本發(fā)明涉及分子靶標(biāo)領(lǐng)域，特別地，涉及一種制備診斷和治療結(jié)腸癌藥物的分子靶標(biāo)及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：結(jié)腸癌是常見(jiàn)的惡性腫瘤，近年來(lái)其發(fā)病率和死亡率呈逐漸上升趨勢(shì)。由于腫瘤的演變是較為復(fù)雜的病理過(guò)程，給臨床的診斷及治療帶來(lái)一定的局限性，因此亟需提供一種藥物為結(jié)腸癌的診斷、治療或預(yù)后判斷提供新的線索和依據(jù)。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明提供了一種制備診斷和治療結(jié)腸癌藥物的分子靶標(biāo)及其應(yīng)用，以解決制備結(jié)腸癌診斷和治療藥物的技術(shù)問(wèn)題。本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：本發(fā)明一方面提供了一種制備診斷和治療結(jié)腸癌藥物的分子靶標(biāo)，分子靶標(biāo)為L(zhǎng)INC00657，LINC00657的堿基序列為SEQIDNO：1。本發(fā)明另一方面提供了一種分子靶標(biāo)在制備診斷和治療結(jié)腸癌藥物中的應(yīng)用，分子靶標(biāo)為L(zhǎng)INC00657。進(jìn)一步地，LINC00657應(yīng)用于制備結(jié)腸癌的診斷試劑。進(jìn)一步地，LINC00657應(yīng)用于制備結(jié)腸癌的診斷試劑盒。進(jìn)一步地，LINC00657應(yīng)用于制備結(jié)腸癌的治療試劑。進(jìn)一步地，LINC00657應(yīng)用于制備結(jié)腸癌的治療試劑盒。本發(fā)明具有以下有益效果：分子靶標(biāo)LINC00657能準(zhǔn)確反映結(jié)腸癌的進(jìn)展情況，進(jìn)而能夠用于結(jié)腸癌診斷。同時(shí)LINC00657還具有明顯促進(jìn)細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)化能力，可以作為治療結(jié)腸癌的分子靶標(biāo)。因此，分子靶標(biāo)LINC00657具有重要的科研理論和臨床應(yīng)用價(jià)值，為結(jié)腸癌的診斷、治療或預(yù)后判斷提供新的線索和依據(jù)，可應(yīng)用于制備診斷和治療結(jié)腸癌藥物。除了上面所描述的目的、特征和優(yōu)點(diǎn)之外，本發(fā)明還有其它的目的、特征和優(yōu)點(diǎn)。下面將參照?qǐng)D，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明。附圖說(shuō)明構(gòu)成本申請(qǐng)的一部分的附圖用來(lái)提供對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步理解，本發(fā)明的示意性實(shí)施例及其說(shuō)明用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的不當(dāng)限定。在附圖中：圖1為實(shí)施例1中以real-timePCR方法檢測(cè)LINC00657在正常結(jié)腸上皮細(xì)胞和結(jié)腸癌細(xì)胞中的表達(dá)結(jié)果圖；圖2為實(shí)施例2中以原位雜交法檢測(cè)LINC00657在正常結(jié)腸上皮與結(jié)腸癌細(xì)胞中的表達(dá)結(jié)果圖；圖3為實(shí)施例3中HT29細(xì)胞中轉(zhuǎn)染LINC00657質(zhì)粒、LINC00657siRNA質(zhì)粒和空白質(zhì)粒后的流式檢測(cè)結(jié)果圖；圖4為實(shí)施例3中HT29細(xì)胞中轉(zhuǎn)染LINC00657質(zhì)粒、LINC00657siRNA質(zhì)粒和空白質(zhì)粒后的流式檢測(cè)結(jié)果圖；圖5為實(shí)施例4中LINC00657對(duì)裸鼠移植瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的影響圖；圖6為實(shí)施例4中LINC00657對(duì)裸鼠移植瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線圖?？梢?jiàn)，不同處理組荷瘤裸鼠腫瘤及腫瘤生長(zhǎng)曲線：無(wú)酶水(DEPC)處理組；LINC00657siRNA處理組；結(jié)果顯示LINC00657siRNA處理組能明顯促進(jìn)腫瘤的增長(zhǎng)(P<0.01)。具體實(shí)施方式以下結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明，但是本發(fā)明可以由權(quán)利要求限定和覆蓋的多種不同方式實(shí)施。