一種從動物肝臟中提取磷脂的方法
【專利摘要】一種從動物肝臟中提取磷脂的方法，屬于農(nóng)產(chǎn)品加工領(lǐng)域，首先使用胰蛋白酶對動物肝臟進行水解，然后采用超聲波強化萃取，最后用乙酸乙酯沉淀獲得磷脂。本發(fā)明運用了酶法聯(lián)合超聲輔助的方法，從動物肝臟中提取磷脂。酶法取磷脂的作用原理是通過酶的作用降解脂蛋白、脂多糖等脂類復(fù)合體，從而促使磷脂的釋放，本發(fā)明再結(jié)合超聲波的方法，達到提高卵磷脂提取率的目的。
【專利說明】一種從動物肝臟中提取磷脂的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于農(nóng)產(chǎn)品加工領(lǐng)域，特別涉及從動物肝臟中提取磷脂的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]磷脂是一種純天然營養(yǎng)保健食品，來源極為廣泛，目前，人們已發(fā)現(xiàn)磷脂幾乎存在于所有機體細胞中，主要存在于動植物的細胞中，是生物細胞膜的主要成分。磷脂廣泛存在于自然界中所有動植物機體中，人及動物體的腦、神經(jīng)系統(tǒng)、肝臟、心臟、肺臟、腎臟、血液等物中，植物機體中大豆油、菜籽油、玉米油中含量較多，動物磷脂主要來源于蛋黃、牛奶、動物體心、肝、腦、腎、骨髓和卵等部位。植物磷脂主要存在于種子油料中，并與蛋白質(zhì)、脂肪酸、糖類、維生素、醇等物質(zhì)以結(jié)合狀態(tài)存在，是一類重要的油脂伴隨物。其中大豆和蛋黃中含量較多，常作為天然卵磷脂提取原料。
[0003]現(xiàn)在市場上大多數(shù)卵磷脂產(chǎn)品是大豆卵磷脂，還有一部分是蛋黃卵磷脂，因為蛋黃的價格比較高，所以生產(chǎn)蛋黃卵磷脂的成本比大豆磷脂高，具有一定的市場限制，為尋求更多、更廣泛、更廉價的卵磷脂原料，開拓市場需求，我們把動物肝臟作為磷脂提取的新原料，進行磷脂的提取。動物肝臟中的磷脂含量較高，但其中一部分磷脂通過脂質(zhì)的非極性部分與蛋白質(zhì)組分之間以疏水性相互作用而結(jié)合在一起，這部分磷脂很難提取。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提出一種提高提取率的從動物肝臟中提取磷脂的方法。
[0005]本發(fā)明技術(shù)方案是:首先使用胰蛋白酶對動物肝臟進行水解，然后采用超聲波強化萃取，最后用乙酸乙酯沉淀`獲得磷脂。
[0006]本發(fā)明運用了酶法聯(lián)合超聲輔助的方法，從動物肝臟中提取磷脂。酶法取磷脂的作用原理是通過酶的作用降解脂蛋白、脂多糖等脂類復(fù)合體，從而促使磷脂的釋放，本發(fā)明再結(jié)合超聲波的方法，達到提高卵磷脂提取率的目的。
[0007]具體的水解工藝是:于45.5±0.5°C溫度條件下，在胰蛋白酶存在下，將動物肝臟與乙酸乙酯混合進行水解反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，離心分層，取下層沉淀物。在該溫度條件下，胰蛋白酶活性最高，能充分水解脂蛋白，使更多的磷脂暴露出來，從而更容易提取。該工藝目的是，運用胰蛋白酶使與蛋白相結(jié)合的磷脂游離出來，有利于磷脂的提取。
[0008]所述動物肝臟與乙酸乙酯的混合體積比為1: 4。使用乙酸乙酯可以除去大部分中性酷，有利于憐脂純度的提聞。
[0009]所述胰蛋白酶為胰蛋白酶水溶液，可以使胰蛋白酶均勻的分布在提取體系中，有利于水解反應(yīng)的進行。
[0010]所述胰蛋白酶水溶液由質(zhì)量比為3: 500的胰蛋白酶和水混合組成。
[0011]具體的超聲波方法是:于35±0.5°C溫度條件下，將水解取得的下層沉淀物與乙醇混合后，在超聲波反應(yīng)器功率為210W、頻率為28Hz的條件下處理后，再離心分層，取上層液體蒸干物。該溫度、超聲條件下可以使乙醇易于滲透到細胞中去，加速磷脂的溶出，有利于磷脂的提取。
[0012]將所述上層液體蒸干物與乙酸乙酯混合后，于-10°C溫度環(huán)境下靜置至少5分鐘，然后取出離心，取固相，即磷脂。在低溫條件下可以使磷脂凝固沉淀，便于分離。
[0013]所述上層液體蒸干物與乙酸乙酯的混合體積比為1: 4。使用乙酸乙酯可以進一步去除中性酯，使磷脂純度得到提高。
【具體實施方式】
[0014]一、本發(fā)明工藝的實施例:
稱取5g鴨肝，切碎后于80mL離心管中，加入蛋白酶溶液(胰蛋白酶活性為2.00 X 105u/g，取0.015g蛋白酶加入2.5mL水中形成蛋白酶溶液)，20mL乙酸乙酯，攪拌均勻，在45.5°C下反應(yīng)133min，離心，棄上清液，取得下層沉淀物。
[0015]再向下層沉淀物中加入17mL95%乙醇，在超聲波反應(yīng)器中35°C反應(yīng)43min，離心取上層上清液。將上層上清液過濾，旋轉(zhuǎn)蒸干。
