專利名稱：具有β的制作方法
背景技術(shù)：
發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及新的具有β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑和毒蕈堿性受體拮抗劑活性的化合物。本發(fā)明還涉及包含該化合物的藥物組合物、用于制備該化合物的方法和中間體以及使用該化合物治療肺病的方法。
技術(shù)狀態(tài)通常用支氣管擴(kuò)張劑治療肺病，例如哮喘和慢性阻塞性肺病(COPD)。廣泛應(yīng)用的一類支氣管擴(kuò)張劑由β2腎上腺素能受體(腎上腺素受體)激動(dòng)劑，例如沙丁胺醇、福莫特羅和沙美特羅組成。這些化合物通常通過(guò)吸入給藥。另一類支氣管擴(kuò)張劑由毒蕈堿性受體拮抗劑(抗膽堿能化合物)，例如異丙阿托品和泰烏托品(tiotropium)組成。這些化合物通常也通過(guò)吸入給藥。
用于治療肺病的包含β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑和毒蕈堿性受體拮抗劑兩者的藥物組合物在本領(lǐng)域中也是已知的。例如，美國(guó)專利No.6433027公開(kāi)了包含毒蕈堿性受體拮抗劑例如噻托溴銨以及β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑例如富馬酸福莫特羅的藥物組合物。
雖然含有β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑和毒蕈堿性受體拮抗劑活性的化合物是已知的，但是提供在相同分子中具有β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑和毒蕈堿性受體拮抗劑兩種活性的化合物是極為合乎需要的。因?yàn)檫@類雙功能化合物能夠通過(guò)兩種獨(dú)立的作用模式提供支氣管擴(kuò)張，同時(shí)具有單一的分子藥物動(dòng)力學(xué)，所以預(yù)期具有β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑和毒蕈堿性受體拮抗劑活性的化合物特別適用作治療劑。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了新的化合物，該化合物被發(fā)現(xiàn)既具有β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑，又具有毒蕈堿性受體拮抗劑活性。預(yù)期這樣的化合物適用作用于治療肺病的治療劑。還發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的某些化合物對(duì)多巴胺D2受體具有親和性。
因此，在其組成方面之一，本發(fā)明涉及式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體 其中G1和G2中的一個(gè)代表NH，另一個(gè)代表S、NH、O或CH2；W代表O或NWa；其中Wa是氫或(1-4C)烷基；每個(gè)R1獨(dú)立地選自(1-4C)烷基、(2-4C)烯基、(2-4C)炔基、(3-6C)環(huán)烷基、氰基、鹵素、-OR1a、-C(O)OR1b、-SR1c、-S(O)R1d、-S(O)2R1e和-NR1fR1g；其中R1a、R1b、R1c、R1d、R1e、R1f和R1g中的每一個(gè)獨(dú)立地是氫、(1-4C)烷基或苯基-(1-4C)烷基；每個(gè)R2獨(dú)立地選自(1-4C)烷基、(2-4C)烯基、(2-4C)炔基、(3-6C)環(huán)烷基、氰基、鹵素、-OR2a、-C(O)OR2b、-SR2c、-S(O)R2d、-S(O)2R2e和-NR2fR2g；其中R2a、R2b、R2c、R2d、R2e、R2f和R2g中的每一個(gè)獨(dú)立地是氫、(1-4C)烷基或苯基-(1-4C)烷基；每個(gè)R3獨(dú)立地選自(1-4C)烷基、(2-4C)烯基、(2-4C)炔基、(3-6C)環(huán)烷基、氰基、鹵素、-OR3a、-C(O)OR3b、-SR3c、-S(O)R3d、-S(O)2R3e和-NR3fR3g；或兩個(gè)R3基團(tuán)結(jié)合形成(1-3C)亞烷基、(2-3C)亞烯基或環(huán)氧乙烷-2，3-二基；其中R3a、R3b、R3c、R3d、R3e、R3f和R3g中的每一個(gè)獨(dú)立地是氫或(1-4C)烷基；R4代表二價(jià)烴基含有4至28個(gè)碳原子并且任選含有獨(dú)立地選自鹵素、氧、氮和硫的1至10個(gè)雜原子，條件是與R4連接的兩個(gè)氮原子之間的的最短鏈上的連續(xù)原子的數(shù)目在4至16的范圍內(nèi)；R5代表氫或(1-4C)烷基；R6代表氫或羥基；每個(gè)R7a和R7b獨(dú)立地選自氫、(1-4C)烷基、羥基和氟；a是0或1至3的整數(shù)；b是0或1至3的整數(shù)；c是0或1至4的整數(shù)；d是0或1至5的整數(shù)；并且m是0或1至3的整數(shù)。
