留完整的抗-MM功能。
[0227] 實(shí)施例2 [022引示例性方法
[0229] 在先前的出版物巧，25)中完整描述了幾種常規(guī)使用的方法。
[0230] 在本發(fā)明的實(shí)施方式中，通過在低氧應(yīng)答元件化RE)的誘導(dǎo)型控制下表達(dá)CAR. CD138來探索MMBM微環(huán)境的低氧性質(zhì)。也可在異種移植小鼠模型中限定在體外和體內(nèi)的 低氧環(huán)境中用于CART細(xì)胞的共刺激的最優(yōu)選免疫元件。最后，為了進(jìn)一步提高所述方法 的安全性，本領(lǐng)域技術(shù)人員可基于誘導(dǎo)型脫冬酶9(iC9)在構(gòu)建體內(nèi)加入先前驗(yàn)證的自殺 基因。
[0231] 初始研究（圖1和2)清楚地顯示組成型表達(dá)CAR.CD138的T細(xì)胞在異種移植小鼠 模型中具有體外和體內(nèi)抗匪效果。如圖3所示，hCAR.CD138在T細(xì)胞暴露于低氧時明顯上 調(diào)，并且運(yùn)些細(xì)胞保持抗-MM活性。運(yùn)些研究中的CAR.CD138編碼CD28共刺激內(nèi)結(jié)構(gòu)域。 可在體外比較共刺激內(nèi)結(jié)構(gòu)域，包括4-1BB及其組合在低氧中的效果。可在小鼠模型中體 內(nèi)系列抗原刺激和抗腫瘤活性之后測量體外增殖、細(xì)胞因子釋放和細(xì)胞毒活性（圖2)。另 夕F，由于仍然能在正常氧下觀察到微弱的CAR表達(dá)（圖3)，可在載體的3'末端LTR和HRE 之間包含絕緣子W進(jìn)一步降低表達(dá)。在hCAR.CD138在BM低氧中的功能性表達(dá)之后，具有 自我更新能力的T細(xì)胞可逃離BM環(huán)境并再循環(huán)，導(dǎo)致潛在毒性。由于T細(xì)胞下調(diào)CAR表達(dá) 需要48-72小時，當(dāng)從低氧轉(zhuǎn)移到正常氧時（在至少一些實(shí)施方式中），可在組成型啟動子 下共表達(dá)基于自殺型脫冬酶9 (iC9)的自殺基因，使得如果它們導(dǎo)致毒性時可快速被消除。 iC9基因可在5'LTR的組成型控制下W相反的取向包含于圖3所述的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體中。 評價載體的體外和體內(nèi)功能性。
[0232] 在本發(fā)明的實(shí)施方式中，有用的載體使得CAR.CD138在體外和體內(nèi)的低氧下主導(dǎo) 且功能性表達(dá)。另外，包含自殺基因預(yù)期在有毒性的情況下消除細(xì)胞。如果低氧下CAR的 表達(dá)是功能上不足的，可能歸咎于包含絕緣子的盒的大?。?. 5化）并且可將盒轉(zhuǎn)移到慢 病毒載體中，與逆轉(zhuǎn)錄病毒載體相比，其具有增加的容量?？刹捎媚孓D(zhuǎn)錄病毒方法，因?yàn)檫\(yùn) 些載體的制備是穩(wěn)健且高度可重復(fù)的，但在一些情況中采用慢病毒。
[0233] 在本發(fā)明的實(shí)施方式中，存在一種方法，該方法包括制備臨床級逆轉(zhuǎn)錄病毒載體 和從MM患者制備CAR-修飾的T-細(xì)胞系，并且將它們輸注到復(fù)發(fā)MM的患者中。本領(lǐng)域技 術(shù)人員可評價過程的安全性，并且，如果出現(xiàn)毒性，可給予二聚體藥物W激活體內(nèi)的iC9安 全性基因。也可評價T-細(xì)胞輸注是否在患有可檢測疾病的患者中提供疾病對照。
