專利名稱：一種電化學(xué)發(fā)光檢測三聚氰胺的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于一種高靈敏電化學(xué)發(fā)光檢測領(lǐng)域，具體涉及一種電化學(xué)發(fā)光檢測三聚
氰胺的方法。
背景技術(shù)：
三聚氰胺(英文名Melamine)，簡稱三胺，俗稱蜜胺、蛋白精，又叫2，4，6_三氨 基-l，3，5-三嗪、l，3，5-三嗪-2，4，6-三胺、2，4，6-三氨基脲、三聚氰酰胺、氰脲三酰胺。 它是一種三嗪類含氮雜環(huán)有機(jī)化合物，重要的氮雜環(huán)有機(jī)化工原料，也是農(nóng)藥滅蠅胺的代 謝產(chǎn)物，廣泛用于塑料、造紙、紡織、皮革、電氣、醫(yī)藥等行業(yè)，是重要的尿素后加工產(chǎn)品。三 聚氰胺屬非食品用化學(xué)物質(zhì)，食品中嚴(yán)禁添加。2008年9月16日，國家質(zhì)檢總局公布22 家奶粉廠家生產(chǎn)的69批產(chǎn)品檢出三聚氰胺。兩天后，全國液態(tài)奶檢查結(jié)果公布，包括蒙牛、 伊利、光明等名牌在內(nèi)的液態(tài)奶檢出了三聚氰胺。隨后，中國產(chǎn)雀巢奶制品、樂天小熊餅、亨 氏米糊等產(chǎn)品在港澳檢出三聚氰胺，最終導(dǎo)致全世界五十多個國家禁止進(jìn)口或回收中國制 造、含有三聚氰胺的食品，后果十分嚴(yán)重。因此，開發(fā)一種簡單、高效的三聚氰胺檢測方法具 有十分重要的意義。 現(xiàn)有三聚氰胺檢測方法主要有高效液相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(王立 媛，吳平谷，沈向紅，張晶，中國衛(wèi)生檢驗雜志，2009， 19 (3) ，556-557 ;吳惠勤，黃芳，林曉珊， 鄧欣，馬葉芬，黃曉蘭，朱志鑫，羅輝泰，分析測試學(xué)報，2008， 27 (10) ， 1044-1048)、液相色 譜_質(zhì)譜/質(zhì)譜法(江和源，袁新躍，張建勇，崔宏春，劉曉輝，堯渝，茶葉科學(xué)，2009， 29 (1)， 15 19)等，檢測定量限分別為2毫克/千克、0.05毫克/千克和0.01毫克/千克。這 三種方法也是國標(biāo)頒布奶制品中三聚氰胺的檢測方法《原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測方 法》(GB/T22388-2008)。目前一份樣品三聚氰胺成份的檢測時間，通常需要至少三到四小 時，最快的方法也需要兩小時。并且最低檢測限不能滿足要求，檢測范圍不夠?qū)?，檢測過程 操作復(fù)雜，所用儀器一般比較昂貴。 三聯(lián)妣啶釕Ru(bpy)32+電化學(xué)發(fā)光(Electrochemiluminescence，簡稱ECL)具有 原位響應(yīng)、檢測靈敏度高、線性范圍寬和儀器簡單等優(yōu)點，在藥物分析、氨基酸分析、DNA探 針分析、酶生物傳感器領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。但目前還沒有任何將電化學(xué)發(fā)光用于三聚氰 胺檢測的相關(guān)報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有的三聚氰胺檢測方法，提出一種全新的檢測限更低、檢 測線性范圍更寬、靈敏度更高的電化學(xué)發(fā)光檢測三聚氰胺的方法。 本發(fā)明的原理是本發(fā)明使用聯(lián)吡啶釕/鋨類化合物作為發(fā)光物質(zhì)，三聚氰胺作 為共反應(yīng)物之一，同時也是被檢測物。將它們分別溶于磷酸或硼酸緩沖溶液中，用電化學(xué)方 法在0-1. 8V電位范圍內(nèi)對其進(jìn)行掃描；同時利用光檢測器采集產(chǎn)生的光信號，經(jīng)計算機(jī)數(shù) 據(jù)處理得到檢測結(jié)果。由于聯(lián)吡啶釕/鋨類化合物具有很高的發(fā)光效率，即使被測物三聚氰胺的濃度很低，該方法仍可檢測到明顯電化學(xué)發(fā)光響應(yīng)，并且三聚氰胺加入前后體系電化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度的變化與體系中三聚氰胺濃度的對數(shù)值呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，通過計算可以確定體系中三聚氰胺的含量。 