專利名稱：：用于治療的三唑衍生物的制作方法
技術領域：
：該發(fā)明涉及用于治療的三唑衍生物(特別是用于人和其他哺乳動物真菌感染的治療)，其應用方法，含有它們的制劑和它們的生產方法。
背景技術：
：20世紀80年代以前，由于真菌感染發(fā)生率相對較低，抗真菌藥物的品種有限，且因其副作用較大也使臨床應用受限，因此，抗真菌藥物的耐藥性產生和發(fā)展很慢。直到80年代初，第一個生物利用度高，可以口服的唑類抗真菌藥物-酮康唑在臨床廣泛應用后不久，臨床就有報道在長期用酮康唑治療念珠菌的病人中，出現(xiàn)治療失敗并伴有其MIC值升高。但在三唑類抗真菌劑-氟康唑問世之前，這種耐藥性在臨床上尚未造成嚴重問題。20世紀80年代后期，氟康唑由于其口服易吸收、抗真菌譜廣，生物利用度高，不良反應低等優(yōu)點很快取代了酮康唑并在臨床上廣泛應用于多種深部真菌感染，但很快出現(xiàn)臨床耐藥的念珠菌，且這類耐藥株逐年增多。此后臨床又分離出耐氟康唑的隱球菌、曲霉菌等，但比例不高。伊曲康唑在臨床應用時間相對較短，且以口服為主，故耐藥的報道相對較少。但在免疫缺陷患者中，也已分離出耐伊曲康唑的念珠菌、煙曲霉、新型隱球菌。伊曲康唑對氟康唑耐藥的念珠菌和煙曲霉的MIC值明顯升高，其中部分真菌對伊曲康唑也耐藥。既使較新的伏立康唑對氟康唑耐藥的念珠菌和煙曲霉的MIC值亦有所升高。這說明在唑類抗真菌藥物之間存在交叉耐藥的可能性。在已知的真菌感染中，大約有40%的患者是全身性真菌感染，這部分患者幾乎不能夠接受口服給藥的治療，靜脈給藥在這部分患者中顯得尤其重要，然而，氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑這些三唑類化合物溶解度較低，制成靜脈給制劑時加入了大量助溶輔料，然而，人們總是希望減少配方的成分數(shù)以便減少病人可能發(fā)生的副反應。
發(fā)明內容本發(fā)明的目的在于提供一種新的三唑類化合物的衍生物。其結構是R「0-(CH2)nO-L(I)R3&優(yōu)選是式Ia的基團其中R2表示被一個或多個鹵素取代的苯基，1^表示H或甲基，R4表示H或與R3—起表示=CH2，R5表示一個5或6元含氮雜環(huán)，該雜環(huán)可以被一個或多個如下基團選擇取代鹵素，=0，苯基[可以被CN和(C6H4)-0CH2CF2CHCF2選擇取代]或CH=CH-(C6H4)_CH2CF2CHF2;或被一或多個鹵素和甲基吡咯基取代的苯基。當Rt帶表如上所述式la時，R2優(yōu)選是2，4-二氟苯基，R3優(yōu)選是H或甲基。R4代表含氮雜環(huán)包括三唑基，嘧啶基和噻唑基&代表的優(yōu)選具體基團包括<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>L代表CO-烷基羧酸、氨基酸殘基、磷?；蛄柞；苌铩Ｆ渲兴霭被釟埢鶠榘被嶂械孽；糠郑渲袃?yōu)選的氨基酸包括甘氨酸、丙氨酸、賴氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、苯丙氨酸；n為l-10;更詳細的來說本發(fā)明的化合物包括其藥用鹽以及它們的水合物。本發(fā)明提供了上述式I化合物及其藥用鹽的生產方法將式I^OH化合物與Cl-(CH2)n-0H，進行脫水反應，生成R「0-(CH》nO—Cl，在與有機酸或磷酸、進行縮合反應即可制備本發(fā)明的化合物，其中所述有機酸為丙二酸、丁二酸、氨基酸等。當n為1時候本發(fā)明也可采用如下方法制備將式RiOH化合物與氯甲基甲硫醚反應進行甲硫甲基化，再經磺酰氯氯化生成(CH2)nO-Cl，在與有機酸或磷酸、硫酸進行5縮合反應即可制備本發(fā)明的化合物，其中所述有機酸為其中所述有機酸為丙二酸、丁二酸、氨基酸等。