本分案申請是基于申請?zhí)枮?00880006990.2、申請日為2008年3月3日、申請人為“布拉姆斯股份公司”、發(fā)明名稱為“借助于利尿肽對nyhai級患者進(jìn)行心功能不全的診斷和危險分層”的原始中國專利申請(原國際申請?zhí)枮閜ct/de2008/000357)的分案申請。
本發(fā)明涉及一種用于對nyhai患者的心功能不全進(jìn)行診斷和/或危險分層和/或后果預(yù)測的方法，其中，對待測患者的標(biāo)志物proanp、或者其片段或部分肽(尤其是nt-proanp或者其片段或部分肽)的測定與對待測患者的bnp、probnp和/或nt-probnp的測定是平行進(jìn)行的。
背景技術(shù)：
在歐洲，診所的急診室每年要收治約一百萬具有急性呼吸窘迫癥狀的患者。呼吸窘迫是許多疾病的特征性癥狀，并且在大約35-47％的病例中是由于心功能不全而導(dǎo)致的(januzzijljr,camargoca,anwaruddins,baggishal,chenaa,krauserdg,tungr,cameronr,nagurneyjt,chaecu,lloyd-jonesdm,browndf,foran-melansons,slusspm,lee-lewandrowskie,lewandrowskikb,then-terminalpro-bnpinvestigationofdyspneaintheemergencydepartment(pride)study,amjcardiol.95(8)(2005),pp.948-954undmaiseias,krishnaswamyp,nowa-krm,mccordj,hollanderje,ducp,omlandt,storrowab,abrahamwt,wuah,cloptonp,stegpg,westheima,knudsencw,pereza,kazanegrar,herrmannhc,mcculloughpa；breathingnotproperlymultinationalstudyinvestigators,rapidmeasurementofb-typenatriureticpeptideintheemergencydiagnosisofheartfailure,nengljmed.347(3)(2002),pp.161-167)。
患者在早期常常對心功能不全只有很小程度的察覺。如不加以醫(yī)治，該病癥通常會加重，并且在晚期時在休息時也會導(dǎo)致身體的徹底衰竭。在該階段，包括心肌本身在內(nèi)的所有身體器官供養(yǎng)不足可導(dǎo)致死亡。一旦該疾病開始發(fā)展，即使在最佳療法下，患者的預(yù)期壽命也大大下降(每年大約死亡30％)。因此，盡早地識別心衰并堅(jiān)定地明確其原因是重要的。
為了開始適當(dāng)?shù)闹委煟瑥亩枰獙υ谠缙诤驮诩痹\和重癥中已有的基礎(chǔ)病癥進(jìn)行早期診斷和區(qū)分。由于非特異性癥狀(呼吸窘迫、咳嗽)，常常使得難于對心功能不全與其他疾病進(jìn)行區(qū)分和界定。
可利用腦利鈉肽(bnp或ntprobnp)的血漿濃度的測定，來提供一種測試方法，此測試方法也在日常工作中用來診斷心功能不全(maiseletal.(supra))。在現(xiàn)有技術(shù)狀態(tài)中，nt-probnp被用于心功能不全的病程控制。
在現(xiàn)有技術(shù)中同樣也已把proanp描述為標(biāo)志物。us5498524記述了proanp對非癥候性心功能不全患者進(jìn)行診斷的應(yīng)用。ep721105b1記述了一種借助于對心臟病合適的抗體來確定proanp的方法。
然而在現(xiàn)有技術(shù)中，對具有心功能不全癥狀的患者而言，特別是在診斷、危險分層和后果預(yù)測方面非常需要改進(jìn)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
因此，本發(fā)明的目的是，提供一種用于對心功能不全進(jìn)行診斷和/或危險分層和/或后果預(yù)測的改進(jìn)方法。