本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例提供了一種制備診斷和治療結(jié)腸癌藥物的分子靶標(biāo)，分子靶標(biāo)為L(zhǎng)INC00657，LINC00657的堿基序列為SEQIDNO：1。分子靶標(biāo)LINC00657為長(zhǎng)鏈非編碼RNA，其堿基序列為SEQIDNO：1，具體為：本發(fā)明具有以下有益效果：分子靶標(biāo)LINC00657能準(zhǔn)確反映結(jié)腸癌的進(jìn)展情況，進(jìn)而能夠用于結(jié)腸癌診斷。同時(shí)LINC00657還具有明顯促進(jìn)細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)化能力，可以作為治療結(jié)腸癌的分子靶標(biāo)。因此，分子靶標(biāo)LINC00657具有重要的科研理論和臨床應(yīng)用價(jià)值，為結(jié)腸癌的診斷、治療或預(yù)后判斷提供新的線索和依據(jù)，可應(yīng)用于制備診斷和治療結(jié)腸癌藥物。本發(fā)明另一方面提供了一種分子靶標(biāo)在制備診斷和治療結(jié)腸癌藥物中的應(yīng)用，分子靶標(biāo)為L(zhǎng)INC00657。進(jìn)一步地，LINC00657應(yīng)用于制備結(jié)腸癌的診斷試劑。進(jìn)一步地，LINC00657應(yīng)用于制備結(jié)腸癌的診斷試劑盒。進(jìn)一步地，LINC00657應(yīng)用于制備結(jié)腸癌的治療試劑。進(jìn)一步地，LINC00657應(yīng)用于制備結(jié)腸癌的治療試劑盒。實(shí)施例1LINC00657在正常結(jié)腸上皮細(xì)胞和結(jié)腸癌細(xì)胞中的表達(dá)情況(1)細(xì)胞培養(yǎng)及RNA提取分別取正常結(jié)腸上皮細(xì)胞系CCD841Con細(xì)胞和NCM460細(xì)胞系于12％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)。再分別取結(jié)腸癌細(xì)胞系SW480細(xì)胞、SW620細(xì)胞、HT29細(xì)胞和HCT116細(xì)胞培養(yǎng)于10％胎牛血清的1640培養(yǎng)基中。待各培養(yǎng)體系中細(xì)胞長(zhǎng)滿，除去培養(yǎng)基，分別單獨(dú)收集上述細(xì)胞分別加Trizol(5×106細(xì)胞/1mlTrizol)吹打混勻，冰上靜置5-10min，提取RNA或-70℃保存。(2)細(xì)胞TotalRNA(總RNA)提取各細(xì)胞均按如下步驟單獨(dú)進(jìn)行操作，分別得到各細(xì)胞的TotalRNA。Trizol提取細(xì)胞總RNA：加氯仿200μl/mlTrizol于Tube中，用手震蕩15-30s，冰上放置5min，4℃12000g離心15min。小心取上層水相入新tube中，加入預(yù)冷的異丙醇0.5ml/mlTrizol混勻，-20℃冰箱靜置20min，4℃12000g離心10min。棄上清，加入75％DEPC(焦碳酸二乙酯)水稀釋的乙醇1-2ml混勻，4℃7500g離心5min。盡量棄上清，室溫干燥5-10min，加入DEPC水10-20μl溶解RNA。用DNase-I消化RNA中痕量的DNA測(cè)定RNA濃度和純度，-70℃保存。(3)RT-PCR(逆轉(zhuǎn)錄及PCR擴(kuò)增)分別對(duì)各細(xì)胞中的TotalRNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，使用RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(購(gòu)于Fermentas公司)，20μL逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的體系如下：逆轉(zhuǎn)錄程序：42℃60分鐘，70℃5分鐘。對(duì)逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進(jìn)行PCR擴(kuò)增LINC00657mRNA(擴(kuò)增LINC00657mRNA左右引物分別是：Left:5-3cagaggaggtatgcagggag；Right:5-3ggatgtctagctccaagggg)(該引物通過(guò)primer5.0軟件進(jìn)行設(shè)計(jì)，再通過(guò)NCBIBALST進(jìn)行匹配確認(rèn)該引物為L(zhǎng)INC00657特異引物)。