠酶解產(chǎn)物的抗氧化活性。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但本發(fā)明并不僅限于以下實(shí)例。實(shí)例1一種復(fù)合酶解輔助提取蜂膠中有效成份的方法，包括以下步驟a)稱取去雜毛膠150kg，置于_18°C溫度下冷凍48h。b)采用液氮冷凍粉碎成10目的細(xì)顆粒；對粉碎后的顆粒進(jìn)行篩選，對大于20目的顆粒返回冷藏柜。c)按毛膠原料重量比1 1加入復(fù)合酶系β -鼠李糖苷酶、β “葡萄糖苷酶、木聚糖酶、果膠酶、α-淀粉酶，酶用量分別為50IU/mg、50IU/mg、1000IU/mg、20IU/mg、10IU/ mg，后將混合原料鋪在生物酶解床上進(jìn)行生物酶解反應(yīng)；酶解反應(yīng)參數(shù)確定為酶解溫度 501、酶解濕度35%，酶解？!1 4.0，酶解時(shí)間121!。酶解完后按酶解料重量比乙醇提取基本參數(shù)確定為浸提釜選用配回流冷凝器的反應(yīng)釜。加入95%乙醇，酶解后毛膠(重量) 乙醇(重量)為1 5。d)在常溫下常壓浸提36h，并正反方向不斷攪拌。36h后，停止攪拌，靜置36h，放出上清液經(jīng)200目與500兩次過濾，濾液進(jìn)入儲(chǔ)罐，再次加95 %乙醇如上述工藝重復(fù)2次，上清液與渣的離心液再經(jīng)兩次過濾，最 后合并濾液。浸漬過程中溫度應(yīng)保持在25-30°C左右， 溫度過高會(huì)引起蜂蠟大量溶化，造成過濾困難；溫度過低溶解度降低導(dǎo)致時(shí)間延長，溶劑用量加大。
e)濾液進(jìn)入減壓蒸發(fā)器，采用水浴加熱。濃縮溫度40-50°C，真空度0. 096以上， 這樣可以減少揮發(fā)油的蒸發(fā)和有效成分受熱變性。f)蒸發(fā)出的乙醇蒸氣經(jīng)冷凝器回收注入溶劑回收罐，循環(huán)使用。 g)濃縮蒸發(fā)后的蜂膠注模成型后即成蜂膠浸膏。利用高效液相色譜檢測復(fù)合酶解蜂膠提取法提取產(chǎn)物中黃酮苷元含量的比較，經(jīng)酶解后提取的蜂膠提取物其楊梅黃酮、槲皮素、芹菜素、松屬素黃酮糖元的含量明顯增加。 分別提高了 71%，17.4%，2. 等酶解對蜂膠黃酮苷元含量的影響(ug/mg)
常規(guī)蜂膠提取物復(fù)合酶解蜂膠提取物~
楊梅黃酮28 9497&
槲皮素3672 Γ
坎菲醇12Γ5ΓΤΤ
芹菜素ο
高良姜素381365. 5
柯因112. 3114.6實(shí)例2一種復(fù)合酶解輔助提取蜂膠中有效成份的方法，包括以下步驟a)稱取去雜毛膠150kg，置于_18°C溫度下冷凍48h。b)采用液氮冷凍粉碎成20目的細(xì)顆粒；對粉碎后的顆粒進(jìn)行篩選，對大于20目的顆粒返回冷藏柜。C)按毛膠原料重量比1 1加入復(fù)合酶系β-鼠李糖苷酶、β-葡萄糖苷酶、木聚糖酶、果膠酶、α-淀粉酶，酶用量分別為 100IU/mg、100IU/mg、2000IU/mg、50IU/mg、50IU/ mg，后將混合原料鋪在生物酶解床上進(jìn)行生物酶解反應(yīng)。酶解反應(yīng)參數(shù)確定為酶解溫度 60 V、酶解濕度50 %，酶解pH 5. 5，酶解時(shí)間24h。d)酶解完后按酶解料重量比乙醇提取基本參數(shù)確定為浸提釜選用配回流冷凝器的反應(yīng)釜。加入95%乙醇，酶解后毛膠(重量)乙醇(重量)=1 6。e)在常溫下常壓浸提48h，并正反方向不斷攪拌。48h后，停止攪拌，靜置48h，放出上清液經(jīng)200目與500兩次過濾，濾液進(jìn)入儲(chǔ)罐，再次加95 %乙醇如上述工藝重復(fù)2次，上清液與渣的離心液再經(jīng)兩次過濾，最后合并濾液。浸漬過程中溫度應(yīng)保持在25-30°C左右， 溫度過高會(huì)引起蜂蠟大量溶化，造成過濾困難；溫度過低溶解度降低導(dǎo)致時(shí)間延長，溶劑用量加大。浸提時(shí)間長可以使蜂膠中的某些成分與乙醇起脂化作用，增加蜂膠液的香味。f)濾液進(jìn)入減壓蒸發(fā)器，采用水浴加熱。濃縮溫度40-50°C，真空度0. 096以上， 這樣可以減少揮發(fā)油的蒸發(fā)和有效成分受熱變性。g)濃縮蒸發(fā)后的蜂膠注模成型后即成純蜂膠浸膏。
利用高效液相色譜檢測復(fù)合酶解蜂膠提取法提取產(chǎn)物中黃酮苷元含量的比較，經(jīng)酶解后提取的蜂膠提取物其楊梅黃酮、槲皮素、芹菜素、松屬素黃酮糖元的含量明顯增加。 分別提高了 104%,44. 4%,4. 等

