干擾素的霧化吸入劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于生物技術(shù)藥物的制劑領(lǐng)域，涉及干擾素的霧化吸入劑。所述的霧化吸入劑單次給藥劑量中含有1?100μg的干擾素與適宜量的霧化吸入劑可藥用輔料，所述的干擾素由重量比1:19?19:1的干擾素α與干擾素λ組成。用本發(fā)明的干擾素的霧化吸入劑治療病毒性肺炎，可較單獨(dú)使用干擾素α的霧化吸入劑或干擾素λ的霧化吸入劑明顯提高療效。
【專利說(shuō)明】
干擾素的霧化吸入劑
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明一般的設(shè)及干擾素的呼吸道及肺部給藥制劑，特別的設(shè)及干擾素的霧化吸 入劑。
【背景技術(shù)】
[0002] 病毒性肺炎是一種嬰幼兒時(shí)期的常見(jiàn)病，嚴(yán)重危害嬰幼兒的生命健康。據(jù)不完全 統(tǒng)計(jì)，超過(guò)90%的嬰幼兒在2歲W前感染過(guò)病毒性肺炎，其中80% W上病例在1歲W內(nèi)，發(fā)病 高峰年齡為2-6個(gè)月，1-6個(gè)月可見(jiàn)較重病例。嬰幼兒因感染病毒性肺炎造成的死亡在發(fā)達(dá) 國(guó)家為0.5%-2.0%，在發(fā)展中國(guó)家可達(dá)7%，在我國(guó)更是嬰幼兒死亡的首要原因。此外，病 毒性肺炎的傳染性和再感染性很強(qiáng)，有報(bào)道表明家庭成員間可發(fā)生相繼感染，已感染嬰幼 兒在10年內(nèi)再感染發(fā)生率高達(dá)65%。
[0003] 引起病毒性肺炎的病毒主要是腺病毒（adenovirus，ADV)和呼吸道合胞病毒 (respiratoiy syn巧tial vi;rus，RSV)，其次是流感病毒（influenza virus,IFV)和副流感 病毒（parainfluenza virus，PIV)，再次是巨細(xì)胞病毒（c}ftomegalovi;rus，CMV)、單純瘤疹 病毒化e巧es simplex vi;rus，HSV)、腸道病毒（enterovirus,EV)、人類偏肺病毒化MPV)等。 由于運(yùn)些病毒極易發(fā)生變異，加之在病毒感染后容易誘發(fā)進(jìn)一步的細(xì)菌感染，從而給患兒 造成混合感染和并發(fā)癥，因此嬰幼兒病毒性肺炎很難實(shí)現(xiàn)全面的特異防治，臨床上缺乏有 效的藥物治療。
[0004] 化學(xué)藥物是目前治療病毒性肺炎的最主要藥物，原因是臨床使用時(shí)間最長(zhǎng)，可迅 速清除感染病毒;但化學(xué)藥物治療病毒性肺炎的缺點(diǎn)是停藥后病情容易反彈，不能調(diào)節(jié)和 提高患兒機(jī)體免疫力對(duì)抗病毒，且在長(zhǎng)期使用過(guò)程中容易產(chǎn)生耐藥性。目前臨床上治療病 毒性肺炎的化學(xué)藥物包括但不限于利己韋林、更昔洛韋、奧司他韋、阿糖腺巧、金剛燒胺等。 例如美國(guó)專利5,290,540公開(kāi)了利己韋林用于治療病毒性肺炎的方法。
[0005] 中藥對(duì)病毒性肺炎的治療在近年的研究使用日益廣泛，運(yùn)源于中藥藥性的溫和持 久，并兼具免疫調(diào)節(jié)作用，但中藥治療病毒性肺炎周期長(zhǎng)，且中藥在很大程度上并不適宜于 嬰幼兒使用，另外中藥的長(zhǎng)期安全性問(wèn)題也是一個(gè)不容忽視的問(wèn)題。目前有報(bào)道臨床研究 用于病毒性肺炎治療的中藥包括但不限于大青葉、板藍(lán)根、銀花、連翅、射干、黃琴、黃連、麻 黃、苦杏仁等。例如中國(guó)專利申請(qǐng)03131642.5公開(kāi)了一種治療小兒病毒性肺炎的清肺口服 液制劑，其由麻黃、生石膏、苦杏仁、亭巧子、桑白皮、前胡、僵蠶、丹參、虎杖、拳參等中草藥 組成。又如中國(guó)專利申請(qǐng)02138175.5公開(kāi)了一種治療小兒病毒性肺炎的藥物組合物，其由 麻黃、苦杏仁、石膏、甘草、前胡、僵蠶、丹參、虎杖、拳參、亭巧子、桑白皮十一味中藥組成。
