專利名稱：新型抗葉酸劑的制作方法
新型抗葉酸劑 發(fā)明領(lǐng)域
本申請(qǐng)涉及藥物活性化合物，且更具體地說，涉及新型抗葉酸劑 化合物。
背景
葉酸為水溶性B族維生素，其系統(tǒng)名稱作N-[4(2-氨基-4-幾基-蝶啶-6-基 甲氨基)-苯甲?；鵠-L (+)-谷氨酸并且具有下式(1)中提供 的結(jié)構(gòu)。
02H
(1)
正如式(l)中觀察到的， 一般可以將葉酸結(jié)構(gòu)描述為由蝶啶環(huán)，對(duì) -氨基苯甲酸部分和谷氨酸部分構(gòu)成。葉酸及其衍生物為代謝和生長(zhǎng)所 必需的，特別是參與胸苷酸，氨基酸和噤呤類的身體合成。已知葉酸 衍生物，諸如天然存在的葉酸鹽具有與葉酸相差無幾的生化作用。已
知葉酸通過氫化，諸如在1，4-二溱環(huán)上被衍生，或被甲基化，甲醛化 或橋連，其中取代一般在W或N"位上。已經(jīng)研究了葉酸鹽在各種應(yīng)用 中的功效，包括出生缺陷，心臟病，中風(fēng)，記憶缺失和與年齡相關(guān)的 癡呆的嚴(yán)重性或發(fā)病率降低。
抗葉酸劑化合物，如葉酸鹽在結(jié)構(gòu)上與葉酸類似；然而，抗葉酸 劑化合物起》皮壞葉酸代i射的作用。Takamoto (1996) The Oncologist, 1 :68_81提供了抗葉酸劑的綜述，將該無需引入本文作為參考。 一組 特定的抗葉酸劑，即所謂的"傳統(tǒng)抗葉酸劑"的特征在于存在葉酸對(duì)-氨基苯甲酰基谷氨酸側(cè)鏈或該側(cè)鏈的衍生物。另一組抗葉酸劑，即所
7謂的"非傳統(tǒng)的抗葉酸劑"的特征在于具體不存在對(duì)-氨基苯曱?；?氨酸基。因?yàn)榭谷~酸劑具有與葉酸作用相反的生理作用，所以已經(jīng)證 實(shí)抗葉酸劑表現(xiàn)出有用的生理功能，諸如通過導(dǎo)致細(xì)胞凋亡破壞癌細(xì) 胞的的能力。
葉酸一谷氨?；锖涂谷~酸劑一谷氨?；锿ㄟ^細(xì)胞膜以還原形 式或未還原形式被對(duì)那些相應(yīng)形式具有特異性的載體轉(zhuǎn)運(yùn)。這些轉(zhuǎn)運(yùn) 系統(tǒng)的表達(dá)根據(jù)細(xì)胞類型和細(xì)胞生長(zhǎng)條件的不同而改變。在進(jìn)入細(xì)胞 后，大部分葉酸鹽和許多抗葉酸劑通過聚谷氨?；恍揎棧渲幸粋€(gè)
谷氨酸鹽殘基與a羧基上的第二個(gè)谷氨酸殘基通過肽鍵連接。這導(dǎo)致 通常通過添加3-6個(gè)谷氨酸鹽殘基形成聚-L-Y-谷氨?；?。對(duì)葉酸 起作用的酶對(duì)聚谷氨?；问骄哂休^高親和力。因此，聚谷氨?；~ 酸一般在細(xì)胞內(nèi)表現(xiàn)出較長(zhǎng)的保留時(shí)間。
完整的葉酸酶途徑對(duì)維持DNA結(jié)構(gòu)單元和許多重要的氨基酸的重 新合成而言是重要的?？谷~酸劑靶標(biāo)包括涉及葉酸代謝的各種酶，包 括(i) 二氫葉酸還原酶(DHFR); (ii)胸普酸合酶(TS); (iii)葉酰 基聚谷氨酰合酶；和(iv)甘氨酰胺核苷酸轉(zhuǎn)曱?；?GARFT)和氨基 咪唑甲酰胺核苷酸轉(zhuǎn)甲酰酶(A ICART)。
為跨膜糖蛋白的還原型葉酸載體(RFC)在通過該栽體介導(dǎo)的機(jī)制 將還原型葉酸轉(zhuǎn)入哺乳動(dòng)物的葉酸途徑中起積極作用(與受體介導(dǎo)的 機(jī)制相反)。RFC還轉(zhuǎn)運(yùn)抗葉酸劑，諸如甲氨蝶呤。因此，介導(dǎo)RFC起 作用的能力可以影響細(xì)胞攝取還原型葉酸的能力。
聚谷氨酰化葉酸鹽可以作為酶的輔因子起作用，而聚谷氨酰化抗 葉酸劑一般作為酶抑制劑起作用。此外，干擾葉酸代謝防止了 DNA和 某些氨基酸重新合成，由此促成抗葉酸劑的選擇性細(xì)胞毒性。式(2) 中提供的結(jié)構(gòu)甲氨蝶呤為一種具有經(jīng)證實(shí)用于癌癥治療的抗葉酸劑， 所述的癌癥治療特別是急性白血病，非何杰金淋巴瘤，乳腺癌，頭頸 癌，絨毛膜癌，骨源性肉瘤和膀胱癌的治療。
8Nair等(J. Med. Chem. (1991) 34: 222-227)證實(shí)傳統(tǒng)的抗葉酸
劑的聚谷氨酰化并非抗腫瘤活性所必需的且甚至是不需要的，即聚谷 氨酰化可以導(dǎo)致藥物的藥理學(xué)活性和靶向特異性缺失，將該文獻(xiàn)引入 本文作為參考。隨后發(fā)現(xiàn)了大量不可聚谷氨?；膫鹘y(tǒng)抗葉酸劑。參 見Nair等(1998) Proc. Amer. Assoc. Cancer Research 39:431， 將該文獻(xiàn)引入本文作為參考。 一組具體的不可聚谷氨?；谷~酸劑的 特征在于在谷氨酸部分的4-位上具有亞甲基(即-CH2取代基)。已經(jīng)證 實(shí)該化學(xué)基團(tuán)的存在影響抗葉酸劑化合物的生物活性。參見Nair等 (1996) Cellular Pharmacology 3:29,將該文獻(xiàn)引入本文作為參考。
還研究了其他的葉酸衍生物，以尋找具有增加的代謝穩(wěn)定性的抗 葉酸劑，從而能夠?qū)颊呓o予較小的劑量和較低的給藥頻率。例如， 已經(jīng)證實(shí)二去氮雜(即基于喹唑啉的)類似物可避免蝶啶環(huán)系上的生理 羥基化。此外，已經(jīng)證實(shí)用任選取代的碳原子取代仲胺氮原子可防止 相鄰的鍵發(fā)生生理裂解。
具有碳取代仲胺氮的抗葉酸劑的一個(gè)實(shí)例為4-氨基-4-脫氧-l 0-去氮雜蝶?；?Y-亞甲基谷氨酸-更通常稱作MDAM-為(3)中提供的結(jié) 構(gòu)。
O COOH
已經(jīng)證實(shí)MDAM的L-對(duì)映體表現(xiàn)出增加的生理活性，參見美國(guó)專 利US 5， 550， 128，將該文獻(xiàn)引入本文作為參考。為代謝穩(wěn)定性設(shè)計(jì)的
9典型抗葉酸劑的另一個(gè)實(shí)例為ZD 1694，以式(4)表示。
H02C、
式(5)中所示結(jié)構(gòu)的一組抗葉酸劑化合物合并了上述分子特征中 的幾個(gè)并且該組化合物被命名為MobileTrexate ， Mobile Trex， Mobi1trex或M-Trex。
正如式(5)中所示，M-Trex包括一組化合物，其中X可以為CH2， C線，CH(CH2CH3), NH或線。正如美國(guó)專利US5, 912， 251中所披露 的，M-TREX種類已經(jīng)表現(xiàn)出用于治療異常細(xì)胞增殖，炎性病癥和自身 免疫疾病的活性，其中X=CH2，將該文獻(xiàn)引入本文作為參考。以式(6) 表示的該化合物被命名為各種名稱，包括如下2-{4-[2-(2，4-二氨基 -喹唑啉-6-基)-乙基]-苯甲酰氨基} -4-亞曱基-戊二酸；Y亞甲基谷氨 酸5， 8， 10-三去氮雜氨基蝶啶；和5， 8-二去氮雜MDAM。式(6)的化合 物為不可聚谷氨酰化的非羥基化的并且能夠破壞葉酸代謝。還證實(shí)該 化合物在治療相關(guān)濃度殺傷培養(yǎng)物中人白血病細(xì)胞和人實(shí)體瘤細(xì)胞中 具有有效性，并且進(jìn)一步作為抗炎藥在津喘動(dòng)物模型中進(jìn)一步表現(xiàn)出 活性。
10代謝惰性外還來 源于其它因素。涉及體內(nèi)葉酸代謝的多種酶提供了抑制抗葉酸劑的靶 標(biāo)的選擇。換句話說，對(duì)抗葉酸劑而言能夠改變它們抑制的酶。例如，
某些抗葉酸劑主要抑制二氫葉酸還原酶(DHFR),而其它抗葉酸劑主要 抑制胸苷酸合酶(TS)，甘氨酰胺核苷酸轉(zhuǎn)曱酰基酶(GARFT)或氨基咪唑 甲酰胺核普酸轉(zhuǎn)甲酰酶，而其它抗葉酸劑抑制這些酶的組合。這種酶 抑制的"選擇"例證在

圖1中。
抗葉酸劑主要在其功效和特異性方面可以改變。此外，對(duì)抗葉酸 劑的改進(jìn)存在持續(xù)的需求，諸如降低的毒性水平，增加的貯存期限和 易于遞送至體內(nèi)耙點(diǎn)。因?yàn)殡y以可靠地預(yù)計(jì)預(yù)先測(cè)試每種實(shí)際化合物 的生理特性的完整范圍，所以對(duì)抗葉酸劑設(shè)計(jì)的改進(jìn)仍然存在需求。
發(fā)明概述
本發(fā)明提供了具有改善的特性的新型抗葉酸劑化合物。本發(fā)明還 提供了包含這類化合物的藥物組合物和合成這類化合物的方法。本發(fā) 明進(jìn)一步提供了治療各種病癥和疾病的方法，包括，但不限于異常細(xì) 胞增殖，哞喘和其它炎性疾病和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和其它自身免疫疾病。
本發(fā)明在一個(gè)實(shí)施方案中涉及具有式(7)中提供的結(jié)構(gòu)的新型抗 葉酸劑化合物及其藥學(xué)上可接受的酯，酰胺，鹽，溶劑合物，對(duì)映體 和前體藥物<formula>formula see original document page 12</formula>
其中
X為CHR,或NR9;
Y!， Ys和丫3獨(dú)立為0或S;
V,和VJ蟲立為0， S或NZ;
Z為H，任選取代的烷基，任選取代的鏈烯基，任選取代的炔基，或烷芳基；
R:和R2獨(dú)立為H，任選取代的烷基，任選取代的鏈烯基，任選取代的炔基，或烷芳基；
R3為H，任選取代的烷基，任選取代的鏈烯基，任選取代的炔基，任選取代的烷氧基，羥基或S素；且
R4, R5， R6, R7， Rs和R,獨(dú)立為H，任選取代的烷基，任選取代的
鏈烯基，任選取代的炔基，?；?，-c(o)-烷基，-c(o)-鏈烯基或-c(o)-炔基。
在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的化合物具有基本上為谷氨酸部分的末端。例如，該化合物可以為式(8)及其藥學(xué)上可接受的酯，酰胺，鹽，溶劑合物，對(duì)映體和前體藥物
<formula>formula see original document page 12</formula> (8)
其中X為CHRg或NR9;
R3為H,任選取代的烷基，任選取代的鏈烯基，任選取代的炔基，任選取代的烷氧基，羥基或卣素；且
R4， R5, R6, R7， Rs和R"蟲立為H，任選取代的烷基，任選取代的
鏈烯基，任選取代的炔基，?；?，-c(o)-烷基，-c(o)-鏈烯基或-c(o)-炔基。
在額外的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的化合物具有基本上為二氨基-
吡咯并嘧啶部分的末端。例如，該化合物可以為式(io)及其藥學(xué)上可
接受的酯，酰胺，鹽，溶劑合物，對(duì)映體或前體藥物
X為徴9或NR9;
Yn 丫2和丫3獨(dú)立為0或S;
V,和V2獨(dú)立為0， S或NZ;
Z為H,任選取代的烷基，任選取代的鏈烯基，任選取代的炔基或烷芳基；
R,和R2獨(dú)立為H，任選取代的烷基，任選取代的鏈烯基，任選取代的炔基或烷芳基；
l為H，任選取代的烷基，任選取代的鏈烯基，任選取代的炔基，任選取代的烷氧基，羥基或卣素；且
Rs為H，任選取代的烷基，任選取代的鏈烯基，任選取代的炔基，
?；?，-c(o)-烷基，-c(o)-鏈烯基或-c(o)-炔基。
本發(fā)明在一個(gè)實(shí)施方案中提供了式(11)的化合物
13或其藥學(xué)上可接受的酯類，酰胺類，鹽類，溶劑合物，對(duì)映體或前體藥物。
在具體的實(shí)施方案中，新的抗葉酸劑化合物為藥學(xué)上可接受的鹽形式。特別地，這些化合物可以為堿金屬鹽形式。在一個(gè)具體的實(shí)施
方案中，本發(fā)明涉及式(12)的抗葉酸劑化合物或其對(duì)映體，其為二鈉鹽形式。
本發(fā)明的其它實(shí)施方案涉及包含本文披露的一種或多種化合物的藥物組合物。例如，本發(fā)明提供了包含式(7)的化合物的藥物組合物。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了包含式(7)的化合物的藥物組合物，其中X為CH2， Yl5 丫2和丫3為0， V,和L為0， R!和112為H， R3為H， R4為H, Rs為H， Re為H， R7為H和Rs為H。在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含如本文所述的化合物，其為藥學(xué)上可接受的鹽形式，諸如堿金屬鹽，特別是二鈉鹽。在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了包含如本文所述的一種或多種化合物與一種或多種額外的活性組分的藥物組合物。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了各種治療方法，包括給予單獨(dú)的本發(fā)明一種或多種化合物或與一種或多種額外的活性組分的組合。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了治療諸如異常細(xì)胞增殖，炎癥，關(guān)節(jié)炎和哞喘這
14類病癥的方法。因此，本發(fā)明提供了治療選自常細(xì)胞增殖，炎癥，哮喘和關(guān)節(jié)炎的病癥的方法，其中該方法包括對(duì)有治療需要的受試者給予治療上有效治療異常細(xì)胞增殖，炎癥，哮喘或關(guān)節(jié)炎的用量的本發(fā)明化合物。
附圖簡(jiǎn)述
由于以一般術(shù)語描述了本發(fā)明，所以參照附圖，其不一定按比例
繪制并且其中
圖1為葉酸化合物代謝途徑和與可聚谷氨酰化的經(jīng)典抗葉酸劑相互作用的示意圖。
詳細(xì)描述
現(xiàn)在通過參照各種實(shí)施方案在下文中更完整地描述本發(fā)明。提供這些實(shí)施方案是為了使得本說明書更充分和完整并且對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員完整地傳達(dá)本發(fā)明的范圍。實(shí)際上，本發(fā)明可以以許多不同形式實(shí)施且不應(yīng)視為限于如本文所述的實(shí)施方案，而提供這些化合物是為了本說明書滿足適用法律的要求。除非在上下文中另有描述，否則本說明書和待批權(quán)利要求中的單數(shù)形式"一種(a)"，"一種(an)"，"該(the)"包括復(fù)數(shù)對(duì)應(yīng)物。
本發(fā)明提供了新型抗葉酸劑及其制備方法。這些新的化合物可以直接或以藥學(xué)上的活性酯類，酰胺類，鹽，溶劑合物或前體藥物的形式用于藥物組合物。這些新的化合物用于治療許多病癥和疾病，特別是治療異常細(xì)胞增殖，炎癥，關(guān)節(jié)炎或哮喘。
I.定義
本文所用的術(shù)語"代謝惰性抗葉酸劑"意指為(i)能夠破壞葉酸代謝的葉酸類似物和(ii)不可聚谷氨?；幕衔?。在某些實(shí)施方案中，該術(shù)語可以意指也為(iii)非-羥基化的化合物。
本文所用的術(shù)語"堿金屬"意指IA族元素并且特別包括鈉，鋰和鉀；本文所用的術(shù)語"堿金屬鹽"意指離子化合物，其中化合物的陽離子部分包含堿金屬，特別是鈉，鋰或鉀。
本文所用的術(shù)語"烷基"意指飽和直鏈，支鏈或環(huán)狀烴基。在具體 15的實(shí)施方案中，烷基意指包含i-io個(gè)碳原子的基團(tuán)("Ch?？踊?)。
在其它實(shí)施方案中，烷基意指包含1-8個(gè)碳原子("d—8烷基")，1-6 個(gè)碳原子("Cw烷基")或1 - 4個(gè)碳原子("d-4烷基")的基團(tuán)。在具體的 實(shí)施方案中，烷基意指甲基，三氟曱基，乙基，丙基，異丙基，環(huán)丙 基，丁基，異丁基，叔丁基，戊基，環(huán)戊基，異戊基，新戊基，己基， 異己基，環(huán)己基，環(huán)己基曱基，3-甲基戊基，2，2-二甲基丁基和2， 3-
二甲基丁基。取代的烷基意指被一個(gè)或多個(gè)部分取代的烷基，所述的 部分選自卣素(例如C1， F， Br和I);鹵代烷基(例如CF" 2-Br-乙基， CH2F， CH2C1, CH2CF3或CF2CF3;羥基；氨基；羧酸酯；曱酰氨基；烷氨
基；芳氨基；烷氧基；芳氧基；硝基；疊氮基；氰基；硫代；磺酸； 硫酸酯；膦酸；磷酸酯；和膦酸酯。
本文所用的術(shù)語"鏈烯基"意指烷基部分，其中至少一個(gè)飽和C-C 鍵被雙鍵取代。在具體的實(shí)施方案中，鏈烯基意指包含1 - 10個(gè)碳原 子的基團(tuán)("Cw。鏈烯基")。在其它實(shí)施方案中，烷基包含l-8個(gè)碳原 子("CH鏈烯基")，1-6個(gè)碳原子("CH鏈烯基")或1 - 4個(gè)碳原子("Cw 鏈烯基")的基團(tuán)。在具體的實(shí)施方案中，鏈烯基可以為乙烯基，烯丙 基，l-丙烯基，2-丙烯基，l-丁烯基，2-丁烯基，3-丁烯基，1-戊烯 基，2-戊烯基，3-戊烯基，4-戊烯基，l-己烯基，2-己烯基，3-己烯 基，4-己烯基或5-己烯基。
本文所用的術(shù)語"炔基"意指烷基部分，其中至少一個(gè)飽和C-C鍵 被三鍵取代。在具體的實(shí)施方案中，炔基意指包含1-IO個(gè)碳原子的 基團(tuán)("Ch?？旎?)。在其它實(shí)施方案中，炔基意指包含l-8個(gè)碳原子
8炔基")，l-6個(gè)碳原子("C卜6炔基")或1-4個(gè)碳原子("C,-4炔基
")的基團(tuán)。在具體的實(shí)施方案中，炔基可以為乙炔基，l-丙炔基，2-丙炔基，1-丁炔基，2-丁炔基，3-丁炔基，l-戊炔基，2-戊炔基，3-戊炔基，4-戊炔基，l-己炔基，2-己炔基，3-己炔基，4-己炔基或5-己炔基.