然而，利用先前所知標(biāo)志物的已知診斷方法的不利之處在于，對危險患者的早期和完全檢測并不能完全成功，因而對患者進(jìn)行的危險分層是不充分的。因此，另一個作為本發(fā)明基礎(chǔ)的目的是，開發(fā)出一種對心功能不全進(jìn)行危險分層的方法，這種方法能夠改進(jìn)對危險患者特別是患者子群的檢測。
令人驚訝的是，現(xiàn)在事實(shí)已經(jīng)證明，在測定proanp或者其片段或肽，尤其是在測定nt-proanp或者其片段或肽的同時，平行地測定probnp、nt-probnp和/或bnp，能夠改進(jìn)對于心功能不全，更確切地說是對于無癥狀的典型心功能不全(nyha-stadiumi)尤其是無癥狀左心室心功能不全(nyha-stadiumi)的診斷、危險分層和后果預(yù)測。
因此，上述目的得通過一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法實(shí)現(xiàn)(后文稱作“根據(jù)本發(fā)明的方法”)。
因而，根據(jù)本發(fā)明的方法能夠特別有利地為nyhai級患者改進(jìn)診斷和預(yù)測價值。
另外，在根據(jù)本發(fā)明的特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，患者的身體質(zhì)量指數(shù)(bmi)至少為30kg/m2。這是個額外的參數(shù)，額外明顯地改進(jìn)了診斷和預(yù)測價值。
在本發(fā)明范圍內(nèi)，術(shù)語“心功能不全”是指心臟急性或慢性的衰竭，其不能供給組織以足夠的血液，并因此不能供給組織以足夠的氧氣，因而無力確保在休息或負(fù)載時的組織代謝。在臨床上，心功能不全在典型癥狀(呼吸困難、疲勞、液體潴留)存在時出現(xiàn)，其原因是基于心臟收縮或舒張功能失常的心功能失常。根據(jù)本發(fā)明，慢性心功能不全(chf)同樣包括在其中(kardiologiecompact,herausgegebenvonchrisianmewis,reimerriessenundioakimspyridopoulos,2.
根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語“危險分層”包括發(fā)現(xiàn)預(yù)后較差的患者，尤其是急診患者和重癥患者，以便對心功能不全進(jìn)行更強(qiáng)化的診斷和治療/處理，從而使得可能獲得最有利的治療進(jìn)展。因而根據(jù)本發(fā)明的危險分層，使得對于無癥狀心功能不全(nyha-stadiumi)患者采取有效的療法。
尤其有利地，尤其是在急診和/或重癥的情況下，借助于根據(jù)本發(fā)明的方法可以實(shí)現(xiàn)可靠的診斷或者后果預(yù)測。根據(jù)本發(fā)明的方法使得能夠作出導(dǎo)致快速治療成功的臨床決策。這種臨床決策同樣包括借助于藥物的進(jìn)一步治療，用于心功能不全的治療或療法，如ace抑制劑、at1拮抗劑：血管緊張素ⅱ受體(亞型1)阻滯劑、β阻滯劑比索洛爾、卡維地洛、美托洛爾和奈必洛爾、血管加壓素受體拮抗劑、自nyha-分級iii級的醛固醇拮抗劑、鈣增敏劑(左西孟旦)。
在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明所述方法因而還涉及對無癥狀心功能不全(nyha-stadiumi)的治療控制。
因此，本發(fā)明同樣涉及對患者進(jìn)行危險分層的方法，尤其是對患者進(jìn)行危險分層以進(jìn)行臨床決策，尤其是在時間緊迫的重癥或急診中，以及用于患者的入院。
在根據(jù)本發(fā)明所述方法的進(jìn)一步優(yōu)選實(shí)施方式中，對罹患無癥狀心功能不全(nyha-stadiumi)的患者進(jìn)行診斷，用于預(yù)測，優(yōu)選用于后果預(yù)測，用于鑒別診斷性早期識別和識別，用于嚴(yán)重程度的評價以及用于伴隨治療的過程評估。