[0006] 伴隨著生物技術(shù)藥物的迅猛發(fā)展，近年來(lái)越來(lái)越多的研究關(guān)注生物技術(shù)藥物對(duì)病 毒性肺炎的治療，其中使用的生物技術(shù)藥物包括但不限于干擾素、白細(xì)胞介素、人血丙種球 蛋白、胸腺膚、特異性抗病毒抗體等，尤其W干擾素使用的報(bào)道最多。例如中國(guó)專利申請(qǐng) 03147580.9公開(kāi)了一種治療病毒性肺炎的重組人干擾素 α噴霧劑，其由重組人干擾素 α原液 配W適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)劑、粘膜吸收促進(jìn)劑、抑菌劑等制成，pH值在5.0-8.0。
[0007] 干擾素（interferon, IFN)是一種最初由動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生的兼具抗病毒、抗增殖與免 疫調(diào)節(jié)作用的細(xì)胞因子蛋白質(zhì)類藥物，根據(jù)其產(chǎn)生部位、作用機(jī)理、藥效特點(diǎn)等的不同可W 分為Ι、ΙΙ、ΙΙΙΞ種大的類型。其中I型干擾素主要是指干擾素 α與干擾素 β，干擾素 α又有包 括干擾素的曰、干擾素 a2b、干擾素〇化在內(nèi)的超過(guò)20種的天然亞型；II型干擾素主要是指干 擾素丫； III型干擾素主要是指干擾素 λ，包括干擾素 λ1、干擾素 λ2、干擾素 λ3Ξ種天然亞型。
[0008] 生物技術(shù)藥物，尤其是干擾素用于病毒性肺炎的治療，作用持久，可調(diào)節(jié)和提高患 兒機(jī)體免疫力對(duì)抗病毒，不易產(chǎn)生耐藥性，安全性更高。但目前在干擾素治療病毒性肺炎的 報(bào)道中，所用的都是干擾素 α，未見(jiàn)有使用ΠΙ型干擾素，即干擾素 λ的報(bào)道。
[0009] 相較于1、11型干擾素，III型干擾素的發(fā)現(xiàn)與報(bào)道較晚。其中干擾素 λ1最早由津莫 吉尼蒂克斯公司公開(kāi)于其國(guó)際專利申請(qǐng)PCT/US2001/021087(國(guó)際公布日2002年1月10日， 進(jìn)入中國(guó)國(guó)家階段后的國(guó)家申請(qǐng)?zhí)枮?1813153.0)中，干擾素 λ2與干擾素 λ3隨后亦由該公 司公開(kāi)于其國(guó)際專利申請(qǐng)PCT/US2002/012887 (國(guó)際公布日2002年10月31日，進(jìn)入中國(guó)國(guó)家 階段后的國(guó)家申請(qǐng)?zhí)枮?2801970.9)中。而在該公司再后的國(guó)際專利申請(qǐng)PCT/US2004/ 025864(國(guó)際公布日2005年3月17日，進(jìn)入中國(guó)國(guó)家階段后的國(guó)家申請(qǐng)?zhí)枮?200480029170.7)中則對(duì)干擾素 λ及其多種變體做了系統(tǒng)的梳理，干擾素 λ1、λ2、λ3的氨基酸 序列分別被確定的報(bào)道在了其說(shuō)明書公開(kāi)的SEQ ID No.4、SEQ ID No.2和SEQ ID No.6中， 干擾素 λ1、λ2、λ3的制備方法則被報(bào)道在了其說(shuō)明書實(shí)施例1-9中（此外，干擾素 λ1、λ2、λ3的 制備方法也可參見(jiàn)國(guó)際專利申請(qǐng)口口71]52002/012887，即中國(guó)專利申請(qǐng)02801970.9的說(shuō)明 書實(shí)施例1-7)。
