豬融合干擾素的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種豬融合干擾素,該豬融合干擾素具有如下所示的氨基酸序列:(豬干擾素多肽)-(連接子)n-(豬免疫球蛋白Fc片段);或(豬免疫球蛋白Fc片段)-(連接子)n-(豬干擾素多肽);其中n為0或1至10的整數(shù),且該豬融合干擾素可與抗豬干擾素的抗體專一性結(jié)合,并且與抗豬免疫球蛋白Fc段的抗體專一性結(jié)合。本發(fā)明并提供一種含有上述豬融合干擾素及/或豬干擾素的豬只抗病毒醫(yī)藥組合物、一種上述豬融合干擾素在制備動物抗病毒藥物中的用途,以及一種豬干擾素在制備動物抗病毒藥物中的用途。
【專利說明】豬融合干擾素
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種豬融合干擾素的制備,以及這種豬融合干擾素在抗病毒上的應(yīng) 用。
【背景技術(shù)】
[0002] 長期以來,動物感染毒性疾病往往無特效藥可以用來治療,通常都是以支持性療 法來耐過病毒侵襲,靠自身免疫力來抵御病毒。隨著生技產(chǎn)業(yè)的發(fā)展,人類已經(jīng)出現(xiàn)多種抗 病毒藥物,可以用來治療病毒性疾病,而這些抗病毒藥物主要分為三類:生化藥物、核苷酸 類似物、干擾素。這三類抗病毒藥物中,目前以干擾素被認為是最具有潛力的選擇用藥,因 為干擾素具有多重生物活性,不但有抗病毒活性,也具有免疫調(diào)節(jié)、促進細胞分化和抗腫瘤 功能;其中,干擾素的抗病毒作用,主要是由第一型干擾素(IFNCI/3 )所負責(zé)。
[0003] 目前市面上的干擾素制劑,多為針對人類所開發(fā)設(shè)計,例如:用來治療人類B型與 C型肝炎等病毒性疾病以及卡波西氏瘤(Kaposi' S sarcoma, KS)、黑色素腫瘤(malignant melanoma)等腫瘤疾病上的干擾素。
[0004] 至于經(jīng)濟動物方面,對于病毒性的疾病,并沒有像人類一樣具有商品化的抗病毒 藥物。若無有效的疫苗來預(yù)防某一動物病毒,當(dāng)畜群受該病毒感染時,只能使用支持性療法 處理,但效果往往不彰,而造成畜牧業(yè)重大損失;因此,動物干擾素的開發(fā),對動物保健產(chǎn)業(yè) 而言,可說是刻不容緩且極為重要的事。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0005] 本發(fā)明提供一種豬融合干擾素,該豬融合干擾素具有如下所示的氨基酸序列:
[0006] (豬干擾素多肽)_(連接子)n_(豬免疫球蛋白Fc片段);或 [0007](豬免疫球蛋白Fc片段)-(連接子) n_ (豬干擾素多肽);
[0008] 其中n為0或1至10的整數(shù);且
[0009] 該豬融合干擾素可與抗豬干擾素的抗體專一性結(jié)合,并且與抗豬免疫球蛋白Fc 段的抗體專一性結(jié)合。
[0010] 該豬干擾素多肽與如SEQ ID N〇S:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16& 17所示之氨基酸序列其中至少一者具有至少80%序列同源性,較佳者,具有85%序列同源 性,更佳者,具有90%序列同源性,甚至是91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%序列同 源性。于一實施例中,該豬干擾素多肽選自于由如SEQ ID Nos:l、2、3、4、5、6、7、8、9、10、ll、 12、13、14、15、16及17所示之氨基酸序列所組成之群組中至少一者。
[0011] 該豬免疫球蛋白Fc段與如SEQ ID Nos: 18、19、20、21及22所示之氨基酸序列其 中至少一者具有至少80%序列同源性,較佳者,具有85%序列同源性,更佳者,具有90%序列 同源性,甚至是91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%序列同源性。于一實施例中,該豬 免疫球蛋白Fc段選自于由如SEQ ID Nos: 18、19、20、21及22所示之氨基酸序列所組成之 群組中至少一者。