在式I的化合物中，特別感興趣的化合物是對(duì)M3毒蕈堿性受體的抑制常數(shù)(Ki)小于約100nM并且對(duì)β2腎上腺素能受體的激動(dòng)的半數(shù)最大有效濃度EC50小于約100nM的那些化合物。尤其是，特別感興趣的化合物是其中對(duì)M3毒蕈堿性受體的抑制常數(shù)(Ki)與對(duì)β2腎上腺素能受體的激動(dòng)的EC50的比值為約30∶1至約1∶30的那些化合物。
在其組成方面的另一方面，本發(fā)明涉及式Ia的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體 其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、G1、G2、W、a、b和c如本申請(qǐng)中所定義(包括任意特定或優(yōu)選的實(shí)施方案)。
在其組成方面的另一方面，本發(fā)明涉及式Ib的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體 其中R1、R2、R3、R4、W、a、b和c如本申請(qǐng)中所定義(包括任意特定或優(yōu)選的實(shí)施方案)。
在其組成方面的還另一方面，本發(fā)明涉及式Ic的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體 其中R1、R2、R3、R4、W、a、b和c如本申請(qǐng)中所定義(包括任意特定或優(yōu)選的實(shí)施方案)。
在其組成方面的還另一方面，本發(fā)明涉及式Id的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體 其中R4如本申請(qǐng)中所定義(包括任意特定或優(yōu)選的實(shí)施方案)。
在其組成方面的另一方面，本發(fā)明涉及藥物組合物，其包含藥學(xué)上可接受的載體和治療有效量的本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體。該藥物組合物可任選含有其它治療劑。
因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及藥物組合物，其包含藥學(xué)上可接受的載體和治療有效量的本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體；以及治療有效量的甾體抗炎劑，例如皮質(zhì)類固醇或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及藥物組合物，其包含藥學(xué)上可接受的載體和治療有效量的本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體；以及治療有效量的磷酸二酯酶-4(PDE4)抑制劑或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體。
本發(fā)明的化合物既具有β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑活性，又具有毒蕈堿性受體拮抗劑活性。因此，預(yù)期本發(fā)明的化合物適用于治療肺病，例如哮喘和慢性阻塞性肺病。
因此，在其方法方面的一方面，本發(fā)明涉及治療肺病的方法，該方法包括對(duì)有治療需要的患者給予治療有效量的本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體。
另外，在其方法方面的另一方面，本發(fā)明涉及在患者中產(chǎn)生支氣管擴(kuò)張的方法，該方法包括對(duì)患者給予產(chǎn)生支氣管擴(kuò)張量的本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體。
本發(fā)明還涉及治療慢性阻塞性肺病或哮喘的方法，該方法包括對(duì)有治療需要的患者給予治療有效量的本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體。