本發(fā)明的化合物是有用的，因為它們在包括人類的動物中具有藥理活性。特別是該化合物在治療或預防真菌感染方面有用。例如它們可用于人類局部真菌感染的治療，感染的微生物包括念珠菌屬，毛癬菌屬，小孢子菌屬，或表皮癬菌屬，或者用于白色念珠菌引起的粘膜感染。它們也可以用于念珠菌屬。新型隱球菌，黃曲霉，煙曲霉，環(huán)孢子菌屬，巴西芽生菌，組織胞漿菌或芽生菌等引起的全身真菌感染的治療。本發(fā)明化合物體外抗真菌活性的評估可以通過測定其最小抑菌濃度(m.i.c)來完成，m.i.c指在適宜的介質中，使某些特定微生物出現(xiàn)不能生長時的受試化合物的濃度。實際操作如下準備一套摻有不同濃度的待測化合物的瓊脂盤，在標準培養(yǎng)條件下接種，如，白色念珠菌，每個盤在37t:孵育48小時，然后檢查盤中真菌是否生長，并得到m.i.c值。用于該試驗的其他微生物可包括煙曲霉，毛癬菌屬，小孢子菌屬，絮狀表皮癬菌，粗球孢子菌和光滑的球擬酵母菌。本發(fā)明化合物可以單位劑量形式給藥，給藥途徑可為腸道或非腸道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔等。本發(fā)明化合物給藥途徑可為靜脈給藥。注射包括靜脈注射、肌肉注射、皮下注射和穴位注射等。給藥劑型可以是片劑、膠囊劑、分散片、口服液、大輸液、小針、凍干粉針等藥學上可接受的制劑。本發(fā)明化合物按總重量給藥，其量為每kg體重0.01-40mg，最好是24h的用量為每kg體重0.l-20mg，亦可采用幾次給藥方法。最佳方案是一天一次給予本發(fā)明的一種或多種活性化合物的量為0.2-20mg/kg體重，優(yōu)選劑量為0.5-16mg/kg體重。為了符合人或獸用的理想給藥方案，這一劑量可視病情輕重、治療難易以及所用化合物的不同上下波動，或遵醫(yī)囑。本發(fā)明的典型化合物如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>CH2CH2COOH]"CH2NH2(化合物C)(化合物D)下面結合實施例對本發(fā)明作進一步詳細說明，但應理解本發(fā)明的范圍非僅限于這些實施例的范圍。實施例1:化合物A的制備將氟康唑306.3克，溶解在2000ml乙酸乙酯中，加入氯甲基甲硫醚100g，室溫反應5h，反應結束后，減壓蒸干溶劑，殘留物用2500ml二氯甲烷溶解，冰浴下滴加氯化亞砜120g，加畢，室溫反應2小時，加入冰水混合物500g終止反應，分液，取下層溶液水洗滌(300mlX3)，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓蒸干，加入400g磷酸，IO(TC攪拌反應5小時，反應畢，加入1000ml水，用氫氧化鈉調pH值至5左右，(TC攪拌析晶24小時，過濾，烘干得化合物A101g。純度98.3X色譜條件C18色譜柱(150mmX46mm，5iim)，流動相為乙腈-水(40:60)，柱溫為30。C，檢測波長為260nm。將化合物A50g用500ml甲醇溶解，攪拌下慢慢加入30%氫氧化鈉溶液至pH為9左右，攪拌30分鐘，溶液減壓蒸干得化合物A的鈉鹽。實施例2:化合物B的制備。按照實施例1制備化合物A的方法制備，不同的是用伏立康唑代替氟康唑。實施例3:化合物C的制備。將伏立康唑349.3克，溶解在2500ml乙酸乙酯中，加入氯甲基甲硫醚100g，室溫反應5h，反應結束后，減壓蒸干溶劑，殘留物用3000ml二氯甲烷溶解，冰浴下滴加氯化亞砜120g，加畢，室溫反應2小時，加入冰水混合物800g終止反應，分液，取下層溶液水洗滌(400mlX3)，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓蒸干，加入100g丁二酸、N，N-二甲基乙酰胺1000ml，IO(TC攪拌反應5小時，反應畢，加入1000ml水，乙酸乙酯提取(1500mlX3)，合并乙酸乙酯層，洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾，蒸干得化合物C52g。