[0012] 該連接子至少含有一個以上的甘氨酸(Glycine,Gly),該連接子包含但不限于: Gly-Gly、Gly-Ser、如 SEQ ID Nos:23、24、25、26、27、28、29、30、31、32 所示的氨基酸序列。 [0013] 本發(fā)明所提供的豬融合干擾素是藉由基因重組技術(shù)而得。先將編碼豬融合干擾素 蛋白的DNA序列選殖到表現(xiàn)載體中,形成含有編碼豬融合干擾素蛋白的DNA序列的質(zhì)體,再 將該質(zhì)體選殖到表現(xiàn)系統(tǒng)中,經(jīng)過誘導(dǎo)蛋白質(zhì)表現(xiàn)后得到豬融合干擾素。
[0014] 該表現(xiàn)載體可為原核生物表現(xiàn)載體或真核生物表現(xiàn)載體。該原核生物表現(xiàn)載體包 含但不限于PET系列表現(xiàn)載體以及pGEX系列表現(xiàn)載體。該真核生物表現(xiàn)載體包含但不限于 pSecTag系列表現(xiàn)載體。表現(xiàn)載體包含但不限于:pcDNA系列、pVAX系列、pAd系列、pLenti 系列。
[0015] 該表現(xiàn)系統(tǒng)可為原核生物表現(xiàn)系統(tǒng)(如:細菌)或真核生物表現(xiàn)系統(tǒng)(如:酵 母菌、昆蟲細胞、植物細胞和哺乳動物細胞等)。細菌的實例包括,但不限于,大腸桿菌 (Escherichia coli)。哺乳動物細胞的實例包括,但不限于,3T3細胞、中國倉鼠卵巢細 胞(Chinese hamster ovary cells,CH0 cells)、幼鼠腎細胞(baby hamster kidney cells, BHK cells)、人類子宮頸癌細胞(HeLa cells),以及人類肝癌細胞〇fepG2cells)等。 [0016] 本發(fā)明亦提供一種豬只抗病毒醫(yī)藥組合物,包含:一豬干擾素與一上述的豬融合 干擾素至少其中之一,以及一醫(yī)藥上可接受的載劑。其中該豬干擾素具有如SEQ ID Nos:l、 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16及17所示之一的氨基酸序列,且該豬干擾素可 與抗豬干擾素的抗體專一性結(jié)合。
[0017] 本發(fā)明并提供一種豬融合干擾素在制備抗病毒藥物中的用途,該豬融合干擾素 可有效抑制DNA病毒與RNA病毒在宿主細胞內(nèi)的增殖,該病毒包含但不限于豬偽狂犬病 病毒(pseudorabies virus, PRV)、豬繁殖與呼吸道綜合癥病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)、豬小病毒(parvovirus)、豬傳染性胃腸炎 病毒(Transmissible gastroenteritis coronavirus, TGEV)、日本腦炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)、豬輪狀病毒(Rotavirus)、豬環(huán)狀病毒第二型(Porcine circovirus type2,PCV2)、豬口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus, FMDV)、豬癌 病毒(hog cholera virus, HCV)、非洲豬癌病毒(African swine fever virus)、豬痘病毒 (swinepox virus)、豬細胞巨大性病毒(porcine cytomegalovirus)、豬流行性下痢病毒 (porcine epidemic diarrhea virus)、豬水痛病病毒(swine vesicular disease virus)、 豬鐵士古病毒(porcine teschovirus)、豬星狀病毒(procine astrovirus)。