[0010] 干擾素 λ1在最初公開(kāi)時(shí)的代號(hào)為zcyto21，干擾素 λ2在最初公開(kāi)時(shí)的代號(hào)為 zcyto20,干擾素 λ3在最初公開(kāi)時(shí)的代號(hào)為zcyto22。在隨后的研究中由于發(fā)現(xiàn)它們的基因、 蛋白質(zhì)立級(jí)結(jié)構(gòu)與白介素10(化-10)非常接近，因此它們被歸于白介素10家族，分別被重新 命名為 IL-29、IL-28A 與 IL-28B。
[0011] 盡管zcパo21、zcパo20與干擾素 α的氨基酸序列一致性(也即同源性）只有17%，與 干擾素 β的氨基酸序列一致性只有14%，與干擾素 γ的氨基酸序列一致性只有4% ;zcyto22 與干擾素 α的氨基酸序列一致性只有16%，與干擾素 β的氨基酸序列一致性只有13%，與干 擾素丫的氨基酸序列一致性只有4%，但它們?cè)陔S后的研究中都發(fā)現(xiàn)和確認(rèn)與傳統(tǒng)的干擾 素有相似的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，有很多類干擾素性質(zhì)。因此從功能的角度出發(fā)，它們最終分別被 命名為干擾素 λ1、干擾素 λ2與干擾素 λ3。
[0012] 鑒于傳統(tǒng)的干擾素 α對(duì)病毒性肺炎的療效也有待進(jìn)一步提高，因此，有必要嘗試 III型干擾素，即干擾素 λ用于病毒性肺炎的治療，更有必要嘗試I型干擾素與III型干擾素 聯(lián)用，即干擾素 α與干擾素 λ聯(lián)用，用于病毒性肺炎的治療。
[0013] 而在治療病毒性肺炎的藥物遞送系統(tǒng)方面，霧化吸入劑是一種近年來(lái)在臨床上發(fā) 展起來(lái)的新的給藥劑型。所謂霧化吸入劑，是指將藥液經(jīng)過(guò)霧化變成藥?kù)F，經(jīng)吸入達(dá)呼吸系 統(tǒng)祀部位起治療作用的劑型。霧化吸入劑的給藥必須借助一定的霧化吸入裝置，包括壓縮 霧化器、超聲霧化器等。由于霧化吸入劑給藥后不經(jīng)過(guò)吸收可直接作用于呼吸系統(tǒng)病變部 位，從而相比其他劑型有明顯更高的生物利用度與藥效，因此霧化吸入劑已逐漸成為臨床 上治療小兒病毒性肺炎的首選劑型。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0014] 本發(fā)明的首要目的是提供一種干擾素(包括干擾素 α與干擾素 λ)的霧化吸入劑，W 用于嬰幼兒病毒性肺炎的治療，進(jìn)一步提高療效。
[0015] 在基礎(chǔ)的實(shí)施方案中，本發(fā)明的干擾素的霧化吸入劑單次給藥劑量(例如0.25ml、 0.5ml、1ml、2ml、3ml、4ml或5ml)中含有1-10化g的干擾素與適宜量的霧化吸入劑可藥用輔 料，所述的干擾素由重量比1:19-19:1的干擾素 α與干擾素 λ組成。
[0016] 所述的霧化吸入劑可藥用輔料包括但不局限于干擾素活性保護(hù)劑、滲透壓調(diào)節(jié) 劑、防腐劑、吸附抑制劑、pH穩(wěn)定調(diào)節(jié)劑中的一種或幾種。而且應(yīng)當(dāng)指出，一種或一類物質(zhì)可 能同時(shí)起到多種可藥用輔料功能的作用。例如人血清白蛋白可同時(shí)起到滲透壓調(diào)節(jié)劑、活 性保護(hù)劑、吸附抑制劑的作用。
[0017] 干擾素活性保護(hù)劑起到保護(hù)干擾素的霧化吸入劑在制備、運(yùn)輸、膽存與使用中干 擾素 α與干擾素 λ的活性不喪失或較少喪失的作用，除人血清白蛋白外還可W選擇氨基酸、 多元醇、環(huán)糊精、卵憐脂等物質(zhì)中的一種或多種的組合。