20μL反應(yīng)體系如下：Component(成份)Vol/1rxnsTaqmix(Taq緩沖液)10μlLINC00657left(10uM)prime(左引物)1μlLINC00657right(10uM)prime(右引物)1μlcDNASample(cDNA樣本)1μlRNaseFreeH2O(無(wú)酶水)To20μlLINC00657實(shí)時(shí)定量PCR反應(yīng)程序：95℃3分鐘，40個(gè)循環(huán)，95℃12秒，62℃35秒。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)LINC00657的表達(dá)情況。通過(guò)Real-timePCR驗(yàn)證了LINC00657在正常結(jié)腸上皮細(xì)胞系CCD841Con細(xì)胞系和NCM460細(xì)胞系、結(jié)腸癌SW480細(xì)胞、結(jié)腸癌SW620細(xì)胞系、結(jié)腸癌HT29細(xì)胞系和結(jié)腸癌HCT116細(xì)胞系的表達(dá)情況，結(jié)腸正常上皮細(xì)胞CCD841CoN細(xì)胞、NCM460細(xì)胞作為正常對(duì)照組。LINC00657表達(dá)水平檢測(cè)以為內(nèi)參并將正常對(duì)照組標(biāo)準(zhǔn)化為1。實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次取均數(shù)。(*)<0.05。結(jié)果如圖1所示。結(jié)果顯示：LINC00657在結(jié)腸癌細(xì)胞系中較正常對(duì)照組表達(dá)水平上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(*p<0.05，**p<0.01)。并且LINC00657在結(jié)腸癌細(xì)胞系中表達(dá)上調(diào)4.3倍(p<0.01)。實(shí)施例2原位雜交檢測(cè)LINC006571)獲取結(jié)腸癌組織(該組織包含結(jié)腸癌組織和癌旁正常組織)的標(biāo)本，將標(biāo)本常規(guī)脫水、浸蠟、包埋。切片厚度6-8um。2)石蠟切片經(jīng)過(guò)常規(guī)脫蠟至水。60℃條件下，烤片30-60min，趁熱放入二甲苯中，靜置10min后，轉(zhuǎn)移到另一新的二甲苯中，放置10min；接著置于100％乙醇中，5min，95％乙醇5min，75％乙醇5min，50％乙醇5min，無(wú)酶水中3min，最后用PBS洗3次，每次3min。3％H2O2，室溫5-10min以滅活內(nèi)源性酶。無(wú)酶水洗1min×3。3)暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3％檸檬酸新鮮稀釋的胃蛋白酶(1ml3％檸檬酸加2滴濃縮型胃蛋白酶)，37℃或是室溫消化3-30min(視標(biāo)本新舊、厚薄自行調(diào)整)(15min)。原位雜交用PBS洗5min×3，無(wú)酶水洗1min×1。4)后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液1％多聚甲醛/0.1MPBS(PH7.2～7.6)，含有1/1000DEPC。室溫固定10min，無(wú)酶水洗1min×3。5)預(yù)雜交：濕盒的準(zhǔn)備，干的雜交盒底部加20％甘油20ml以保持濕度。按每張切片20ul加預(yù)雜交液，恒溫42℃2-4小時(shí)，吸取多余液體，不洗。6)雜交：將切片分為實(shí)驗(yàn)組(即圖2所示LINC00657組)和對(duì)照組(即圖2所示NC組)，其中實(shí)驗(yàn)組按每張切片20ulNORAD-h寡核苷酸探針雜交液(該雜交液含與LINC00657結(jié)合的探針?lè)肿樱撾s交探針訂制于武漢博士德生物工程有限公司。檢測(cè)所用的原位雜交試劑盒：敏感性加強(qiáng)型原位雜交檢測(cè)試劑盒Ⅰ，貨號(hào)MK1030，該敏感性加強(qiáng)型原位雜交檢測(cè)試劑盒Ⅰ包括NORAD-h寡核苷酸探針雜交液和寡核苷酸探針雜交液)加在切片上，對(duì)照組(NC組)切片按照每張切片20ul寡核苷酸探針雜交液(該雜交液含對(duì)照無(wú)關(guān)序列Nccontrol，該雜交探針訂制于武漢博士德生物工程有限公司。檢測(cè)所用的原位雜交試劑盒：敏感性加強(qiáng)型原位雜交檢測(cè)試劑盒Ⅰ，貨號(hào)MK1030)恒溫箱42℃雜交過(guò)夜。7)雜交后洗滌：37℃水溫2×SSC(SSC檸檬酸鈉緩沖溶液)洗滌5min×2次；37℃0.5×SSC洗滌15min×1次；37℃0.2×SSC洗滌15min×1次(如果有非特異性染色，重復(fù)0.2×SSC洗滌15min×1-2次)。附2×SSC的配制方法：20×SSC：NaCl175g；檸檬酸三鈉88g；dH2O1000ml；固定試劑溶解后，dH2O定容至1000ml，調(diào)pH至7.4，高壓滅菌。工作液稀釋成2×的SSC。其它濃度的SSC可相應(yīng)配制。8)滴加封閉液：37℃30min，甩去多余液體，不洗。9)滴加生物素化鼠抗地高辛：室溫120min，原位雜交用PBST5min×4，勿用其他DAB(3.3'-二氨基聯(lián)苯胺)顯色，蘇木精復(fù)染，充分水洗，酒精脫水，二甲苯透明，封片。