[0234] 生產(chǎn)了編碼hCAR.CD138和組成型iC9的穩(wěn)定逆轉(zhuǎn)錄病毒生產(chǎn)細(xì)胞系。如前所述， 可采用PG13包裝。在核屯、描述中提供了制備生產(chǎn)細(xì)胞系的詳細(xì)過程。從運(yùn)種包裝得到的 臨床級上清可用于轉(zhuǎn)導(dǎo)來自從MM患者得到的PB樣品的T細(xì)胞。
[0235] 可評價增加的表達(dá)hCAR.CD138和iC9的淋己細(xì)胞的劑量在患有復(fù)發(fā)/難治MM的 患者中的效果（與其它實(shí)施方式相反，其可治療響應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)一線治療的患者）。可初步評價3 個不同劑量水平下的CAR-T細(xì)胞的單次靜脈內(nèi)劑量。在用苯達(dá)莫司汀治療后給予T細(xì)胞， 因?yàn)樵撍幬锞哂幸欢ǖ目筂M活性并且可能產(chǎn)生對過繼轉(zhuǎn)移的CART-細(xì)胞的擴(kuò)增有利的環(huán) 境。
[0236] 可開發(fā)具有效價〉l〇VmL的穩(wěn)定生產(chǎn)細(xì)胞系。低氧下，T-細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的范圍可 W是30%至40% (圖3)。重定向T細(xì)胞可在低氧下的共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中消除CD138+祀標(biāo)并且 可在體外暴露于AP1903 (20-50nM) 24小時內(nèi)被快速消除（>90%轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞），AP1903是激 活iC9自殺基因的小分子二聚體。
[0237] 在本發(fā)明的實(shí)施方式中，通過測量其體內(nèi)存活來表征輸注的CAR-T細(xì)胞的命運(yùn)， 并且可確定二聚化藥物在體外和體內(nèi)對運(yùn)些細(xì)胞的后續(xù)影響。也可比較運(yùn)些細(xì)胞在BM和 外周血中的累積，各環(huán)境中T細(xì)胞的CAR差異表達(dá)W及它們殺死腫瘤細(xì)胞的能力。
[0238] 使用免疫表型和實(shí)時定量PCR試驗(yàn)（Q-PCR)在T-細(xì)胞輸注之后在不同時間點(diǎn)上 收集的PB中提取的DNA中評估轉(zhuǎn)化的T細(xì)胞的持續(xù)性和增殖。在第6周收集BM樣品作為 對運(yùn)些患者的臨床評價的部分。間隔收集血樣樣品并速凍W檢測體內(nèi)T細(xì)胞釋放的IL-2、 IL6、IFN丫和TNFα。也可通過在例如第6、12和24周監(jiān)測副蛋白水平和PCBM滲透來尋 找抗腫瘤活性的臨床證據(jù)。密切監(jiān)測患者按照NCI標(biāo)準(zhǔn)出現(xiàn)的毒性。在III-IV級毒性的 情況中，用AP1903處理患者W如前所述激活iC9基因。通過QPCR測量CAR+循環(huán)細(xì)胞的損 失和iC9轉(zhuǎn)基因的變化來對iC9的效果進(jìn)行定量。
[0239] 在第6周前檢測到PB和BM樣品中CAR的分子信號（其為低氧獨(dú)立性的），雖然 由于CART細(xì)胞的積累在BM中可能有較高的信號。預(yù)期通過流式細(xì)胞術(shù)測量的T細(xì)胞中 CAR的表達(dá)（其是低氧依賴性的，由于其檢測蛋白合成）在BM中遠(yuǎn)高于PB，由于匪BM是 含氧量低的。在【具體實(shí)施方式】中，如果在PB和BM中等量的T細(xì)胞在表型上是CAR陽性的， 運(yùn)反映了低氧激活的τ細(xì)胞的再循環(huán)而沒有發(fā)生預(yù)期的CAR下調(diào)，而運(yùn)預(yù)計發(fā)生在細(xì)胞回 到正常氧環(huán)境時?？