本發(fā)明還涉及適用于制備式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體的方法和新的中間體。因此，在其方法方面的另一方面，本發(fā)明涉及制備式I化合物的方法，該方法包括(a)使式1的化合物或其鹽，與式2化合物反應(yīng)；(b)使式3化合物或其鹽，與式4化合物反應(yīng)；(c)將式5化合物與式6化合物偶聯(lián)；(d)對(duì)于其中R5代表氫原子的式I化合物，在還原劑存在下，使式3化合物與式7a或7b化合物或其水合物反應(yīng)；(e)在還原劑存在下，使式1化合物與式8化合物或其水合物反應(yīng)；(f)使式9化合物與式10化合物反應(yīng)；或者(g)在還原劑存在下，使式11化合物或其水合物與式10化合物反應(yīng)；然后除去任意保護(hù)基團(tuán)形成式I的化合物；其中式1-11的化合物如本申請(qǐng)中所定義。
在一個(gè)實(shí)施方案中，上述方法還包括形成式I化合物的藥學(xué)上可接受的鹽的步驟。在其它的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及本申請(qǐng)中描述的其它方法；并涉及由本申請(qǐng)中描述的任意方法制備的產(chǎn)物。
本發(fā)明還涉及在治療中使用或作為藥物的本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體。
另外，本發(fā)明涉及本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體在制備藥物中的用途；尤其是在制備用于治療肺病的藥物中的用途。
發(fā)明詳述在它的組成方面之一，本發(fā)明涉及新的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體。這些化合物可包含一個(gè)或多個(gè)手性中心，因此除非另外指出，當(dāng)這類手性中心存在時(shí)，本發(fā)明涉及外消旋混合物；純立體異構(gòu)體(即對(duì)映異構(gòu)體或非對(duì)映異構(gòu)體)；富含立體異構(gòu)體的混合物等。除非另外指出，當(dāng)本文展示或命名特定立體異構(gòu)體時(shí)，本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解少量的其它立體異構(gòu)體可以存在于本發(fā)明的組合物中，條件是組合物作為整體的有用性不被這類其它異構(gòu)體的存在而被消除。
尤其是，其中R6代表羥基的式I化合物在下式符號(hào)*所示的碳原子含有手性中心 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，由符號(hào)*指定的碳原子具有(R)構(gòu)型。在這一實(shí)施方案中，優(yōu)選式I化合物在符號(hào)*指定的碳原子具有(R)構(gòu)型或者富集呈在這一碳原子具有(R)構(gòu)型的立體異構(gòu)體形式。在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，符號(hào)*指定的碳原子具有(S)構(gòu)型。在這一實(shí)施方案中，優(yōu)選式I化合物在符號(hào)*指定的碳原子具有(S)構(gòu)型或者富集呈在這一碳原子具有(S)構(gòu)型的立體異構(gòu)體形式。在一些情況下，為了優(yōu)化本發(fā)明化合物的β2腎上腺素能激動(dòng)劑活性，優(yōu)選符號(hào)*指定的碳原子具有(R)構(gòu)型。
本發(fā)明的化合物也包含多個(gè)堿性基團(tuán)(例如氨基基團(tuán))，因此這類化合物可以游離堿形式或以各種鹽形式存在。所有這類鹽形式都包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。此外，本發(fā)明化合物的溶劑化物或其鹽包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
此外，除非另外指出，當(dāng)可適用時(shí)，本發(fā)明化合物的所有順-反或E/Z異構(gòu)體(幾何異構(gòu)體)、互變異構(gòu)形式和拓?fù)洚悩?gòu)形式包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
本文采用的用以命名本發(fā)明化合物及其中間體的命名法一般是利用商業(yè)上可購(gòu)得的AutoNom軟件(MDL、San Leandro，California)派生的。通常，其中W是O的式I化合物被命名為聯(lián)苯-2-基氨基甲酸的酯衍生物；并且其中W是NWa的式I化合物被命名作為脲衍生物。