本文所用的術(shù)語"烷氧基"意指連接氧原子的直鏈或支鏈烷基(即 -0-烷基)，其中烷基如上所述。在具體的實(shí)施方案中，烷氧基意指包
16含1 - 10個(gè)碳原子的氧-連接的基團(tuán)("Cw。烷氧基")。在其它實(shí)施方案 中，烷氧基意指包含1 - 8個(gè)碳原子("d—s烷氧基")，1-6個(gè)碳原子("d—6 烷氧基")或1-4個(gè)碳原子("CH烷氧基")的氧-連接的基團(tuán)。
本文所用的術(shù)語"鹵素(halo)"或"鹵素(halogen)"意指氟，氯，
溴或碘。
本文所用的術(shù)語"芳基"意指在每個(gè)環(huán)上由至多8個(gè)成員組成的穩(wěn) 定的單環(huán)，雙環(huán)或三環(huán)碳環(huán)，其中至少一個(gè)環(huán)為通過Hiickel 4n+2規(guī) 則定義的芳族的。本發(fā)明的典型芳基包括苯基，萘基，四氫萘基和聯(lián) 苯基。芳基可以被一個(gè)或多個(gè)部分取代，所述的部分選自羥基，氨基， 烷氨基，芳氨基，烷氧基，芳氧基，硝基，氰基，磺酸，硫酸酯，膦 酸，磷酸酯或膦酸酯。
本文所用的術(shù)語"芳烷基"和"芳基烷基"意指通過如上述定義的烷 基與如上述定義的芳基連接的分子。
本文所用的術(shù)語"烷芳基"和"烷基芳基"意指通過如上述定義的芳 基與如上述定義的烷基連接的分子。
本文所用的術(shù)語"酰基"意指羧酸酯，其中酯基的非羰基部分選自 直鏈，支鏈或環(huán)狀烷基或低級(jí)烷基；烷氧基烷基，包括甲氧基曱基； 芳烷基，包括節(jié)基；芳氧基烷基，諸如苯氧基甲基；芳基，包括任選 被卣素，d-Ce烷基或d-C6烷氧基取代的苯基；磺酸酯類，諸如烷基 或芳烷基磺酰基，包括甲磺酰基；一-，二-或三磷酸酯；三苯甲基或 一曱氧基三苯曱基；取代的節(jié)基；三烷基甲硅烷基，諸如二甲基-叔丁 基甲硅烷基或二苯基甲基曱硅烷基。酯類中的芳基最佳地包含苯基。
本文所用的術(shù)語"氨基"意指由結(jié)構(gòu)NR2表示的部分并且包括被烷 基取代的伯胺類和仲和叔胺類(即烷氨基)。因此，R2可以表示兩個(gè)氫 原子，兩個(gè)烷基部分或一個(gè)氫原子和一個(gè)烷基部分。
本文所用的術(shù)語"烷氨基"和"芳氨基"意指分別具有一個(gè)或兩個(gè)烷 基或芳基取代基的氨基。
本文所用的術(shù)語"類似物"意指化合物，其中 一個(gè)或多個(gè)各原子或 官能基被不同原子或不同官能基所取代， 一般產(chǎn)生具有類似特性的化
17合物。
本文所用的術(shù)語"衍生物"意指通過使另一個(gè)分子或原子與起始化 合物連接由類似的起始化合物形成的化合物。此外，本發(fā)明的衍生物 包括通過添加一個(gè)或多個(gè)原子或分子或通過合并兩種或多種前體化合 物由前體化合物形成的 一種或多種化合物。
本文所用的術(shù)語"前體藥物"意指在對(duì)哺乳動(dòng)物給藥時(shí)完全或部分 轉(zhuǎn)化成本發(fā)明化合物的任意化合物。
本文所用的術(shù)語"活性代謝物"意指由本發(fā)明化合物或其前體藥物 在對(duì)哺乳動(dòng)物給予這類化合物或前體藥物時(shí)代謝產(chǎn)生的生理活性化合 物。
本文所用的術(shù)語"治療有效量"或"治療有效劑量"可互換使用并且 意指足以按照本文所述的治療方法引起期望的治療作用的本發(fā)明化合 物或其生物活性變體的濃度。
本文所用的術(shù)語"藥學(xué)上可接受的載體"意指在本領(lǐng)域中常用于有 利于生物活性劑儲(chǔ)存，給藥/或治愈作用的載體。
本文所用的術(shù)語"間歇性給藥"意指給予治療有效劑量的本發(fā)明組 合物，隨后有一定時(shí)間期限的中斷期，然后再給予治療有效劑量等。
本文所用的術(shù)語"抗增殖劑"意指減少細(xì)胞增殖過度的化合物。
本文所用的術(shù)語"異常細(xì)胞增殖"意指特征在于與未患該疾病或病 癥的個(gè)體中細(xì)胞類型或多種細(xì)胞類型相比一種或多種細(xì)胞類型不適當(dāng) 生長(zhǎng)或倍增的疾病或病癥。
本文所用的術(shù)語"癌癥"意指特征在于可以通過局部或通過血流和 淋巴系統(tǒng)擴(kuò)散至身體的其它部分所不受控制的異常細(xì)胞生長(zhǎng)的疾病或 病癥。該術(shù)語包括形成腫瘤或未形成腫瘤的癌癥并且包括各種類型的 癌癥，諸如原發(fā)性腫瘤和瘤轉(zhuǎn)移。
本文所用的術(shù)語"腫瘤"意指因不受控制和進(jìn)行性的過度細(xì)胞分裂 導(dǎo)致的多細(xì)胞生物體內(nèi)的異常細(xì)胞塊，也稱作新生物。腫瘤可以為良 性的或惡性的。
本文所用的術(shù)語"纖維變性病癥"意指完全或部分因成纖維細(xì)胞增
18殖導(dǎo)致的纖維化和纖維化的其它醫(yī)學(xué)并發(fā)癥。
本文所用的術(shù)語"關(guān)節(jié)炎"意指可以來源于感染，自身免疫或創(chuàng)傷 的侵害關(guān)節(jié)的炎性病癥。
II.化合物
本發(fā)明的化合物包括代謝惰性的抗葉酸劑。正如本領(lǐng)域公認(rèn)的， 抗葉酸劑為干擾葉酸代謝的不同階段的化合物。因此，本發(fā)明的化合 物特別可以用于藥物制劑，這些藥物制劑用于治療或能夠通過破壞葉 酸代謝或與葉酸代謝相關(guān)的其它生物學(xué)機(jī)制治療的疾病和病癥。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的新化合物包括具有式(7)中提供的結(jié) 構(gòu)的化合物及其藥學(xué)上可接受的酯，酰胺，鹽，溶劑合物，對(duì)映體和 前體藥物
其中
X為CHR9或NR9;
Y" 丫2和丫3獨(dú)立為0或S;
V,和V2獨(dú)立為0， S或NZ;
Z為H，任選取代的烷基，任選取代的鏈烯基，任選取代的炔基， 或烷芳基；
Id和R2獨(dú)立為H，任選取代的烷基，任選取代的鏈烯基，任選取 代的炔基，或烷芳基；
R3為H,任選取代的烷基，任選取代的鏈烯基，任選取代的炔基， 任選取代的烷氧基，羥基或卣素；且
R4, R5， R6， R7， Rs和R,獨(dú)立為H，任選取代的烷基，任選取代的 鏈烯基，任選取代的炔基，酰基，-C(0)-烷基，-C(O)-鏈烯基或-C(0)-
19炔基。
在另 一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的新化合物包括具有式(8)中提供的 結(jié)構(gòu)的化合物及其藥學(xué)上可接受的酯，酰胺，鹽，溶劑合物，和前體 藥物
/
R8 (8)
其中
X為CHR9或NR9;
R3為H,任選取代的烷基，任選取代的鏈烯基，任選取代的炔基， 任選取代的烷氧基，羥基或卣素；且
R4, R5， R6, R7， Rn和Rs獨(dú)立為H,任選取代的烷基，任選取4戈的 鏈烯基，任選取代的炔基，?；?，-C(0)-烷基，-c(o)-鏈烯基或-C(O)-炔基。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的新化合物包括具有式(9)中提供 的結(jié)構(gòu)的化合物及其藥學(xué)上可接受的酯，酰胺，鹽，溶劑合物，和前 體藥物
/
R8 (9)
其中
Y,, 丫2和Y3獨(dú)立為0或S; 、和L獨(dú)立為0， S或NZ;Z為H，任選取代的烷基，任選取代的鏈烯基，任選取代的炔基， 或烷芳基；
R、和IU獨(dú)立為H,任選取代的烷基，任選取代的鏈烯基，任選取 代的炔基，或烷芳基；且
R4, R5, R6， R,和R8獨(dú)立為H，任選取代的烷基，任選取代的鏈烯
基，任選取代的炔基，?；?c(o)-烷基，-c(o)-鏈烯基或-c(o)-炔基。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的新化合物包括具有式(io)中提供
的結(jié)構(gòu)的化合物及其藥學(xué)上可接受的酯，酰胺，鹽，溶劑合物，和前 體藥物
其中
X為CHR,或NR9;
Y" 丫2和Ys獨(dú)立為0或S;
V!和V2獨(dú)立為0， S或NZ;
Z為H，任選取代的烷基，任選取代的鏈烯基，任選取代的炔基， 或烷芳基；
R!和R2獨(dú)立為H,任選取代的烷基，任選取代的鏈烯基，任選取 代的炔基，或烷芳基；
R3為H,任選取代的烷基，任選取代的鏈烯基，任選取代的炔基， 任選取代的烷氧基，羥基或囟素；且
R,為H,任選取代的烷基，任選取代的鏈烯基，任選取代的炔基， ?；?C(O)-烷基，-C(O)-鏈烯基或-C(O)-炔基。
就式(7)-(10)而言，X優(yōu)選的實(shí)例包括-CH2-， -NH-， -CH(C卜6烷
21基)-，-N(C,—6烷基)-，-CH (C (0)-Ch烷基)-和-N (C (0)-d-6烷基)-;Z 的優(yōu)選實(shí)例包括H和d—6烷基；R,和R2的優(yōu)選實(shí)例獨(dú)立地包括H和Cw 烷基；R3的優(yōu)選實(shí)例包括H， Cw烷基，羥基和鹵素；且R" R5， R6， R7， Rs和Rg的優(yōu)選實(shí)例獨(dú)立地包括H， d-6烷基和-C(0)-d—6烷基，其中 d—6烷基各自可以任選被一個(gè)或多個(gè)鹵素(例如C1， F， Br和I);鹵代 烷基(例如CF" 2-Br-乙基,CH2F， CH2C1， CH2CF^ CF2CF3;羥基；氨 基；羧酸酯；甲酰氨基；烷氨基；芳氨基；烷氧基；芳氧基；硝基； 疊氮基；氰基；硫代；磺酸；硫酸酯；膦酸；磷酸酯；和膦酸酯取代。 在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了具有式(ll)中提供的結(jié) 構(gòu)的新型抗葉酸劑化合物，在本文中可以稱作CHL-003。式(ll)中的 星號(hào)表示手性原子。正如下文中更完整地描述的，這一手性點(diǎn)可以制 備對(duì)映體純形式的化合物的焦點(diǎn)。在沒有具體鑒定對(duì)映體純形式的情 況下，可以預(yù)計(jì)該化合物為外消旋形式。
合成抗葉酸劑化合物的各種方法披露在美國(guó)專利US4， 996， 207， 美國(guó)專利US5， 550, 128，美國(guó)專利US5， 593， 999, Abraham等(1991) J. Med. Chem. 34:222-227和Rosowsky等(1991) J. Med. Chem. 34:203-208中，將所有這些文獻(xiàn)引入本文作為參考。作為合成方法的 一個(gè)實(shí)例可以按照如下所示的反應(yīng)方案I制備式(ll)的化合物，其中 X為鹵素。
反應(yīng)方案I
22(I-Ol) (1 — 02) (卜03)
o
(I - 08) III.生物活性變體
上述化合物的生物活性變體也特別包括在本發(fā)明中。這類變體應(yīng)
保持原始化合物的一般生物活性；然而，存在額外的活性不一定限制 其在本發(fā)明中的應(yīng)用。可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公認(rèn)一般用于鑒定這 類活性的標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試方法和生物測(cè)定法評(píng)價(jià)這類活性。
按照本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，合適的生物活性變體包括一種或多 種上述化合物的類似物或衍生物。實(shí)際上，單一化合物，諸如上述那 些可以產(chǎn)生完整家族的具有類似活性的類似物或衍生物，且由此在本 發(fā)明具有有用性。同樣，單一化合物，諸如上述那些可以表示根據(jù)本 發(fā)明可用的更大類的單一家族成員。因此，本發(fā)明不僅完全包括上述 化合物，而且包括這類化合物的類似物和衍生物，特別是可通過本領(lǐng)域通常公知的方法鑒定并且本領(lǐng)域技術(shù)人員可公認(rèn)的那些。本文披露的化合物可以包含手性中心，其可以為(R)或(S)構(gòu)象中 的任一種或可以包含其混合物。因此，本發(fā)明還包括本文所迷化合物 的立體異構(gòu)體，如果合適，可以為單個(gè)的或任意比例的混合物。立體 異構(gòu)體可以包括，但不限于對(duì)映體，非對(duì)映體，外消旋混合物及其組 合?？梢允褂贸Ｒ?guī)技術(shù)，通過使對(duì)映體原料物質(zhì)反應(yīng)或通過分離本發(fā) 明化合物的異構(gòu)體制備和分離這類立體異構(gòu)體。異構(gòu)體可以包括幾何 異構(gòu)體。幾何異構(gòu)體的實(shí)例包括，但不限于通過雙鍵的順式異構(gòu)體或 反式異構(gòu)體。關(guān)注本發(fā)明化合物中的其它異構(gòu)體。這些異構(gòu)體可以以 純的形式或與本文所述化合物的其它異構(gòu)體的混合物形式使用。本領(lǐng)域中已知各種有用制備旋光活性形式和測(cè)定活性的方法。這i) 晶體的物理分離，其中手工分離各對(duì)映體的肉眼可見的晶體。 這項(xiàng)技術(shù)在單獨(dú)的對(duì)映體存在(即物質(zhì)為聚集物)且晶體特別在視覺上 不同時(shí)使用；ii) 同時(shí)結(jié)晶，其中使各對(duì)映體從外消旋物溶液中分別結(jié)晶，唯 一可能的條件是后者為固態(tài)聚集物；iii) 酶法拆分，其中通過對(duì)映體與酶的不同反應(yīng)速率部分或完全 分離外消旋物；iv) 酶法不對(duì)稱合成，即一種合成技術(shù)，其中合成中的至少一步 使用酶促反應(yīng)以便獲得對(duì)映體純或富含合成前體的所需對(duì)映體；v) 化學(xué)不對(duì)稱合成，其中在產(chǎn)生可以使用手性催化劑或手性助劑 獲得的產(chǎn)物中的不對(duì)稱性(即手性)的條件下由非手性前體合成期望的 對(duì)映體；vi) 非對(duì)映體分離，其中使外消旋化合物與將各對(duì)映體轉(zhuǎn)化成非 對(duì)映體的對(duì)映體純的試劑(手性助劑)反應(yīng)。然后通過色譜法或根據(jù)其 目前更多的不同結(jié)構(gòu)差異結(jié)晶分離所得非對(duì)映體且隨后除去手性助劑 而得到期望的對(duì)映體；vii) —級(jí)-和二級(jí)不對(duì)稱轉(zhuǎn)化，其中來自外消旋物的非對(duì)映體平 衡至產(chǎn)生在來自期望的對(duì)映體的非對(duì)映體溶液中占優(yōu)勢(shì)，或其中來自 期望的對(duì)映體的非對(duì)映體的優(yōu)先結(jié)晶干擾了平衡，使得最終基本上所 有的物質(zhì)均由期望的對(duì)映體被轉(zhuǎn)化成結(jié)晶的非對(duì)映體。