纱_定運(yùn)種持續(xù)表達(dá)是否與毒性相關(guān)，如果與毒性相關(guān)，可確定是否可通 過給予激活iC9自殺基因的AP1903來消除。iC9的激活可在給予AP1903的3小時內(nèi)消除 >90%的hCAR.CD138T。如果盡管給予AP1903,副作用持續(xù)增加，則可給予額外劑量的藥物 和高劑量類固醇。在【具體實(shí)施方式】中，hCAR.CD138T細(xì)胞的輸注產(chǎn)生了腫瘤的顯著減小。在 一次劑量的T細(xì)胞不足W誘導(dǎo)完全緩解的事件中，可給予額外劑量的T細(xì)胞。
[0240] 在【具體實(shí)施方式】中，CAR.CD138被移植到第Ξ部分的邸V-特異性CTL中W制備對 于患有MM的患者"現(xiàn)成（offtheshelf)"的產(chǎn)物，運(yùn)是一種在非骨髓消融性同種異體干細(xì) 胞移植（可用于患有嚴(yán)重疾病的老年MM患者）后有特別價值的方法。在一些實(shí)施方式中， 使用導(dǎo)向MMTAA的TCR祀向其它腫瘤相關(guān)抗原（MAGE，F(xiàn)RAME,生存素）。在一些實(shí)施方式 中，由CAR而不是TCR介導(dǎo)的第Ξ種特異性的加入可顯著降低由于HLA分子表達(dá)/抗原加 工或抗原的缺失而導(dǎo)致的腫瘤逃逸?？蓪D138scFv表達(dá)為可分泌的"接合"蛋白。
[0241] 實(shí)施例3
[0242] 用于漸進(jìn)性漿細(xì)胞病的表達(dá)CD138-特異性CAR的T細(xì)胞的研究
[0243] 在本發(fā)明的實(shí)施方式中，可評價遞增劑量的自體同源或同系的激活的外周血T淋 己細(xì)胞（ATL)的安全性，該T淋己細(xì)胞經(jīng)遺傳修飾表達(dá)（a)在低氧依賴性啟動子下祀向 CD138分子的人工T-細(xì)胞受體（嵌合抗原受體或CAR) (CD138.CAR)，和化）組成型激活啟 動子下的誘導(dǎo)型脫冬酶-9(iC9)自殺蛋白。本發(fā)明的方法的【具體實(shí)施方式】包括（1)測量運(yùn) 些CD138.CAR-A化在體內(nèi)的存活和功能；（2)對CD138.CAR-A化在患有難治漿細(xì)胞病的患 者中的抗腫瘤效果進(jìn)行定量，由改進(jìn)的國際骨髓瘤工作組（IMWG)統(tǒng)一應(yīng)答標(biāo)準(zhǔn)來評價臨 床應(yīng)答；和（3)如果出現(xiàn)毒性，通過測量來自外周血的轉(zhuǎn)基因陽性細(xì)胞的消失來評價給予 AP1903的功效，其為用于激活自殺基因的二聚體。
[0244] 在初始研究的至少一些情況中，存在對T細(xì)胞治療的示例性合格標(biāo)準(zhǔn)。（1)難治/ 復(fù)發(fā)漿細(xì)胞?。ɑ蛐略\斷的，如果患者不能接受或完成標(biāo)準(zhǔn)治療）；（2)至少12周的壽命延 長；（3)足夠的器官功能；（4)由流式細(xì)胞術(shù)確定的具有>20%的CD138.CAR/iC9表達(dá)的可 用的自體同源轉(zhuǎn)導(dǎo)的外周血T細(xì)胞；（5)簽字的知情同意書；(6)對含鼠蛋白的產(chǎn)品沒有超 敏反應(yīng)史。
[0245] 治療計劃的示例。苯達(dá)莫司汀的給予。患者接受苯達(dá)莫司?。ɡ?，45mg/m2每天 持續(xù)2天）W產(chǎn)生對輸注的CAR巧細(xì)胞的淋己消耗和有利移植。