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的切片除雜交步驟的雜交液不同外，其余步驟相同。取實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組處理好的切片在顯微鏡下觀察。如圖2所示，結(jié)腸組織中框內(nèi)(×100)的區(qū)域?qū)?yīng)在高倍鏡下觀察(×200)。觀察LINC00657在結(jié)腸癌組織(下方深色框區(qū)域)和癌旁正常組織(上方淺色區(qū)域)中的表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)組的切片顯示Linc00657在腫瘤組織中的表達(dá)量較正常癌旁組織中的表達(dá)量明顯升高，而對(duì)照組的切片顯示無(wú)關(guān)序列在腫瘤組織與正常組織表達(dá)陰性，對(duì)照組良好。綜上，可見(jiàn)對(duì)組織進(jìn)行連續(xù)切片后原位雜交檢測(cè)結(jié)果顯示：在癌旁組織中LINC00657低表達(dá)；在結(jié)腸癌組織中LINC00657高表達(dá)。實(shí)施例3轉(zhuǎn)染及流式檢測(cè)準(zhǔn)備用于轉(zhuǎn)染后上調(diào)細(xì)胞內(nèi)LINC00657的LINC00657質(zhì)粒、轉(zhuǎn)染后下調(diào)細(xì)胞內(nèi)LINC00657的siRNA質(zhì)粒及空白陰性對(duì)照質(zhì)粒(negativecontrol，NC)(購(gòu)于山東維真生物科技有限公司)、HT29細(xì)胞和SW480細(xì)胞。按照下列步驟分別對(duì)HT29細(xì)胞進(jìn)行LINC00657質(zhì)粒轉(zhuǎn)染、LINC00657siRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染和空白質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，以及對(duì)SW480細(xì)胞進(jìn)行LINC00657質(zhì)粒轉(zhuǎn)染、LINC00657siRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染和空白質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，并對(duì)上述轉(zhuǎn)染后的相應(yīng)細(xì)胞進(jìn)行流式檢測(cè)。1)轉(zhuǎn)染程序：將細(xì)胞分別接種于6孔板中，完全培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞。加入5μl的脂質(zhì)體(lipofectamine2000轉(zhuǎn)染試劑盒，購(gòu)于Invitrogen公司)到200μl無(wú)血清培養(yǎng)基中，混勻靜置15min。稀釋400ng相應(yīng)質(zhì)粒于200μl無(wú)血清培養(yǎng)基中，并將上述脂質(zhì)體與質(zhì)粒稀釋液混合，室溫放置30min。待細(xì)胞生長(zhǎng)至30％密度后，分別用Hank's液與無(wú)血清培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞，將上述混合物加入6孔板中，再加1600μl無(wú)血清培養(yǎng)基，放置于CO2培養(yǎng)箱中，37℃培養(yǎng)6h。棄去上清，加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)48h。2)胰酶消化生長(zhǎng)狀態(tài)良好、70％～80％融合度的貼壁細(xì)胞。1500rpm/min，離心5min，收集細(xì)胞沉淀。1×PBS洗細(xì)胞，1500rpm/min，離心5min，收集細(xì)胞。如此重復(fù)洗2次。在旋渦震蕩器上充分震蕩使成為單個(gè)細(xì)胞懸液，70％預(yù)冷乙醇固定。3)流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，用PH7.4的PBS洗滌乙醇固定的細(xì)胞，離心后去除固定液，加碘化丙錠(PI)染色液(含50mg/LPI,1g/LTritonX-100，100g/LRNase)混勻，37℃，避光30min。4)流式細(xì)胞儀FAM檢測(cè)，每次分析1×106各細(xì)胞，重復(fù)3次，檢測(cè)細(xì)胞的熒光強(qiáng)度進(jìn)行分析。LINC00657對(duì)細(xì)胞周期的影響：A：如圖3所示，HT29細(xì)胞中轉(zhuǎn)染LINC00657和LINC00657siRNA后流式檢測(cè)結(jié)果顯示：LINC00657能明顯促進(jìn)細(xì)胞從G0/G1向S期轉(zhuǎn)換。