[0018] 滲透壓調(diào)節(jié)劑起到將干擾素的霧化吸入劑的滲透壓調(diào)節(jié)到與人體血液基本等滲 (240-360m0sm/L)的作用，除人血清白蛋白外還可W選擇氯化鋼、甘露醇、葡萄糖等物質(zhì)中 的一種或多種的組合。
[0019] 防腐劑起到在干擾素的霧化吸入劑的制備、運(yùn)輸、膽存與使用過(guò)程中抑制微生物 生長(zhǎng)，尤其是有害微生物生長(zhǎng)，并防止微生物及其代謝產(chǎn)物破壞藥物成分，特別是活性成分 干擾素 α與干擾素 λ的作用。運(yùn)樣的防腐劑可選擇苯扎氯錠、苯扎漠錠、苯甲醇、苯酪、甲酪 (又包括鄰甲酪、間甲酪、對(duì)甲酪）、尼泊金醋（即對(duì)徑基苯甲酸醋，包括對(duì)徑基苯甲酸甲醋、 乙醋、丙醋、下醋等)等物質(zhì)中的一種或多種的組合。
[0020] 吸附抑制劑起到抑制或降低裝盛干擾素的霧化吸入劑的容器對(duì)干擾素 α、干擾素入 及其他輔料的吸附的作用，除人血清白蛋白外還可W選擇表面活性劑，在表面活性劑中又 優(yōu)選非離子表面活性劑，并更優(yōu)選吐溫類非離子表面活性劑。
[0021] pH穩(wěn)定調(diào)節(jié)劑起到將干擾素的霧化吸入劑的抑穩(wěn)定在生理適宜抑巧.0-8.0)的作 用，并要求生理安全，可選擇的范圍包括但不局限于憐酸鹽緩沖溶液體系、構(gòu)祿酸鹽緩沖溶 液體系、抗壞血酸鹽緩沖溶液體系，優(yōu)選憐酸鹽緩沖溶液體系。運(yùn)樣的抑穩(wěn)定調(diào)節(jié)劑的總濃 度應(yīng)在0. l-500mmol/L之間，優(yōu)選在1-lOOmmol/L之間，并更優(yōu)選在5-20mmol/L之間。
[0022] 本發(fā)明的干擾素的霧化吸入劑在配制過(guò)程中應(yīng)首先按配制所需量溶解各可藥用 輔料，然后在與干擾素 α、干擾素 λ的原液混合均勻后用水調(diào)節(jié)溶液的體積至目標(biāo)配制體積。 各可藥用輔料的溶解可同時(shí)進(jìn)行，也可分別進(jìn)行，但難溶性可藥用輔料的配制應(yīng)單獨(dú)進(jìn)行， 并視情況加熱和/或加入一定的助溶劑。溶解過(guò)程中應(yīng)快速混合，注意避免抑、溫度等的急 劇變化，從而引起藥物活性成分干擾素 α與干擾素 λ的生物失活和/或化學(xué)降解。
[0023] 在一種優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的干擾素的霧化吸入劑中的干擾素 α是干擾素 α 2a、干擾素 a2b、干擾素 α化中的一種或W任意比例混合的幾種。
[0024] 在一種優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的干擾素的霧化吸入劑中的干擾素 α是干擾素 α Ibo
[0025] 在一種優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的干擾素的霧化吸入劑中的干擾素 λ是干擾素 λ 1、干擾素 λ2、干擾素 λ3中的一種或w任意比例混合的幾種。
[0026] 在一種優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的干擾素的霧化吸入劑中的干擾素 λ是干擾素 λ 1〇
[0027] 在一種優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的干擾素的霧化吸入劑中的干擾素 α是干擾素 α lb，干擾素 λ是干擾素 λ1。
[0028] 在一種優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的霧化吸入劑可藥用輔料包含干擾素活性保護(hù) 劑，選自人血清白蛋白、氨基酸、多元醇、環(huán)糊精、卵憐脂類物質(zhì)中的一種或幾種的組合。