[0246] 苯達(dá)莫司汀也可能具有優(yōu)先的抗骨髓瘤效果。T細(xì)胞給予。在苯達(dá)莫司汀治療后 第4-7天輸注T細(xì)胞W最大化其對包括IL-7和比-15的再生細(xì)胞因子的發(fā)育環(huán)境的暴露。 使用改良的連續(xù)重新估計方法評估3種劑量水平并且各劑量水平招募2個一組。各患者按 照W下給藥計劃接受一次注射：組1，2X107個細(xì)胞/m2;組2,1X10 8個細(xì)胞/m2;組3, 2X10S 個細(xì)胞/m2。在沒有直接毒性的情況下，可獲得給予順序劑量的T細(xì)胞的允許，運(yùn)是示例性 前述研究中的策略。
[0247] 監(jiān)測臨床和生物參數(shù)?？杀O(jiān)測某些參數(shù)并包括病史和生理檢查W及在T-細(xì)胞輸 注前和T細(xì)胞輸注后4小時及1、2、4、6周時進(jìn)行的常規(guī)實(shí)驗(yàn)室觀察。還可通過如用于其它 設(shè)計檢測逆轉(zhuǎn)錄病毒部分的研究所述的特定Q-PCR試驗(yàn)監(jiān)測CAR巧細(xì)胞的持續(xù)性。按照 FDA指南進(jìn)行復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒的檢測（PCR)和逆轉(zhuǎn)錄病毒部分克隆性的檢測。采用治療 前和治療后6周的疾病負(fù)荷評估，包括BM。
[024引劑量限制性毒性值LT)?？砂凑湛杀徽J(rèn)為大概、可能或明確與修飾的T細(xì)胞相關(guān) 的W下任意來定義化T: (1)任何3級或4級非血液毒性；（2)任何4級血液化T(血細(xì)胞減 少癥用苯達(dá)莫司汀進(jìn)行預(yù)期并且不被認(rèn)為是化T;患有廣泛骨髓病變的患者不可評估血液 DLT)。如果出現(xiàn)非血液化T，將用一次劑量的二聚體藥物化4mg/kg)治療患者并且研究其 對循環(huán)基因修飾的T細(xì)胞的影響。如果在48小時內(nèi)毒性沒有降低，方案將使用最高3次額 外劑量的二聚體藥物與類固醇的組合（每天Img/kg的甲潑尼龍）。
[0249] 研究終止。當(dāng)最少10個患者得到治療而6個患者增加至現(xiàn)有劑量，如果沒有化T時，或者當(dāng)可預(yù)測的DLT概率>20%時，可終止試驗(yàn)。最大18個患者可獲得治療。使用 NCUCTCA巧評估毒性。在【具體實(shí)施方式】中，6周的時間構(gòu)成療程并且作為評價DLT的基礎(chǔ)。 [0巧0] 實(shí)施例4
[0巧1] CD138CART-細(xì)胞在體外和體內(nèi)有效
[0巧2] 通過體外和體內(nèi)測量，本發(fā)明的實(shí)施例顯示示例性CD138-特異性CART-細(xì)胞對 腫瘤細(xì)胞是有效的。
[0253] 圖4證明CAR.CD138可在來自健康供體和多發(fā)性骨髓瘤（MM)樣品的T細(xì)胞中 高效和穩(wěn)定地表達(dá)。如圖4D所示，來自健康供體的對照和轉(zhuǎn)導(dǎo)T細(xì)胞都含有均衡比例 的CD3+CD8叮細(xì)胞（57 % ± 26 % 和 54 % ± 14 % )和CD3+CD4叮細(xì)胞（35 % ± 17 % 和 37 % ± 13 % )，而來自匪患者的T細(xì)胞更偏向含有CD8+細(xì)胞（80 % ± 10 % )。來自健康供體和匪 患者的轉(zhuǎn)導(dǎo)T細(xì)胞含有與離體增殖過程相容的一定比例的記憶和效應(yīng)記憶細(xì)胞（CD45R0+: 分別為 82% ±16%和 79% ±9% ;CD62L+分別為 51 % ±17%和 42% ±14% )。