[0018] 本發(fā)明又提供一種豬干擾素在制備抗病毒藥物中的用途,該豬干擾素可有效 抑制DNA病毒與RNA病毒在宿主細胞內(nèi)的增殖,該病毒包含但不限于豬偽狂犬病病 毒(pseudorabies virus, PRV)、豬繁殖與呼吸道綜合癥病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)、豬小病毒(parvovirus)、豬傳染性胃腸炎 病毒(Transmissible gastroenteritis coronavirus, TGEV)、日本腦炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)、豬輪狀病毒(Rotavirus)、豬環(huán)狀病毒第二型(Porcine circovirus type2,PCV2)、豬口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus, FMDV)、豬癌 病毒(hog cholera virus, HCV)、非洲豬癌病毒(African swine fever virus)、豬痘病毒 (swinepox virus)、豬細胞巨大性病毒(porcine cytomegalovirus)、豬流行性下痢病毒 (porcine epidemic diarrhea virus)、豬水痛病病毒(swine vesicular disease virus)、 豬鐵士古病毒(porcine teschovirus)、豬星狀病毒(procine astrovirus)。
[0019] 本說明書中所述之所有技術(shù)性及科學(xué)術(shù)語,除非另外有所定義,皆為該所屬領(lǐng)域 具有通常技藝者可共同了解的意義。
[0020] 本發(fā)明系以下面的實施例予以示范闡明,但本發(fā)明不受下述實施例所限制。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0021] 圖1 :為以不同抗體偵測帶有編碼豬融合干擾素基因的CHO細胞所表現(xiàn)的蛋白中 是否含有豬融合干擾素(SEQ ID No:l-SEQ ID No:23-SEQ ID No:22)的結(jié)果;M:蛋白質(zhì)標(biāo) 記;第1道:帶有編碼豬融合干擾素基因的CHO細胞所表現(xiàn)的蛋白的SDS-PAGE分析圖;第2 道:以mouse anti porcine IFNa單株抗體分析;第3道:以mouse anti His單株抗體分 析;第4道:以goat anti porcine IgG抗體分析。
[0022] 圖2 (A) - (C):為以不同抗體偵測帶有編碼豬融合干擾素基因的CHO細胞所表現(xiàn)的 蛋白中是否含有豬融合干擾素的結(jié)果;M:蛋白質(zhì)標(biāo)記,第1道:豬干擾素(SEQ ID N〇:2); 第2道:豬免疫球蛋白Fe片段(SEQ ID No:22);第3道:豬融合干擾素(SEQ ID No:2-SEQ ID No:33-SEQ ID No:22);圖 2(A)為 SDS-PAGE 分析圖;圖 2(B)為以 mouse anti porcine IFNa單株抗體分析圖;圖2(C)為以goat anti porcine IgG抗體分析圖。
【具體實施方式】
[0023] 實施例一豬干擾素基因選殖
[0024] 取三品系雜交豬(LXY-D)的血液分離周邊血液單核細胞(Peripheral blood mononuclear cel 1,PBMC),并以異硫氰酸狐(guanidine thiocyanate,GTC)法萃取總 RNA (total RNA)。接著將萃取的總RNA進行反轉(zhuǎn)錄聚合酶連鎖反應(yīng)(reverse polymerase chain reaction, RT-PCR)以進行cDNA合成;再將合成后的cDNA進行聚合酶連鎖反應(yīng) (polymerase chain reaction,PCR)以選殖豬干擾素基因。以如下所示的豬干擾素特異性 引子進行PCR :
[0025] 正向引子(IFN-Fl):
[0026] 5,-CCCAAGCTTATGGCCCCAACCTCAGCC-3, (SEQ ID NO:34)
[0027] HindIII
[0028] 反向引子(IFN-Rl):
[0029] 5? -CCGCTCGAGCAGGTTTCTGGAGGAAGA-3' (SEQ ID NO:35)。
[0030] XhoI
[0031] PCR反應(yīng)條件為先以95° C5分鐘將DNA變性,接著以95° Cl分鐘、55° C30秒、 72° C30秒進行30個循環(huán),最后以72° C5分鐘完成PCR反應(yīng)。
