專利名稱：果汁中耐熱菌的快速檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及食品衛(wèi)生檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體地說是一種果汁中耐熱菌的快速 檢測方法。
背景技術(shù)：
耐熱菌，即酸土環(huán)脂芽抱桿菌(^/icyc7oZ aw'L ^s acjV"arre^n'5")， 是1994年從腐敗的蘋果汁中發(fā)現(xiàn)的，它是一種嗜酸、嗜熱的芽孢桿菌，能經(jīng) 受酸性條件(pH3.5)和巴氏滅菌而存活，是果汁生產(chǎn)中重要的目標控制微生 物，它在果汁中大量繁殖，不產(chǎn)生氣體，不改變果汁的外觀，但會代謝產(chǎn)生以 愈創(chuàng)木酚為主的化學(xué)物質(zhì)，釋放類似臭襪子的特殊的化學(xué)藥品氣味，有時會使 果汁輕微沉淀或出現(xiàn)霧狀渾濁，對果汁感官品質(zhì)產(chǎn)生重大影響，完全破壞了果 汁的食用性和商品價值。隨著人們對食品安全問題的日益重視，國際貿(mào)易中對 果汁的耐熱菌含量要求很高，耐熱菌的有效控制，首先需要有快速而準確的檢 測方法。
目前常用的耐熱菌檢測方法有常規(guī)的培養(yǎng)檢測法、分子生物學(xué)的DNA分析 或16SrRNA序列分析方法。由于耐熱菌生長緩慢，常規(guī)的培養(yǎng)檢測法需要4 5 日才能出檢測報告，分析結(jié)果的滯后使之無法及時指導(dǎo)生產(chǎn)。分子生物學(xué)的DNA 分析或16SrRNA序列分析的方法雖然檢測的時間較短，但檢測成本較高，檢測 步驟復(fù)雜， 一般小型果汁廠家不會采用這種分子生物學(xué)的分析方法對日常生產(chǎn) 進行質(zhì)量控制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足而提供的一種果汁中耐熱菌的快速 檢測方法，分析工藝簡單，操作方便，它能快速、直觀的檢測果汁飲料中的耐熱菌，檢測費用低，對日常生產(chǎn)能有效、及時的進行質(zhì)量控制，是一種很有應(yīng) 用前景的食品衛(wèi)生檢測方法。
實現(xiàn)本發(fā)明目的的具體技術(shù)方案是 一種果汁中耐熱菌的快速檢測方法，
特點是該方法在果汁中接種耐熱菌(BAM)培養(yǎng)基，使檢測樣品大量繁殖并迅
速產(chǎn)生愈創(chuàng)木酚，利用愈創(chuàng)木酚在含有過氧化物酶的緩沖體系中與過氧化氫的
反應(yīng)，快速檢測果汁中的耐熱菌，具體檢測按下述步驟進行
a、 將檢測的果汁加熱，加熱溫度為8(TC，時間為10min，然后加入含香 草酸濃度為100ppm的耐熱菌(BAM)培養(yǎng)基為培養(yǎng)液，培養(yǎng)液在45。C溫度下， 靜止培養(yǎng)24h，加滴的耐熱菌(BAM)培養(yǎng)基與果汁的體積比為3:1。
b、 在上述培養(yǎng)液中加入濃度為50ppm的鄰苯二甲酸氫鉀溶液、3%的過氧 化氫溶液和20U/ml的過氧化物酶溶液混合均勻后，在室溫下反應(yīng)10min，培
養(yǎng)液與鄰苯二甲酸氫鉀溶液、過氧化氫溶液和過氧化物酶溶液的體積比分別 為2:1、 20:1和20:3。
c、用分光光度計測定或用肉眼觀察上述反應(yīng)的顏色變化，分光光度計測 定0D470X). 5或肉眼觀察上述反應(yīng)出現(xiàn)紅褐色，則表示檢測的果汁中含有耐 熱菌；分光光度計測定0D470 〈0.5或肉眼觀察上述反應(yīng)未出現(xiàn)紅褐色，則表 示檢測的果汁中不含有耐熱菌。
所述耐熱菌(BAM)培養(yǎng)基由培養(yǎng)基A液和培養(yǎng)基B液按體積比為1000:1 配制而成，培養(yǎng)基A液和培養(yǎng)基B液為下述組分混合而成，所述物質(zhì)按重量百 分比計
