專利名稱：一種高收率的左亞葉酸鈣的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物合成領(lǐng)域，涉及一種抗腫瘤藥物的制備方法，具體涉及一種高收率的左亞葉酸鈣的制備方法。
背景技術(shù)：
左亞葉酸鈣為左亞葉酸的鈣鹽，左亞葉酸為5-甲酰四氫葉酸(即亞葉酸)的同分異構(gòu)體。左亞葉酸不需要被二氫葉酸還原酶還原即可參加利用葉酸鹽作為一碳單位來(lái)源的反應(yīng)，且左亞葉酸可以主動(dòng)或被動(dòng)地通過(guò)細(xì)胞膜，左亞葉酸基本作用和葉酸相同，但效果優(yōu)于葉酸，因?yàn)槿~酸在肝及骨髓中先變?yōu)閬喨~酸才能起作用，而本品為亞葉酸的活性形式，本品也具有刺激白細(xì)胞生長(zhǎng)成熟的作用，能改善巨幼細(xì)胞性貧血。本品除用于各種原因引起的巨幼細(xì)胞性貧血外，主要用于腫瘤化療的輔助用藥。
(I)高劑量甲氨喋呤結(jié)合左亞葉酸鈣的解救療法，用于對(duì)抗腫瘤細(xì)胞對(duì)甲氨蝶呤的抗藥性，也能拮抗甲氨喋呤對(duì)正常細(xì)胞的毒性；(2)左亞葉酸鈣與5-FU合用加強(qiáng)其治療作用，延長(zhǎng)姑息治療晚期結(jié)腸直腸癌的生存時(shí)間。在日本，以往是亞葉酸鈣與5-Fu有效組合，作為結(jié)直腸癌的標(biāo)準(zhǔn)治療，99年10月，公共福利部批準(zhǔn)左亞葉酸鈣與5-Fu治療胃癌，結(jié)直腸癌，療效確切，已廣泛推廣。 左亞葉酸鈣由美國(guó)惠氏藥品公司首先研制成功，于1994年首先在英國(guó)上市，現(xiàn)已在包括意大利、加拿大、日本、南非、芬蘭、冰島等10幾個(gè)國(guó)家上市，其制劑有片劑、水針劑及凍干針劑，國(guó)外臨床應(yīng)用已充分證實(shí)了該藥的安全有效性。左亞葉酸鈣具有工業(yè)生產(chǎn)價(jià)值的制備方法是基于亞葉酸鈣中存在的6R及6S兩種非對(duì)映異構(gòu)體，可以根據(jù)兩者在水中溶解度的差異分離出6S構(gòu)型的左亞葉酸鈣。其詳細(xì)的制備方法中國(guó)專利CN1401647A公開(kāi)地很清楚，如下描述:
1.60g (6R，S)-亞葉酸鈣與540 690ml蒸餾水混合加熱溶解，加入摩爾量為亞葉酸鈣6.5倍的無(wú)水CaCl2降溫至30°C，滴加25%氨水，調(diào)pH值至10，滴加完畢，將溫度緩慢降溫至18°C，恒溫18小時(shí)，過(guò)濾沉淀，用5%氯化鈣溶液及無(wú)水乙醇洗滌，干燥，得淡黃色固體 25 克，[a]d20=-12 0 (c=l,
H2O,濃度以無(wú)水鹽計(jì))。2.第一步拆分產(chǎn)物60g與540 690ml蒸餾水混合加熱至60°C左右，用20%的HCl調(diào)pH至5.5左右，固體全溶，再用5%的NaOH調(diào)pH至7.0 7.5，加入摩爾量為亞葉酸鈣3.5倍的無(wú)水CaCl2，溶解完全后靜置，緩慢降溫至22°C，恒溫24小時(shí)，過(guò)濾沉淀，得到產(chǎn)物33克，[a] d20=-16 0 (c=l, H2O,濃度以無(wú)水鹽計(jì))。高效毛細(xì)管電泳測(cè)定左旋亞葉酸鈣含量在95%左右。3.第二步拆分產(chǎn)物60g與600ml水混合加熱至60°C左右，用20%的HCl調(diào)pH至
5.5左右，待固體全溶，再用5%的NaOH調(diào)pH至7.0 7.5，加入摩爾量為亞葉酸鈣，3.5倍的無(wú)水CaCl2，溶解完全后靜置，降溫至22°C，恒溫40小時(shí)后，過(guò)濾沉淀，得到產(chǎn)物56克，[a] d20=-18.3。(c=1，H20， 濃度以無(wú)水鹽計(jì))。