[0032] 將PCR反應(yīng)產(chǎn)物以洋菜膠電泳(agarose electrophoresis)分析確認產(chǎn)物片段大 小,接著以DNA純化套組(臺灣波仕特公司)進行PCR產(chǎn)物純化。再分別將純化后的PCR 產(chǎn)物以及表現(xiàn)載體pET20b以限制酶HindIII以及XhoI進行酶切反應(yīng)后,再以DNA純化套 組(臺灣波仕特公司)純化酶切后的PCR產(chǎn)物及表現(xiàn)載體,接著進行接合反應(yīng),將PCR產(chǎn)物 選殖到pET20b載體中并轉(zhuǎn)殖(transformation)至表現(xiàn)宿主大腸桿菌(E.coli)中,選出帶 有豬干擾素基因的質(zhì)體的大腸桿菌,并進行定序確認選殖的PCR產(chǎn)物序列確實為豬干擾素 基因;結(jié)果共有17種不同的豬干擾素被選殖出來,其氨基酸序列分別如SEQ ID Nos: 1,2, 3 ,4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11,12, 13, 14, 15, 16 及 17 所示。
[0033] 實施例二豬免疫球蛋白IgG Fc片段基因選殖
[0034] 取新鮮豬脾臟,并以GTC法萃取總RNA。接著以RT-PCR進行cDNA合成,再將合成 后的cDNA進行PCR反應(yīng)以選殖豬免疫球蛋白IgG Fc片段基因。以如下所示的豬免疫球蛋 白IgG Fc片段特異性引子進行PCR :
[0035] 正向引子(IgG-Fl):
[0036] 5' -CGGGATCCGGGAACAAAGACC-3' (SEQ ID NO:36)
[0037] BamHI
[0038] 反向引子(IgG-Rl):
[0039] 5' -CCCAAGCTTTTTACCCGGAGTC-3' (SEQ ID NO:37)。
[0040] HindIII
[0041] PCR反應(yīng)條件為先以95° C5分鐘將DNA變性,接著以95° Cl分鐘、55° C30秒、 72° C30秒進行30個循環(huán),最后以72° C5分鐘完成PCR反應(yīng)。
[0042] 將PCR反應(yīng)產(chǎn)物以洋菜膠電泳分析確認產(chǎn)物片段大小,接著以DNA純化套組(臺 灣波仕特公司)進行PCR產(chǎn)物純化。再分別將純化后的PCR產(chǎn)物以及表現(xiàn)載體pET20b以 限制酶BamHI以及HindIII進行酶切反應(yīng)后,再以DNA純化套組(臺灣波仕特公司)純化 酶切后的PCR產(chǎn)物及表現(xiàn)載體,接著進行接合反應(yīng),將PCR產(chǎn)物選殖到pET20b載體中并 轉(zhuǎn)殖至表現(xiàn)宿主大腸桿菌(E. coli)中,選出帶有豬免疫球蛋白IgG Fc片段基因的質(zhì)體的 大腸桿菌,并進行定序確認選殖的PCR產(chǎn)物序列確實為豬免疫球蛋白IgG Fc片段基因; 結(jié)果共有5種不同的豬免疫球蛋白IgG Fc片段被選殖出來,其氨基酸序列分別如SEQ ID Nos: 18, 19, 20, 21 及 22 所示。
[0043] 實施例三豬融合干擾素基因的構(gòu)筑
[0044] 以PCR反應(yīng)以及基因選殖技術(shù)連接由實施例一及實施例二選殖到的豬干擾素基 因及豬免疫球蛋白IgG Fc片段基因,以形成豬融合干擾素蛋白的DNA序列,該豬融合干擾 素蛋白具有以下結(jié)構(gòu):
[0045] (豬干擾素多肽)_(連接子)n_(豬免疫球蛋白Fc片段);或
[0046] (豬免疫球蛋白Fc片段)_ (連接子)n_ (豬干擾素多肽)。
[0047] 其中n為0或1至10的整數(shù)。
[0048] 該豬干擾素多肽具有如 SEQ ID Nos:l、2、3、4、5、6、7、8、9、10、ll、12、13、14、15、16 及17所示之一的氨基酸序列。
[0049] 該連接子至少含有一個以上的甘氨酸,該連接子包含但不限于:Gly-Gly、 Gly-Ser、如 SEQ ID Nos:23、24、25、26、27、28、29、30、31、32 所示之一的氨基酸序列。
[0050] 該豬免疫球蛋白Fc段具有如SEQ ID Nos: 18、19、20、21及22所示之一的氨基酸 序列。