[0016]取一定質(zhì)量的蒸干產(chǎn)物，加入5倍體積量的乙酸乙酯，將其放入-10°C冰箱中，5分鐘后取出離心，取固相，即磷脂，將其密封好放入-18°C冰箱備用。
[0017]二、對比試驗:
1、普通工藝:稱取5g鴨肝，切碎后于80mL離心管中，加入20mL乙酸乙酯，攪拌均勻，在45.5°C下靜置133min，離心，棄上清液，取得下層沉淀物。向下層沉淀物中加入17mL95%乙醇，在35°C條件下靜置43min，離心取上層上清液。將上層上清液過濾，旋轉(zhuǎn)蒸干。取一定質(zhì)量的蒸干產(chǎn)物，加入5倍體積量的乙酸乙酯，將其放入-10°C冰箱中，5分鐘后取出離心，取固相，即磷脂，將其密封好放入_18°C冰箱備用。
`[0018]2、單獨的胰蛋白酶工藝:稱取5g鴨肝，切碎后于80mL離心管中，加入蛋白酶溶液(胰蛋白酶活性為2.0OX 105u/g，取0.015g蛋白酶加入2.5mL水中形成蛋白酶溶液)，20mL乙酸乙酯，攪拌均勻，在45.5°C下反應(yīng)133min，離心，棄上清液，取得下層沉淀物。向下層沉淀物中加入17mL95%乙醇，在35°C條件下靜置43min，離心取上層上清液。將上層上清液過濾，旋轉(zhuǎn)蒸干。取一定質(zhì)量的蒸干產(chǎn)物，加入5倍體積量的乙酸乙酯，將其放入-10°C冰箱中，5分鐘后取出離心，取固相，即磷脂，將其密封好放入-18°C冰箱備用。
[0019]3、單獨的超聲工藝:稱取5g鴨肝,切碎后于80mL離心管中，加入2OmL乙酸乙酯，攪拌均勻，在45.5°C下靜置133min，離心，棄上清液，取得下層沉淀物。向下層沉淀物中加入17mL95%乙醇，在超聲波反應(yīng)器中35°C反應(yīng)43min，離心取上層上清液。將上層上清液過濾，旋轉(zhuǎn)蒸干。取一定質(zhì)量的蒸干產(chǎn)物，加入5倍體積量的乙酸乙酯，將其放入-10°C冰箱中，5分鐘后取出離心，取固相，即磷脂，將其密封好放入-18°C冰箱備用。
[0020]三、結(jié)論:
將本發(fā)明與普通工藝、單獨的超聲波工藝提取磷脂產(chǎn)量與純度對比表如下:
I普通工藝I單獨的胰蛋白酶工藝I單獨的超聲波工藝I本發(fā)明工藝
磷脂產(chǎn)量(％) 2.5 2.9_^8_3^_
_脂純度(％) 丨81.7 丨81.I丨81.2!81.7 一
由上表可見，使用本發(fā)明后動物肝臟中磷脂的提取率大大提高，且純度沒有降低。
【權(quán)利要求】
1.一種從動物肝臟中提取磷脂的方法，其特征在于:首先使用胰蛋白酶對動物肝臟進行水解，然后采用超聲波強化萃取，最后用乙酸乙酯沉淀獲得磷脂。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于:于45.5±0.5°C溫度條件下，在胰蛋白酶存在下，將動物肝臟與乙酸乙酯混合進行水解反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，離心分層，取下層沉淀物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述方法，其特征在于:所述動物肝臟與乙酸乙酯的混合體積比為1: 4。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述方法，其特征在于:所述胰蛋白酶為胰蛋白酶水溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述方法，其特征在于:所述胰蛋白酶水溶液由質(zhì)量比為3: 500的胰蛋白酶和水混合組成。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述方法，其特征在于:于35±0.5 °C溫度條件下，將水解取得的下層沉淀物與乙醇混合后，在超聲波反應(yīng)器功率為210W、頻率為28Hz的條件下處理后，再離心分層，取上層液體蒸干物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述方法，其特征在于:將所述上層液體蒸干物與乙酸乙酯混合后，于-10°c溫度環(huán)境下靜置至少5分鐘，然后取出離心，取固相，即磷脂。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述方法，其特征在于:所述上層液體蒸干物與乙酸乙酯的混合體積比為1: 4。
【文檔編號】C07F9/10GK103709193SQ201310738580
【公開日】2014年4月9日 申請日期:2013年12月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月30日
【發(fā)明者】王道營, 張牧焓, 卞歡, 耿志明, 劉芳, 諸永志, 徐為民 申請人:江蘇省農(nóng)業(yè)科學院