A液
CaCl2. 2 H20: 0. 20~ 0. 30 g MgS04.7H20 : 0. 45 0. 55 g
(NH4)2 S04 :0. 15 0.25 g 酵母粉 1.50 2.50 g蒸餾水 B液 CaC1.2H20:
4. 50 5. 50 g 1000 mL
0. 56 0. 76 mg
KH2P04
2. 50 3. 50 g
NaMo04. 2H20 : 0 . 25 0. 35 mg
MnS04. 4H20: ZnS04. 7H20
0. 10 0. 20 mg 0. 10 0. 30 mg
0. 10 0. 30 mg 1. 00 mL
CoCl2.6H20 : 0. 10 0. 30 mg CuS04. 5H20 :
H3B03: 0.05 0. 15 mg 蒸餾水
所述培養(yǎng)基A液用硫酸酸化，其pH值為4.0。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有快速、直觀，檢測費用低的特點，對日常生產(chǎn) 能有效、及時的進行質(zhì)量控制，是一種很有應(yīng)用前景的食品衛(wèi)生檢測方法。
具體實施方式
實施例1
本發(fā)明是在果汁中接種耐熱菌(BAM)培養(yǎng)基，使檢測樣品大量繁殖并迅 速產(chǎn)生愈創(chuàng)木酚，利用愈創(chuàng)木酚在含有過氧化物酶的緩沖體系中與過氧化氫的 反應(yīng)，快速檢測果汁中的耐熱菌，具體檢測按下述步驟進行-
a、取待檢測的蘋果汁0.5 mL，加熱到8(TC，時間為10min，然后加入含 香草酸濃度為100ppm的耐熱菌(BAM)培養(yǎng)基1.5 mL為培養(yǎng)液，將培養(yǎng)液在 45。C溫度下，靜止培養(yǎng)24h。所述耐熱菌(B層)培養(yǎng)基由培養(yǎng)基A液和培養(yǎng)基 B液按體積比為1000:1配制而成，培養(yǎng)基A液和培養(yǎng)基B液為下述組分混合而 成，所述物質(zhì)按重量百分比計-
A液 CaCl2.2 ■ (NH4)2 S04 :
0.25 g 0.20 g
MgS04.7H20: 酵母粉
0.50 g 2.00 g蒸餾水:
5.00 g
1000 mL
KH2P04
3.00 g
用lmol/L的硫酸調(diào)上述組分溶液的pH值為4. 0; B液
CaC1.2H20:
NaMo04. 2H20:
0. 66 mg 0. 30 mg
MnS04. 4H20
ZnS04. 7H20
0. 15 mg 0. 18 mg，
0. 16 mg
1. 00 mL 氫鉀溶液1.0 mL、 3%
CoCl2. 6H20 : 0. 18 mg CuS04. 5H20
H3B03: 0. 10 mg 蒸餾水
b、 在上述培養(yǎng)液中加入濃度為50ppm的鄰苯二甲 的過氧化氫溶液50tx L和20U/ml的過氧化物酶溶液0. 3ml混合均勻后，在室 溫下反應(yīng)lOmin。
c、 用分光光度計測定上述反應(yīng)體系的吸光值，如0D470X).5，則檢測結(jié) 果為"耐熱菌陽性"，表示檢測的蘋果汁中含有耐熱菌，否則判定為"耐熱菌 陰性"，表示檢測的蘋果汁中不含有耐熱菌。
用肉眼觀察上述反應(yīng)體系的顏色變化，如反應(yīng)后出現(xiàn)紅褐色，則表示檢測 的蘋果汁中含有耐熱菌，如反應(yīng)后未出現(xiàn)紅褐色，則表示檢測的蘋果汁中不含 有耐熱菌。本發(fā)明根據(jù)檢測液顏色的變化可以判定果汁中耐熱菌的存在與否， 檢測方法簡便、快速、直觀，檢測限度為每毫升果汁中幾個耐熱菌芽孢。
上述具體實施方式