[0029] 在一種優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的霧化吸入劑可藥用輔料包含滲透壓調(diào)節(jié)劑， 選自人血清白蛋白、NaCl、甘露醇、葡萄糖中的一種或幾種的組合。
[0030] 在一種優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的霧化吸入劑可藥用輔料包含防腐劑，選自苯 扎氯錠、苯扎漠錠、苯甲醇、苯酪、甲酪、尼泊金醋中的一種或幾種的組合。
[0031] 在一種優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的霧化吸入劑可藥用輔料包含吸附抑制劑，選 自人血清白蛋白和表面活性劑中的一種或幾種的組合。
[0032] 在一種優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的霧化吸入劑可藥用輔料包含能將霧化吸入劑 的抑穩(wěn)定在5.0-8.0范圍內(nèi)的緩沖溶液體系，選自憐酸鹽緩沖溶液體系、構(gòu)祿酸鹽緩沖溶液 體系、抗壞血酸鹽緩沖溶液體系中的一種或幾種的組合。
[0033] 在一種優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的干擾素的霧化吸入劑含有：1)單次給藥劑量 (例如0.25ml、0.5ml、1ml、2ml、3ml、4ml或5ml)中 l-100yg的干擾素；2) l-50mg/ml的人血清 白蛋白；3) l-8mg/ml的NaCl;4) 1-lOOmmol/L的憐酸氨二鋼-憐酸二氨鋼，pH7.0溶液，所述的 干擾素由重量比1:19-19:1的干擾素 α化與干擾素 λ組成。
[0034] 在一種優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的干擾素的霧化吸入劑含有：1)單次給藥劑量 (例如0.25ml、0.5ml、1ml、2ml、3ml、4ml或5ml)中 l-100yg的干擾素；2) l-50mg/ml的人血清 白蛋白；3) l-8mg/ml的NaCl;4) 1-lOOmmol/L的憐酸氨二鋼-憐酸二氨鋼，pH7.0溶液，所述的 干擾素由重量比1:19-19:1的干擾素 α與干擾素 λ1組成。
[0035] 在一種優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的干擾素的霧化吸入劑含有：1)單次給藥劑量 (例如0.25ml、0.5ml、1ml、2ml、3ml、4ml或5ml)中 l-100yg的干擾素；2) l-50mg/ml的人血清 白蛋白；3) l-8mg/ml的NaCl;4) 1-lOOmmol/L的憐酸氨二鋼-憐酸二氨鋼，pH7.0溶液，所述的 干擾素由重量比1:19-19:1的干擾素 α化與干擾素 λ1組成。
[0036] 本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供干擾素的霧化吸入劑在制備治療病毒性肺炎藥物中 的應(yīng)用。利用本發(fā)明主藥含量的干擾素的霧化吸入劑治療病毒性肺炎，可取得明顯更好的 治療效果。
[0037] 本發(fā)明中使用的術(shù)語(yǔ)"干擾素 α"或"α干擾素"包括人體或動(dòng)物體在外界病原性物 質(zhì)刺激下由白細(xì)胞產(chǎn)生的天然序列的抗病毒活性物質(zhì)(尤其包括干擾素曰化、干擾素 a2a、干 擾素 a2b)，也包括通過(guò)基因工程方法選擇適宜的表達(dá)載體表達(dá)的與上述天然序列完全相同 的重組分子，還包括天然序列的干擾素 α的突變體，尤其包括通過(guò)基因工程方法選擇適宜的 表達(dá)載體表達(dá)的集成了上述天然干擾素 α保守序列的人工設(shè)計(jì)的分子，即復(fù)合干擾素分子， 例如在中國(guó)專利申請(qǐng)CN02159950.5中于序列表3公開(kāi)序列并在說(shuō)明書實(shí)施例中公開(kāi)制備方 法的復(fù)合干擾素。