[0254] 在圖5中，CAR.CD138叮細(xì)胞祀向CD138+腫瘤細(xì)胞系。來自健康供體的表達(dá) CAR.CD138的T細(xì)胞W比標(biāo)準(zhǔn)51化釋放試驗(yàn)中的對照T細(xì)胞明顯高的比率裂解選擇的 CD138+MM-衍生的細(xì)胞系（圖5A，5D)。當(dāng)從匪患者生成轉(zhuǎn)導(dǎo)T細(xì)胞時，觀察到相似的殺傷 圖案（圖5B)。相反，CAR.CD138叮細(xì)胞具有針對特定CD138 -祀標(biāo)（圖5A，5B，5D)或?qū)φ?T細(xì)胞（圖5C)的可忽略的活性。
[0巧引 圖6證明CAR.CD138叮細(xì)胞在共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中消除CD13削中瘤細(xì)胞。為了評價CAR. CD138+消除CD138 +腫瘤細(xì)胞的長期能力，在沒有外源性細(xì)胞因子的情況下，CAR+或?qū)φ誘細(xì)胞與CD138+腫瘤細(xì)胞或CD138 -腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)（圖6A);通過FACS分析在5-7天后對 殘留的腫瘤細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)。在CAR+T細(xì)胞存在的情況下CD138+腫瘤完全消除，而腫瘤細(xì)胞 在含對照T細(xì)胞的培養(yǎng)中過度生長。
[0巧6] CAR.CD138叮細(xì)胞顯示響應(yīng)腫瘤細(xì)胞的Thl概況（圖7)。為了評價CAR.CD138+的 細(xì)胞因子概況，CAR+或?qū)φ誘細(xì)胞與CD138 +或CD138 -腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)。在24小時后收集 培養(yǎng)上清并分析特定Thl和Thl細(xì)胞因子的存在。
[0巧7] CAR.CD138叮細(xì)胞祀向推定的癌癥干細(xì)胞（圖8)。為了確保該方法也祀向推定的 癌癥干細(xì)胞，通過由RPMI-8266腫瘤細(xì)胞中含有的SP細(xì)胞研究CD138的表達(dá)，然后監(jiān)測該 亞組是否也可被CAR+T細(xì)胞有效消除。在與對照T細(xì)胞的共培養(yǎng)中，不僅RPMI-8266細(xì)胞仍 然存在，而且平均6%的SP細(xì)胞也仍然存在（圖8A，8B)。相反，在與CAR+T細(xì)胞的培養(yǎng)中， RPMI細(xì)胞明顯減少且沒有可檢測的SP細(xì)胞（圖8A，8B)。為了進(jìn)一步確認(rèn)運(yùn)一能力，直接 從RPMI細(xì)胞系中分選SP細(xì)胞并與對照或CAR+T細(xì)胞培養(yǎng)（圖8C)。僅在轉(zhuǎn)導(dǎo)的T細(xì)胞存 在下，SP細(xì)胞分選的細(xì)胞被完全消除。
[0巧引圖9顯示CAR.CD138+T細(xì)胞祀向原發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞。與對照T細(xì)胞相反，從健康供 體生成的CAR+T細(xì)胞成功地消除了來自匪患者的CD138選擇的腫瘤細(xì)胞（<80%倍數(shù)降低） (圖9A)。在圖9B中，類似地，與對照T細(xì)胞相比，自體同源CAR+T細(xì)胞消除了原發(fā)性匪細(xì) 胞，并且運(yùn)些實(shí)驗(yàn)中的細(xì)胞因子概況與Thl相一致（圖9C)。