在根據(jù)本發(fā)明所述方法的進(jìn)一步實(shí)施方式中，從待檢查病人采集體液(特別是血液，任選全血或血清)，并且在體外/離體，即在人或動物的外部進(jìn)行診斷。基于對標(biāo)志物proanp或者其片段或肽(尤其是nt-proanp或者其片段或肽)以及對所述標(biāo)志物在至少一個患者樣本中的含量的確定，能夠?qū)崿F(xiàn)診斷。根據(jù)本發(fā)明，平行地對標(biāo)志物probnp、nt-probnp和/或bnp在至少一個患者樣本中的含量進(jìn)行確定。
在本發(fā)明的范圍內(nèi)，“proanp”(也包括nt-proanp)是指一種包括98個自由氨基酸的心納肽的多肽/蛋白質(zhì)或者其片段或部分肽。proanp的n末端片段(氨基酸1-98)是在漂移激素阿爾法-anp(99-126，具有28氨基酸)從激素原“proanp”(氨基酸1-126，參見seqidno.1)分裂出之后產(chǎn)生的，所述激素原“proanp”由126個氨基酸組成，其儲存在且根據(jù)本發(fā)明包含在心肌細(xì)胞的分泌微粒(sekretgranuladermyoendokrinenzellen)中。此外，根據(jù)本發(fā)明的這一多肽可以具有翻譯后的修飾，例如乙二醇化或糖基化、脂化或者衍生化。尤其是，nt-proanp(氨基酸1-98)在血漿中極其穩(wěn)定。
在本發(fā)明的范圍內(nèi)，片段和部分肽可尤其涉及nt-proanp(1-98)和proanp(1-126)中的氨基酸50-90的中間部分，根據(jù)本發(fā)明尤其優(yōu)選的是nt-proanp(1-98)的氨基酸53-90的片段或部分肽(也被稱作mr-proanp，參見wo2004046181以及seqidno.1)。在wo2004046181a1(brahms股份公司)中公開了一種合適的檢驗(yàn)。此外優(yōu)選nt-proanp(氨基酸1-98)。根據(jù)本發(fā)明，片段(α)-anp(氨基酸99-126)也包括在內(nèi)。
在本發(fā)明的范圍內(nèi)，bnp(氨基酸77-108)是指b型利鈉肽，其從激素原probnp(氨基酸1-108，參見seqidno.2)分裂而出，在此分裂過程中同時產(chǎn)生nt-probnp(氨基酸1-76)。根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選nt-probnp。
“平行測定”是指同時地實(shí)施測定或者使測定之間至少能夠具有足夠的關(guān)聯(lián)或者能夠進(jìn)行組合評價。
在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，對proanp、nt-proanp或者其片段或部分肽與對bnp、probnp和/或nt-probnp的平行測定額外地借助其他標(biāo)志物進(jìn)行，即優(yōu)選地這樣的標(biāo)志物，這些標(biāo)志物已指示心功能不全，并在根據(jù)本發(fā)明的方法中能夠產(chǎn)生標(biāo)志物組合的綜合效果。
由此，本發(fā)明涉及一種根據(jù)本發(fā)明方法的這樣的實(shí)施方式，其中借助至少一個選自下列的其它標(biāo)志物對待測患者額外進(jìn)行該測定：炎癥標(biāo)志物、心血管標(biāo)志物或缺血性標(biāo)志物。
根據(jù)本發(fā)明，炎癥標(biāo)志物可以選自下列至少一種標(biāo)志物：c-反應(yīng)蛋白(crp)、細(xì)胞因子(cytokinen)諸如例如tnf-α、白細(xì)胞介素諸如例如il-6、降鈣素原(1-116,3-116)和粘附分子如vcam或者icam；心血管標(biāo)志物選自下列至少一種標(biāo)志物：肌酸激酶、髓過氧化物酶、和肽素、肌紅蛋白、心肌鈣蛋白、crp。此外，同樣理解來調(diào)節(jié)循環(huán)的激素(原)，特別是如胃泌素釋放肽原(progrp)、內(nèi)皮素原(proend)、瘦蛋白原、神經(jīng)肽y原、生長抑素原、神經(jīng)肽yy原、阿黑皮素原、腎上腺髓質(zhì)素原(proadm)、和肽素或各自的部分序列。
