本發(fā)明涉及體外診斷領(lǐng)域，特別是涉及一種血紅蛋白濃度測(cè)定用溶血?jiǎng)?/p>

背景技術(shù)：

血紅蛋白（hb）測(cè)定是臨床上一項(xiàng)常規(guī)檢查項(xiàng)目，通常通過(guò)血液檢查的手段來(lái)進(jìn)行測(cè)定，血紅蛋白含量能更好地反映貧血程度，是診斷相關(guān)疾病的重要依據(jù)。

血紅蛋白含量常采用比色的原理進(jìn)行測(cè)定，處理后的血液樣本加入溶血?jiǎng)?，紅細(xì)胞溶解，釋放血紅蛋白。血紅蛋白可以與溶血?jiǎng)┲械南嚓P(guān)成分結(jié)合，形成一種穩(wěn)定的血紅蛋白復(fù)合物，在一定的波長(zhǎng)下進(jìn)行比色，溶液吸光度的變化與血紅蛋白含量成正比，進(jìn)而對(duì)血紅蛋白進(jìn)行定量測(cè)定。早期對(duì)于血紅蛋白的檢測(cè)通常采用氰化高鐵血紅蛋白法（hicn），其致命的弱點(diǎn)是氰化物試劑有劇毒，污染環(huán)境，易造成公害，如今該方法已經(jīng)基本停止使用?，F(xiàn)在血紅蛋白溶血?jiǎng)┦遣捎藐?yáng)離子表面活性劑或陰離子表面活性劑，破壞紅細(xì)胞釋放血紅蛋白，并與血紅蛋白形成穩(wěn)定復(fù)合物進(jìn)而比色檢測(cè)。這種檢測(cè)手段要借助于全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀來(lái)完成。目前市場(chǎng)上血細(xì)胞分析儀品牌繁雜，血紅蛋白溶血?jiǎng)┐蠖嗍菍?zhuān)機(jī)專(zhuān)用，消耗量大，且價(jià)格昂貴，給廣大醫(yī)療機(jī)構(gòu)帶來(lái)成本上的困擾。因此開(kāi)發(fā)一種配方簡(jiǎn)易，成本較低，適用多種機(jī)型，能夠代替原裝試劑上機(jī)使用的血紅蛋白溶血?jiǎng)?，降低?duì)國(guó)外進(jìn)口產(chǎn)品的依賴(lài)性，是十分必要的。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明主要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種血紅蛋白濃度測(cè)定用溶血?jiǎng)?，為無(wú)氰溶血?jiǎng)?/p>

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用的一個(gè)技術(shù)方案是：提供一種血紅蛋白濃度測(cè)定用溶血?jiǎng)?，包括緩沖劑、陰離子表面活性劑、非離子表面活性劑和增溶劑，所述溶血?jiǎng)┑暮渴歉鶕?jù)不同血細(xì)胞分析儀調(diào)整某一組分的含量以適用。

在本發(fā)明一個(gè)較佳實(shí)施例中，所述溶血?jiǎng)┑暮渴窍却_定緩沖劑、陰離子表面活性劑和增溶劑的含量，再根據(jù)采用的血細(xì)胞分析儀調(diào)整非離子表面活性劑的含量。

在本發(fā)明一個(gè)較佳實(shí)施例中，所述緩沖劑為硼酸-硼砂緩沖劑、磷酸鹽緩沖劑、tris-hcl緩沖劑、good’s緩沖劑中的一種或幾種。

在本發(fā)明一個(gè)較佳實(shí)施例中，所述緩沖劑為磷酸鹽緩沖劑，所述磷酸鹽緩沖劑的濃度為10mm。

在本發(fā)明一個(gè)較佳實(shí)施例中，所述陰離子表面活性劑為烷基磺酸鹽、烷基苯磺酸鹽、烷基硫酸鹽中的一種；所述陰離子表面活性劑的用量為4~8g/l。

在本發(fā)明一個(gè)較佳實(shí)施例中，所述陰離子表面活性劑為十二烷基硫酸鈉。

在本發(fā)明一個(gè)較佳實(shí)施例中，所述非離子表面活性劑為聚氧乙烯醚類(lèi)；所述非離子表面活性劑的用量根據(jù)血細(xì)胞分析儀確定。