[0巧9] 圖10證明CAR.CD138+T細(xì)胞具有體內(nèi)抗腫瘤活性。NSG小鼠接受靜脈內(nèi)給予 4xl06個蛋火蟲巧光素酶標(biāo)記的0PM-2細(xì)胞，之后是3次用CAR.CD138叮細(xì)胞的靜脈內(nèi)輸注 (IxlO7)。在第23天開始進(jìn)行Cioluminescent成像度LI)W監(jiān)測腫瘤生長。圖10A顯示 用BLI測定的每只小鼠的平均光子/秒/cmVsr，比較了用對照T細(xì)胞或CAR.CD138叮細(xì)胞 治療的小鼠。3次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的匯總。圖10B顯示了用CAR.CD138叮細(xì)胞或?qū)φ誘細(xì)胞治療 的小鼠的卡普蘭-邁耶存活曲線（P<〇. 01)。
[0260] 在圖11中，存在低氧可誘導(dǎo)CAR.CD138化RE.CAR.CD138)的生成和功能。圖11A 提供了在逆轉(zhuǎn)錄病毒載體中編碼的HRE.CAR.CD138的示意圖。對照、組成型CAR.CD138+或 HRE.CAR.CD138叮細(xì)胞在正常氧或低氧下與CD138+祀標(biāo)共培養(yǎng)（圖11B)。在培養(yǎng)4天后，收 集細(xì)胞并用CD3和CD138染色W評價腫瘤細(xì)胞的生長。也評價T細(xì)胞上CAR的表達(dá)。HRE. CAR.CD138叮細(xì)胞在低氧條件下消除腫瘤細(xì)胞。（圖11C)對照、組成型CAR.CD138+或HRE. CAR.CD138叮細(xì)胞被標(biāo)記并在正常氧或低氧下與[0138?標(biāo)共培養(yǎng)。在4天的培養(yǎng)后，收 集細(xì)胞，用CD3染色并通過流式細(xì)胞術(shù)測量CSFE的稀釋。HRE.CAR.CD138+T細(xì)胞在低氧條 件下增殖。
[0261] 盡管已經(jīng)詳細(xì)描述了本發(fā)明和其優(yōu)勢，但是應(yīng)當(dāng)理解，可對本文進(jìn)行各種變化、替 代和改變而不背離所附權(quán)利要求所定義的本發(fā)明的精神和范圍。此外，本申請的范圍不是 旨在限制于本說明書所述的形式、手段、方法和步驟的過程、機(jī)器、制造、組合物的具體實(shí)施 方式。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通過本發(fā)明的內(nèi)容將容易理解，現(xiàn)存或后續(xù)開發(fā)的與本文所述 相應(yīng)實(shí)施方式實(shí)施基本相同功能或?qū)崿F(xiàn)基本相同結(jié)果的形式、手段、方法、或步驟的過程、 機(jī)器、制造、組合物均可使用。因此，所附權(quán)利要求旨在將形式、手段、方法、或步驟的過程、 機(jī)器、制造、組合物包括在其范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種表達(dá)載體，所述表達(dá)載體編碼CD138-特異性嵌合抗原受體（CAR)和與之功能上 相關(guān)的一種或多種低氧應(yīng)答調(diào)控元件。2. 如權(quán)利要求1所述的載體，所述載體還包含編碼誘導(dǎo)型自殺基因的序列。3. -種表達(dá)載體，所述表達(dá)載體編碼CD138-特異性嵌合抗原受體（CAR)并包含： a) 與CD138-特異性CAR功能上相關(guān)的一種或多種低氧應(yīng)答調(diào)控元件；和/或 b) 誘導(dǎo)型自殺基因。4. 如權(quán)利要求1或3所述的載體，其特征在于，所述載體是非病毒載體或病毒載體。5. 如權(quán)利要求1或3所述的載體，其特征在于，所述病毒載體是逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、慢病 毒載體、腺病毒載體或腺相關(guān)病毒載體。6. 如權(quán)利要求1或3所述的載體，其特征在于，⑶138-特異性CAR包含IgGl鉸鏈區(qū)。7. 