期望的對(duì)映體 隨后從非對(duì)映體中釋放；viii) 動(dòng)力學(xué)拆分，包括通過對(duì)映體與手性，非外消旋試劑或催分拆分的化合物進(jìn)一步拆、分)；；'》<;5 ' ^;ix) 由非外消旋前體的對(duì)映體特異性合成，其中期望的對(duì)映體獲 自非手性原料物質(zhì)，并且其中立體化學(xué)完整性在合成過程中未受損或 僅受到最小的損害；x) 手性液相色譜法，其中在液體流動(dòng)相中根據(jù)其與固定相的差別 相互作用分離外消旋物的對(duì)映體。固定相可以由手性物質(zhì)構(gòu)成或固定 相可以包含額外的手性物質(zhì)以便引起差別相互作用；xi) 手性氣相色譜法，其中外消旋物為揮發(fā)性的并且根據(jù)其在氣 態(tài)固定相中與含固定非外消旋手性吸收劑相的柱的差別相互作用分離 對(duì)映體；xii) 用手性溶劑提取，其中通過一種對(duì)映體優(yōu)先溶于特定的手性 溶劑分離對(duì)映體；和xiii) 通過手性膜轉(zhuǎn)運(yùn)，其中將外消旋物以接觸薄膜屏障的方式 放置。該屏障一般可分離兩種可溶混的流體， 一種包含所述的外消旋 物，并且諸如濃度或壓力差這類驅(qū)動(dòng)力導(dǎo)致優(yōu)先通過所述的膜屏障轉(zhuǎn) 運(yùn)。分離作為僅允許外消旋物的一種對(duì)映體通過的膜的非外消旋手性 性質(zhì)的結(jié)果發(fā)生。可以以富含對(duì)映體的形式提供本發(fā)明的抗葉酸劑化合物，諸如對(duì) 映體混合物，其中一種對(duì)映體以過量存在(作為摩爾分?jǐn)?shù)或重量分?jǐn)?shù)給 出)。將對(duì)映體過量理解為存在化學(xué)物質(zhì)包含同一化合物的兩種對(duì)映體 且一種對(duì)映體以大于另一種對(duì)映體的量存在的情況。與外消旋混合物 不同，這些混合物將顯示凈旋光度。由于具有混合物的比旋光和純對(duì)25測(cè)定對(duì)映體過量(縮寫為"ee")。使用NMR光語法和手性柱色譜法能夠直接測(cè)定存在于混合物中 的各對(duì)映體的量。就式(11)的化合物而言，可以以外消旋形式或?qū)?R)或(S)異構(gòu)體 而言對(duì)映體純的形式提供本發(fā)明的化合物。下文的實(shí)施例2描述了式 (12)化合物的對(duì)映體純化的(S)異構(gòu)體的合成。實(shí)施例3描述了式(11) 的化合物的外消旋形式的合成。在具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物可以包括具有對(duì)于單一對(duì) 映體而言至少約75%的對(duì)映體純度的抗葉酸劑化合物。在其它實(shí)施方 案中，本發(fā)明的抗葉酸劑化合物具有至少約80%,至少約85%，至少約 90%，至少約95%，至少約96%，至少約97%，至少約98%，至少約99% 或至少約99. 5%的對(duì)映體純度。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物 包括對(duì)(S)異構(gòu)體而言具有這類對(duì)映體純度的抗葉酸劑化合物。在另一 個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物包括對(duì)(R)異構(gòu)體而言具有這類對(duì)映體 純度的抗葉酸劑化合物。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明包括化合 物(S) -N- {4- [2- (2, 4-二氨基-7H-吡咯并[2， 3-d]嘧啶-5-基)乙基]苯 甲?；鶀 -4-亞甲基-L-谷氨酸二鈉鹽。本文所述的化合物還可以為酯，酰胺，鹽，溶劑合物，前體藥物 或代謝物的形式，只要它們維持本發(fā)明的藥理學(xué)活性?？梢园凑找话?本々員i或公知的方'法，諸^口，例^口 J. March, Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms and Structure, 4th Ed. (New York: Wiley-Interscience，1992)中所述的那些方法制備本發(fā)明化合物的酯 類，酰胺類，鹽，溶劑合物，前體藥物和其它衍生物，將該文獻(xiàn)引入 本文作為參考。本發(fā)明中有用的化合物的藥學(xué)上可接受的鹽的實(shí)例包括酸加成的 鹽。不過，非藥學(xué)上可接受的酸的鹽可以用于制備和純化所述的化合 物。本發(fā)明合適的酸加成的鹽包括有機(jī)酸和無機(jī)酸。優(yōu)選的鹽包括由 鹽酸，氫溴酸，硫酸，磷酸，檸檬酸，酒石酸，乳酸，丙酮酸，乙酸， 琥珀酸，富馬酸，馬來酸，草酰乙酸，甲磺酸，乙磺酸，對(duì)甲苯磺酸，26苯磺酸和羥乙磺酸形成的那些鹽。其它有用的酸加成的鹽包括丙酸， 乙醇酸，草酸，蘋果酸，丙二酸，苯甲酸，肉桂酸，扁桃酸，水楊酸 等。藥學(xué)上可接受的鹽的具體實(shí)例包括，但不限于硫酸鹽，焦硫酸鹽， 硫酸氫鹽，亞疏酸鹽，亞硫酸氫鹽，磷酸鹽，磷酸一氫鹽，磷酸二氫 鹽，偏磷酸鹽，焦磷酸鹽，氯化物，溴化物，碘化物，乙酸鹽，丙酸 鹽，癸酸鹽，辛酸鹽，丙烯酸鹽，甲酸鹽，異丁酸鹽，己酸鹽，庚酸 鹽，丙炔酸鹽，草酸鹽，丙二酸鹽，琥珀酸鹽，辛二酸鹽，癸二酸鹽，富馬酸鹽，馬來酸鹽，丁炔-1，4-二酸鹽，己炔-1，6-二酸酸，苯甲酸 鹽，氯苯酸鹽，甲基苯甲酸鹽，二硝基苯曱酸鹽，羥基苯甲酸鹽，甲 氧基苯甲酸鹽，鄰苯二甲酸鹽，磺酸鹽，二甲苯磺酸鹽，苯乙酸鹽， 苯丙酸鹽，苯丁酸鹽，檸檬酸鹽，乳酸鹽，y-羥丁酸鹽，乙醇酸鹽， 酒石酸鹽，甲磺酸鹽，丙磺酸鹽，萘-1-磺酸鹽，萘-2-磺酸鹽和扁桃 酸鹽。可以通過用合適的堿處理將酸加成的鹽再轉(zhuǎn)化成游離堿。可以按 照類似方式，使用藥學(xué)上可接受的堿，諸如氫氧化鈉，氫氧化鉀，氫 氧化銨，氫氧化鈣，三乙胺等制備可以存在于本發(fā)明有用化合物上的 酸部分的堿式鹽?？梢酝ㄟ^可以存在于化合物分子結(jié)構(gòu)內(nèi)的羥基和/或羧基的官能 化制備本發(fā)明化合物的酯類。還可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的技術(shù) 制備酰胺類和前體藥物。例如，可以使用合適的胺反應(yīng)劑由酯類制備 酰胺類，或可以通過與氨或低級(jí)烷基烷反應(yīng)由酸酐或?；戎苽渌鼈?。 此外，可以通過與羰基化試劑(例如乙酸乙酯，乙酐，甲氧基乙酰氯， 苯甲酰氯，異氰酸甲酯，氯曱酸乙酯，甲磺酰氯)和合適的堿(例如4-二甲氨基吡啶，吡啶，三乙胺，碳酸鉀)在合適的有機(jī)溶劑(例如四氫 呋喃，丙酮，甲醇，吡啶，N，N-二甲基甲酰胺)在(TC - 60。C的溫度下 反應(yīng)制備本發(fā)明化合物的酯類和酰胺和酰胺類。 一般通過共價(jià)連接產(chǎn) 生治療上無活性，直到被個(gè)體代謝系統(tǒng)改變?yōu)橹沟幕衔锏牟糠种苽?前體藥物。藥學(xué)上可接受的溶劑合物的實(shí)例包括，但不限于本發(fā)明化 合物與水，異丙醇，乙醇，曱醇，DMSO，乙酸乙酯，乙酸或乙醇胺的27組合。就固體組合物而言，可以理解用于本發(fā)明組合物的化合物可以以不同形式存在。例如，這些化合物可以以穩(wěn)定和相對(duì)穩(wěn)定的晶型和各 向同性和非晶形的形式存在，所有這些均指定屬于本發(fā)明的范圍。如果本發(fā)明的化合物為堿，那么可以通過本領(lǐng)域公知的任意合適 的方法，包括用無機(jī)酸或用有機(jī)酸處理制備所需的鹽，所述的無機(jī)酸 諸如鹽酸，氫溴酸，硫酸，硝酸，磷酸等，所述的有機(jī)酸，諸如乙酸， 馬來酸，琥珀酸，扁桃酸，富馬酸，丙二酸，丙酮酸，草酸，乙醇酸，水楊酸，吡喃糖基酸，諸如葡糖醛酸和半乳糖醛酸，a羥酸，諸如檸 檬酸和酒石酸，氨基酸，天冬氨酸和谷氨酸，芳香酸，諸如苯曱酸和 肉桂酸，磺酸，諸如對(duì)曱苯磺酸或乙磺酸等。如果本發(fā)明的化合物為酸，那么可以通過本領(lǐng)域Z〉知的^f壬意合適 的方法，包括用無機(jī)或有機(jī)堿，諸如胺(伯，仲或叔)，堿金屬或堿土 金屬氫氧化物等處理制備所需的鹽。合適的鹽的例證性實(shí)例包括衍生 自氨基酸，諸如甘氨酸和精氨酸，氨、伯、仲和叔胺類和環(huán)胺類，諸 如哌啶，嗎啉和哌溱的有機(jī)鹽；和衍生自鈉，鈣，鉀，鎂，錳，鐵， 銅，鋅，鋁和鋰的無才幾鹽。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗葉酸劑化合物為鹽的形式。例如，該化合物可以為式(7),式(9)或式(10)的化合物，其中R" l和Z之一或全部被合適的成鹽陽離子取代。優(yōu)選所述的鹽為堿金屬 鹽，特別是鈉或鉀。在具體的實(shí)施方案中，所述的鹽為二鈉鹽。在下 面的式(12)中提供了用于本發(fā)明藥物組合物的特別優(yōu)選的二鈉鹽。當(dāng) 然，應(yīng)理解其他陽離子部分，特別是其它堿金屬可以用于鹽化合物。 例如，在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明包括式(ll)的化合物的鉀鹽。 下文的實(shí)施例2中描述了一種合成式(12)的化合物的方法。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，提供了對(duì)映體純化的(S)形式的式(12) 的化合物。特別地，本發(fā)明包括(S)-N-{4-[2-(2，4-二氨基-7H-吡咯 并[2， 3-d]嘧啶-5-基)乙基]苯甲?；鶀 -4-亞曱基-L-谷氨酸二鈉鹽(在 本文中可以稱作CHL1007)。
本發(fā)明進(jìn)一 步包括本發(fā)明化合物的前體藥物和活性代謝物。可以 將本文所述的化合物中的任意種作為前體藥物給藥以便增加該化合物 的活性，生物利用度或穩(wěn)定性，或者另外改變?cè)摶衔锏奶匦?。前體
的保護(hù)基的化合物。前體藥物包括可以被氧化，還原，氨基化，脫氨 基化，羥基化，脫羥基化，水解，脫水，烷基化，脫烷基化，?；?脫?；姿峄?或去磷酸化而產(chǎn)生活性化合物的化合物。在優(yōu)選的 實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物具有針對(duì)異常增殖細(xì)胞的抗增殖活性或 被代謝成表現(xiàn)出這類活性的化合物。
已知許多前體藥物配體。 一般而言，化合物，諸如游離胺或羧酸 殘基的一個(gè)或多個(gè)雜原子的烷基化，?；蚱渌H脂性修飾減小了極 性并且能夠具有進(jìn)入細(xì)胞的通道。可以取代游離胺和/或羧酸部分上的 一個(gè)或多個(gè)氫原子的取代基的實(shí)例包括，但不限于如下芳基；類固 醇；碳水化合物(包括糖類)；1,2-二?；视停淮碱?；酰基(包括低級(jí) ?；?；烷基(包括低級(jí)烷基)；磺酸酯類(包括烷基或芳基烷基磺?；?諸如甲磺?；推S基，其中苯基任選被如本文指定的芳基定義中提供 的一個(gè)或多個(gè)取代基取代)；任選取代的芳基磺?；?；脂質(zhì)(包括磷脂 類)；磷脂酰膽堿；磷酸膽堿；氨基酸殘基或衍生物；氨基酸?；鶜埢?或衍生物；肽類；膽固醇；或其它藥學(xué)上可接受的離去基，在體內(nèi)給 藥時(shí)，它們提供游離胺和/或羧酸部分。它們中的任意種可以與披露的
29化合物聯(lián)用以便獲得期望的作用。
IV.藥物組合物
盡管能夠以原料化學(xué)物質(zhì)形式給予本發(fā)明組合物中使用的各化合 物，但是優(yōu)選將化合物作為藥物組合物遞送。因此，本發(fā)明提供了包 含一種或多種如本文所述的化合物的藥物組合物。照此，本發(fā)明的組 合物包含如上所述的藥物活性化合物或其藥學(xué)上可接受的酯類，酰胺 類，鹽，溶劑合物，類似物，衍生物或前體藥物。此外，可以制備本 發(fā)明的組合物并且以各種組合形式遞送。例如，該組合物可以包含含 有所有活性組分的單一組合物，可選擇地，該組合物可以包含含有單 獨(dú)的活性組分，但指定同時(shí)，連續(xù)，或者另外在接近的時(shí)間給予的活 性組分的多種組成。
可以制備本發(fā)明的化合物并且將其與一種或多種藥學(xué)上可接受的
載體和任選的其它治療組分一起遞送。載體應(yīng)為可接受的，即它們與 組合物中的任意其它組分相容并且對(duì)其接受者而言無害。載體還可以 減少所述活性劑的任何不需要的副作用。這類載體為本領(lǐng)域公知的。
參見Wang等(198t)) J. Parent. Drug Assn. 34 (6): 452-462,將該 文獻(xiàn)完整地引入作為參考。
本發(fā)明的組合物可以包括短效，快速起作用，快速補(bǔ)充，控釋， 延緩釋放和脈沖釋放組合物，只要這些組合物能夠?qū)崿F(xiàn)如本文所述的 化合物的給藥。參見Remington 's Pharmaceutical Sciences (18th ed.; Mack Publishing Company, Eaton, Pennsylvania, 1990)， 將 該文獻(xiàn)完整地引入作為參考。
本發(fā)明的藥物組合物適合于各種遞送模式，包括口服，非腸道(包 括靜脈內(nèi)，肌內(nèi)，皮下，真皮內(nèi)，關(guān)節(jié)內(nèi)，滑膜內(nèi)，鞘內(nèi)，動(dòng)脈內(nèi)， 心內(nèi)，皮下，目匡內(nèi)，嚢內(nèi)，脊柱內(nèi)，胸骨內(nèi)(intrastemal )和透皮)， 局部(包括皮膚，口含和舌下)，陰道，尿道和直腸給藥。還可以提供 鼻部噴霧，手術(shù)植入物，體內(nèi)手術(shù)涂料，輸注泵或提供導(dǎo)管，支架， 氣嚢或其它遞送裝置給藥。最有用和/或有益的給藥模式可以改變，尤 其是取決于接受者的情況和所治療的病癥。
30可以便利地以單位劑型的形式得到藥物組合物，其中這類組合物 可以通過制藥領(lǐng)域中一般公知的方法中的任意種制備。
一般而言，這
種或多種組成組成的合適的栽體或其它佐劑。然后用物理方式處理活 性組分與一種或多種佐劑的組合以便提供適合于遞送形式的組合物 (例如成形為片劑或形成含水混懸液)。
適合于口服劑量的本發(fā)明藥物組合物可以采取各種形式，諸如片 劑，膠嚢，膠嚢形片劑和糯米紙嚢劑(包括速溶或泡騰)，它們各自包 含預(yù)定量的活性劑。這些組合物還可以為粉末或顆粒，在水或非水液 體中的溶液或混懸液形式和液體乳劑(水包油型和油包水型)。還可以 將活性劑作為大丸劑藥糖劑或糊劑遞送。 一般可以理解制備上述劑型 的方法為本領(lǐng)域一般公知的并且任意這類方法均可以適合于制備用于 遞送本發(fā)明組合物的相應(yīng)劑型。
在一個(gè)實(shí)施方案中，通過口服給予化合物與藥學(xué)上可接受的媒介 物，諸如惰性稀釋劑或可食用栽體的組合?？梢詫⒖诜M合物包封在 硬或軟膠囊中，可以壓制稱片劑或可以直接摻入患者膳食的食物中。
可以改變組合物和制劑的百分比；然而，在這類治療有用的組合物中 的物質(zhì)的量?jī)?yōu)選使得可以獲得有效劑量水平。
可以使用生理可降解的組成，諸如明膠制備包含所述化合物的硬 膠嚢。這類硬膠嚢包含所述的化合物并且可以進(jìn)一步包含額外的組分， 包括，例如，惰性固體稀釋劑，諸如碳酸釣，磷酸釣或高嶺土?？梢?使用生理學(xué)可降解的組成，諸如明膠制備包含所述的化合物的軟膠嚢。 這類軟膠嚢包含所述的化合物，可以混合水或油介質(zhì)，諸如花生油， 液體石蠟或橄欖油。