在本發(fā)明一個(gè)較佳實(shí)施例中，所述非離子表面活性劑為聚乙二醇辛基苯基醚。

在本發(fā)明一個(gè)較佳實(shí)施例中，所述增溶劑為異丙醇、甲醇、乙醇、乙二醇中的一種或多種；所述增溶劑的用量為5~20ml/l。

在本發(fā)明一個(gè)較佳實(shí)施例中，所述溶血?jiǎng)┑慕M成為：磷酸二氫鉀0.1~2g/l、十二水合磷酸氫二鈉0.1~5g/l、十二烷基硫酸鈉4~8g/l、異丙醇5~20ml/l、聚乙二醇辛基苯基醚1-10g/l。

本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明的血紅蛋白濃度測(cè)定用溶血?jiǎng)轻槍?duì)利用比色法檢測(cè)血紅蛋白濃度的血細(xì)胞分析儀，通過(guò)對(duì)血紅蛋白溶血?jiǎng)┕潭ɑA(chǔ)配方，僅通過(guò)調(diào)整一種成分的含量，使得該溶血?jiǎng)┛梢赃m用于不同的血細(xì)胞分析儀，簡(jiǎn)化體外診斷試劑開(kāi)發(fā)步驟，降低研發(fā)成本，有實(shí)際意義。

附圖說(shuō)明

為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，顯而易見(jiàn)地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其它的附圖，其中：

圖1是本發(fā)明實(shí)施例一試劑與bc-5800血細(xì)胞分析儀匹配試劑測(cè)定的血紅蛋白濃度的相關(guān)圖；

圖2是本發(fā)明實(shí)施例二試劑與bc-6800血細(xì)胞分析儀匹配試劑測(cè)定的血紅蛋白濃度的相關(guān)圖；

圖3是實(shí)施例三試劑與kx-21血細(xì)胞分析儀匹配試劑測(cè)定的血紅蛋白濃度的相關(guān)圖。

具體實(shí)施方式

下面將對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅是本發(fā)明的一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其它實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

本發(fā)明提供一種血紅蛋白濃度測(cè)定用溶血?jiǎng)?，包括緩沖劑、陰離子表面活性劑、非離子表面活性劑和增溶劑。所述溶血?jiǎng)┲饕糜谌芙饧t細(xì)胞，并與血紅蛋白特異性結(jié)合，形成穩(wěn)定的血紅蛋白復(fù)合物，在540nm左右有最大吸收峰，根據(jù)吸光度的變化測(cè)量血紅蛋白含量。

其中所述緩沖劑為硼酸-硼砂緩沖劑、磷酸鹽緩沖劑、tris-hcl緩沖劑、good’s緩沖劑中的一種或幾種，優(yōu)選磷酸鹽緩沖劑，所述磷酸鹽緩沖劑的濃度為10mm。所述緩沖劑用于調(diào)節(jié)溶血?jiǎng)┑膒h。

所述陰離子表面活性劑既有破裂細(xì)胞和溶解紅細(xì)胞的作用，又可以與血紅蛋白結(jié)合形成穩(wěn)定的復(fù)合物，選自烷基磺酸鹽、烷基苯磺酸鹽、烷基硫酸鹽中的一種，具體為十二烷基硫酸鈉。所述陰離子表面活性劑的用量為4~8g/l。

所述非離子表面活性劑既可以參與紅細(xì)胞的溶解，又可以加速血紅蛋白復(fù)合物的形成，增加十二烷基硫酸鈉溶解能力，防止其在低溫下析出，增強(qiáng)血紅蛋白復(fù)合物的穩(wěn)定性。所述非離子表面活性劑為聚氧乙烯醚類(lèi)，具體為聚乙二醇辛基苯基醚tritonx-100。所述非離子表面活性劑的用量在不同血細(xì)胞分析儀上使用有所不同。

所述增溶劑可以增加陰離子表面活性劑或非離子表面活性劑的溶解度，優(yōu)選但不限于異丙醇，還可以是甲醇、乙醇、乙二醇等，其使用量為5~20ml/l。

本發(fā)明實(shí)施例中所用試劑均為分析純?cè)噭?/p>

本發(fā)明血紅蛋白溶血?jiǎng)┑慕M成成分為：磷酸二氫鉀0.1~2g/l、十二水合磷酸氫二鈉0.1~5g/l、十二烷基硫酸鈉4~8g/l、異丙醇5~20ml/l、tritonx-1001-10g/l。