[0051] 將該DNA序列選殖到表現(xiàn)載體pcDNA3內(nèi),形成各種帶有編碼豬融合干擾素蛋白 的DNA序列的質(zhì)體,并將該些質(zhì)體轉(zhuǎn)殖到表現(xiàn)宿主大腸桿菌(E. coli)中。接著將上述帶有 編碼豬融合干擾素蛋白的DNA序列的質(zhì)體以脂質(zhì)體試劑(Lipofectamine,Invitrogen公 司,美國)轉(zhuǎn)染(transfection)至中國倉鼠卵巢細胞株(CH0 cells),依照脂質(zhì)體試劑的 使用方式進行轉(zhuǎn)染,并將轉(zhuǎn)染后的CHO細胞以含有10%胎牛血清(FBS)的F12培養(yǎng)基、置于 37° C、5%C02培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)48小時。
[0052] 接著,以Zeocin抗生素篩選帶有豬融合干擾素基因的CHO細胞。將經(jīng)過轉(zhuǎn)染的CHO 細胞株繼代培養(yǎng)于24孔細胞培養(yǎng)盤中,以含有10%FBS、lOOUnits/ml青霉素(Penicillin)、 100Units/ml 鏈霉素(Streptomycin)和不同濃度(100 ?1000 u g/ml)的 Zeocin 抗生素 的F12培養(yǎng)基培養(yǎng)以進行篩選。接著將細胞以磷酸鹽緩沖液(PBS)清洗兩次后加入0. 125% 胰蛋白酶(Trypsin)進行消化,待細胞圓化后,搖晃角瓶使細胞脫落,以培養(yǎng)基將細胞沖散 懸浮,細胞培養(yǎng)于37° C、5%C02培養(yǎng)箱,繼代多次后,將細胞培養(yǎng)基替換成含有10%FBS的 F12培養(yǎng)基,待細胞恢復(fù)原來生長速度后,以西方墨點法確認細胞是否帶有豬融合干擾素基 因并且表現(xiàn)豬融合干擾素。
[0053] 西方墨點法方法如下,取上述細胞上層培養(yǎng)液以十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺膠 電泳分析(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE) 后,將膠體上的蛋白轉(zhuǎn)印至PVDF膜上,并將轉(zhuǎn)印后的PVDF膜置于blocking buffer (5%Skim milk,in TBST)中,于4° C作用16?24小時,以去除非特異性反應(yīng),再以TBST(10mM Tris-HCl pH8.0,150mM NaCl, 0.3%Tween20)清洗三次,每次五分鐘,隨后加入 mouse anti IFN a單株抗體(SANTA CRUZ),該抗體事先以含有0. 5%skin milk的TBST稀釋500倍,于室 溫下輕輕搖晃作用1小時后,以TBST清洗六次,每次5分鐘,再加入已標(biāo)記堿性磷酸酶(AP) 的goat anti mouse抗體,該抗體事先以含有0.5%skin milk的TBST稀釋2000倍,于室溫下 輕輕搖晃作用1小時后,以TBST清洗6次,每次5分鐘,再加AP受質(zhì)NBT/BCIP (Bio-Rad)呈 色約5分鐘后,倒掉顯色劑以清水沖洗終止呈色反應(yīng)。另外也使用已標(biāo)記堿性磷酸酶(AP) 的goat anti-Porcine IgG之抗體(KPL)以及已標(biāo)記堿性磷酸酶(AP)的mouse anti6XHis 單株抗體(invitrogen)偵測豬融合干擾素。西方墨點法分析結(jié)果分別如圖1及圖2(A)-(C) 所示。
[0054] 圖1中的豬融合干擾素具有以下結(jié)構(gòu):
[0055] (豬干擾素多肽)_ (連接子)廠(豬免疫球蛋白Fc片段);
[0056] 其中該豬干擾素多肽具有如SEQ ID N〇:l所示的氨基酸序列,該連接子具有如SEQ ID No:23所示的氨基酸序列,且該豬免疫球蛋白Fc段具有如SEQ ID No:22所示的氨基酸 序列。如圖1所示,帶有豬融合干擾素(SEQ ID No:l-SEQ ID No:23-SEQ ID No:22)基因的 CHO細胞分泌物可分別被mouse anti porcine IFNa 單株抗體、goat anti-Porcine IgG之 抗體(KPL)以及mouse anti6XHis單株抗體辨認,顯示該細胞分泌物含有豬融合干擾素。
[0057] 圖2 (A)-(C)中的豬融合干擾素具有以下結(jié)構(gòu):