設(shè)計(jì)極快溶解的舌下片。這類組合物的實(shí)例包括麥角胺酒石酸鹽， 硝酸異山梨酯和異丙腎上腺素HCL。這些片劑的組成除所述的藥物外 還包含各種可溶性賦形劑，諸如乳糖，蔗糖粉，葡萄糖和甘露糖醇。
但不限于纖維素聚:物(諸如乙酸鄰苯二甲酸纖維素，羥丙l纖維素，羥丙基曱基纖維素，鄰苯二甲酸羥丙基甲基纖維素和乙酸琥珀酸羥丙 基甲基纖維素)，聚乙烯乙酸酯鄰苯二曱酸酯，丙烯酸聚合物和共聚物
和曱基丙烯酸樹脂(諸如在商品名EUDRAGIT⑧下商購(gòu)的那些)，玉米醇 溶蛋白，蟲膠和多糖類。
可以使用公知方法制備本發(fā)明藥物制劑的粉末和顆粒組合物?？?以將這類組合物直接對(duì)患者給藥或用于制備進(jìn)一步的劑型，諸如制成 片劑，填充膠嚢或通過向其中添加水或油媒介物制備水或油混懸液或 溶液。這些組合物各自可以進(jìn)一步包含一種或多種添加劑，諸如分散 或濕潤(rùn)劑，懸浮劑和防腐劑。在這些組合物中還可以包括額外的賦形 劑(例如填充劑，甜味劑，矯味劑或著色劑)。
可以以液體形式或指定在使用前用水或另 一種合適的媒介物再溶 解的干品形式制備，包裝并且銷售適合于口服給藥的藥物組合物的液 體組合物。
可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員易于了解的任意標(biāo)準(zhǔn)方法，諸如，例如 通過任選與 一種或多種佐劑或輔助組分一起壓制或模制制備包含本發(fā) 明 一種或多種化合物的片劑。這些片劑可以任選被包衣或刻痕并且可 以配制成可提供活性劑的緩釋或控釋。
為可接受的任意制藥組分，諸:口粘合劑，i充劑，潤(rùn)滑劑:崩解劑:
稀釋劑，表面活性劑，穩(wěn)定劑，防腐劑，矯味劑和著色劑等。粘合劑 一般用于有利于片劑的粘著性并且確保片劑在壓制后保持完整。合適 的粘合劑包括，但不限于淀粉，多糖類，明膠，聚乙二醇，丙二醇， 蠟和天然和合成樹膠?？山邮艿奶畛鋭┌ǘ趸瑁趸?，氧 化鋁，滑石粉，高嶺土，粉狀纖維素和微晶纖維素，乙基可溶性物質(zhì)， 諸如甘露糖醇，脲，蔗糖，乳糖，葡萄糖，氯化鈉和山梨醇。潤(rùn)滑劑 用于有利于片劑制備并且包括植物油，甘油，硬脂酸鎂，硬脂酸釣和 硬脂酸。用于有利于片劑崩解的崩解劑一般包括淀粉，粘土，纖維素， 藻膠，樹膠和交聯(lián)聚合物。 一般包括以便給片劑提供容積的稀釋劑可 以包括磷酸二釣，硫酸釣，乳糖，纖維素，高嶺土，甘露糖醇，氯化鈉，干淀粉和糖粉。適用于本發(fā)明組合物的表面活性劑可以為陰離子 型，陽離子型，兩性或非離子型表面活性劑。組合物中可以包括穩(wěn)定 劑以便抑制或減少導(dǎo)致活性劑分解的反應(yīng)，諸如氧化反應(yīng)。
可以將固體劑型配制稱提供活性劑的延緩釋放，諸如通過涂布包 衣層。延緩釋放包衣層為本領(lǐng)域公知的并且可以通過任意公知的合適 的方法制備包含這類包衣層的劑型。這類方法一般包括，在制備固體 劑型(例如片劑或膠嚢形片劑)后，涂布包含延緩釋放包衣層的組合物。 涂布可以通過諸如真空噴霧，流化床包衣，使用包衣鍋等這類方法進(jìn) 行。用作延緩釋放包衣層的材料可以具有聚合物性質(zhì)，諸如纖維素質(zhì) 材料(例如丁酸鄰苯二曱酸纖維素，鄰苯二曱酸羥丙基曱基纖維素和羧 甲基乙基纖維素)和丙烯酸，甲基丙烯酸及其酯類的聚合物和共聚物。
性劑)并且可以為，也可以不為延緩釋放的。緩釋組合物為本領(lǐng)域中公 知的并且一般通過將藥物分散于可逐步降解的或可水解的材料，諸如 不溶性塑料，親水性聚合物或脂肪化合物基質(zhì)內(nèi)制備?？蛇x擇地，可 以用這類材料給固體劑型包衣。
用于非腸道給藥的組合物包括水和非水的》菌注射溶液，其可以 進(jìn)一步包含額外的試劑，諸如抗氧化劑，緩沖劑，制菌劑和溶質(zhì)，它 們可以賦予組合物與指定接受者的血液等滲。這些組合物可以包括水 和非水無菌混懸液，其包含懸浮劑和增稠劑?？梢詫⒂糜诜悄c道給藥 的這類組合物提供在單位劑量或多劑量容器中，諸如，例如，密封安 瓿和小瓶并且可以儲(chǔ)存在冷凍干燥(凍干)條件下，僅需要在使用前即 刻添加無菌液體載體，例如水(注射用)?？梢杂缮鲜鲱愋偷臒o菌粉末， 顆粒和片劑制備臨時(shí)注射用溶液和混懸液。
還可以提供透皮方式給藥本發(fā)明的組合物，其中將活性劑摻入層 狀結(jié)構(gòu)(一般稱作"貼劑")，它適合于保持與接受者表皮接觸延長(zhǎng)的時(shí) 間期限。 一般而言，這類貼劑作為單層"粘合劑包藥物型"貼劑或作為 多層貼劑獲得，在所述的多層中，活性劑包含在與粘合劑層隔離的層 中。例證類型的貼劑一般還包含裱背層和在附著于接受者皮膚前可除去的襯層。透皮遞藥貼劑還可以由位于裱背層下面的通過半透膜和粘 合層與接受者皮膚隔離的儲(chǔ)器構(gòu)成。透皮遞藥可以通過被動(dòng)擴(kuò)散進(jìn)行 或可以使用電轉(zhuǎn)運(yùn)或離子透入法促進(jìn)。
用于直腸遞送本發(fā)明組合物的組合物包括直腸栓劑，霜?jiǎng)?，軟?劑和液體?？梢詫⑺▌┲瞥苫钚詣┡c本領(lǐng)域一般公知的載體，諸如聚 乙二醇的組合?？梢詫⑦@類劑型設(shè)計(jì)稱快速或在延長(zhǎng)時(shí)間期限內(nèi)崩解，
并且完全崩解所需的時(shí)間可以從短時(shí)間，諸如約1 o分鐘到延長(zhǎng)時(shí)間期 限，諸如約6小時(shí)。
典型組合物可以為本領(lǐng)域中適合于和易于將活性劑遞送至身體表 面的任意形式，包括表皮，口含和舌下。局部組合物典型實(shí)例包括軟 膏劑，霜?jiǎng)z，糊劑和溶液。用于口腔內(nèi)局部遞送的組合物還包 括錠劑。
在某些實(shí)施方案中，可以通過醫(yī)療裝置遞送本文披露的化合物和 組合物。這類遞送一般可以通過任意可插入或可植入的醫(yī)療裝置進(jìn)行， 包括，但不限于支架，導(dǎo)管，氣嚢型導(dǎo)管，分流器或線圏。在一個(gè)實(shí) 施方案中，本發(fā)明提供了醫(yī)療裝置，諸如支架，其表面上涂敷了如本 文所述的化合物或組合物。本發(fā)明的醫(yī)療裝置可以用于，例如治療， 預(yù)防，或者其他影響疾病或病癥過程，諸如本文披露的那些的任意應(yīng) 用。
在本發(fā)明的另 一個(gè)實(shí)施方案中，可以以間歇方式給予包含本文所 述的一種或多種化合物的藥物組合物?？梢砸赃B續(xù)方式，例如使用緩 釋組合物給予治療有效劑量，或可以按照期望的每日劑量方案，例如 作為每天一次，兩次，三次或三次以上進(jìn)行。所謂"中斷的時(shí)間期限" 指定為中斷連續(xù)的組合物緩釋或每日給藥。中斷的時(shí)間期限可以長(zhǎng)于 或短于連續(xù)緩釋或每日給藥的期限。在中斷的時(shí)間期限過程中，相關(guān) 組織中組合物中成分的水平基本上低于治療過程中獲得的最高水平。 中斷期限的優(yōu)選長(zhǎng)度取決于有效劑量的濃度和所用的組合物形式。中 斷的期限可以至少為2天，至少4天或至少l周。在其它實(shí)施方案中， 中斷的期限至少為l個(gè)月，2個(gè)月，3個(gè)月，4個(gè)月或4個(gè)月以上。當(dāng)
34使用緩釋制組合物時(shí)，必須延長(zhǎng)中斷的期限以補(bǔ)償組合物在體內(nèi)的較 長(zhǎng)阻滯時(shí)間?？蛇x擇地，由此可以降低緩釋組合物有效劑量的給藥頻 率。本發(fā)明組合物的間歇給藥方案可以持續(xù)至實(shí)現(xiàn)期望的治療作用和 最終治療所述疾病或病癥。
本發(fā)明組合物的給藥包括給予如本文所述的單一藥物活性化合
物；給予如本文所述的藥物活性化合物與一種或多種本文所述的額外 的藥物活性化合物；或給予一種或多種本文所述的藥物活性化合物與 一種或多種額外的藥物活性化合物的聯(lián)合用藥(即共同給藥)。因此， 認(rèn)為可以以固定的組合給予本發(fā)明組合物中的藥物活性化合物(即包 含兩種活性物質(zhì)的單一藥物組合物)?？蛇x擇地，可以同時(shí)給予所述的 藥物活性化合物(即同時(shí)給予單獨(dú)的組合物)。在另 一個(gè)實(shí)施方案中， 依次給予所述的藥物活性化合物(即在給予一種或多種藥物活性化合 物后單獨(dú)給予一種或多種藥物活性化合物)。本領(lǐng)域技術(shù)人員認(rèn)為最優(yōu) 選的給藥方法能夠?qū)崿F(xiàn)期望的治療作用。
可以通過給予治療有效劑量的組合物獲得本發(fā)明治療有效量的組 合物的遞送。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，治療有效量為有效治療異常 細(xì)胞增殖的用量。在另一個(gè)實(shí)施方案中，治療有效量為有效治療炎癥 的用量。在另一個(gè)實(shí)施方案中，治療有效量為有效治療關(guān)節(jié)炎的用量。 在另一個(gè)實(shí)施方案中，治療有效量為有效治療哮喘的用量。
活性化合物以足以在沒有嚴(yán)重毒性作用的情況下在患者體內(nèi)遞送 本發(fā)明化合物的治療用量的用量包括在藥物組合物中。藥物組合物中 活性化合物的濃度取決于該藥物的吸收，失活和排泄速率以及本領(lǐng)域 技術(shù)人員公知的其它因素。應(yīng)注意劑量值也隨所緩解的病癥的嚴(yán)重性 的不同而改變。進(jìn)一步應(yīng)理解對(duì)任何具體受試者而言，應(yīng)按照個(gè)體需 要和給予或監(jiān)督組合物給藥的專業(yè)判斷調(diào)整具體的劑量方案，并且本 文所述的劑量范圍僅為典型的并且并不指定用于限制請(qǐng)求保護(hù)的組合 物的范圍或?qū)嵤?。可以即刻給予活性組分或?qū)⑵浞殖稍S多較小劑量在 不同時(shí)間間隔給予。
可以基于接受者體重確定本發(fā)明的治療有效量。例如，在一個(gè)實(shí)
35約0.1 ug/kg 體重-約5mg/kg體重/天的范圍?？蛇x擇地，可以以固定劑量的方式 描述治療有效量。因此，在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的一種或多種 化合物的治療有效量在約0. 01 mg-約500 mg/天。當(dāng)然，應(yīng)理解可以
將這類用量分成許多較小劑量在全天內(nèi)給予。可以基于所遞送的母體 核苷的重量計(jì)算藥學(xué)上可接受的鹽和前體藥物的有效劑量范圍。如果 鹽或前體藥物自身表現(xiàn)出活性，那么可以如上述使用鹽或前體藥物的 重量或通過本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的其它方式估計(jì)有效劑量。
關(guān)注可以以治療有效量將包含本文所述的本發(fā)明一種或多種化合 物的組合物給予哺乳動(dòng)物，優(yōu)選人。用于治療本文所述的任意病癥或 疾病的化合物或組合物的有效劑量易于通過使用常規(guī)技術(shù)并且根據(jù)在 類似情況下獲得的觀察結(jié)果確定?？梢灶A(yù)計(jì)組合物的有效量根據(jù)受試 者的體重，性別，年齡和醫(yī)療史的不同而改變。當(dāng)然，其它因素也可 以影響遞送的組合物的有效量，包括，但不限于涉及的具體疾病，涉 及的程度或疾病的嚴(yán)重性，個(gè)體患者的反應(yīng)，給予的具體化合物，給 藥方式，給予制劑的生物利用度特征，選擇的劑量方案和伴隨使用的 藥物。優(yōu)選將化合物給予足夠的時(shí)間期限以便緩解與所治療病癥相關(guān) 的不需要的癥狀和臨床體征。測(cè)定功效和劑量的方法為本領(lǐng)域技術(shù)人 員公知的。例如,參見Isselbacher等(1996) Harrison ' s Principles of Internal Medicine 13 ed. ， 1814-1882，將該文獻(xiàn)引入作為參考。
V.活性劑組合
在治療本發(fā)明的各種疾病或病癥的過程中，可以以不同組合的形 式給予本文披露的化合物。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合 物可以包含本文所述的單一化合物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的 組合物可以包含本發(fā)明的兩種或多種化合物。在其它實(shí)施方案中，本 發(fā)明的組合物可以包含本文所述的一種或多種化合物與已知具有治療 特性的一種或多種額外的化合物。例如，可以將本文所述的化合物與 一種或多種降低毒性的化合物一起給藥(例如葉酸或亞葉酸)。在其它 實(shí)施方案中，可以將本文所述的化合物與已知為抗炎藥，抗關(guān)節(jié)炎藥，抗生素，抗真菌藥或抗病毒藥的一種或多種化合物一起給予。可以以 與本發(fā)明的化合物組合或可替代的形式提供這類額外的化合物。在具 體的實(shí)施方案中，可以將本發(fā)明的化合物與一種或多種選自下述組的 化合物聯(lián)合提供。
在上述描述中，用于與本發(fā)明化合物聯(lián)用的某些化合物可以參照 通常使用所關(guān)注的化合物治療的具體疾病或病癥描述。對(duì)這類疾病或 病癥的披露內(nèi)容并非指定用于限制本發(fā)明的范圍并且并非特別地限制 可以使用本文披露的聯(lián)合用藥治療的疾病或病癥。而提供這類舉例的 疾病或病癥僅是為了例證一般可以使用額外化合物治療疾病和病癥的 類型。
在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物可以組合或可替代地與抗增 殖藥聯(lián)用。目前使用各種類型的化合物治療增殖性病癥，包括烷化劑， 抗代謝藥，天然產(chǎn)物，酶，生物應(yīng)答調(diào)節(jié)劑，各種藥劑，放射性藥物(例
如，標(biāo)記激素或抗體的Y-90)，激素和拮抗劑。如例如在DeVita，V. T.， Jr. ，Hellmann，S. ，Rosenberg,S. A. ; Cancer: Principles &Practice of Oncology, 5th ed. ， Lippincott-Raven Publishers (1997)中所 述的任意下列抗增殖藥或任意其它這類治療劑和成分可以與本發(fā)明的 化合物聯(lián)用。
制性實(shí)例包括，但不限于視黃酸及其衍生物，2-視黃酸，ANGI0STATIN
蛋白，endostatintm蛋白，舒拉明，角篁胺，金屬蛋白酶-i組織抑制
劑，金屬蛋白酶-2組織抑制劑，纖溶酶原激活物抑制劑-1，纖溶酶原 激活物抑制劑-2，軟骨-衍生的抑制劑，紫杉醇，血小板因子4，硫酸 魚精蛋白(緋精蛋白)，硫酸化殼多糖衍生物(由母蟹殼(queen crab shells)制備)，硫酸化多糖肽多糖復(fù)合物(sp-pg)，星狀孢子素，基 質(zhì)代謝調(diào)節(jié)劑，包括，例如，脯氨酸類似物(1-氮雜環(huán)丁烷-2-曱酸 (LACA)，順式-羥脯氨酸)，d， 1-3， 4-脫氫脯氨酸，硫雜脯氨酸，(，(-聯(lián)吡啶，P -氨基丙腈富馬酸鹽，4-丙基-5- (4-吡啶基)-2 (3h)-噁唑酮， 甲氨蝶呤，米托蒽醌，肝素，干擾素，2巨球蛋白-血清，chimp-3，