本發(fā)明首先確定磷酸二氫鉀、十二水合磷酸氫二鈉、十二烷基硫酸鈉和異丙醇的含量，其次通過(guò)調(diào)節(jié)tritonx-100的含量使得該溶血?jiǎng)┠軌蜻m用于不同的血細(xì)胞分析儀，使用本發(fā)明的溶血?jiǎng)┰谘?xì)胞分析儀上檢測(cè)血液樣品中血紅蛋白含量，并與原裝試劑血紅蛋白檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)性來(lái)評(píng)價(jià)本發(fā)明的溶血?jiǎng)?duì)不同機(jī)型的適用情況。以邁瑞bc-5800、bc-6800、希森美康kx-21機(jī)型為例進(jìn)行試驗(yàn)，但不限于這三種機(jī)型。

按照下表配方準(zhǔn)確稱(chēng)取各組分，依次溶解后用純化水定容，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，即得到本發(fā)明所述血紅蛋白溶血?jiǎng)┗篴、b。將基液a、b按不同的比例混合，即通過(guò)調(diào)節(jié)tritonx-100的含量，確定適用于不同血細(xì)胞分析儀的溶血?jiǎng)┡浞健?/p>

實(shí)施例一：

量取a液290ml和b液710ml，混合均勻，用于邁瑞bc-5800血細(xì)胞分析儀上，檢測(cè)10組血樣，每組血樣檢測(cè)3次，記錄血紅蛋白檢測(cè)結(jié)果，并與原裝試劑檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1所示。

實(shí)施例二：

量取a液230ml和b液770ml，混合均勻，用于邁瑞bc-6800血細(xì)胞分析儀上，檢測(cè)10組血樣，每組血樣檢測(cè)3次，記錄血紅蛋白檢測(cè)結(jié)果，并與原裝試劑檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2所示。

實(shí)施例三：

量取a液320ml和b液680ml，混合均勻，用于希森美康kx-21血細(xì)胞分析儀上，檢測(cè)10組血樣，每組血樣檢測(cè)3次，記錄血紅蛋白檢測(cè)結(jié)果，并與原裝試劑檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3所示。

由圖1可見(jiàn)，當(dāng)tritonx-100含量為7.1g/l時(shí)，本發(fā)明血紅蛋白溶血?jiǎng)y(cè)量結(jié)果與bc-5800原裝溶血?jiǎng)y(cè)量結(jié)果基本一致，其相關(guān)系數(shù)為0.998，說(shuō)明按照本發(fā)明開(kāi)發(fā)的血紅蛋白溶血?jiǎng)┩耆梢源鎎c-5800原裝血紅蛋白溶血?jiǎng)┦褂谩?/p>

由圖2、圖3可見(jiàn)，當(dāng)tritonx-100含量分別為7.7g/l、6.8g/l時(shí)，本發(fā)明血紅蛋白溶血?jiǎng)y(cè)量結(jié)果分別與bc-6800、kx-21原裝血紅蛋白溶血?jiǎng)y(cè)量結(jié)果基本一致，其相關(guān)系數(shù)為0.997、0.997，說(shuō)明按照本發(fā)明開(kāi)發(fā)的血紅蛋白溶血?jiǎng)┩耆梢源鎎c-6800、kx-21原裝血紅蛋白溶血?jiǎng)┦褂谩?/p>

由圖1、圖2、圖3可見(jiàn)，說(shuō)明tritonx-100含量為6~8g/l時(shí)，按照本發(fā)明開(kāi)發(fā)方法所配制血紅蛋白溶血?jiǎng)?，完全可以代替原裝試劑在bc-5800、bc-6800、kx-21等全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀上進(jìn)行血紅蛋白濃度檢測(cè)。綜上，本發(fā)明所提供的一種用于血紅蛋白溶血?jiǎng)╅_(kāi)發(fā)的方法操作簡(jiǎn)單，易于實(shí)現(xiàn)，且按照其所配制的試劑成本較低，能滿(mǎn)足市場(chǎng)上多數(shù)血細(xì)胞分析儀檢測(cè)血紅蛋白濃度的需求。

本發(fā)明通過(guò)對(duì)血紅蛋白溶血?jiǎng)┗A(chǔ)配方中的一種有效成分含量的調(diào)節(jié)，使得該溶血?jiǎng)┠軌蜻m用于不同的血細(xì)胞分析儀，可以滿(mǎn)足不同儀器檢測(cè)血紅蛋白的需要。

以上所述僅為本發(fā)明的實(shí)施例，并非因此限制本發(fā)明的專(zhuān)利范圍，凡是利用本發(fā)明說(shuō)明書(shū)內(nèi)容所作的等效結(jié)構(gòu)或等效流程變換，或直接或間接運(yùn)用在其它相關(guān)的技術(shù)領(lǐng)域，均同理包括在本發(fā)明的專(zhuān)利保護(hù)范圍內(nèi)。