從上述制備方法可以看出:該工藝雖然具有工業(yè)生產(chǎn)價(jià)值，且可以得到高純度的左旋亞葉酸鈣，但是，拆分收率不高，特別是第2步驟中，拆分損失較大，收率低。提高收率，在工業(yè)生產(chǎn)中有很重要的意義，因此，進(jìn)一步提高生產(chǎn)左旋亞葉酸鈣的收率，是我們急待解決的課題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是進(jìn)一步提高生產(chǎn)左旋亞葉酸鈣的收率。我們發(fā)現(xiàn):拆分過(guò)程中加入含有左亞葉酸鈣的溶液，溶液中左亞葉酸鈣占到亞葉酸鈣總量的70%以上，溶液可以是拆分工藝制備左亞葉酸鈣中產(chǎn)生的溶液，可以提高生產(chǎn)左旋亞葉酸鈣的收率。我們發(fā)現(xiàn):拆分過(guò)程第2步驟中，產(chǎn)生的母液中，左亞葉酸鈣占到亞葉酸鈣總量的78%左右。具體地，拆分過(guò)程中加入含有左亞葉酸鈣的溶液的工藝可作如下描述:
(6R，S)-亞葉酸鈣與其90 100倍(W/V)蒸餾水混合加熱溶解，加入摩爾量為亞葉酸鈣6 7倍的無(wú)水CaCl2,再加入含有左亞葉酸鈣的溶液，溶液中左亞葉酸鈣占到亞葉酸鈣總量的70%以上，溶液的體積是蒸餾水體積的1/2 1/3，混合加熱至60°C，恒溫I小時(shí)，然后緩慢降溫至30°C，滴加25%氨水，調(diào)pH值至10，滴加完畢，將溫度緩慢降溫至18°C，恒溫18小時(shí)，過(guò)濾沉淀，用5%氯化鈣溶液及無(wú)水乙醇洗滌，干燥，得淡黃色固體，該固體(6S)-亞葉酸鈣含量85%以上，可進(jìn)一步拆分至純品。更具體地，拆分過(guò)程中加入含有左亞葉酸鈣的溶液的工藝可進(jìn)一步作如下描述: 拆分過(guò)程中加入含有左亞葉酸鈣的溶液的工藝如下: 1.首先，按通常工藝生產(chǎn):
(la) 60g (6R，S)-亞葉酸鈣與540_600ml蒸餾水混合加熱溶解，加入摩爾量為亞葉酸鈣6 7倍的無(wú)水CaCl2降溫至30°C，滴加25%氨水，調(diào)pH值至10，滴加完畢，將溫度緩慢降溫至18°C，恒溫18小時(shí)，過(guò)濾沉淀，用5%氯化鈣溶液及無(wú)水乙醇洗滌，干燥，得淡黃色固體24-25克，其中(6S)-亞葉酸鈣含量86 87%。(Ib)第一步拆分產(chǎn)物25g與250ml蒸餾水混合加熱至60°C左右，用20%的HCl調(diào)pH至5.5左右，固體全溶，再用5%的NaOH調(diào)pH至7.0 7.5，加入摩爾量為亞葉酸鈣3 4倍的無(wú)水CaCl2，溶解完全后靜置，緩慢降溫至22°C，恒溫24小時(shí)，過(guò)濾沉淀，得到產(chǎn)物8 9克，(6S)-亞葉酸鈣含量在95 96%。濾液中亞葉酸鈣總量16 17克，(6S)-亞葉酸鈣含量占到亞葉酸鈣總量的75 78%。(Ic)第二步拆分產(chǎn)物9g與90ml蒸餾水混合加熱至60°C左右，用20%的HCl調(diào)pH至5.5左右，待固體全溶，再用5%的NaOH調(diào)pH至7.0 7.5，加入摩爾量為亞葉酸鈣3 4倍的無(wú)水CaCl2，溶解完全后靜置，降溫至22°C，恒溫40小時(shí)結(jié)晶后，過(guò)濾，得到產(chǎn)物8克，(6S)-亞葉酸鈣含量> 99%。2.套用母液的生產(chǎn)工藝:
(2a)首先，將上述(Ib)步驟產(chǎn)生的濾液減壓濃縮到原體積的約1/3，至飽和，備用；60g (6R，S)-亞葉酸鈣與540 600ml蒸餾水混合加熱溶解，加入摩爾量為亞葉酸鈣6 7倍的無(wú)水CaCl2,加入備用的濾液，混合加熱至60°C，恒溫I小時(shí)，然后緩慢降溫至30°C，滴加25%氨水，調(diào)pH值至10，滴加完畢，將溫度緩慢降溫至18°C，恒溫18小時(shí)，過(guò)濾沉淀，用5%氯化鈣溶液及無(wú)水乙醇洗滌，干燥，得淡黃色固體38 39克，其中(6S)-亞葉酸鈣含量87 88%。(2b)第一步拆分產(chǎn)物39g與390ml蒸餾水混合加熱至60°C左右，用20%的HCl調(diào)pH至5.5左右，固體全溶，再用5%的NaOH調(diào)pH至7.0 7.5，加入摩爾量為亞葉酸鈣3 4倍的無(wú)水CaCl2，溶解完全后靜置，緩慢降溫至22°C，恒溫24小時(shí)，過(guò)濾沉淀，得到產(chǎn)物12 13克，(6S)-亞葉酸鈣含量在95 96%。濾液中亞葉酸鈣總量27 28克，(6S)-亞葉酸鈣含量占到亞葉酸鈣總量的75 78%。該步驟產(chǎn)生的濾液繼續(xù)可以套入下一批產(chǎn)品。(2c)第二步拆分產(chǎn)物13g與130ml蒸餾水混合加熱至60°C左右，用20%的HCl調(diào)pH至5.5左右，待固體全溶，再用5%的NaOH調(diào)pH至7.0 7.5，加入摩爾量為亞葉酸鈣3 4倍的無(wú)水CaCl2，溶解完全后靜置，降溫至22°C，恒溫40小時(shí)結(jié)晶后，過(guò)濾，得到產(chǎn)物12克，(6S)-亞葉酸鈣含量> 99%
上述制備方法可以得到有益的效果:
1.原工藝投料60g (6R，S)-亞葉酸鈣，得到純品(6S)-亞葉酸鈣(6S)-亞葉酸鈣僅8克，而套用母液的生產(chǎn)工藝，投料60g(6R，S)-亞葉酸鈣，得到純品(6S)-亞葉酸鈣(6S)-亞葉酸鈣12克，收率提升了 50%。2.套用母液的生產(chǎn)工藝，第一步拆分產(chǎn)物6S)-亞葉酸鈣含量87 88%，比原工藝提升了 1%。3.套用母液工藝簡(jiǎn)單，與原工藝融為一體。我們還發(fā)明了左亞葉酸鈣的含量測(cè)定方法，即用高效液相色譜法測(cè)定，方法如下:
色譜條件與系統(tǒng)適用性:用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以磷酸氫二鈉緩沖溶液(水950ml，加入10%四丁基氫氧化銨10.25ml和磷酸氫二鈉7.1g,溶解后用磷酸調(diào)pH至
7.8，加水至1000ml)-甲醇(78:22)為流動(dòng)相，柱溫40°C，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，精密稱取亞葉酸鈣對(duì)照品與甲酰葉酸對(duì)照品適量，置同一量瓶中，加水溶解并稀釋制成每Iml含亞葉酸鈣與甲酰葉酸各5 μ g的系統(tǒng)適用性溶液,取10 μ I注入液相色譜儀,記錄色譜圖,亞葉酸鈣與甲酰葉酸的分離度不得低于2.2 ；
測(cè)定法:取本品適量，精密稱定，加水溶解并稀釋制成每1ml約含1mg的溶液，精密量取10 μ l注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取亞葉酸鈣對(duì)照品，同法測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。
具體實(shí)施例方式
下面實(shí)施例用于進(jìn)一步敘述本發(fā)明，但不作任何限制。實(shí)施例1左亞葉酸鈣的制備 工藝過(guò)程如下:
1.首先，按通常工藝生產(chǎn)
(la) 60g (6R, S)-亞葉酸鈣與600ml蒸懼水混合加熱溶解,加入72g無(wú)水CaCl2降溫至30°C，滴加25%氨水，調(diào)pH值至10，滴加完畢，將溫度緩慢降溫至18°C，恒溫18小時(shí)，過(guò)濾沉淀，用5%氯化鈣溶液1OOml及無(wú)水乙醇50ml洗滌，干燥，得淡黃色固體25克，其中(6S)-亞葉酸鈣含量86%。(lb)第一步拆分產(chǎn)物25g與250ml蒸餾水混合加熱至60°C左右，用20%的HCl調(diào)pH至5.5左右，固體全溶，再用5%的NaOH調(diào)pH至7.0 7.5，加入16g無(wú)水CaCl2，溶解完全后靜置，緩慢降溫至22°C，恒溫24小時(shí)，過(guò)濾沉淀，得到產(chǎn)物9克，(6S)-亞葉酸鈣含量在95.5%。濾液中亞葉酸鈣總量17克，(6S)-亞葉酸鈣含量占到亞葉酸鈣總量的78%。(Ic)第二步拆分產(chǎn)物9g與90ml蒸餾水混合加熱至60°C左右，用20%的HCl調(diào)pH至5.5左右，待固體全溶，再用5%的NaOH調(diào)pH至7.0 7.5，加入6g無(wú)水CaCl2，溶解完全后靜置，降溫至22°C，恒溫40小時(shí)結(jié)晶后，過(guò)濾，得到產(chǎn)物8克，(6S)-亞葉酸鈣含量99.5%。2.套用母液的生產(chǎn)工藝:
(2a)首先，將上述(Ib)步驟產(chǎn)生的濾液減壓濃縮到原體積的約1/3，至飽和，備用；60g (6R, S)-亞葉酸I丐與600ml蒸懼水混合加熱溶解,加入72 g的無(wú)水CaCl2,加入備用的濾液，混合加熱至60°C，恒溫I小時(shí)，然后緩慢降溫至30°C，滴加25%氨水，調(diào)pH值至10，滴加完畢，將溫度緩慢降溫至18°C，恒溫18小時(shí)，過(guò)濾沉淀，用5%氯化鈣溶液150ml及無(wú)水乙醇70ml洗滌，干燥，得淡黃色固體39克，其中(6S)-亞葉酸鈣含量87%。(2b)第一步拆分產(chǎn)物39g與390ml蒸餾水混合加熱至60°C左右，用20%的HCl調(diào)pH至5.5左右，固體全溶，再用5%的NaOH調(diào)pH至7.0 7.5，加入25g無(wú)水CaCl2，溶解完全后靜置，緩慢降溫至22°C，恒溫24小時(shí)，過(guò)濾沉淀，得到產(chǎn)物13克，(6S)-亞葉酸鈣含量在96%。濾液中亞葉酸鈣總量28克，(6S)-亞葉酸鈣含量占到亞葉酸鈣總量的78%。該步驟產(chǎn)生的濾液繼續(xù)可以套入下一批產(chǎn)品。(2c)第二步拆分產(chǎn)物13g與130ml蒸餾水混合加熱至60°C左右，用20%的HCl調(diào)pH至5.5左右，待固體 全溶，再用5%的NaOH調(diào)pH至7.0 7.5，加入8g無(wú)水CaCl2，溶解完全后靜置，降溫至22°C，恒溫40小時(shí)結(jié)晶后，過(guò)濾，得到產(chǎn)物12克，(6S)-亞葉酸鈣含量99.6%。
權(quán)利要求