為達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是一種電化學(xué)發(fā)光檢測三聚氰胺的方法，步驟如下 (1)根據(jù)三聚氰胺樣品濃度，將10—7 10—^ol/L的聯(lián)吡啶釕/鋨以及待測的三聚氰胺樣品分別加入到PH值為3-11的0. 1M的磷酸鹽或硼酸鹽緩沖溶液中；
(2)在任意一款電化學(xué)工作站上，對步驟(1)配置的溶液進(jìn)行掃描；掃描電位范圍0_1. 8V ; (3)用光檢測器采集電化學(xué)工作站掃描產(chǎn)生的光信號，再經(jīng)計算機(jī)數(shù)據(jù)處理后得到三聚氰胺樣品的含量。 該方法適用于檢測所有含有三聚氰胺的物質(zhì)，檢測可使用任意一款電化學(xué)工作站和/或發(fā)光檢測器。 所述的聯(lián)吡啶釕/鋨化合物具有下列結(jié)構(gòu)通式
M(L)2L' 通式中M為Ru或0s ;L選自任意的2，2' _聯(lián)吡啶及其衍生物或者1， 10-鄰菲咯
啉(二氮雜菲)及其衍生物，L'選自以下配體
式中B為-(Ciyn-，其中n為整數(shù)0-10或者在任意位置存在酰胺鍵基團(tuán)的烷基鏈-(CH》n-，烷基鏈總碳數(shù)n為整數(shù)0-10 ;P為吩噻嗪(PTZ)或H。其中，當(dāng)M為Ru， n = 0，P為H時，標(biāo)記物稱為三聯(lián)吡啶釕；當(dāng)M為Ru， n = 4， P為酚噻嗪時，標(biāo)記物稱為釕酚噻嗪，結(jié)構(gòu)式如下 本發(fā)明的有益效果是能夠更加有效的檢測三聚氰胺，檢測限更低，檢測線性范圍更寬，靈敏度高，重現(xiàn)性好，測試可在瞬間完成，適用于檢測所有含有三聚氰胺的物質(zhì)，以及所有電化學(xué)發(fā)光檢測裝置。
三聯(lián)吡啶釕
釕酚噻嗪


圖1是實施例1三聯(lián)吡啶釕-三聚氰胺電化學(xué)發(fā)光體系測定三聚氰胺的檢測限以及它的線性范圍。 其中橫坐標(biāo)是三聚氰胺的濃度，縱坐標(biāo)是加入三聚氰胺后的光強(qiáng)減掉沒加三聚氰
胺前的光強(qiáng)，即混合溶液的ECL減掉三聯(lián)吡啶釕空白的ECL所得的差值。 圖2是實施例2釕吩噻嗪-三聚氰胺電化學(xué)發(fā)光體系測定三聚氰胺的檢測限和它
的線性范圍。 其中橫坐標(biāo)是三聚氰胺的濃度，縱坐標(biāo)是加入三聚氰胺前的光強(qiáng)減掉加入三聚氰胺后的光強(qiáng)，即釕吩噻嗪空白的ECL減掉混合溶液的ECL所得的差值。
具體實施方式
實施例1 使用MPI-B型電化學(xué)發(fā)光分析儀，選擇三聯(lián)吡啶釕的濃度為10-3mol/L，再加入三聚氰胺觀察其對ECL的影響，設(shè)定光電倍增管的高壓為900V，掃描電壓在0-1.5V，光電倍增管采用二級放大。所用工作電極為Au電極，緩沖鹽是pH二 IO的O. 1M硼酸鹽緩沖液。檢測溶液的發(fā)光信號，三聚氰胺的濃度范圍在10—1Q 10—5mol/L時，其ECL發(fā)光強(qiáng)度的變化與三聚氰胺濃度的對數(shù)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，結(jié)果如圖l所示。測試表明，加入三聚氰胺后的ECL強(qiáng)度會明顯高于三聚氰胺加入之前的ECL強(qiáng)度，并且ECL強(qiáng)度的變化值與三聚氰胺濃度的對數(shù)在1 X 10—"mol/L 1 X 10—5mol/L三聚氰胺范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，三聚氰胺最低檢測限為1X10—"mol/L，線性相關(guān)系數(shù)為0. 9987，根據(jù)ECL強(qiáng)度的變化可確定體系中三聚
氰胺的濃度。