[0058] (豬干擾素多肽)_ (連接子)r (豬免疫球蛋白Fc片段);
[0059] 其中該豬干擾素多肽具有如SEQ ID N〇:2所示的氨基酸序列,該連接子具有如SEQ ID N〇:33所示的氨基酸序列,且該豬免疫球蛋白Fc段具有如SEQ ID N〇:22所示的氨基 酸序列。如圖2(B)及(C)所示,帶有豬融合干擾素(SEQ ID No:2-SEQ ID No:33-SEQ ID No:22)基因的CHO細胞分泌物可分別被mouse anti porcine IFNa單株抗體以及goat anti-Porcine IgG之抗體(KPL)辨認,顯示該細胞分泌物含有豬融合干擾素。
[0060] 實施例四豬融合干擾素的制備
[0061] 將實施例三制得帶有豬融合干擾素基因的CHO細胞以2X IO6顆細胞數(shù)接種 培養(yǎng)于25平方公分細胞培養(yǎng)瓶(25T-f lask)中,并以含有10%FBS以及l(fā)OOUnits/ml Penicillin和IOOUnits/ml Streptomycin的F12培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時后,去除原培養(yǎng) 基,以 PBS 清洗一次后,加入含有 1%FBS 以及 100Units/ml Penicillin 和 100Units/ml Str印tomycin的F12培養(yǎng)基,每隔72小時更換新的培養(yǎng)基(含有1%FBS以及100Units/ml Penicillin和100Units/ml Streptomycin),并且收集被更換的細胞生長液,以1,OOOrpm 離心10分鐘,將細胞以及細胞碎片去除,取其上清液,即獲得豬融合干擾素。
[0062] 實施例五豬融合干擾素抗PRRS病毒活性的分析
[0063] 分別將實施例四獲得的豬融合干擾素以及未與豬免疫球蛋白IgG-Fc片段融合的 豬干擾素,以含有 1%FBS 以及 100Units/ml Penicillin 和 100Units/ml Streptomycin 的 MEM培養(yǎng)基進行10倍、20倍、40倍、80倍、160倍、320倍、640倍、1,280倍、2, 560倍序列稀 釋。并取MARC-145細胞接種至96孔細胞培養(yǎng)盤(I. 5X IO4顆/孔),培養(yǎng)于37° C、5%C02 培養(yǎng)箱中,培養(yǎng)16?24小時待細胞貼附后,移除培養(yǎng)基,加入上述稀釋后的豬融合干擾素 或豬干擾素,每個樣品100 Ul/Vell,每個稀釋倍數(shù)的樣品分別接種于4個孔中,于37° C、 5%C02恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細胞24小時后,移除上清液,并于每孔加入100 ill含有IOOTCID5q 的PRRS病毒;另外,亦有其他不同處理的組別:未攻毒未添加干擾素、有攻毒未添加干擾 素、添加干擾素未攻毒處理等其他三組;于37° C、5%C02培養(yǎng)箱中,經(jīng)4-5天后,以MTT法判 讀活性,進行干擾素抗病毒活性的測定。
[0064] 干擾素抗病毒活性的測定首先將細胞上清液移除,以PBS清洗兩次后,加入 100iil80%丙酮(-20° C),并于4° C下固定30分鐘,接著移除丙酮以PBS洗三次后,加入 1%氯化甲基玫瑰苯胺(methylrosaniline chloride)染色20分鐘,再以蒸饋水洗5次,去 除未染上細胞的氯化甲基玫瑰苯胺,最后將蒸餾水吸干并加入100%乙醇將氯化甲基玫瑰 苯胺的顏色溶出來,作用10分鐘后,再以ELISA reader在吸光值波長(0.D)550nm下讀取 吸光值,并以下列公式計算干擾素抗病毒活性。
【權(quán)利要求】
1. 一種豬融合干擾素,包含下列氨基酸序列: (豬干擾素多肽)-(連接子)n_ (豬免疫球蛋白Fc片段);或 (豬免疫球蛋白Fc片段)-(連接子)n-(豬干擾素多肽); 其中η為0或1至10的整數(shù); 其中該豬干擾素多肽具有如 SEQ ID Nos:l、2、3、4、5、6、7、8、9、10、ll、12、13、14、15、16 及17所示之一的氨基酸序列; 其中該連接子具有如 Gly-Gly、Gly-Ser、如 SEQ ID Nos:23、24、25、26、27、28、29、30、 31、32、33所示之一的氨基酸序列; 其中該豬免疫球蛋白Fc段具有如SEQ ID Nos: 18、19、20、21及22所示之一的氨基酸 序列;且 該豬融合干擾素可與抗豬干擾素的抗體專一性結(jié)合,并且與抗豬免疫球蛋白Fc段的 抗體專一'I"生結(jié)合。