37抑糜酶素，P環(huán)糊精十四硫酸鹽，eponemycin，夫馬潔林，硫代蘋果 酸金鈉，d-青霉胺(CDPT)， l-抗膠原酶-血清，a-2-抗纖維蛋白溶 酶，比生群，氯苯扎利二鈉，n-(2-羧基苯基-4-氯鄰氨基苯甲酸 (anthronilic acid ) 二鈉或"CCA"，沙利度胺，血管穩(wěn)定類固醇 (angostat ic steroid )，羧氨基咪哇(cargboxynaminoImidazole )， 金屬蛋白酶抑制劑，諸如BB94。其它血管生成抑制劑包括抗體，優(yōu)選 針對(duì)這些血管生長(zhǎng)因子的單克隆抗體bFGF， aFGF， FGF-5， VEGF同 種型，VEGF-C, HGF/SF和Ang-l/Ang-2。 Ferrara N.和Alitalo， K. "Clinical application of angiogenic growth factors and their inhibitors" (1999) Nature Medicine 5:1359-1364。
包括，但不限于氮芥，諸如氮芥(何杰金病，非何杰金淋巴瘤)，環(huán)磷 酰胺，異環(huán)磷酰胺(急性和慢性淋巴細(xì)胞白血病，何杰金病，非何杰金 淋巴瘤，多發(fā)性骨髓瘤，神經(jīng)母細(xì)胞瘤，乳腺，卵巢，肺，維爾姆斯 瘤，宮頸，睪丸，軟組織肉瘤)，美法侖(L-沙可來新)(多發(fā)性骨髓瘤， 乳腺，卵巢)，苯丁酸氮芥(慢性淋巴細(xì)胞白血病，原發(fā)性巨球蛋白血 癥，何杰金病，非何杰金淋巴瘤)，乙烯亞胺類和甲基蜜胺類，諸如六 甲蜜胺(卵巢)，塞替派(膀胱，乳腺，卵巢)，磺酸烷基酯，諸如白消 安(慢性粒細(xì)胞白血病)，亞硝基脲類，諸如卡莫司汀(BCNU)(何杰金病， 非何杰金淋巴瘤，原發(fā)性腦瘤，多發(fā)性骨髓瘤，惡性黑素瘤)，洛莫司 汀(CCNU)(何杰金病，非何杰金淋巴瘤，原發(fā)性腦瘤，小細(xì)胞肺)，司 莫司汀(甲基-CCNU)(原發(fā)性腦瘤，胃，結(jié)腸)，鏈佐星(STR)(惡性胰腺 胰島素瘤，惡性類癌(carcinoin),三氮烯類，諸如達(dá)卡巴嗪(DTIC-二曱基三氮烯咪唑-甲酰胺)(惡性黑素瘤，何杰金病，軟組織肉瘤)。 適用于與本發(fā)明化合物聯(lián)用的抗代謝藥的有代表性的非限制性實(shí)
例包括，但不限于葉酸類似物，諸如甲氨蝶呤(氨曱蝶呤)(急性淋巴細(xì) 胞白血病，絨毛膜癌，蕈樣真菌病，乳腺，頭頸，肺，成骨性肉瘤)， 嘧啶類似物，諸如氟尿嘧啶(5-氟尿嘧啶-5-FU)氟尿苷(氟脫氧尿苷 -FUdR)(乳腺，結(jié)腸，胃，胰腺，卵巢，頭頸，膀胱，惡變前皮膚病損)(局部)，阿糖胞苷(胞嘧啶阿糖核苷)(急性粒細(xì)胞性白血病和急性淋巴細(xì)
胞白血病)，噤呤類似物和相關(guān)抑制劑，諸如巰嘌呤(6-巰嘌呤 -6-MP)(急性淋巴細(xì)胞白血病，急性粒細(xì)胞性白血病和慢性粒細(xì)胞白血 病)，硫鳥嘌呤(6-硫鳥嘌呤-TG)(急性淋巴細(xì)胞白血病，急性淋巴細(xì) 胞白血病和慢性粒細(xì)胞白血病)，噴司他丁 (2'-脫氧助間型霉素 (deoxycyoformycin ))(多毛細(xì)胞白血病，蕈樣真菌病，慢性淋巴細(xì) 胞白血病)，長(zhǎng)春花生物堿類，諸如長(zhǎng)春堿(VLB)(何杰金病，非何杰金 淋巴瘤，乳腺，睪丸)，長(zhǎng)春新堿(急性淋巴細(xì)胞白血病，神經(jīng)母細(xì)胞 瘤，腎母細(xì)胞瘤，橫紋肌肉瘤，何杰金病，非何杰金淋巴瘤，小細(xì)胞 肺)，表鬼臼毒素，諸如依托泊苷(睪丸，小細(xì)胞肺和其它肺，乳腺， 何杰金病，非何杰金淋巴瘤，急性粒細(xì)胞性白血病，卡波西肉瘤)，替 尼泊苷(睪丸，小細(xì)胞肺和其它肺，乳腺，何杰金病，非何杰金淋巴瘤， 急性粒細(xì)胞性白血病，卡波西肉瘤)。
適用于與本發(fā)明化合物聯(lián)用的細(xì)胞毒性劑的有代表性的非限制性 實(shí)例包括，但不限于多柔比星，卡莫司汀(BCNU)，洛莫司汀(CCNU)， 阿糖胞苷USP，環(huán)磷酰胺，磷雌氮芥(estramucine phosphate sodium )， 六曱蜜胺，羥基脲，異環(huán)磷酰胺，丙卡巴肼，絲裂霉素，白消安，環(huán) 磷酰胺，米托蒽醌，卡鉑，順鉑，干擾素a-2a重組體，紫杉醇，替 尼泊脊和鏈佐星(streptozoci )。
例包括，但^限于抗生素，諸如更^霉素(放線菌素D)、(絨毛膜癌， 腎母細(xì)胞瘤，橫紋肌肉瘤，睪丸，卡波西肉瘤)，柔紅霉素(道諾霉素-紅比霉素)(急性粒細(xì)胞性白血病和急性淋巴細(xì)胞白血病)，多柔比星 (軟組織，成骨性肉瘤和其它肉瘤，何杰金病，非何杰金淋巴瘤，急性 白血病，乳腺，泌尿生殖器，甲狀腺，肺，胃，神經(jīng)母細(xì)胞瘤)，博來 霉素(睪丸，頭頸，皮膚和食道，肺和生殖泌尿道，何杰金病，非何杰 金淋巴瘤)，普卡霉素(光輝霉素)(睪丸，惡性血鈣過多)，絲裂霉素(絲 裂霉素C)(胃，宮頸，結(jié)腸，乳腺，胰腺，膀胱，頭頸)，酶，諸如L-天冬酰胺酶(急性淋巴細(xì)胞白血病)，生物應(yīng)答調(diào)節(jié)劑，諸如干擾素oc(多毛細(xì)胞白血病，卡波西肉瘤，黑素瘤，類癌，腎細(xì)胞，卵巢,膀胱， 非何杰金淋巴瘤，蕈樣真菌病，多發(fā)性骨髓瘤，慢性粒細(xì)胞白血病)。 可以用于與本文披露的化合物聯(lián)用或替代應(yīng)用的額外的活性劑包
括，但不限于鈾配位絡(luò)合物，諸如順柏(順式-DDP),卡鉑(睪丸，卵 巢，膀胱，頭頸，肺，甲狀腺，宮頸，子宮內(nèi)膜，神經(jīng)母細(xì)胞瘤，成 骨性肉瘤)；蒽二酮，諸如米托蒽醌(Mixtozantrone)(急性粒細(xì)胞性 白血病，如乳腺)；取代的脲，諸如羥基脲(慢性粒細(xì)胞白血病，真性 紅細(xì)胞增多癥，特發(fā)性血小板增多，惡性黑素瘤)；丙卡巴肼衍生物， 諸如丙卡巴肼(N-丙卡巴肼，MIH)(何杰金病)；腎上腺皮質(zhì)抑制劑，諸 如米托坦(o,p'-DDD)(腎上腺皮質(zhì))，氨魯米特(乳腺)；腎上腺皮質(zhì)類 固醇(Adrenorticosteriods )，諸如潑尼+> (急性和慢性淋巴細(xì)胞白 血病，非何杰金淋巴瘤，何杰金病，乳腺)；黃體酮，諸如己酸羥孕酮， 醋酸甲羥孕酮，醋酸甲地孕酮(子宮內(nèi)膜，乳腺)；類固醇，諸如，包 括倍他米松磷酸鈉和醋酸倍他米松。
可以用于與本文披露的化合物聯(lián)用的激素和拮抗劑的有代表性的 非限制性實(shí)例包括，但不限于雌激素己烯雌酚，炔雌醇(乳腺，前 列腺)；抗雌激素他莫昔芬(乳腺)；雄激素丙酸睪酮， Fluxomyesterone (乳腺)；丙酸睪酮氟他胺(前列腺)；促性腺素釋 放素類似物亮丙瑞林(前列腺)。其它激素包括醋酸甲羥孕酮，雌二 醇，醋酸曱地孕酮，醋酸奧曲肽，二磷酸己烯雌酚，睪內(nèi)酯和醋酸戈 舍瑞林。
本發(fā)明的化合物可以與用于治療關(guān)節(jié)炎的治療劑聯(lián)用或替代使 用。這類活性劑的實(shí)例包括，但不限于如下
非類固醇消炎藥(NSAIDs)，諸如環(huán)氧化酶-2(C0X-2)抑制劑，阿司 匹林(乙酰水楊酸)，布洛芬，酮洛芬和萘普生；
止痛藥，諸如對(duì)乙酰氨基酚，阿片類止痛劑和透皮芬太尼；
生物應(yīng)答調(diào)節(jié)劑，諸如依那西普，英夫利西單抗，阿達(dá)木單抗， 阿那白滯素,阿巴他塞，Uruximab， certolizumab pegol 和 tocilizumab;
40皮質(zhì)類固醇或類固醇，諸如糖皮質(zhì)激素(GC)，氟替卡松，布地奈 德，潑尼松龍，氫化可的松，腎上腺素，酪甾酮，醋酸可的松，脫氧 米塞松，地塞米松，氟可龍，氫化可的松，甲潑尼松，曱潑尼龍，潑 尼松龍，潑尼松，潑尼立定，普西奈德，利美索龍和腎上腺皮質(zhì)；
緩解疾病的抗風(fēng)濕性藥物(DMARDs)，諸如羥氯喹，環(huán)磷酰胺 (cyclosphosphamide )，苯丁酸氮芥，金化合物金諾芬(auranof in )， 柳氮磺胺吡啶，米諾環(huán)素，環(huán)孢菌素，toll-類受體激動(dòng)劑和拮抗劑， 激酶抑制劑(例如p38 MAPK),免疫抑制劑和腫瘤壞死因子(TNF)阻滯 劑(例如依那西普，英夫利西單抗和阿達(dá)木單抗)；
纖維肌痛用藥，諸如阿米替林，氟西汀，度洛西汀，米那普侖， 環(huán)苯扎林(cylobenzaprine )，曲馬多，力口巴噴丁，普瑞巴林和雙重 再攝取抑制劑；
骨質(zhì)疏松癥用藥，諸如雌激素，甲狀旁腺激素，二膦酸鹽，選擇 性受體分子和骨形成劑；
痛風(fēng)用藥，諸如別噤醇，丙磺舒，氯沙坦和非諾貝特； 銀屑病用藥，諸如阿維酸；和 局部治療，諸如局部NSAIDs和辣4權(quán)辣素。
本發(fā)明的化合物還可以與用于治療哮喘的治療劑聯(lián)用或替代使 用。這類活性劑的實(shí)例包括，但不限于如下
抗變態(tài)反應(yīng)藥，諸如色甘酸鈉和富馬酸酮替芬；
抗炎藥，諸如NSAIDs和類固醇抗炎藥(例如二丙酸倍氯米松，布 地奈德，地塞米松磷酸鈉，氟尼縮松，丙酸氟替卡松和曲安奈德)；
抗膽堿能藥，諸如異丙托銨，顛茄堿，阿托品和氧托溴銨；
抗組胺藥，諸如氯苯那敏，溴苯那敏，苯海拉明，氯馬斯汀，茶 苯海明，西替利溱，羥溱，美克洛"秦，非索非那定，氯雷他定和埃美 丁 (enadine );
P廣腎上腺素能激動(dòng)劑(P激動(dòng)劑)，諸如沙丁胺醇(albutainol )， 特布他林，腎上腺素，奧西那林，異丙托銨，麻黃(生物堿來源)，麻 黃堿和偽麻黃堿；
41白三烯受體拮抗劑，諸如扎魯司特和齊留通孟魯司特； 黃噤呤類(支氣管擴(kuò)張藥)，諸如茶堿，二羥丙茶堿和膽茶堿； 各種平喘藥，諸如黃嘌呤類，甲基黃嘌呤類，膽茶堿，氨茶堿，
磷酸二酯酶抑制劑，諸如扎達(dá)維林，鈣拮抗劑，諸如硝苯地平和鉀活
化劑，諸如色滿卡林；和
預(yù)防藥，諸如色甘酸鈉(sodiura cromoglycate )， 色甘酸鈉
(cromolyn sodium)， 奈多羅米和酉同替芬。
此外，可以與本發(fā)明化合物聯(lián)用或替代使用的活性劑的非限制性
實(shí)例包括抗銀屑病藥，抗炎性腸病(抗-IBD)藥，抗慢性阻塞性肺疾病
(抗-C0PD)藥，抗多發(fā)性硬化藥。 VI.制品
本發(fā)明還包括提供包含本文所述的 一種或多種化合物的組合物的 制品。該制品可以包含本文所述的化合物中的一種或多種與一種或多 種額外的治療劑的組合。該制品可以包括小瓶或其它容器，其包含適 用于本發(fā)明與任意載體的干燥或液體形式的組合物。特別地，該制品 可以包括試劑盒，其包括具有本發(fā)明組合物的容器。在這類試劑盒中， 可以以各種組合形式遞送組合物。例如，組合物可以包含單一劑量， 其包含所有活性組分。可選擇地，如果提供一種以上活性組分，那么 組合物可以包含多劑量，它們各自包含一種或多種活性組分，指定該 劑量用于以組合，依次或在其它接近的時(shí)間中給藥。例如，該劑量可 以為固體形式(例如片劑，膠嚢形片劑，膠嚢等)或液體形式(例如小 瓶)，它們各自包含單一活性組分，而以泡罩包，袋等形式提供以便以 聯(lián)用方式給藥。
所述的制品進(jìn)一步包括用于實(shí)施本發(fā)明方法的說明書。這類說明 書可以為不同形式，諸如在容器上的標(biāo)簽，包裝容器的盒子中包括的 插頁或各種計(jì)算機(jī)可讀格式。還可以將這些說明書印刷在包裝有小瓶 的盒子上。這些說明書包含諸如足夠劑量和給藥信息這類信息，以便 能夠使得受試者和本領(lǐng)域技術(shù)人員給予藥物組合物。預(yù)期本領(lǐng)域技術(shù) 人員包括任何醫(yī)生，護(hù)士，技師，配偶或可以給予組合物的其他照護(hù)者。藥物組合物還可以由受試者自我給予。
VII.治療方法
如上所述，抗葉酸劑可以因葉酸依賴性代謝過程由此抑制而改變
并且許多抗葉酸劑可以對(duì)各種酶起作用。培美曲塞(也稱作ALIMTA 或L-谷氨酸，N-[4-[2-(2-氨基-4， 7-二氫-4-氧代-1H-吡咯并[2， 3-d] 嘧啶-5-基)乙基]苯甲酰基-，二鈉，七水合物)為已知對(duì)多種酶起作用 的抗葉酸劑的一個(gè)實(shí)例并且具有式(13)中提供的結(jié)構(gòu)。已知培美曲塞 通過抑制TS， DHFR和GARFT表現(xiàn)出抗腫瘤活性。
胸苷酸合酶(TS)為嘧"定脫氧核苷酸重新生物合成中的限速酶且由 此通常為化療策略的靶標(biāo)。在DNA合成中，TS在脫氧尿苷-5'-—磷酸 (dUMP)還原甲基化成脫氧胸苷-5'-—磷酸(dTMP)中起關(guān)鍵作用。因此， TS抑制直接導(dǎo)致dTMP和隨后的2'-脫氧胸苷-5 三磷酸(dTTP)，即 DNA合成的主要前體耗盡。這間接導(dǎo)致-脫氧尿苷-5 '-三磷酸(dUTP) 蓄積，且由此因dUTP錯(cuò)誤摻入DNA和隨后尿嘧啶-DNA轉(zhuǎn)葡糖基酶催 化的切割導(dǎo)致所謂的"缺胸腺嘧啶死亡"，從而造成DM損傷。這種DM 損傷和注意到的dTTP/dUTP中的失衡可以誘導(dǎo)下游事件，從而導(dǎo)致細(xì) 胞凋亡(細(xì)胞死亡)。
二氫葉酸還原酶(DHFR)催化7， 8-二氫葉酸(DHF或H2F)的NADPH-依賴性還原成5,6，7，8-四氫葉酸(THF或H4F)。因此，DHFR為維持嘌 呤類，胸苷酸和幾種氨基酸的合成途徑中的主要輔因子THF胞內(nèi)水平 所必不可少的。
甘氨酰胺核苷酸轉(zhuǎn)曱酰酶(GARFT)為對(duì)細(xì)胞分裂和增殖而言關(guān)鍵 的噤呤重新生物合成中的葉酸-依賴性酶。特別地，GARFT催化10-甲 酰四氫葉酸(10-FTHF)與THF反應(yīng)形成嘌呤類。抑制GARFT導(dǎo)致胞內(nèi)噤 呤水平耗盡，由此抑制DNA和RNA合成。最終GARFT抑制破壞DNA和RNA合成導(dǎo)致細(xì)胞死亡。與GARFT抑制相關(guān)的抗增殖作用使得它成為 抗腫瘤藥的特別理想的靶標(biāo)。
抗葉酸劑，諸如培美曲塞可以通過諸如還原的葉酸載體系統(tǒng)和膜 葉酸結(jié)合蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)這類機(jī)制被轉(zhuǎn)運(yùn)入細(xì)胞。 一旦進(jìn)入細(xì)胞，培美 曲塞就被葉酰基聚谷氨酸合酶轉(zhuǎn)化成聚谷氨酸形式。聚谷氨酸形式被 保留在細(xì)胞中并且為TS和GARFT的抑制劑。聚谷氨酸化為發(fā)生在腫瘤 細(xì)胞中的時(shí)間-和濃度-依賴性過程并且在正常組織中達(dá)到較低程度。 聚谷氨酸化代謝物具有增加的胞內(nèi)半衰期，從而導(dǎo)致藥物在惡性細(xì)胞 中的作用延長(zhǎng)。