LINC00657siRNA能明顯抑制細(xì)胞從G0/G1向S期轉(zhuǎn)換，實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次取均數(shù)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，(*)<0.05。B：如圖4所示，SW480細(xì)胞中轉(zhuǎn)染LINC00657和LINC00657siRNA后流式檢測(cè)結(jié)果顯示：LINC00657能明顯促進(jìn)細(xì)胞從G0/G1向S期轉(zhuǎn)換。LINC00657siRNA能明顯抑制細(xì)胞從G0/G1向S期轉(zhuǎn)換，實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次取均數(shù)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，(*)<0.05注：NC組(細(xì)胞中轉(zhuǎn)染空白質(zhì)粒)；LINC00657(細(xì)胞中轉(zhuǎn)染LINC00657質(zhì)粒)；LINC00657siRNA(細(xì)胞中轉(zhuǎn)染LINC00657siRNA質(zhì)粒)。實(shí)施例4裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)1)瘤細(xì)胞懸液接種：對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HT29細(xì)胞經(jīng)胰酶消化后，1500rpm/min，常溫離心5min，棄去上清，用PBS離心洗滌2次；計(jì)算細(xì)胞數(shù)；并調(diào)整細(xì)胞濃度至1×107/ml。2)準(zhǔn)備雄性裸鼠10只，周齡4周，分籠飼養(yǎng)，予以標(biāo)準(zhǔn)飼料及飲水讓其自由攝食，小鼠隨機(jī)分成2實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組，每組5只。將步驟1的細(xì)胞懸浮在生理鹽水中，制成細(xì)胞懸液，并接種于各組的雄性裸鼠一側(cè)腋部皮下。3)觀察接種細(xì)胞后裸鼠一般情況和精神狀態(tài)，記錄移植瘤形成的時(shí)間及大小。4)治療：待腫瘤長(zhǎng)至150mm3時(shí)，以10nmol膽固醇修飾siRNA/次/只溶于100μl生理鹽水對(duì)實(shí)驗(yàn)組的小鼠進(jìn)行瘤內(nèi)原位多點(diǎn)注射。對(duì)照組用10nmol膽固醇修飾無(wú)關(guān)序列scramble(廣州市銳博生物科技有限公司合成)100ul生理鹽水進(jìn)行瘤內(nèi)原位多點(diǎn)注射，每隔3天注射一次。5)移植瘤體積、重量及瘤重抑瘤率：治療后每2天用游標(biāo)卡尺測(cè)各組小鼠移植瘤最長(zhǎng)徑(L)和最短徑(W)，計(jì)算腫瘤體積(V)，V＝L×W2×0.52。繪制治療后移植瘤生長(zhǎng)曲線。6)實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，完整剝離腫瘤，照相，測(cè)量其體積及重量。每組分別取部分移植瘤組織用10％的甲醛固定，其余均在液氮超低溫冰箱中保存。LINC00657對(duì)裸鼠移植瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：A：如圖5所示，LINC00657siRNA處理組裸鼠移植瘤較對(duì)照組明顯小，可見(jiàn)LINC00657siRNA能明顯抑制裸鼠移植瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。B：如圖6所示，裸鼠移植瘤生長(zhǎng)曲線結(jié)果顯示：LINC00657siRNA能明顯抑制裸鼠移植瘤腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)速度，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，(*)<0.05；注：圖5和圖6中NC組為對(duì)照組，LINC00657siRNA組為實(shí)驗(yàn)組。實(shí)施例1通過(guò)Real-timePCR檢測(cè)了LINC00657在正常結(jié)腸上皮細(xì)胞系CCD841Con細(xì)胞系、NCM460細(xì)胞系、結(jié)腸癌SW480細(xì)胞、結(jié)腸癌HT29細(xì)胞系、結(jié)腸癌SW620細(xì)胞系和結(jié)腸癌HCT116細(xì)胞系的表達(dá)情況，證明顯示LINC00657在結(jié)腸癌細(xì)胞系中高度表達(dá)，其表達(dá)上調(diào)4.3倍(p<0.01)。