缺血性標(biāo)志物可以選自下列至少一種標(biāo)志物：肌鈣蛋白i和t、ck-mb。
在本發(fā)明的進(jìn)一步實(shí)施方式中，可以通過平行地或同時地測定標(biāo)志物(例如，96孔或更多孔的多重滴定板)來實(shí)施根據(jù)本發(fā)明的方法，其中該測定在至少一個病人樣品上進(jìn)行。
此外，根據(jù)本發(fā)明的方法及其測定可以在自動分析儀上進(jìn)行，特別是借助kryptor(http://www.kryptor.net/)進(jìn)行。
在另一實(shí)施方式中，根據(jù)本發(fā)明的方法及其測定可以通過快速檢驗(yàn)(例如免疫層析)進(jìn)行，優(yōu)選以多參數(shù)測定。
另一發(fā)明對象涉及利用標(biāo)志物proanp或者nt-proanp或者其片段和部分肽,并平行地對待測患者進(jìn)行標(biāo)志物probnp、nt-probnp和/或bnp的測定，用于對無癥狀心功能不全((nyha-stadiumi)進(jìn)行體外診斷和/或危險分層和/或后果預(yù)測。mr-proanp是優(yōu)選的片段或部分肽。根據(jù)本發(fā)明的應(yīng)用同樣涉及其它上述的實(shí)施方式。
具體實(shí)施方式
利用下列的實(shí)施例和附圖對本發(fā)明進(jìn)行更詳細(xì)的解釋，但本發(fā)明不限于這些實(shí)施例和附圖。
實(shí)施例和附圖：
實(shí)施例1：
nhya-分級1的患者：受試者工作特性，用于存活/死亡的分析(roc，用于windows的軟件statview5.0(abacus,concepts,berkley,canadaundmedcalc,broekstraat,mariakerke,belgien))。
從患者血漿中分離出mr-proanp，并在-80度溫度下冷凍。采用根據(jù)brahms股份公司的wo2004046181的夾心法(lia)來探測mr-proanp(morgenthaleretal.immunoluminometricassayforthemidregionofpro-atrialnatriureticpeptideinhumanplasma,clin.chem,2004；50:234-236)。
nt-probnp通過elicia(羅氏診斷，penzberg，德國)確定。
受檢者人數(shù)n＝66，其中7人死亡。
圖1顯示了mr-proanp＝0.665和nt-probnp＝0.533的曲線(auc)下的區(qū)域。
mr-proanp:0.665–0.5(不顯著)：0.165
nt-probnp:0.533–0.5(不顯著)：0.033
0.165/0.033＝5
與此相應(yīng)，相較于nhya-分級1中患者子群中的nt-probnp，mr-proanp得到提高了5倍的診斷價值(考慮存活/死亡)。
實(shí)施例2：
與借助于cox-回歸法的nt-probnp相比，mr-proanp的預(yù)測價值提高了。
單變量分析：
過程：在nyha-i患者子群中，計(jì)算兩種標(biāo)志物(mr-proanpundnt-probnp)的中值；nt-probnp的中值比mr-proanp的中值高3.7倍。因此在cox-分析中計(jì)算出，較于mr-proanp的風(fēng)險比，nt-probnp的風(fēng)險比是3.7倍大小的濃度增長。
單變量cox比例風(fēng)險分析的結(jié)果：
與nt-probnp沒有得到顯著的結(jié)果(p＝0.536)無關(guān)，相比于nt-probnp的風(fēng)險比1.107，mr-proanp的風(fēng)險比為2.517，說明其在nyha-1級患者的子群中有了改善。1.000的風(fēng)險比意味著，每個濃度單元下死亡的風(fēng)險沒有增加。對于mr-proanp而言，風(fēng)險比為2.517意味著，每單位(這里為100pmol/l)中死亡的風(fēng)險增加了151.7％。與nt-probnp相比，風(fēng)險增高了14.2倍。