純度99.1X色譜條件C18色譜柱(150mmX46mm，5iim)，流動相為乙腈-水(40:60)，柱溫為30°C，檢測波長為255nm。將化合物C20g用100ml甲醇溶解，攪拌下慢慢加入30%氫氧化鈉溶液至pH為9左右，攪拌30分鐘，溶液減壓蒸干得化合物C的鈉鹽。實施例4:化合物D的制備。將伏立康唑349.3克，溶解在2000ml乙酸乙酯中，加入三苯基磷262.3g、氯乙醇85g，攪拌下滴加偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)174.2g室溫反應5h，過濾，濾液蒸干，過柱層析，濾液蒸干，加入N，N-二甲基乙酰胺500ml，boc保護的甘氨酸100g，10(TC反應5小時，反應畢，冷卻，加入1000ml水，乙酸乙酯提取，濾液蒸干得化合物D。純度99.3%色譜條件C18色譜柱(150mmX46mm，5ym)，流動相為乙腈-水(40:60)，柱溫為30°C，檢測波長為255nm。實施例5:化合物B片的制備方法處方化合物B300g淀粉80g微晶纖維素120g硬酯酸鎂2.0g羥丙基甲基纖維素(E-30)(4%溶液)適量_制成1000片制法配制4%羥丙基甲基纖維素(E-30)溶液，備用。稱取20g淀粉置105t:干燥5小時備用。稱取60g淀粉和處方量的化合物B、微晶纖維素，混勻，粉碎過80目篩。用4%羥丙基甲基纖維素(E-30)溶液將物料制軟材，用20目篩制粒，于50-6(TC干燥至顆粒中的水份3%左右。過20目篩整粒，加入處方量的干淀粉(105。C干燥5小時)、硬酯酸鎂，終混，測中間體含量，定片重；壓片。實施例6:化合物D氯化鈉輸液的制備處方化合物D300g氯化鈉89g注射用水10L_制成10000ml制法稱取處方量的化合物D和氯化鈉，加注射用水10L，攪拌調pH為5.0;向上述溶液中加入O.1%活性炭，攪拌，放置15分鐘，5微米鈦棒脫炭，再經筒式濾器0.45微米和0.22微米的微孔濾膜精濾；灌封于100ml玻璃輸液瓶中，115t:流動蒸汽滅菌30分鐘，即得化合物D氯化鈉輸液。實施例7:化合物C注射液的制備處方化合物C250g注射用水1000ml_制成1000ml制法稱取處方量的化合物C，加注射用水1000ml，攪拌調pH為8.0;向上述溶液中加入0.1%活性炭，攪拌，放置15分鐘，5微米鈦棒脫炭，再經筒式濾器0.45微米和0.22微米的微孔濾膜精濾；灌封于10ml安瓿瓶中，即得化合物C注射液。實施例8:注射用化合物B的鈉鹽制備處方化合物B320g8注射用水1000ml_制成100瓶將化合物B的鈉鹽用注射用水溶解后，調pH為8左右，加針用活性炭吸附30分鐘后經除炭、除菌過濾(0.22m)，經檢測，濾液符合規(guī)定后分裝于管制抗生素西林瓶內，放置真空冷凍干燥箱內進行冷凍干燥48小時，加蓋丁基膠塞，并軋封鋁蓋即得注射用化合物B的鈉鹽。實施例9:藥理藥效學試驗1、真菌敏感性測定使用一系列假絲酵母菌分離物加上皮膚真菌，狗小孢霉、紅色發(fā)癬菌與須發(fā)癬菌；煙曲霉，及新型隱球酵母的單一分離物，以體外評估試驗化合物的活性。接種物制備成肉湯培養(yǎng)物(酵母菌類)，或呈由瓊脂斜面培養(yǎng)物制得之真菌物質懸浮液(霉菌類)。將試驗化合物以定量滴管，自匿SO儲存溶液吸取至水中，以提供一系列io-倍稀釋液。