1.一種通過(guò)拆分工藝制備左亞葉酸鈣的方法，其特征在于:拆分過(guò)程中加入了含有左亞葉酸鈣的溶液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述左亞葉酸鈣的制備方法，其特征在于:左亞葉酸鈣溶液中左亞葉酸鈣占到亞葉酸鈣總量的70%以上。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述左亞葉酸鈣的制備方法，其特征在于:左亞葉酸鈣溶液是拆分工藝制備左亞葉酸鈣中產(chǎn)生的溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述左亞葉酸鈣的制備方法，其制備方法包括:(6R，S)-亞葉酸鈣與其90 100倍(W/V)蒸餾水混合加熱溶解，加入摩爾量為亞葉酸鈣6 7倍的無(wú)水CaCl2,再加入含有左亞葉酸鈣的溶液，溶液中左亞葉酸鈣占到亞葉酸鈣總量的70 %以上，溶液的體積是蒸餾水體積的1/2 1/3，混合加熱至60°C，恒溫I小時(shí)，然后緩慢降溫至30°C，滴加25%氨水，調(diào)pH值至10，滴加完畢，將溫度緩慢降溫至18°C，恒溫18小時(shí)，過(guò)濾沉淀，用5%氯化鈣溶液及無(wú)水乙醇洗滌，干燥，得淡黃色固體，該固體(6S)-亞葉酸鈣含量85%以上，可進(jìn)一步拆分至純品。
5.一種通過(guò)拆分工藝制備左亞葉酸鈣的方法，其特征在于:左亞葉酸鈣的含量是用高效液相色譜法測(cè)定，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以磷酸氫二鈉為緩沖溶液，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述左亞葉酸鈣的制備方法，其特征在于:左亞葉酸鈣的含量測(cè)定包括: (1)左亞葉酸鈣的含量:照高效液相色譜法測(cè)定； (2)色譜條件與系統(tǒng)適用性:用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以磷酸氫二鈉緩沖溶液(水950ml，加入10%四丁基氫氧化銨10.25ml和磷酸氫二鈉7.lg，溶解后用磷酸調(diào)pH至7.8，加水至IOOOml)-甲醇(78:22)為流動(dòng)相，柱溫40°C，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，精密稱取亞葉酸鈣對(duì)照品與甲酰葉酸對(duì)照品適量，置同一量瓶中，加水溶解并稀釋制成每Iml含亞葉酸I丐與甲酰葉酸各5 μ g的系統(tǒng)適用性溶液,取10 μ I注入液相色譜儀,記錄色譜圖,亞葉酸鈣與甲酰葉酸的分離度不得低于2.2 ； (3)測(cè)定法:取本品適量，精密稱定，加水溶解并稀釋制成每Iml約含Img的溶液，精密量取10 μ I注入液相色譜儀， 記錄色譜圖；另取亞葉酸鈣對(duì)照品，同法測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。
全文摘要
本發(fā)明屬于藥物合成領(lǐng)域，涉及一種抗腫瘤藥物的制備方法，具體涉及一種高收率的左亞葉酸鈣的制備方法；其發(fā)明特點(diǎn)在于通過(guò)拆分工藝制備左亞葉酸鈣，拆分過(guò)程中加入了含有左亞葉酸鈣的溶液，左亞葉酸鈣溶液中左亞葉酸鈣占到亞葉酸鈣總量的70％以上，該方法既提高了拆分收率，又回收利用了拆分工藝產(chǎn)生的母液，在工業(yè)生產(chǎn)中有較大意義。
文檔編號(hào)C07D475/04GK103113372SQ20131008083
公開(kāi)日2013年5月22日 申請(qǐng)日期2013年3月14日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月14日
發(fā)明者王勇, 李立忠, 解曉榮, 李潤(rùn)寶, 昝建強(qiáng), 姚荷云, 閆潔, 胡成偉 申請(qǐng)人:山西普德藥業(yè)股份有限公司