實(shí)施例2的原位雜交結(jié)果同樣顯示LINC00657在結(jié)腸癌組織中較正常結(jié)腸組織中的表達(dá)量明顯上調(diào)。實(shí)施例3和實(shí)施例4在體內(nèi)與體外對(duì)LINC00657的生物學(xué)功能進(jìn)行研究：結(jié)果表明：LINC00657可以明顯促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖，沉默LINC00657后能明顯抑制結(jié)腸癌腫瘤細(xì)胞的增殖與轉(zhuǎn)化能力。綜上LINC00657可以作為結(jié)腸癌診斷與治療的分子靶標(biāo)，分子靶標(biāo)LINC00657可應(yīng)用在制備診斷和治療結(jié)腸癌的藥物中。進(jìn)而，分子靶標(biāo)LINC00657可應(yīng)用于制備結(jié)腸癌的診斷試劑、制備結(jié)腸癌的診斷試劑盒、制備結(jié)腸癌的治療試劑、結(jié)腸癌的治療試劑盒。以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。序列表<110>中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院、中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院<120>分子靶標(biāo)LINC00657在制備診斷和治療結(jié)腸癌藥物中的應(yīng)用<160>1<170>PatentInversion3.3<210>1<211>5378<212>RNA<213>人工序列<223>分子靶標(biāo)LINC00657<400>1agttccggtccggcagagatcgcggagagacgcagaacgcagcccgctcctccagggccc60tccaggccctccggccccgggccggcgggtgaactggggggccccgggacaggccgagcc120ctctgccctgcagataacggaggcctctgctgtggctgcccactggctgtgcccgcccac180tggctgtgcccagaccttgaagccgcagcgaacctctctttcccaccccacctcggtgac240taatggcggccgtggcgtctcccagcccggaccccgccggcacccgggtctcccgaccca300agcctcgacgaaacccccgcagagccgccgggacgcagcgcctttgggcggcgctgggcg360tggtgggccgggaagtatggcggcagctcgaacgccgcgcggcggaggccattaaggcgt420ggacggcccgggaaggcggcctagggacgcaagcaggctcggccgcctctttaggccacg480gagccgcgcagatccggttcccgggtgaccactctgtcgccattgggcgagacctaccta540gtcctgacgacaacggacaaaggccttaaggggcctggaaggtgagcgaagtcccgaacg600acgacgggtggaacggttagcggccatcgggcggttggtcttcattctaccagactttgc660tgtcggaagagagaaatggtagaatgacaggccacgtttggcccgttggaaatgcccacc720accctctgggaagatttactggccgtttatggaaggcctgtgtatataatatgaaaaagc780tgctctcaactccaccccaaccttttaatagaaaacatttgtcacatctagcccttctag840atggaaagaggttgccgacgtatgataaaatagagttagaaagttacacatcttgtaaat900tctcatttgtttaaaagaaatcatagaaaatacatgtcttctggagatgacttttggaaa960tggagttgttaagacggcctctggaagcgatacgtccacgtttgttaagtgggttagatg1020acatggagctggaagacctgagaaggaagagaagaaggttctatgctagactggtcatat1080ttagaagacattttcatattctatccattgttttgtgtgcattttattcctcactactgt1140gtatatagttgacaatgctaagcttttttgaaatgtctcttctttttagatgttctgaag1200tgcctgatatgttaaaattagaggtagcaaaatcacattttgtaaatacctttttgttac1260aattcataggaaatatttttgggggggaatggccaaatcacctgttgagtaatactcatt1320gtgtttgtgcagtggttcaggggaggagagaggagggggaggtgcagagagctctatgcc1380atcctgtttacagcgaggcaagatgaatcattatgtctgtgcattttgttttacttatct1440gtgtatatagtgtacataaaggacagacgagtcctaattgacaacatctagtctttctgg1500atgttaaagaggttgccagtgtatgacaaaagtagagttagtaaactaatatattttgta1560cattttgttttacaagtcctaggaaagattgtcttctgaaaatttgatgtcttctgggtt1620gatggagatgggaagggttctaggccagaatgttcacatttggaagactctttcaaatta1680taactgttgttacatgtttgcagtttattcaagactgctgtatacatagtagacaaatta1740actccttacttgaaacatctagtctatctagatgtttagaagtgcccgatgtatgttaaa1800tgtataggtagtaaaataccactttgtaaatatctttttgctaaaattcataggaaatgc1860ttttggaaattgaattgtgaagccacctttgtgaacagtatagtaatgtctatacttgtt1920caatagtttagaggaggtaggagggaagaaattgcaaaaggtaatattactagtgtgttc1980atacttggacattttcagacaccatttttctatatgttttgtgcattttgttttgctctg2040tatatagtatatataatggacaaatagtcctaatttttcaacatctagtctctagatgtt2100aaagaggttgccagtgtatgacaaaggagtaaaattagcatattttgtacactttgtgtt2160gaaattcgtaggaaaacttgtcttctgtaaagacttttgcataggaatttgtttgaccat2220ctctaagcattacacgtgcctgtacttgtccactggattgaaggcagagaaggaagggag2280gagggaatgattcaaggccaaaatggccacatttagaagatacctcagatgataaccatt2340gttatgtgtgtgcaattttatttaacagtgctgtgtatgtggtggacaagttatatgaaa2400tatctagtctttctagatatttggaagtgcttgatgtatttaaaagtggtagtagaataa2460cactttgtaaatagcttttaaaaactgatgggaaatgctgtttggaagtggaattgttga2520accacctgggaggtgggagggaagaaattgcaaatggtgttttgccattgtttattagaa2580aatttcagcttaatccattgtgtatatgttacatgcatttcatttaactttgctatactg2640tatatattgtatatataacggacaaattagtcccgattttataatatctagtctctagat2700attaaagaggttgccaatgtatgacagaagtagagttagtaaactaacacattttgtaca2760ctttgttaaaatttgtagaaaggctgtcttctgaaaaggacttttggaagtgagataaca2820tcagctctaagtgacacgtgcctatatccatcaggttggtggtggagaggagttggaagg2880aatgaagggttctagaccagaatgttcgtatttagaagacactatcagatataaccattg2940ttacatgtgtgtagtttattcaaccctactgtgtatatagcggacaaacttaagtcctta3000tttgaaacatctagtctttctagatgtttagaagtgcacaaagtatgttaaaagtagagg3060tagtaaataacacattttgtagctatccttttgatatgaaatattgtcttggaaattgat3120caattctctgagcagtacccattttgatatttgtgctggttcagggggaaggaggagcac3180aaagtgcaaagggctttctaccagtgtccagtgtgtttatgaggaggcacattgaccatt3240gtcccttatgtctgcattttcatttactgtgctgtgtatatagtgtatataagcggacat3300aggagtcctaatttacgtctagtcgatgttaaaaaggttgccagtatatgacaaaagtag3360aattagtaaactactacattgagtacactttgtgttaaaattcatagggaagacttctta3420aaaacaagtgaaattgttaaaaccccccctaagcattacagatggcttatagctgtccac3480ggggttggtagaggtgggaaagggaagggttctaggccagaatgttcctatttagaagac3540actcaaattacagtctgtgttatgtatgtataccatttattcaatgctactgtgtatata3600atggaaaacttaagtccagtttgaaacatctagtctttctaggtgtttaaaagtgtacaa3660cggcctgtcgcagtggcgcatgcctgtaatcccagcactttgggaggccgaggcaggcgg3720atcacgaggtcaagagatcaggaccatcttggccaacatggtgaaaccccatctttacta3780aaaatacaaaaattagctggtcgtggtggtgcccacctgtagccccagttactcgagagg3840ctgaggcaggagaatcgcttgaacttgggaggcggaagttgcagtgagccaagatcgcac3900cactgcactccagcctggcgacagagcgaggctccgtttcaaaaaaaaaagtgcacaatg3960taggttaacagtagagggcttaagtaacacccctctaagcatttgttttcagtacttcct4020aggagtggttgcatttgggaatggaattgttaaaacttgatgcttaggagcgaatgcaga4080ctattcattgggtgtttggggtgggggaagggggggtgggcagaggaggtatgcagggag4140aggggttctgtgctcctgagattagttcagatggtctaaccattgttctatatgtgcatt4200ttagttaatattgtgtattaaaggataagtcttaatgctcaaagtatgttaaaaatagat4260gtagtaaatcagtccctttgtgaatgtccttttgttagtttttaggaaggcctgtcctct4320gggagtgacctttattagtccaccccttggagctagacatcctgtacttagtcacgggga4380tggtggaagagggagaagaggaagggtgaagggaagggctctttgctagtatctccatat4440ctagacgatggttttagatgataaccacaggtctacaagagcgtttttagtaaagtgcct4500gtgttcattgtggacaaagttattattttgcaacatctaagctttacgaatggggtgaca4560acttatgataaaaactagagctagtgaattagcctatttgtaaatacctttgttataatt4620gataggatacatcttggacatggaattgttaagccacctctgagcagtgtatgtcaggac4680ttgttcattaggttggcagcagaggggcagaaggaattatacaggtagagatgtatgcag4740atgtgtccatatatgtccatatttacattttgatagccattgatgtatgcatctcttggc4800tgtactataagaacacattaattcaatggaaatacactttgctaatattttaatggtata4860gatctgctaatgaattctcttaaaaacatactgtattctgttgctgtgtgtttcatttta4920aattgagcattaagggaatgcagcatttaaatcagaactctgccaatgcttttatctaga4980ggcgtgttgccatttttgtcttatatgaaatttctgtcccaagaaaggcaggattacatc5040tttttttttttttttagcagtttgagttggtgtagtgtattcttggttatcagaatactc5100atatagctttgggattttgaattggtaaatattcatgatgtgtgaaaaatcatgatacat5160actgtacagtctcagtcccataaaattggatgttgtgcctacacacaggatctagaagaa5220tatgtcaaactataaactgcttgtgattgtgaatgactttgttctttgcttgtgtttttc5280aatttcctataatgcacatactaacttttaaaaaataaaggttattttaaaagcctgtat5340taaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa5378<210>2<211>20<212>RNA<213>人工序列<223>LINC00657mRNA左引物<400>2cagaggaggtatgcagggag20<210>3<211>20<212>RNA<213>人工序列<223>LINC00657mRNA右引物<400>3ggatgtctagctccaagggg20當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3