[0038] 本發(fā)明中使用的術(shù)語(yǔ)"干擾素 λ"或"λ干擾素"包括人體或動(dòng)物體在外界病原性物 質(zhì)刺激下產(chǎn)生的天然序列的抗病毒活性物質(zhì)(包括干擾素 λ1、干擾素 λ2、干擾素 λ3)，也包括 通過(guò)基因工程方法選擇適宜的表達(dá)載體表達(dá)的與上述天然序列完全相同的重組分子，還包 括干擾素 λ1、干擾素 λ2、干擾素 λ3的突變體，尤其是國(guó)際專利申請(qǐng)PCT/US2004/025864的說(shuō) 明書中明確提及乃至公開(kāi)氨基酸序列的干擾素如勺突變體。
[0039] 本發(fā)明中使用的術(shù)語(yǔ)"治療有效量"表示當(dāng)施用藥物活性成分用于治療或預(yù)防疾 病時(shí)，藥物活性成分的量足W實(shí)現(xiàn)對(duì)疾病的治療或預(yù)防。治療有效量將依藥物活性成分、疾 病和它的嚴(yán)重性和所治療病人的年齡、體重等而異。
[0040] 本發(fā)明中使用的術(shù)語(yǔ)"霧化吸入劑可藥用輔料"是指在霧化吸入劑處方設(shè)計(jì)時(shí)，為 解決霧化吸入劑的溶解性、有效性、穩(wěn)定性、安全性等問(wèn)題，加入到霧化吸入劑處方中的除 藥物活性成分W外自身對(duì)人體或動(dòng)物體安全的其他輔助成分。
【具體實(shí)施方式】
[0041] 通過(guò)如下的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的實(shí)施作進(jìn)一步說(shuō)明，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不局限 于如下的實(shí)施例。
[0042] 實(shí)施例1:干擾素霧化吸入劑的制備
[0043] 按如下表1的配方組成配制不同配方的干擾素的霧化吸入劑，其中"ΡΒ"為憐酸氨 二鋼-憐酸二氨鋼緩沖溶液(ρΗ7.0)。
[0044] 表1干擾素霧化吸入劑的配方組成
[0045]
[0046]
[0047]
[004引實(shí)施例2:干擾素霧化吸入劑治療病毒性肺炎的動(dòng)物試驗(yàn)
[0049] 1)RSV病毒培養(yǎng)
[0050] 將呼吸道合胞病毒標(biāo)準(zhǔn)株RSV-Long(引自北京兒科研究所)接種于化P-2細(xì)胞上， 待細(xì)胞病變達(dá)80%W上時(shí)收獲，將病毒液凍存于液氮中，用時(shí)于37°C融化，10(K)rpm離屯、10 分鐘，取上清液備用。
[0化1] 2)RSV小鼠感染模型的建立
[0052] 取172只6-7周齡的Balb/c小鼠，雌雄各半，均用乙酸麻醉后，分別經(jīng)鼻腔滴入 10中即/ml RSV病毒液0.1ml，每天滴病毒1次，共滴2次，第3天小鼠出現(xiàn)豎毛、煩躁不安、呼 吸急促、腹肌抽搖陽(yáng)性反應(yīng)，表明RSV感染小鼠模型建立成功。
[0化3] 3)分組及給藥
[0化4] 將上述172只小鼠隨機(jī)分為43組，每組4只，雌雄各半。組1至組42分別每日超聲霧 化吸入實(shí)施例1的配方1至配方42的霧化吸入劑各1ml (加入生理鹽水稀釋至4ml后霧化吸 入）；組43每日超聲霧化吸入生理鹽水4ml。所有各組每日均只超聲霧化吸入1次，共超聲霧 化吸入5次(5天）。
[0055] 4)病毒滴度測(cè)定