在許多情況中，針對(duì)多種酶的寬泛作用不一定理想。例如，培美 曲塞抑制DHFR， TS和GARFT。如上所述，抑制TS和GARFT與細(xì)胞死 亡強(qiáng)烈相關(guān)，由此使用TS和GARFT抑制劑作為抗腫瘤藥具有理想性。 然而，藥物，諸如培美曲塞誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的能力增加了藥物的毒性(即 健康細(xì)胞和胂瘤細(xì)胞死亡)。
化合物，諸如培美曲塞作為TS和GARFT抑制劑的功能因化合物在 細(xì)胞內(nèi)部的聚谷氨酸化而產(chǎn)生。根據(jù)本發(fā)明，已經(jīng)確定不可聚谷氨酸 化的化合物不一定作為TS抑制劑或GARFT抑制劑起作用。然而，抑制 聚谷氨酸化一般不影響化合物作為DHFR抑制劑起作用的能力。例如， 已經(jīng)證實(shí)培美曲塞與培美曲塞的聚谷氨酸化形式相比具有等效的 DHFR抑制作用。
正如式(7) - (ll)中所觀察到的，本發(fā)明的化合物在化合物的谷氨 酸部分上包含4-亞甲基。這類也稱作Y亞甲基谷氨酸部分。亞甲基的 存在使得本發(fā)明的化合物不能夠聚谷氨酸化。因此，本發(fā)明的化合物 對(duì)DHFR抑制具有特異性(即因細(xì)胞內(nèi)部不存在聚谷氨酸化而不抑制TS 或GARFT)。這類特異性對(duì)提供更具有特異性的治療而言是理想的，同 時(shí)避免或降低了毒性并且將更通常與對(duì)額外的酶，諸如TS和GARFT 起作用的化合物，諸如培美曲塞相關(guān)的副作用減少到最低限度。
本發(fā)明的化合物特別用于治療各種病癥，其中破壞葉酸代謝對(duì)治 療病癥癥狀或一般對(duì)治療病癥癥狀而言是有益的。因此，在其它實(shí)施
44方案中，本發(fā)明涉及治療各種疾病或病癥的方法。在具體的實(shí)施方案 中，本發(fā)明提供了已知或發(fā)現(xiàn)可通過破壞葉酸代謝治療的疾病或病癥
的方法。在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了通過抑制DHFR治療各種疾 病或病癥的方法。在具體的實(shí)施方案中，這類DHFR的抑制為選擇性的。 特別地，DHFR的特異性抑制包括在不抑制TS或GARFT的情況下抑制 DHFR。在具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了治療病癥，諸如異常細(xì)胞 增殖，炎癥(包括炎性腸病)，關(guān)節(jié)炎(特別是類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎)，銀屑病 和哮喘的方法。
A.異常細(xì)胞增殖
已經(jīng)證實(shí)異常細(xì)胞增殖為許多疾病和病癥的根源，包括呈現(xiàn)嚴(yán)重 健康威脅的癌和非-癌病癥。 一般而言，異常細(xì)胞，諸如在腫瘤中的生 長(zhǎng)過度并且與正常細(xì)胞生長(zhǎng)共濟(jì)失調(diào)。此外，腫瘤細(xì)胞異常生長(zhǎng)在一 般導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)異常的刺激停止后一般以異常(即過度)方式持續(xù)。良 性腫瘤的特征在于保持其分化特征并且無法以完全不受控制的方式分 裂的細(xì)胞。良性肺瘤通常局限并不轉(zhuǎn)移。惡性腫瘤(即癌)的特征在于 未分化的，對(duì)身體生長(zhǎng)控制信號(hào)無應(yīng)答并且以不受控制的方式繁殖的 細(xì)胞。惡性腫瘤為侵襲性的并且能夠轉(zhuǎn)移。
治療異常細(xì)胞增殖疾病或病癥包括殺傷，抑制或減慢異常增殖細(xì) 胞體或群的大小的生長(zhǎng)或增加(包括腫瘤或癌生長(zhǎng))，減少異常增殖細(xì) 胞群中的細(xì)胞數(shù)量或預(yù)防異常增殖細(xì)胞擴(kuò)散至其它解剖部位，以及減 小異常增殖細(xì)胞大小。本文所用的術(shù)語"治療"不一定意指治愈或完全 根除異常細(xì)胞增殖病癥。預(yù)防異常細(xì)胞增殖包括與不進(jìn)行治療相比減 慢，延緩，控制或減小異常細(xì)胞增殖病癥發(fā)病率或發(fā)作可能性的方法。
異常細(xì)胞增殖，特別是增殖過度可以作為各種因素的結(jié)果發(fā)生， 包括遺傳突變，感染，接觸毒素，自體免疫疾病和良性或惡性腫瘤誘 導(dǎo)。過度增殖細(xì)胞病癥包括，但不限于皮膚病，血管病變，心血管病 癥，纖維變性病癥，腎小球系膜病變，自體免疫疾病，移植物-宿主 排斥，腫瘤和癌。
可以使用本發(fā)明治療的非腫瘤性異常細(xì)胞增殖病癥的有代表性的
45非限制性實(shí)例包括皮膚病，諸如銀屑病，濕滲(eczerma),角化病，基底細(xì)胞癌和鱗狀細(xì)胞癌；心血管系統(tǒng)病癥，諸如高血壓和血管-閉塞性病癥(例如動(dòng)脈粥樣硬化，血栓形成和再狹窄)；血管增殖性病癥，諸如血管源性(形成)和生成血管(擴(kuò)展性)病癥，其導(dǎo)致血管異常增生，諸如血管發(fā)生；和與內(nèi)分泌系統(tǒng)相關(guān)的病癥，諸如胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)，包括肥胖和糖尿病(1 & 2型)。
本發(fā)明的組合物和方法也用于治療與非肺瘤性異常細(xì)胞增殖相關(guān)的炎性疾病。它們包括，但不限于炎性腸病(IBD)，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)，多發(fā)性硬化(MS)，增生性腎小球腎炎，紅斑狼瘡，硬皮病，暫時(shí)性動(dòng)脈炎，閉塞性血栓性脈管炎，皮膚粘膜淋巴結(jié)綜合征，哮喘，宿主抗移植物，甲狀腺炎，格雷夫斯病，抗原誘導(dǎo)的氣道活動(dòng)過度，肺嗜酸性細(xì)胞增多癥，格-巴綜合征，過敏性鼻炎，重癥肌無力，人T-親淋巴性1型病毒-相關(guān)脊髓病，單純皰滲腦炎，炎癥性肌病，動(dòng)脈粥樣石更化和古德帕斯徹氏綜合征。
在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物用于治療銀屑病。4艮屑病為免疫介導(dǎo)的皮膚病，其特征在于出現(xiàn)在皮膚中的抗原呈遞細(xì)胞(APC)的慢性T-細(xì)胞刺激。銀屑病的各種類型包括，例如，斑塊狀銀屑病(即尋常性銀屑病)，膿皰性銀屑病，滴點(diǎn)狀牛皮癬，皮褶牛皮癬，紅皮性牛皮縳，牛皮癬性關(guān)節(jié)炎，頭皮性牛皮癬和指甲牛皮癬。用于銀屑病的常用系統(tǒng)性治療包括曱氨蝶呤，環(huán)孢素和口服維生素a酸類，但其應(yīng)用因毒性而受限。至多40%的具有銀屑病的患者也發(fā)生牛皮癬性關(guān)節(jié)炎(Kormeili T等Br J Dermatol. (2004) 151 (1): 3-15)。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物用于治療血管增生性病癥，包括導(dǎo)致血管異常增生的血管源性(形成)和生成血管(擴(kuò)展性)病癥。其它血管增生性病癥包括關(guān)節(jié)炎和眼病，諸如糖尿病視網(wǎng)膜病變。異常新生血管形成還涉及實(shí)體瘤。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物用于治療與不受控制的血管發(fā)生相關(guān)的疾病。異常血管發(fā)生的有代表性的非限制性疾病包括類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，局部缺血-再灌注相關(guān)的腦水腫和損傷，皮質(zhì)局部缺血，卵巢增生和血管過度分布(多嚢卵巢
46綜合征)，子宮內(nèi)膜異位癥，銀屑病，糖尿病視網(wǎng)膜病變和其它眼部生
成血管疾病，諸如早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病(retrolental fibroplastic )，黃斑變性，角膜移植排斥，新生血管性青光眼(neuroscular glaucoma )和0ster Webber綜合征。與異常血細(xì)胞增殖相關(guān)的癌癥包括血管內(nèi)皮瘤，血管瘤和卡波西肉瘤。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物用于治療涉及異常細(xì)胞增殖的心血管系統(tǒng)病癥。這類病癥包括，例如高血壓，血管-閉塞性病癥(例如動(dòng)脈粥樣硬化，血栓形成和血管成形術(shù)后再狹窄)，急性冠脈綜合征(諸如不穩(wěn)定的心絞痛，心肌梗死，缺血和非-缺血性心肌病，MI后心肌病和心肌纖維化)和物質(zhì)-誘導(dǎo)的心肌病。
血管損傷還可以導(dǎo)致內(nèi)皮和血管平滑肌細(xì)胞增殖。這種損傷可以由創(chuàng)傷性情況或干預(yù)(例如血管成形術(shù)，血管移植物，吻合術(shù)，器官移植)導(dǎo)致(Clowes A等A. J. Vase. Surg (1991) 13:885)。再狹窄(例如冠狀動(dòng)脈，頸動(dòng)脈和腦損害)為成功的冠狀動(dòng)脈氣嚢血管成形術(shù)的主要并發(fā)癥。認(rèn)為它因作為對(duì)冠狀動(dòng)脈內(nèi)層內(nèi)皮細(xì)胞的機(jī)械損傷結(jié)果的生長(zhǎng)因子釋放導(dǎo)致。
可以通過本發(fā)明治療或預(yù)防的其它動(dòng)脈粥樣硬化性病癥包括涉及
內(nèi)皮和/或血管平滑肌細(xì)胞增殖的動(dòng)脈壁疾病，包括糖尿病并發(fā)癥，糖尿病性腎小球硬化癥和糖尿病視網(wǎng)膜病變。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物用于治療涉及內(nèi)分泌系統(tǒng)的異常細(xì)胞增殖病癥。這類病癥包括，例如，胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)，包括肥胖，糖尿病(l & 2型)，糖尿病視網(wǎng)膜病變，與糖尿病相關(guān)的黃斑變性，妊娠糖尿病，葡萄糖耐量異常，多嚢性卵巢綜合征，骨質(zhì)疏松癥，骨質(zhì)減少和組織和器官老化加速，包括韋耳納綜合征。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物用于治療泌尿生殖系統(tǒng)的異常細(xì)胞增殖病癥。它們包括，例如，子宮內(nèi)膜異位癥(edometriosis )，良性前列腺增生，平滑肌瘤(eiomyoma)，多嚢性腎病和糖尿病腎病。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物用于治療纖維變性病癥。涉及纖維化的醫(yī)學(xué)情況包括因手術(shù)或損傷造成的不需要的組織粘連。纖維變性病癥的非限制性實(shí)例包括肝硬化和腎小球系膜增殖細(xì)胞病癥。
在其它實(shí)施方案中可以按照本發(fā)明治療組織和關(guān)節(jié)的異常細(xì)胞增
殖病癥。這類病癥包括，例如，雷諾現(xiàn)象/疾病，斯耶格侖綜合征系統(tǒng)
性硬化，系統(tǒng)性紅斑狼疳，血管炎病，強(qiáng)直性脊柱炎，骨關(guān)節(jié)炎，反
應(yīng)性關(guān)節(jié)炎，牛皮癬性關(guān)節(jié)炎和纖維肌痛。
在某些實(shí)施方案中，也可以按照本發(fā)明治療肺系統(tǒng)的異常細(xì)胞增
殖病癥。這些病癥包括，例如，嗜喘，慢性阻塞性肺疾病(COPD),反應(yīng)性氣道病，肺纖維化和肺動(dòng)樂K高壓。
可以按照本發(fā)明治療的包括異常細(xì)胞增殖成分的其它病癥包括貝
切特綜合征，乳腺纖維嚢性病，纖維腺瘤，慢性疲勞綜合征，急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)，缺血性心臟病，透析后綜合征，白血病，獲得性免疫缺陷綜合征，脈管炎，類脂組織細(xì)胞增多病，膿毒性休克和家族性腸息肉病，諸如加德納綜合征。在可以用本發(fā)明組合物和方法治療的病癥范圍內(nèi)還包括病毒誘導(dǎo)的過度增生性疾病，包括，例如，人乳頭狀瘤病毒-誘導(dǎo)的疾病(例如因人乳頭狀瘤病毒感染造成的損害)，EB病毒-誘導(dǎo)的疾病，瘢痕形成，生殖器疣，皮膚疣等。
本發(fā)明的化合物進(jìn)一步用于治療異常細(xì)胞增殖病癥和疾病，包括各種類型的癌癥，諸如原發(fā)性腫瘤和瘤轉(zhuǎn)移?？梢园凑毡景l(fā)明治療的具體的非限制性良性腫瘤實(shí)例包括血管瘤，肝細(xì)胞性腺瘤，海綿狀血管瘤，局灶性結(jié)節(jié)性增生，聽神經(jīng)瘤，神經(jīng)纖維瘤，膽管腺瘤，膽管嚢腺瘤(bile duct cystanoma)，纖維瘤，脂肪瘤，平滑肌瘤，間皮瘤，畸胎瘤，粘液瘤，結(jié)節(jié)性再生性增生，沙眼和膿性肉芽腫。
可按照本發(fā)明治療的有代表性的非限制性癌癥包括乳腺癌，皮膚癌，骨癌，前列腺癌，肝癌，肺癌，腦癌，喉，膽嚢，胰臟，直腸，甲狀旁腺，甲狀腺，腎上腺，神經(jīng)組織，頭頸，結(jié)腸，胃，支氣管，腎癌，基底細(xì)胞癌，潰瘍和乳頭狀類型的鱗狀細(xì)胞癌，轉(zhuǎn)移性皮膚癌，骨肉瘤，尤因肉瘤，網(wǎng)狀細(xì)胞肉瘤，骨髓瘤，巨細(xì)胞瘤，小細(xì)胞肺腫瘤，膽石，胰島細(xì)胞瘤，原發(fā)性腦瘤，急性和慢性淋巴細(xì)胞和粒細(xì)胞瘤，毛細(xì)胞瘤，腺瘤，增生，髓樣癌，嗜鉻細(xì)胞瘤，粘膜神經(jīng)瘤，腸
48神經(jīng)節(jié)瘤，增生性角膜神經(jīng)瘤，膽脂瘤樣腫瘤(marfanoid habitustumor )，腎母細(xì)胞瘤，精原細(xì)胞瘤，卵巢腫瘤，平滑肌瘤(leiomyomatertumor)，宮頸發(fā)育不良和原位癌，神經(jīng)母細(xì)胞瘤，視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤，軟組織肉瘤，惡性類癌，局部皮膚損害，蕈樣真菌病，橫紋肌肉瘤，卡波西肉瘤，成骨性和其它肉瘤，惡性血鈣過多，腎細(xì)胞瘤，紅細(xì)胞增多癥，腺癌，膠質(zhì)母細(xì)胞瘤，白血病，淋巴瘤，惡性黑素瘤，表皮
才羊癌和其它癌和肉瘤。
本發(fā)明的化合物還用于預(yù)防或治療與促成排斥或其它并發(fā)癥的器官移植相關(guān)的增殖反應(yīng)。例如，增殖反應(yīng)可以在心臟，肺，肝，腎和其它體器官或器官系統(tǒng)移植過程中發(fā)生。
B.炎癥