如權(quán)利要求1或3所述的載體，其特征在于，所述CD138-特異性CAR包含選自下組 的胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域：CD28、0X40、4-1BB、ICOS及其組合。8. 如權(quán)利要求1或3所述的載體，其特征在于，所述CD138-特異性CAR包含選自 ⑶3-ζ和⑶28的跨膜結(jié)構(gòu)域。9. 如權(quán)利要求2或3所述的載體，其特征在于，所述自殺基因選自下組：胱冬酶9、單純 皰疹病毒、胸苷激酶（HSV-tk)、胞嘧啶脫氨酶（⑶）和細(xì)胞色素Ρ450。10. 如權(quán)利要求1或2所述的載體，其特征在于，所述低氧應(yīng)答調(diào)控元件包含VEGF低氧 應(yīng)答調(diào)控元件、a1B-腎上腺素能受體低氧應(yīng)答調(diào)控元件、脂肪酸合成酶低氧應(yīng)答調(diào)控元件 或其組合。11. 一種包含如權(quán)利要求1、2或3所述載體的細(xì)胞。12. 如權(quán)利要求11所述的細(xì)胞，其特征在于，所述細(xì)胞還限定為真核細(xì)胞。13. 如權(quán)利要求11所述的細(xì)胞，其特征在于，所述細(xì)胞還限定為人細(xì)胞。14. 如權(quán)利要求11所述的細(xì)胞，其特征在于，所述細(xì)胞還限定為相對于特定個體是自 體同源的、同系的、同種異體的或異種異體的。15. 如權(quán)利要求14所述的細(xì)胞，其特征在于，所述個體需要癌癥治療。16. 如權(quán)利要求14所述的細(xì)胞，其特征在于，所述個體需要針對Β-系血液惡性腫瘤的 治療。17. 如權(quán)利要求14所述的細(xì)胞，其特征在于，所述個體需要針對多發(fā)性骨髓瘤的治療。18. 如權(quán)利要求11所述的細(xì)胞，其特征在于，所述細(xì)胞還限定為細(xì)胞毒性Τ淋巴細(xì)胞 (CTL)、自然殺傷細(xì)胞或自然殺傷Τ細(xì)胞。19. 如權(quán)利要求18所述的細(xì)胞，其特征在于，所述細(xì)胞是病毒特異性的。20. 如權(quán)利要求19所述的細(xì)胞，其特征在于，所述病毒是EBV、CMV、腺病毒、ΒΚ病毒、 HHV6、RSV、流感病毒、副流感病毒、博卡病毒、冠狀病毒、LCMV、腮腺炎病毒、麻疹病毒、偏肺 病毒、細(xì)小病毒Β、輪狀病毒、西尼羅河病毒、JC、HHV7或HIV。21. 如權(quán)利要求19所述的細(xì)胞，其特征在于，所述細(xì)胞包含對除CD138以外的抗原有特 異性的至少一種其它CAR。22. 如權(quán)利要求21所述的細(xì)胞，其特征在于，所述CAR針對選自下組的抗原具有特異 性：黑色素瘤-相關(guān)抗原（MAGE)，黑色素瘤的優(yōu)先表達(dá)抗原（PRAME)、生存素、⑶19、⑶20、 CD22、k輕鏈、CD30、CD33、CD123、CD38、ROR1、ErbB2、ErbB3/4、ErbB二聚體、EGFrvIII、癌 胚抗原、EGP2、EGP40、間皮素、TAG72、PSMA、NKG2D配體、B7-H6、IL-13受體a2、MUCl、MUC16、CA9、⑶2、⑶3、HMW-MAA、CD171、LewisY、G250/CAIX、HLA-AIMAGEAl、HLA-A2NY-ES0-1、 PSCA、葉酸受體-a、CD44v6、CD44v7/8、avb6整聯(lián)蛋白、8H9、NCAM、VEGF受體、5T4、胎牛AchR、 NKG2D配體、⑶44v6、雙抗原和通用抗原。23.權(quán)利要求18所述的細(xì)胞，其特征在于，所述細(xì)胞表達(dá)可分泌接合蛋白，所述蛋白包 含激活結(jié)構(gòu)域和抗原識別結(jié)構(gòu)域。