[0化6] 將組1至組42的168只小鼠在連續(xù)給藥結(jié)束后的第二天脫頸椎處死，組43的4只小 鼠在將組1至組42的小鼠給藥開(kāi)始的當(dāng)天脫頸椎處死。所有處死后的小鼠均迅速摘取右肺 組織勻漿后W1:10進(jìn)行稀釋，稀釋后的勻漿液-20°C保存。預(yù)先用96孔培養(yǎng)板培養(yǎng)化P-2單 層細(xì)胞。將?〇μ1稀釋后的勻漿液再經(jīng)10倍稀釋后加入培養(yǎng)板孔中，每孔加 ?〇μ1，每只動(dòng)物3 個(gè)重復(fù)孔，設(shè)陰性對(duì)照、正常對(duì)照。37°C，5%C02條件下，間歇振搖培養(yǎng)板，1小時(shí)后，用 RPMI1640液洗涂，覆W1 %甲基纖維素。置37°C，5 %C〇2培養(yǎng)6天。培養(yǎng)孔內(nèi)用0.2 %福爾馬林 固定，0.1%結(jié)晶紫染色，計(jì)數(shù)斑個(gè)數(shù)。病毒滴度定義為每克新鮮右肺組織斑形成單位(P即/ g)，各組的病毒滴度均表示為各組4只小鼠病毒滴度測(cè)定結(jié)果的平均值，具體結(jié)果如下表2 所示。
[0057] 表2病毒滴度測(cè)定結(jié)果
[0化引
[0化9]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 干擾素的霧化吸入劑，其特征是單次給藥劑量中含有I-IOOyg的干擾素與適宜量的 霧化吸入劑可藥用輔料，所述的干擾素由重量比1:19-19:1的干擾素 α與干擾素 λ組成。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的霧化吸入劑，其特征是所述的干擾素 α是干擾素 a2a、干擾素 α 2b、干擾素 a Ib中的一種或以任意比例混合的幾種。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的霧化吸入劑，其特征是所述的干擾素 α是干擾素 a Ib。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的霧化吸入劑，其特征是所述的干擾素 λ是干擾素 λ?、干擾素 λ2、 干擾素 λ3中的一種或以任意比例混合的幾種。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的霧化吸入劑，其特征是所述的干擾素 λ是干擾素 λ?。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的霧化吸入劑，其特征是所述的霧化吸入劑可藥用輔料包含干 擾素活性保護(hù)劑，選自人血清白蛋白、氨基酸、多元醇、環(huán)糊精、卵磷脂類物質(zhì)中的一種或幾 種的組合。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的霧化吸入劑，其特征是所述的霧化吸入劑可藥用輔料包含滲 透壓調(diào)節(jié)劑，選自人血清白蛋白、NaCl、甘露醇、葡萄糖中的一種或幾種的組合。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的霧化吸入劑，其特征是所述的霧化吸入劑可藥用輔料包含防 腐劑，選自苯扎氯銨、苯扎溴銨、苯甲醇、苯酚、甲酚、尼泊金酯中的一種或幾種的組合。9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的霧化吸入劑，其特征是所述的霧化吸入劑可藥用輔料包含能 將霧化吸入劑的pH穩(wěn)定在5.0-8.0范圍內(nèi)的緩沖溶液體系，選自磷酸鹽緩沖溶液體系、枸櫞 酸鹽緩沖溶液體系、抗壞血酸鹽緩沖溶液體系中的一種或幾種的組合。10. 根據(jù)權(quán)利要求1-9之一所述的霧化吸入劑在制備治療病毒性肺炎的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61P31/22GK105920586SQ201610256450
【公開(kāi)日】2016年9月7日
【申請(qǐng)日】2016年4月22日
【發(fā)明人】周敏毅, 程永慶
【申請(qǐng)人】北京三元基因藥業(yè)股份有限公司