本發(fā)明的化合物還用于治療特征在于炎癥的疾病。具有顯著炎癥成分的疾病和病癥普遍存在并且包括，例如，皮膚病，腸病，某些變性神經(jīng)病癥，關(guān)節(jié)炎，自身免疫疾病和各種其它疾病。這些疾病中的某些如上所述具有炎癥和增殖成分。在具體的實(shí)施方案中，所述的化合物用于治療炎性腸病(IBD)，克羅恩病(CD)，潰瘍性結(jié)腸炎(UC)，慢性阻塞性肺疾病(COPD)，結(jié)節(jié)病或銀屑病。披露的化合物還用于治療其它炎性疾病，例如過敏性疾病，皮膚病，移植排斥，鏈球菌感染后和自身免疫腎衰竭，膿毒性休克，全身性炎性反應(yīng)綜合征(SIRS)，成人呼吸窘迫綜合征(ARDS)，表面變質(zhì)，紅斑狼瘡，橋本曱狀腺炎，自身免疫性溶血性貧血，胰島素依賴性糖尿病和風(fēng)濕熱，盆腔炎性疾病(PID)，結(jié)膜炎，皮炎和支氣管炎。
炎性腸病(IBD)包括幾種慢性炎性病癥，包括克羅恩病(CD)和潰瘍性結(jié)腸炎(UC)。 CD和UC被視為"特發(fā)性的"，因?yàn)樗鼈兊牟∫虿幻?。盡管克羅恩病和潰瘍性結(jié)腸炎共有許多癥狀(例如腹瀉，腹痛，發(fā)熱，疲勞)，但是潰瘍性結(jié)腸炎限于結(jié)腸，而克羅恩病可以涉及許多胃腸道節(jié)段。兩種疾病均可能涉及腸外表現(xiàn)，包括關(guān)節(jié)炎，眼病(例如鞏膜外層炎和虹膜炎)，皮膚病(例如結(jié)節(jié)性紅斑和壞疽性膿皮病)，泌尿系并發(fā)癥，膽石和貧血。中風(fēng)，視網(wǎng)膜血栓和肺栓子不常見，因?yàn)樵S多患者處于高凝狀態(tài)。
在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物，包括其藥學(xué)上可接受的鹽，前體藥物和酯類用于治療炎性腸病。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述的炎性腸病為克羅恩病。
慢性阻塞性肺疾病或C0PD的特征在于不完全可逆的氣流通氣受限，其為進(jìn)行性的并且與肺異常炎癥反應(yīng)相關(guān)。其為最常見的成年人的常見呼吸系統(tǒng)病癥之一，即主要的慢性病原因并且代表了全世界大部分經(jīng)濟(jì)和社會(huì)負(fù)擔(dān)(Pa難ls R A.Lancet. (2004)
364 (9434) :613-20)。該病的其它名稱包括，例如，慢性阻塞性氣道病(C0AD);慢性阻塞性肺疾病(COLD)，慢性氣流通氣受限(CAL或CAFL)和性氣道阻塞(COA)。
C0PD的特征在于整個(gè)氣道，實(shí)質(zhì)和肺血管系統(tǒng)內(nèi)的t曼性炎癥。該炎癥涉及大批細(xì)胞，介體和炎癥效應(yīng)。介體包括，例如，介體包括蛋白酶，氧化劑和毒性肽類。隨時(shí)間的推移，炎癥損害肺并且導(dǎo)致COPD的病理變化特征。疾病的表現(xiàn)包括慢性支氣管炎和肺氣胂。慢性支氣管炎為產(chǎn)生大量粘液的氣道長(zhǎng)期炎癥，導(dǎo)致喘鳴和感染。如果受試者存在定期咳嗽和粘液依次至少三個(gè)月和兩年，那么認(rèn)為是慢性的。肺氣腫為破壞肺泡和/或支氣管(bronchae)的疾病，導(dǎo)致氣嚢變大，由此使得呼吸困難。最常見的C0PD患者為中央小葉形式的肺氣腫。在一
個(gè)具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物用于治療慢性阻塞性肺疾病。結(jié)節(jié)病為與異常細(xì)胞增殖相關(guān)的另一種慢性炎性疾病。結(jié)節(jié)病為
多系統(tǒng)肉芽腫病癥，其中肉芽腫由提供炎癥細(xì)胞恒定供給的生成血管的毛細(xì)管芽生成。
如上所述，炎癥還在心血管疾病，包括再狹窄，因斑塊破裂導(dǎo)致的動(dòng)脈粥樣硬化并發(fā)癥，嚴(yán)重組織缺血和心力衰竭的發(fā)病機(jī)制中起重要作用。例如，認(rèn)為在動(dòng)脈壁上的炎性改變?cè)诎l(fā)生再狹窄和動(dòng)脈粥樣硬化中起主要作用(Ross R. N Engl J Med. (1999) 340:115-126)。局部炎癥在也促成斑塊發(fā)展的纖維帽衰減的斑塊形成中發(fā)生，最終導(dǎo)致斑塊石皮裂和急性冠脈綜合征(Lind L. Atherosclerosis. (2003)169 (2): 203-14)。
多發(fā)性硬化(MS)為慢性的，通常為虛弱性的影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)的 自身免疫疾病。MS的特征在于當(dāng)身體指揮針對(duì)在腦和脊髓中隔絕神經(jīng) 的髓磷脂鞘脂肪物質(zhì)中的蛋白質(zhì)的抗體和白細(xì)胞時(shí)產(chǎn)生的炎癥。這一 結(jié)果可以為瘢痕形成的多個(gè)區(qū)域(硬化)，從而減慢或阻斷肌肉協(xié)調(diào)， 視覺和其它神經(jīng)信號(hào)。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物用
于治療多發(fā)性硬化。
已經(jīng)證實(shí)炎癥與神經(jīng)病癥發(fā)病^^制相關(guān)，包括帕金森病和阿爾茨 海默病(Mirza B.等Neuroscience (2000) 95 (2): 425-32; Gupta A. Int JClinPract. (2003) 57 (1): 36-9; Ghatan E.等Neurosci Biobehav Rev. (1999) 23 (5): 615-33)。
本發(fā)明還用于治療，例如過敏性病癥，過敏性鼻炎，皮膚病，移 植排斥，鏈球菌感染后和自身免疫性腎衰竭，膿毒性休克，全身性炎 性反應(yīng)綜合征(SIRS)，成人呼吸窘迫綜合征(ARDS)，表面變質(zhì)，紅斑 狼瘡，重癥肌無力，格雷夫斯病，橋本曱狀腺炎，自身免疫性溶血性 貧血，胰島素依賴性糖尿病，腎小球腎炎，和風(fēng)濕熱，盆腔炎性疾病 (PID)，結(jié)膜炎，皮炎，支氣管炎和鼻炎。
C.哞喘
本文披露的化合物可以用于治療哮喘。近年來，已經(jīng)顯而易見的 是基于哮喘的主要病理學(xué)情況為氣道組織炎癥(Lemanke (2002) Pediatrics 109 (2): 368-372; Nagayama等(1995) Pediatr Allergy Immunol. 6:204-208)。哮喘涉及廣泛癥狀和體征，包括喘鳴，咳嗽， 胸部發(fā)緊，短促呼吸和產(chǎn)生痰。氣道炎癥為哮喘發(fā)病機(jī)制及其臨床表 現(xiàn)的關(guān)鍵特征。炎癥細(xì)胞，包括肥大細(xì)胞，嗜酸性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞 甚至存在于具有輕度哮喘的年輕患者的氣道中。
炎癥還在具有或不具有哮喘的喘鳴病癥中起作用。哮喘有時(shí)被分 類為導(dǎo)致哞喘發(fā)作的觸發(fā)器(或哮喘攻擊)或使哞喘在慢性個(gè)體中惡化 的情況，諸如職業(yè)性哮喘，運(yùn)動(dòng)誘發(fā)哮喘，夜間哮喘或類固醇抵抗型 哞喘。因此，本發(fā)明的化合物還一般可以用于治療喘鳴病癥。
51D.關(guān)節(jié)炎和骨關(guān)節(jié)炎
超過4000萬美國(guó)人患有各種形式的關(guān)節(jié)炎，包括超過100種類的 風(fēng)濕性疾病(即侵害構(gòu)成或支持身體各種結(jié)構(gòu)，包括腱，軟骨，血管和 內(nèi)臟器官的關(guān)節(jié)，肌肉和結(jié)締組織的疾病)。有代表性的關(guān)節(jié)炎類型包 括類風(fēng)濕性(諸如軟組織風(fēng)濕病和非關(guān)節(jié)性風(fēng)濕病)，纖維肌痛，纖維 組織炎，肌風(fēng)濕病，肌盤膜痛，肱骨上髁炎，凍結(jié)肩，提策綜合征， 筋膜炎，肌腱炎，腱鞘炎，滑嚢炎)，青少年慢性脊推關(guān)節(jié)病(juvenile chronic spondyloarthropaties )(強(qiáng)直性脊柱炎)，骨關(guān)節(jié)炎，高尿 酸血癥和與急性痛風(fēng)相關(guān)的關(guān)節(jié)炎，慢性痛風(fēng)和系統(tǒng)性紅斑狼瘡。
肥大性關(guān)節(jié)炎或骨關(guān)節(jié)炎為關(guān)節(jié)炎的最常見形式并且特征在于關(guān) 節(jié)軟骨受到破壞。骨關(guān)節(jié)炎在超過65歲人中常見，但可能在前數(shù)十年 已經(jīng)出現(xiàn)。軟骨受到破壞導(dǎo)致骨彼此之間發(fā)生摩擦，造成疼痛和運(yùn)動(dòng) 喪失。近年來，炎癥在骨關(guān)節(jié)炎中起重要作用的證據(jù)已經(jīng)逐步增加。 近來因骨關(guān)節(jié)炎(0A)準(zhǔn)備進(jìn)行關(guān)節(jié)置換術(shù)的患者中的三分之一在圍繞 和保護(hù)關(guān)節(jié)的滑液中存在嚴(yán)重炎癥。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的化 合物用于治療骨關(guān)節(jié)炎。
關(guān)節(jié)炎的第二種最常見形式為類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎。其為可以影響整個(gè) 身體的自身免疫病，導(dǎo)致虛弱，疲勞，食欲缺失和肌痛。 一般而言， 發(fā)作年齡遠(yuǎn)低于骨關(guān)節(jié)炎，在20 - 50歲。炎癥在滑膜襯層中開始并且 可以擴(kuò)散至整個(gè)關(guān)節(jié)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物用于治 療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎。
實(shí)驗(yàn)
現(xiàn)在特別參照各實(shí)施例來描述本發(fā)明。下列實(shí)施例不應(yīng)視為限制 本發(fā)明，而是作為典型實(shí)施方案提供。
實(shí)施例1 抗葉酸劑化合物的酶抑制活性 制備用于各種酶活性測(cè)定的本文命名為CHL-003和CHL 1007的本 發(fā)明新型抗葉酸劑化合物。在上述式(11)和(12)中提供了 CHL-003和 CHL1007的通式并且在下面的實(shí)施例中提供了其合成方法。CHL1007
52為二鈉鹽的(S)對(duì)映體且CHL-003為外消旋形式。使用酶活性測(cè)定法評(píng) 價(jià)CHL-003和CHL1007相對(duì)于已知抗葉酸劑化合物甲氨蝶呤，氨基蝶 呤和Mobiltrex而言對(duì)各種酶的活性。
在37。C下通過在NADPH存在下將DHFR與5種級(jí)別濃度的類似物 一起預(yù)孵育3分鐘，通過添加DHFR啟動(dòng)反應(yīng)并且對(duì)殘留的DHFR活性 定量來評(píng)價(jià)CCRF-CEM人白血病細(xì)胞中對(duì)DHFR的抑制功效。下表1中 提供了所述化合物的以nM計(jì)的相當(dāng)于50y。相對(duì)活性(ICJ的抑制劑濃 度。
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_化合物 IC5Q (nM)
甲氨蝶呤 Mobi1trex CHL1007 CHL-003
通過將至多5種級(jí)別濃度的化合物導(dǎo)入反應(yīng)混合物，通過添加TS 啟動(dòng)反應(yīng)并且對(duì)殘留的TS活性定量來評(píng)價(jià)CCRF-CEM人T-成淋巴細(xì)胞 性白血病細(xì)胞中對(duì)TS的抑制功效。下表2中提供了所述化合物的以 uM計(jì)的IC5。。
表2
化合物IC50 (uM)
曱氨蝶呤47
Mobiltrex8
CHL—003>50
兩種轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)導(dǎo)致減少的葉酸和抗葉酸劑在人細(xì)胞中攝入減少 的葉酸載體(RFC)和葉酸結(jié)合蛋白(FBP)家族。RFC分布最為廣泛并且 一般性認(rèn)為是減少的葉酸和抗葉酸劑的主要轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制。由于CCRF-CEM 細(xì)胞僅表達(dá)RFC，所以可以根據(jù)其作為PH]MTX流入抑制劑的功效確定
0. 45
1. 1 5. 2 12. 5這種載體與各種化合物的相互作用。
根據(jù)抑制完整細(xì)胞攝取2 uM [3H]MTX評(píng)價(jià)氨基蝶呤，Mobiltrex 和CHL-003對(duì)CCRF-CEM人白血病細(xì)胞RFC的抑制功效(由此評(píng)價(jià)氨基 蝶呤而不是甲氨蝶呤)。下表3中提供了以nM—H十的化合物的IC5。。
表3
化合物IC5。(uM)
氨基蝶呤2..7
Mobi1trex2.,9
CHL-0031,,0
上述數(shù)據(jù)例證了新型抗葉酸劑在酶抑制中的選擇性。正如表1-
表3中所觀察到的，CHL-003表現(xiàn)出良好的對(duì)DHFR的活性(經(jīng)測(cè)定IC50 值在nM范圍)，而表現(xiàn)出對(duì)TS的較低活性(經(jīng)測(cè)定ICs。值在uM范圍)。 類似實(shí)驗(yàn)表明CHL-003幾乎不提供對(duì)AICART或GARFT的活性(ICs。值 >50uM)。如上所述，這類活性中的選擇可以用于改善對(duì)具體病癥的活 性，同時(shí)避免不需要的副作用。本發(fā)明的抗葉酸劑化合物CHL-003還 表現(xiàn)出對(duì)RFC攝取的極為良好的活性，明顯和令人意外地超出了氨基 蝶呤和Mobiltrex的作用。
實(shí)施例2 CHL1007的合成
在8個(gè)步驟中以商購(gòu)的乙基-4-碘苯甲酸酯和(S)-二乙基-2-氨基 -4-亞甲基戊二酸酯鹽酸鹽為原料合成化合物(S) -N- {4- [2- (2， 4-二氨 基-7H-吡咯并[2， 3-d]嘧啶-5-基)乙基]苯曱酰基)-4-亞曱基-L-谷氨 酸二鈉鹽(CHL1007)，通過HPLC測(cè)定純度〉99%。
步驟1
將乙基-4-碟苯曱酸酯(180 g， 0.65 raol)，烯丙醇(67 mL， 0.98 moi)， Na跳(137 g, 1.63 mol) , Pd (0Ac) 2 (4. 39 g， 0.02 mol)和 n-Bu4NBr(210 g， 0. 652 mol)在曱苯(1. 5 L)中的混合物在回流狀態(tài)下 攪拌5小時(shí)。將該反應(yīng)混合物通過CELITE⑧過濾材料過濾，用EtOAc
54沖洗并且用水洗滌濾液(兩次洗涂每次均使用500 mL水)和鹽水鹽溶液 (500 mL)。濃縮有才幾相并且通過4吏用1 : 6之比的EtOAc和石油醚的二 氧化硅快速色謙法純化殘余物?；厥諢o色油狀物用于下一步。將步驟 1的總體反應(yīng)方案提供在下面。
<formula>formula see original document page 55</formula>步驟2