24. 權(quán)利要求23所述的細(xì)胞，其特征在于，所述激活結(jié)構(gòu)域、抗原識別結(jié)構(gòu)域或兩者包 含單鏈可變區(qū)片段（SCFV)抗體部分。25.如權(quán)利要求1所述的細(xì)胞，其特征在于，所述激活結(jié)構(gòu)域是識別選自下組的分子的 scFV:CD3、CD16、CD28、CD40、CD134和CD137。26.如權(quán)利要求23所述的細(xì)胞，其特征在于，所述抗原識別結(jié)構(gòu)域結(jié)合CD138。27.-種治療個體中癌癥的方法，所述方法包括向所述個體遞送治療有效量的權(quán)利要 求1-10中任一項(xiàng)所述的載體的步驟。28.-種治療個體中癌癥的方法，所述方法包括向所述個體遞送治療有效量的權(quán)利要 求11-26中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞的步驟。29. -種包含權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)所述的載體的試劑盒。30. -種包含權(quán)利要求11-26中任一項(xiàng)所述的細(xì)胞的試劑盒。31. -種表達(dá)載體，所述表達(dá)載體編碼腫瘤抗原-特異性CAR和與之功能上相關(guān)的一種 或多種低氧應(yīng)答調(diào)控元件。32.如權(quán)利要求31所述的載體，所述載體還包含編碼誘導(dǎo)型自殺基因的序列。33. -種表達(dá)載體，所述表達(dá)載體編碼腫瘤抗原-特異性CAR并包含： a)與腫瘤抗原-特異性CAR功能上相關(guān)的一種或多種低氧應(yīng)答調(diào)控元件；和/或 b)誘導(dǎo)型自殺基因。34.如權(quán)利要求31或33所述的載體，其特征在于，所述腫瘤抗原選自下組：黑色素 瘤-相關(guān)抗原（MAGE)，黑色素瘤的優(yōu)先表達(dá)抗原（PRAME)、生存素、⑶19、⑶20、⑶22、k輕 鏈、CD30、CD33、CD123、CD38、ROR1、ErbB2、ErbB3/4、ErbB二聚體、EGFrvIII、癌胚抗原、 EGP2、EGP40、間皮素、TAG72、PSMA、NKG2D配體、B7-H6、IL-13受體a2、MUC1、MUC16、CA9、 (?2、a)3、HMff-MAA、CD171、LewisY、G250/CAIX、HLA-AIMAGEAl、HLA-A2NY-ES0-l、PSCA、 葉酸受體-a、CD44v6、CD44v7/8、avb6整聯(lián)蛋白、8H9、NCAM、VEGF受體、5T4、胎牛AchR、NKG2D 配體、⑶44v6、雙抗原和通用抗原。
【專利摘要】本發(fā)明的實(shí)施方式涉及靶向某些癌細(xì)胞而不是具有相同抗原的其它細(xì)胞的治療載體和細(xì)胞。在【具體實(shí)施方式】中，本發(fā)明的方法和組合物涉及具有CD138-特異性嵌合抗原受體的細(xì)胞，其表達(dá)處于環(huán)境特異性調(diào)控的控制之下。在【具體實(shí)施方式】中，環(huán)境是缺氧。在一些情況中，該組合物包含自殺基因。
【IPC分類】A61K38/17, C12N15/63, C12N5/10, A61P35/00
【公開號】CN105339498
【申請?zhí)枴緾N201480026310
【發(fā)明人】G·道提, C·A·拉莫斯, B·薩沃爾多
【申請人】貝勒醫(yī)學(xué)院
【公開日】2016年2月17日
【申請日】2014年3月7日
【公告號】CA2904369A1, EP2964753A1, US20160017048, WO2014138704A1