2. -種豬只抗病毒醫(yī)藥組合物,包含: 一如權(quán)利要求1所述的豬融合干擾素;以及 一醫(yī)藥上可接受的載劑。
3. 如權(quán)利要求2所述的豬只抗病毒醫(yī)藥組合物,其特征在于,該豬干擾素具有如SEQ ID Nos:l、2、3、4、5、6、7、8、9、10、ll、12、13、14、15、16 及 17 所示之一的氨基酸序列,且該豬 干擾素可與抗豬干擾素的抗體專一性結(jié)合。
4. 一種如權(quán)利要求1所述的豬融合干擾素在制備動物抗病毒藥物中的用途。
5. 如權(quán)利要求4所述的用途,其特征在于,該病毒為豬偽狂犬病病毒(pseudorabies virus, PRV)、豬繁殖與呼吸道綜合癥病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)、豬小病毒(parvovirus)、豬傳染性胃腸炎病毒(Transmissible gastroenteritis coronavirus, TGEV)> 日本腦炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)、豬輪狀病毒(Rotavirus)、豬環(huán)狀病毒第二型(Porcine circovirus type2,PCV2)、豬口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,F(xiàn)MDV)、豬癌病毒(hog cholera virus, HCV)、非洲豬癌病毒(African swine fever virus)、豬痘病毒(swinepox virus)、豬細胞巨大性病毒(porcine cytomegalovirus)、豬流行性下痢病毒(porcine epidemic diarrhea virus)、豬水皰病病毒(swine vesicular disease virus)、豬鐵士古 病毒(porcine teschovirus)、豬星狀病毒(procine astrovirus) 〇
6. -種如權(quán)利要求1所述的豬融合干擾素在制備動物抗病毒藥物中的用途。
7. 如權(quán)利要求6所述的用途,其特征在于,該病毒為豬偽狂犬病病毒(pseudorabies virus, PRV)、豬繁殖與呼吸道綜合癥病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)、豬小病毒(parvovirus)、豬傳染性胃腸炎病毒(Transmissible gastroenteritis coronavirus, TGEV)> 日本腦炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)、豬輪狀病毒(Rotavirus)、豬環(huán)狀病毒第二型(Porcine circovirus type2,PCV2)、豬口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus, FMDV)、豬癌病毒(hog cholera virus, HCV)、非洲豬癌病毒(African swine fever virus)、豬痘病毒(swinepox virus)、豬細胞巨大性病毒(porcine cytomegalovirus)、豬流行性下痢病毒(porcine epidemic diarrhea virus)、豬水皰病病毒(swine vesicular disease virus)、豬鐵士古 病毒(porcine teschovirus)、豬星狀病毒(procine astrovirus) 〇
【文檔編號】C07K19/00GK104292337SQ201310300830
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2013年7月17日 優(yōu)先權(quán)日:2013年7月17日
【發(fā)明者】郭村勇, 吳忠晉, 陳漢婷 申請人:施懷哲維克生物科技股份有限公司