將真菌接種物以每毫升大約50，000菌落-形成單位(CFU)之濃度，懸浮于生長培養(yǎng)基CYG(F.C.歐德斯(Odds)，臨床微生物學期刊，29，2735-2740，1991)中，并加至該水性試驗藥劑中。將培養(yǎng)物建立于96孔塑膠微滴定平板中，并將其于37t:下培養(yǎng)2天(菌假絲酵母菌屬)，或于3(TC下培育5天(其它真菌)。藉由其于波長405nm下所測得之光學密度(OD)，測量于微量培養(yǎng)中的生長情形。計算含有試驗化合物培養(yǎng)物之OD值，對應對照組(不含藥劑OD值)之百分率。抑制生長至對照組35%或更少，即記錄為顯著抑制。于表1中列出某些式(I)化合物對團假絲酵母，克魯斯假絲酵母、近平滑假絲酵母、白假絲酵母、乳酒假絲酵母、熱帶假絲酵母、狗小孢霉、紅色發(fā)癬菌、須發(fā)癬菌、新型隱球酵母、煙曲霉的最低抑制濃度(MICs;單位10—6M)。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>2、天竺鼠中的彌漫性曲霉病及假絲酵母病所有實驗中皆使用不含特定病原的(SPF)天竺鼠(體重為400-500克)。將導管置入有待接受靜脈灌注處理之動物的左頸靜脈中，將靜脈結合，并將導管連接至微量控制灌注泵上。將動物經由陰莖之側靜脈，或經由所植入之導管，以煙曲霉(4，000CFU/克體重)，或以白假絲酵(4，000CFU/克體重)感染。于感染后l小時開始，進行靜脈內治療(5毫克/公斤/天)。對于每組試驗動物(每組試驗動物數(shù)目列示于"N"欄中)，記錄于各天數(shù)內之平均存活時間(MST)，以及存活百分率(％surv)。對各組于實驗期間死亡之動物，以及于實驗中存活但后來被殺死之動物，研究計數(shù)其深層組織(肝、脾、腎、肺與腦)中，煙曲霉及白假絲酵母數(shù)量。測量于培養(yǎng)物陽性肝臟中殘余之CFU/克，并列示于表2(靜脈內處理后)，以平均logl。CFU/克表示。表2中的"％neg"表示，于處理后呈培養(yǎng)物-陰性之深層組織百分率。因此，較有效之試驗化合物的"MST"、"％surv"及"％neg"各欄中具有高的值，而"CFU/克"欄中具有低的值。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>權利要求通式(I)的化合物或其水合物和它們的藥用鹽R1-O-(CH2)nO——L(I)R1優(yōu)選是式Ia的基團其中R2表示被一個或多個鹵素取代的苯基；R3表示H或甲基；R4表示H或與R3一起表示＝CH2；R5表示一個5或6元含氮雜環(huán)，該雜環(huán)可以被一個或多個如下基團選擇取代鹵素，＝O，苯基[可以被CN和(C6H4)-OCH2CF2CHCF2選擇取代]或CH＝CH-(C6H4)-CH2CF2CHF2；或被一或多個鹵素和甲基吡咯基取代的苯基；n代表1-10；L代表CO-烷基羧酸、氨基酸殘基、磷?；蛄柞；苌?。F2009102193224C00011.tif2.—種藥用組合物，其特征在于，含有治療有效劑量如權利要求1所述化合物作為活性成分以及藥學上可接受的載體。3.根據(jù)權利要求3所述藥物組合物的用途，用于生產治療抗真菌感染的藥物。全文摘要本發(fā)明提供了式(I)化合物或其藥用鹽R1-O-(CH2)nO-L，其中R1代表含叔羥基類型的三唑類抗真菌化合物的非羥基部分，n代表1-10，L代表CO-烷基羧酸、氨基酸殘基、磷酰基或磷?；苌?。本發(fā)明化合物用于治療真菌感染并具有良好的水溶性。文檔編號C07D403/06GK101723980SQ20091021932公開日2010年6月9日申請日期2009年12月4日優(yōu)先權日2009年12月4日發(fā)明者楊成申請人:陜西合成藥業(yè)有限公司