只是對本發(fā)明可行實施例之一的具體說明，并非用以限 制本發(fā)明專利，凡為本發(fā)明等效實施或變更，均應(yīng)包含于本專利的權(quán)利要求范 圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1、一種果汁中耐熱菌的快速檢測方法，其特征在于該方法是在果汁中接種耐熱菌(BAM)培養(yǎng)基，使檢測樣品大量繁殖并迅速產(chǎn)生愈創(chuàng)木酚，利用愈創(chuàng)木酚在含有過氧化物酶的緩沖體系中與過氧化氫的反應(yīng)，快速檢測果汁中的耐熱菌，具體檢測按下述步驟進行a、將檢測的果汁加熱，加熱溫度為80℃，時間為10min，然后加入含香草酸濃度為100ppm的耐熱菌(BAM)培養(yǎng)基為培養(yǎng)液，培養(yǎng)液在45℃溫度下，靜止培養(yǎng)24h，加滴的耐熱菌(BAM)培養(yǎng)基與果汁的體積比為3∶1；b、在上述培養(yǎng)液中加入濃度為50ppm的鄰苯二甲酸氫鉀溶液、3％的過氧化氫溶液和20U/ml的過氧化物酶溶液混勻后，在室溫下反應(yīng)10min，培養(yǎng)液與鄰苯二甲酸氫鉀溶液、過氧化氫溶液和過氧化物酶溶液的體積比分別為2∶1、20∶1和20∶3；c、用分光光度計測定或用肉眼觀察上述反應(yīng)的顏色變化，分光光度計測定OD470≥0.5或肉眼觀察上述反應(yīng)出現(xiàn)紅褐色，則表示檢測的果汁中含有耐熱菌；分光光度計測定OD470＜0.5或肉眼觀察上述反應(yīng)未出現(xiàn)紅褐色，則表示檢測的果汁中不含有耐熱菌。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述果汁中耐熱菌的快速檢測方法，其特征在于所述耐 熱菌(BAM)培養(yǎng)基由培養(yǎng)基A液和培養(yǎng)基B液按體積比為1000:1配制而成， 培養(yǎng)基A液和培養(yǎng)基B液為下述組分混合而成，所述物質(zhì)按重量百分比計A液CaCl2. 2 H20: 0. 20~ 0. 30 g MgS04.7H20 : 0. 45 0. 55 g(NH4)2 S04 : 0. 15~0.25 g 酵母粉 1.50 2.50 g葡萄糖 4. 50~5. 50 g KH2P04 : 2 . 50 3. 50 g蒸餾水 1000 mLB液CaCL 2H20: 0. 56 0. 76 mg MnSCk 4H20: 0. 10 0. 20 mgNaMo04. 2H20 : 0. 25 0. 35 mg ZnS04. 7H20 : 0. 10~ 0. 30 mgCoCl2. 6H20 : 0. 10~ 0. 30 mg CuS04. 5H20 : 0. 10 0. 30 mgH3B03: 0.05 0. 15mg 蒸餾水 1.00 mL
3、根據(jù)權(quán)利要求2所述果汁中耐熱菌的快速檢測方法，其特征在于所述培 養(yǎng)基A液用硫酸酸化，其pH值為4.0。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種果汁中耐熱菌的快速檢測方法，特點是該方法在果汁中接種耐熱菌(BAM)培養(yǎng)基，使檢測樣品大量繁殖并迅速產(chǎn)生愈創(chuàng)木酚，利用愈創(chuàng)木酚在含有過氧化物酶的緩沖體系中與過氧化氫的反應(yīng)，快速檢測果汁中的耐熱菌。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有快速、直觀，檢測費用低的特點，對日常生產(chǎn)能有效、及時的進行質(zhì)量控制，是一種很有應(yīng)用前景的食品衛(wèi)生檢測方法。
文檔編號C12Q1/28GK101613739SQ200910055289
公開日2009年12月30日 申請日期2009年7月24日 優(yōu)先權(quán)日2009年7月24日
發(fā)明者葉建芳, 常忠義, 李文俊, 莫小晶, 賈彩鳳, 趙文超, 高紅亮 申請人:華東師范大學(xué)