實施例2 使用MPI-B型電化學(xué)發(fā)光分析儀，選擇釕吩噻嗪的濃度為10—iol/L，再加入三聚氰胺觀察其對ECL的影響，設(shè)定光電倍增管的高壓為900V，掃描電壓在0 1. 5V，光電倍增管采用二級放大。所用工作電極為Au電極，緩沖鹽是pH二 IO的O. 1M硼酸鹽緩沖液。檢測溶液的發(fā)光信號，當(dāng)三聚氰胺濃度在10—"mol/L 10—^Ql/L時，其ECL發(fā)光強(qiáng)度的變化與三聚氰胺濃度的對數(shù)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。結(jié)果如圖2所示。測試表明，隨著三聚氰胺的加入ECL逐漸減弱，ECL強(qiáng)度的變化值與三聚氰胺濃度的對數(shù)在1 X 10—"mol/L 1 X 10—3mol/L三聚氰胺濃度范圍呈良好的線性關(guān)系，三聚氰胺最低檢測限為1 X 10—"mol/L，線性相關(guān)系數(shù)為0. 9976。根據(jù)ECL強(qiáng)度的變化值可確定體系中三聚氰胺的濃度。
權(quán)利要求
一種電化學(xué)發(fā)光檢測三聚氰胺的方法，其特征在于，該方法步驟如下(1)根據(jù)三聚氰胺樣品濃度，將10-7～10-1mol/L的聯(lián)吡啶釕/鋨以及待測的三聚氰胺樣品分別加入到pH值為3-11的0.1M的磷酸鹽或硼酸鹽緩沖溶液中；(2)在任意一款電化學(xué)工作站上，對步驟(1)配置的溶液進(jìn)行掃描；掃描電位范圍0-1.8V；(3)用光檢測器采集電化學(xué)工作站掃描產(chǎn)生的光信號，再經(jīng)計算機(jī)數(shù)據(jù)處理后得到三聚氰胺樣品的含量。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種電化學(xué)發(fā)光檢測三聚氰胺的方法，其特征在于，該方法 適用于檢測所有含有三聚氰胺的物質(zhì)，檢測可使用任意一款電化學(xué)工作站和/或發(fā)光檢測 器。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種電化學(xué)發(fā)光檢測三聚氰胺的方法，其特征在于，所述的聯(lián)吡啶釕/鋨化合物具有下列結(jié)構(gòu)通式M(L)2L'<formula>formula see original document page 2</formula>通式中M為Ru或0s ;L選自任意的2， 2'-聯(lián)吡啶及其衍生物或者1， 10-鄰菲咯啉(二氮雜菲)及其衍生物，L'選自以下配體式中B為_(CH2)n-，其中n為整數(shù)0-10或者在任意位置存在酰胺鍵基團(tuán)的烷基 鏈-(Cign-，烷基鏈總碳數(shù)n為整數(shù)0-10 ;P為吩噻嗪(PTZ)或H，其中，當(dāng)M為Ru， n = 0， P為H時，標(biāo)記物稱為三聯(lián)吡啶釕；當(dāng)M為Ru， n = 4， P為酚噻嗪時，標(biāo)記物稱為釕酚噻嗪， 結(jié)構(gòu)式如下聯(lián)吡啶釕<formula>formula see original document page 2</formula>釕酚噻嗪。
全文摘要
本發(fā)明屬于一種高靈敏電化學(xué)發(fā)光檢測領(lǐng)域，具體涉及一種電化學(xué)發(fā)光檢測三聚氰胺的方法。本發(fā)明使用聯(lián)吡啶釕/鋨類化合物作為發(fā)光物質(zhì)，三聚氰胺作為共反應(yīng)物之一，同時也是被檢測物。將它們分別溶于磷酸或硼酸緩沖溶液中，用電化學(xué)方法在0-1.8V電位范圍內(nèi)對其進(jìn)行掃描；同時利用光檢測器采集產(chǎn)生的光信號，經(jīng)計算機(jī)數(shù)據(jù)處理得到檢測結(jié)果。本發(fā)明能夠更加有效的檢測三聚氰胺，檢測限更低，檢測線性范圍更寬，靈敏度高，重現(xiàn)性好，測試可在瞬間完成，適用于檢測所有含有三聚氰胺的物質(zhì)，以及所有電化學(xué)發(fā)光檢測裝置。
文檔編號G01N21/76GK101750410SQ20101010062
公開日2010年6月23日 申請日期2010年1月22日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月22日
發(fā)明者劉鳳玉, 孫世國, 楊雪 申請人:大連理工大學(xué)