多變量模型：
結(jié)果再次說明，在應(yīng)用mr-proanp時有了改善，因?yàn)樵诓捎胣t-probnp和年齡作為預(yù)測死亡的唯一獨(dú)立變量的模型中，在nyha-i級患者子群中，它保持不變(p＝0.015)。
實(shí)施例3：
身體質(zhì)量指數(shù)(bmi)>＝30kg/m2的患者：與借助于cox-回歸法的nt-probn相比，闡述了mr-proanp提高的預(yù)測價值(受檢者人數(shù)：n＝114；其中36名患者死亡)
單變量分析：
過程：在身體質(zhì)量指數(shù)(bmi)>＝30kg/m2的患者子群中，計(jì)算兩種標(biāo)志物(mr-proanp和nt-probnp)的中值，由此得到nt-probnp的中值比mr-proanp的中值高5倍。因此在cox-分析中計(jì)算出，與mr-proanp相比，nt-probnp的風(fēng)險比是5倍大小的濃度增長。
單變量cox比例風(fēng)險分析的結(jié)果：
與nt-probnp沒有得到顯著的結(jié)果(p＝0.416)無關(guān)，相比于nt-probnp的風(fēng)險比1.024，mr-proanp具有風(fēng)險比1.503說明其在身體質(zhì)量指數(shù)>＝30的患者子群中的優(yōu)越性。1.000的風(fēng)險比意味著，每濃度單元下死亡的風(fēng)險沒有增加。對于mr-proanp而言，風(fēng)險比為1.503相應(yīng)地意味著，每單位(這里為100pmol/l)中死亡的風(fēng)險增加了50.3％。與nt-probnp相比，風(fēng)險增高了21倍。
多變量模型：
結(jié)果再次說明了mr-proanp的預(yù)后值的升高，因?yàn)?，在采用nt-probnp作為預(yù)測死亡的獨(dú)立變量的模型中，在身體質(zhì)量指數(shù)>＝30的患者子群中，它保持不變(p＝0.007)。與此相反，nt-probnp不是獨(dú)立變量。
表1：在不同時間點(diǎn)mr-proanp和nt-probnp的auc一覽
specificity＝特異度，sensitivity＝靈敏度
表2：在心功能不全的不同階段用于預(yù)測存活的mt-proanp和nt-probnp的cox比例風(fēng)險分析
*＝對于mr-proanp的額外的預(yù)測價值
受檢者人數(shù)n＝774
diseaseseverity：疾病嚴(yán)重度，rr：風(fēng)險比，increase：增加
表3：紐約心臟協(xié)會(nyha)分級
nyhai：體力活動不受限制。日常體力活動不引起過度疲勞、心悸、呼吸困難或心絞痛。
nyhaii：體力活動輕度受限。休息時無癥狀，但日常活動即可引起疲勞、心悸、呼吸困難或心絞痛。
nyhaiii：體力活動高度受限。休息時無癥狀，輕于日常的活動即可引起疲勞、心悸、呼吸困難或心絞痛。
nyhaiv：在所有體力活動及休息時都有癥狀。限于臥床。
序列表
<110>布拉姆斯股份公司
<120>借助于利尿肽對nyhai級患者進(jìn)行心功能不全的診斷和危險分層
<130>iic62848
<140>pct/de2008/000357
<141>2008-03-03
<150>de102007010834.8
<151>2007-03-03
<160>2
<170>patentinversion3.3
<210>1
<211>126
<212>prt
<213>智人
<400>1
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151015
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<210>2
<211>108
<212>prt
<213>智人
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