將來自步驟1的產(chǎn)物(193. 4 g, 0.94mol)與低聚曱醛(28g， 0.94 mol)， N-乙基苯并瘞唑錄溴化物(46 g， 0. 19mol)， Et3N (26 mL, 0.19 mol)和4埃分子篩在Et0H (1.7 L)中合并并且在回流狀態(tài)下攪拌24 小時(shí)。濃縮該反應(yīng)混合物并且通過^f吏用1: 2之比的Et0Ac和石油醚的 二氧化硅快速色譜法純化殘余物而得到反應(yīng)產(chǎn)物。將步驟2的總體反 應(yīng)方案提供在下面。
<formula>formula see original document page 55</formula>
歩驟3
將來自步驟2的反應(yīng)產(chǎn)物(46 g, 0. 19 mol)在MeOH(560 mL)中的 溶液與丙二腈(malonitrile) (12.6 g， 0.19 mol)和Et3N (26 mL， 0.19 mol)在MeOH(190 fflL)中的混合物合并并且將所得溶液在環(huán)境溫 度下攪拌24小時(shí)。通過過濾收集固體產(chǎn)物，用Me0H洗滌并且干燥而 得到固體反應(yīng)產(chǎn)物。將步驟3的總體反應(yīng)方案提供在下面。<formula>formula see original document page 56</formula>
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歩驟4
將步驟3的氨基腈反應(yīng)產(chǎn)物(20 g， 70 mmol)加入到胍游離堿(109 mmol，來自10. 4 g的胍鹽酸鹽和7.7 g (109 mmol) NaOEt)在無水 EtOH(600 mL)中的溶液中并且將該混合物在回流狀態(tài)下攪拌48小時(shí)。 濃縮該反應(yīng)混合物并且通過二氧化硅快速色譜法純化殘余物，使用6% 在丙酮中的水作為洗脫劑而形成反應(yīng)產(chǎn)物。將步驟4的總體反應(yīng)方案 提供在下面。
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歩驟5
將0. 7 g Na0H在35 mL水中的溶液加入到來自步驟4的反應(yīng)產(chǎn)物 (5.55 g， 17.1 mmol)在MeOH(73 raL)中的混合物中并且將該混合物在 回流狀態(tài)下加熱2小時(shí)。然后將該反應(yīng)混合物冷卻至環(huán)境溫度，用 Ac0H(1.2 mL)酸化以^t形成沉淀，向其中加入水(IOO mL)。然后過濾 沉淀，用水(150 mL)洗滌并且干燥。將步驟5的總體反應(yīng)方案提供在 下面。
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步驟6
將H0BtxH20 (1. 52 g， 11. 2 mmol)和二氯化乙烯(EDC) (2. 15 g， 11.2 mmol)加入到來自步驟5的反應(yīng)產(chǎn)物(3. 34 g， 11.2 mmol)在 DMF(70 mL)中的溶液中并且保持?jǐn)嚢?0分鐘。加入(5)-二乙基-2-氨
56基-4-亞甲基戊二酸酯x HC1 (2. 85 g， 11.2 mmol)(對(duì)映體純度99. 8%) 和EUN(3. 12 mL， 22.5 mmol)并且將該反應(yīng)混合物攪拌2小時(shí)。在冷 卻至環(huán)境溫度后，用水(350 mL)稀釋該反應(yīng)混合物并且用二氯甲烷萃 取。合并有機(jī)萃取物，用鹽水鹽溶液洗滌，用NazS04干燥并且濃縮。 使粗產(chǎn)物從曱苯中重結(jié)晶，過濾出來，用Et20洗滌并且在真空中干燥 而得到白色固體的反應(yīng)產(chǎn)物。將步驟6的總體反應(yīng)方案提供在下面。
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步驟7
向來自步驟6的反應(yīng)產(chǎn)物(3. 6 g， 7. 28 mmol)在乙腈(85 mL)中的 混懸液中加入0.25 N NaOH(水溶液)(85 mL)并且將該混合物攪拌16 小時(shí)。接下來加入2 N HC1以便達(dá)到pH 5-6。過濾出形成的白色沉淀， 用水和乙腈洗滌并且在真空中干燥而得到淡黃色固體產(chǎn)物。將步驟7 的總體反應(yīng)方案提供在下面。
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步驟8
將NaOH (0.42 g, 10.5 mmol)在水(20 mL)中的溶液加入到來自 步驟7的反應(yīng)產(chǎn)物(2.29 g， 5.23 ramol)在乙醇(40 mL)中的混懸液中 并且將該混合物攪拌1小時(shí)。濃縮該反應(yīng)混合物，加入乙腈(20 mL)
57并且將所得淤漿攪拌過夜。過濾出沉淀并且在真空中干燥而得到2.45 g (97%產(chǎn)率)的灰白色固體反應(yīng)產(chǎn)物，通過在254 nm下的HPLC評(píng)估其 具有>99%純度。將步驟8的總體反應(yīng)方案提供在下面。
應(yīng)用的對(duì)映體純的(S) -二乙基-2-氨基-4-亞曱基戊二酸酯特別用 于制備也為對(duì)映體純的終產(chǎn)物。在本合成中，形成的產(chǎn)物對(duì)(S)異構(gòu)體 而言為對(duì)映體純的。
在8個(gè)步驟中以商購(gòu)的乙基-4-碘苯甲酸酯和二乙基-2-氨基-4-亞甲基戊二酸酯鹽酸鹽為原料合成化合物N- {4-[2-(2， 4-二氨基-7H-吡咯并[2， 3-d]嘧啶-5-基)乙基]苯甲?；鶀-4-亞曱基-谷氨酸 (CHL-003)，通過HPLC測(cè)定純度〉99%。步驟1-5, 7和8后如上述實(shí)施 例2中所述進(jìn)行。步驟6，如下所述使用外消旋形式的二乙基-2-氨基 -4-亞甲基戊二酸酯x HC1而不是(S)異構(gòu)體。
在步驟6中，將H0Bt x H20 (1. 52 g， 11.2 mmol)和EDC (2. 15 g， 11.2 mmol)加入到來自步驟5的反應(yīng)產(chǎn)物(3. 34 g， 11.2 mmol)在 DMF (70 mL)中的溶液中并且保持?jǐn)嚢?0分鐘。加入二乙基-2-氨基-4-亞甲基戊二酸酯x HC1 (2.85 g， 11.2 mmol)和Et3N(3. 12 mL, 22.5 mmol)并且將該反應(yīng)混合物攪拌2小時(shí)。在冷卻至環(huán)境溫度后，用水 (350 mL)稀釋該反應(yīng)混合物并且用二氯甲烷萃取。合并有機(jī)萃取物， 用鹽水鹽溶液洗滌，用Na2S04干燥并且濃縮。使粗產(chǎn)物從甲苯中重結(jié) 晶，過濾出來，用Et20洗滌并且在真空中干燥而得到白色固體的反應(yīng)
步驟6中
實(shí)施例3 CHL-003的合成本文所述的本發(fā)明的許多變型和其它實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明所屬領(lǐng)域 普通技術(shù)人員而言在得益于上述描述中提供的教導(dǎo)的情況下預(yù)期到。 因此，可以理解本發(fā)明并不限于披露的具體實(shí)施方案，并且指定變型 和其它實(shí)施方案包括在待批權(quán)利要求范圍內(nèi)。盡管本文使用了具體的 術(shù)語，但是它們僅以一般和描述性的含義使用，而并非限制目的。
權(quán)利要求
1.下式的化合物或其藥學(xué)上可接受的酯，酰胺，鹽，溶劑合物，對(duì)映體或前體藥物其中X為CHR9或NR9；Y1，Y2和Y3獨(dú)立為O或S；V1和V2獨(dú)立為O，S或NZ；Z為H，任選取代的烷基，任選取代的鏈烯基，任選取代的炔基，或烷芳基；R1和R2獨(dú)立為H，任選取代的烷基，任選取代的鏈烯基，任選取代的炔 id="icf0002" file="A2008800026040002C2.tif" wi="10" he="9" top= "164" left = "37" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="yes"/>烷芳基；R3為H，任選取代的烷基，任選取代的鏈烯基，任選取代的炔基，任選取代的烷氧基，羥基或鹵素；且R4，R5，R6，R7，R8和R9獨(dú)立為H，任選取代的烷基，任選取代的鏈烯基，任選取代的炔基，?；?，-C(O)-烷基，-C(O)-鏈烯基或-C(O)-炔基。
2. 權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物為藥學(xué)上可接受的鹽形式。
3. 權(quán)利要求2的化合物，其中所述化合物為堿金屬鹽形式。
4. 權(quán)利要求3的化合物，其中所迷化合物為二鈉鹽形式。
5. 權(quán)利要求2的化合物，其中R,， R2和Z中的一個(gè)或多個(gè)被成鹽陽離子取代。
6. 權(quán)利要求5的化合物，其中所述的成鹽陽離子包括堿金屬陽離子。
7. 權(quán)利要求2的化合物，其中V!和V2為0且R,和R2均獨(dú)立地被成鹽陽離子取代。
8. 權(quán)利要求7的化合物，其中所述的成鹽陽離子包括堿金屬陽離子。
9. 具有下式的權(quán)利要求1的化合物或其藥學(xué)上可接受的酯，酰胺，鹽，溶劑合物，對(duì)映體或前體藥物/R8其中-.X為CHR9或NR9;R3為H，任選取代的烷基，任選取代的鏈烯基，任選取代的炔基，任選取代的烷氧基，羥基或卣素；且R4， R5， R6， R7, Rs和R,獨(dú)立為H, 4壬選取^C的烷基，4壬選取4戈的鏈烯基，任選取代的炔基，?；?，-c(o)-烷基，-C(O)-鏈烯基或-C(O)-炔基。
10. 權(quán)利要求9的化合物，其中所述化合物為藥學(xué)上可接受的鹽形式。
11. 權(quán)利要求10的化合物，其中所述化合物為堿金屬鹽形式。
12. 權(quán)利要求ll的化合物，其中所述化合物為二鈉鹽形式。
13. 具有下式的權(quán)利要求1的化合物或其藥學(xué)上可接受的酯，酰胺，鹽，溶劑合物，對(duì)映體或前體藥物<formula>formula see original document page 4</formula>其中X為CHR,或NR9;Y!， 丫2和丫3獨(dú)立為0或S;V,和V2獨(dú)立為0， S或NZ;Z為H,任選取代的烷基，任選取代的鏈烯基，任選取代的炔基，或烷芳基；R,和R2獨(dú)立為H,任選取代的烷基，任選取代的鏈烯基，任選取代的炔基，或烷芳基；R3為H,任選取代的烷基，任選取代的鏈烯基，任選取代的炔基，任選取代的烷氧基，羥基或卣素；且R,為H，任選取代的烷基，任選取代的鏈烯基，任選取代的炔基，酰基，-C(O)-烷基，-C(O)-鏈烯基或-C(0)-炔基。
14. 權(quán)利要求13的化合物，其中所述化合物為藥學(xué)上可接受的鹽形式。
15. 權(quán)利要求14的化合物，其中所述化合物為堿金屬鹽形式。
16. 權(quán)利要求15的化合物，其中所述化合物為二鈉鹽形式。
17. 權(quán)利要求14的化合物，其中R" R2和Z中的一個(gè)或多個(gè)被成鹽陽離子取代。
18. 權(quán)利要求17的化合物，其中所述的成鹽陽離子包括堿金屬陽離子。
19. 權(quán)利要求14的化合物，其中V!和V2為0且Ri和R2均獨(dú)立地被成鹽陽離子取代。
20. 權(quán)利要求19的化合物，其中所述的成鹽陽離子包括堿金屬陽離子。
21.具有下式的權(quán)利要求1的化合物:或其藥學(xué)上可接受的酯，酰胺，鹽，溶劑合物，對(duì)映體或前體藥物。
22. 權(quán)利要求21的化合物，其中所述化合物為藥學(xué)上可接受的鹽形式。
23. 權(quán)利要求22的化合物，其中所述化合物為堿金屬鹽形式。
24. 權(quán)利要求22的化合物，其中所述化合物為二鈉鹽形式。
25. 具有下式的權(quán)利要求24的化合物
26. 權(quán)利要求21的化合物，其中所述化合物就(S)對(duì)映體而言為對(duì)映體純的。
27. 權(quán)利要求26的化合物，其中所述化合物具有至少約80%的對(duì)映體純度。
28. 權(quán)利要求26的化合物，其中所述化合物具有至少約95%的對(duì)映體純度。
29. 權(quán)利要求21的化合物，其中所述化合物就(R)對(duì)映體而言為對(duì)映體純的。
30. 權(quán)利要求29的化合物，其中所述化合物具有至少約80%的對(duì)映體純度。
31. 權(quán)利要求29的化合物，其中所述化合物具有至少約95%的對(duì) 映體純度。
32. 權(quán)利要求25的化合物，其中所述化合物就(S)對(duì)映體而言為 對(duì)映體純的。
33. 權(quán)利要求32的化合物，其中所述化合物具有至少約80%的對(duì) 映體純度。
34. 權(quán)利要求32的化合物，其中所述化合物具有至少約95%的對(duì) 映體純度。
35. 權(quán)利要求25的化合物，其中所述化合物就(R)對(duì)映體而言為 對(duì)映體純的。
36. 權(quán)利要求35的化合物，其中所述化合物具有至少約80%的對(duì) 映體純度。
37. 權(quán)利要求35的化合物，其中所述化合物具有至少約95%的對(duì) 映體純度。
38. 藥物組合物，包含權(quán)利要求1 - 37中任意項(xiàng)的化合物和藥學(xué) 上可接受的載體。
39. 治療選自異常細(xì)胞增殖，炎癥，哮喘和關(guān)節(jié)炎的病癥的方法， 該方法包括對(duì)有此需要的受試者給予治療有效量的權(quán)利要求1 - 37中 任意項(xiàng)的化合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及具有式(I)結(jié)構(gòu)的抗葉酸劑化合物及其藥學(xué)上可接受的酯類、酰胺類、鹽、溶劑合物和前體藥物，其中X為CHR9或NR9；Y1、Y2和Y3獨(dú)立為O或S；V1和V2獨(dú)立為O、S或NZ；Z為H、任選取代的烷基、任選取代的鏈烯基、任選取代的炔基、或烷芳基；R1和R2獨(dú)立為H、任選取代的烷基、任選取代的鏈烯基、任選取代的炔基、或烷芳基；R3為H、任選取代的烷基、任選取代的鏈烯基、任選取代的炔基、任選取代的烷氧基、羥基或鹵素；且R4，R5，R6，R7，R8和R9獨(dú)立為H、任選取代的烷基、任選取代的鏈烯基、任選取代的炔基、?；?、-C(O)-烷基、-C(O)-鏈烯基或-C(O)-炔基。所述的化合物用于治療多種病癥、包括異常細(xì)胞增殖、炎性疾病、哮喘和關(guān)節(jié)炎的藥物組合物和方法。
文檔編號(hào)C07D487/04GK101652366SQ200880002604
公開日2010年2月17日 申請(qǐng)日期2008年1月18日 優(yōu)先權(quán)日2007年1月19日
發(fā)明者M·J·羅伯斯, S·派德 申請(qǐng)人:切爾西治療公司