酶解對蜂膠黃酮苷元含量的影響(ug/mg)
常規(guī)蜂膠提取物復(fù)合酶解蜂膠提取物~
楊梅黃酮28 959 2
槲皮素3672523
坎菲醇12Γ5ΓΤ Γ8
芹菜素09 6
高良姜素381375. 7
柯因112. 3116.8
權(quán)利要求
1.復(fù)合酶解輔助提取蜂膠中有效成份的方法，其特征在于所述提取方法包括以下步驟a)毛膠的預(yù)處理毛膠經(jīng)預(yù)選分級(jí)，去除雜質(zhì)，放入冷藏柜，進(jìn)行冷凍；b)將冷凍后的毛膠進(jìn)行粉碎成顆粒，對粉碎后的顆粒進(jìn)行篩選，對大于20目的顆粒返回冷藏柜；c)將破碎篩選后的毛膠顆粒與一定配比的水和復(fù)合酶的混合液混合，將混合原料鋪在生物酶解床上，調(diào)節(jié)好相應(yīng)的溫濕度、PH值，進(jìn)行生物酶解反應(yīng)；d)酶解過程始終保持原料的均勻，酶解完成后將原料放入浸提釜，加無水乙醇使其濃度達(dá)到75%，使酶滅活，同時(shí)進(jìn)行乙醇提??；e)在常溫下常壓浸提24-48h;并正反方向不斷攪拌，24-48h后，停止攪拌；靜置24-48h，放出上清液經(jīng)200目與500兩次過濾，濾液進(jìn)入儲(chǔ)罐；再次加95%乙醇如上述工藝重復(fù)2次，上清液與渣的離心液再經(jīng)兩次過濾，最后合并濾液；浸漬過程中溫度應(yīng)保持在25-30°C左右，溫度過低溶解度降低導(dǎo)致時(shí)間延長，溶劑用量加大；f)濾液進(jìn)入減壓蒸發(fā)器，采用水浴加熱；濃縮溫度40-50°C，真空度0.096以上；g)蒸發(fā)出的乙醇蒸氣經(jīng)冷凝器回收注入溶劑回收罐，循環(huán)使用。h)蒸發(fā)后的蜂膠注模成型。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)合酶解輔助提取蜂膠中有效成份的方法，其特征在于 所述復(fù)合酶為β “鼠李糖苷酶、β “葡萄糖苷酶、木聚糖酶、果膠酶、α “淀粉酶；各種酶解參數(shù)如下β -鼠李糖苷酶50-100IU/mg、β-葡萄糖苷酶50-100IU/mg、木聚糖酶 1000-2000IU/mg、果膠酶 20-50IU/mg、α -淀粉酶 10_50IU/mg，加酶總量 0. 5-1. 5%，酶解溫度50-60°C，酶解濕度30-50%，酶解pH 3. 5-5. 0，酶解時(shí)間12_24h。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)合酶解輔助提取蜂膠中有效成份的方法，其特征在于所述浸提釜選用配回流冷凝器的反應(yīng)釜，乙醇提取時(shí)加入乙醇的比例為按照重量酶解后毛膠與95%的乙醇比例為1 4到1 8之間。
全文摘要
本發(fā)明提供了復(fù)合酶解輔助提取蜂膠中有效成份的方法，屬于蜂膠的提取技術(shù)，包括以下步驟選用優(yōu)質(zhì)毛膠為原料，經(jīng)去雜、冷凍、粉碎后，均質(zhì)混合一定量的酶解劑；混合后的原料充填在生物酶解床上，通過調(diào)節(jié)酶解溫度、濕度、pH、時(shí)間等參數(shù)進(jìn)行生物酶解；在提取罐中通過控制酒精度、料液比、溫度、壓力、時(shí)間等因素進(jìn)行分級(jí)提取蜂膠中的黃酮類化合物；控制濃縮溫度和真空度進(jìn)行減壓蒸餾，去除雜質(zhì)和水分。其顯著優(yōu)點(diǎn)是1、將酶解蜂膠技術(shù)與醇提蜂膠技術(shù)相集成運(yùn)用到生產(chǎn)實(shí)際中，工藝簡單，工藝參數(shù)范圍準(zhǔn)確，易實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化；2、所提取蜂膠的有效成份中提高了楊梅黃酮、槲皮素、芹菜素、松屬素等黃酮苷元的含量；3、可以明顯提高蜂膠酶解產(chǎn)物的抗氧化活性。
文檔編號(hào)C12P17/06GK102321699SQ20111017478
公開日2012年1月18日 申請日期2011年6月24日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月24日
發(fā)明者張敏, 毛日文, 邵興軍 申請人:江蘇江大源生態(tài)生物科技有限公司