代表性實(shí)施方案下述取代基和值是為了提供本發(fā)明各方面和實(shí)施方案的有代表性的例子。這些有代表性的值是為了進(jìn)一步定義和說(shuō)明這些方面和實(shí)施方案，并不是為了排除其它實(shí)施方案或限制本發(fā)明的范圍。在這一方面，除非具體指出，優(yōu)選特定值或取代基的表述不是為了以任何方式從本發(fā)明排除其它值或取代基。
在式I化合物的特定實(shí)施方案中，a和b獨(dú)立地是0、1或2；包括0或1。在一個(gè)實(shí)施方案中，a和b都是0。
當(dāng)存在時(shí)，R1每一個(gè)可以在與其相連的苯環(huán)的2、3、4、5或6-位。在一個(gè)實(shí)施方案中，R1每一個(gè)獨(dú)立地選自(1-4C)烷基、鹵素、-OR1a和-NR1fR1g；例如甲基、氟、氯、溴、羥基、甲氧基、氨基、甲基氨基、二甲基氨基等。R1的特定值是氟或氯。
當(dāng)存在時(shí)，R2每一個(gè)可以在與其相連的亞苯基環(huán)的3、4、5或6-位(與氮原子連接的在亞苯環(huán)上的碳原子是位置1)。在一個(gè)實(shí)施方案中，R2每一個(gè)獨(dú)立地選自(1-4C)烷基、鹵素、-OR2a和-NR2fR2g；例如甲基、氟、氯、溴、羥基、甲氧基、氨基、甲基氨基、二甲基氨基等。R2的特定值是氟或氯。
R1a、R1b、R1c、R1d、R1e、R1f和R1g和R2a、R2b、R2c、R2d、R2e、R2f和R2g每一個(gè)當(dāng)分別在R1和R2中使用時(shí)，獨(dú)立地是氫、(1-4C)烷基或苯基-(1-4C)烷基；例如氫、甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基和芐基。在一個(gè)實(shí)施方案中，這些基團(tuán)獨(dú)立地是氫或(1-3C)烷基。在另一實(shí)施方案中，這些基團(tuán)獨(dú)立地是氫、甲基或乙基。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，W是O。在另一個(gè)實(shí)施方案中，W是NWa。
總的來(lái)說(shuō)，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)其中W代表O的化合物對(duì)于毒蕈堿性受體和β2腎上腺素能受體顯示尤其高的親和性。因此，在本發(fā)明的特定實(shí)施方案中，W優(yōu)選代表O。
當(dāng)W是NWa時(shí)，Wa是氫或(1-4C)烷基；例如氫、甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基和叔丁基。在一個(gè)實(shí)施方案中，Wa是氫或(1-3C)烷基。在另一個(gè)實(shí)施方案中，Wa是氫、甲基或乙基；例如氫或甲基。在另一個(gè)實(shí)施方案中，Wa是氫且NWa是NH。
當(dāng)b是0并且m是2時(shí)(這樣W與哌啶環(huán)連接)，感興趣的特別實(shí)施方案是其中W在相對(duì)于哌啶環(huán)的氮原子的4-位置與哌啶環(huán)連接的化合物。
在式I化合物的特定實(shí)施方案中，c是0、1或2；包括0或1。在一個(gè)實(shí)施方案中，c是0。
在式I化合物的特別實(shí)施方案中，d是0、1或2；包括0或1。在一個(gè)實(shí)施方案中，d是0。在另一個(gè)實(shí)施方案中，d是1。
在一個(gè)實(shí)施方案中，R7a和R7b獨(dú)立地選自氫、甲基或乙基。R7a和R7b的特殊的值是氫。
在式I化合物的特殊實(shí)施方案中，m是0、1或2；包括1或2。在一個(gè)實(shí)施方案中，m是2。當(dāng)m是1時(shí)，所得到的環(huán)是吡咯烷環(huán)；并且當(dāng)m是2時(shí)，所得到的環(huán)是哌啶環(huán)。
在式I化合物的特殊實(shí)施方案中，c是0、1或2；包括0或1。在一個(gè)實(shí)施方案中，c是0。
在特殊實(shí)施方案中，每個(gè)R3獨(dú)立地選自(1-4C)烷基；例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基和叔丁基。在另一方面，每個(gè)R3獨(dú)立地是甲基或乙基。
當(dāng)m是2時(shí)，在一個(gè)實(shí)施方案中，每個(gè)R3在哌啶環(huán)的3、4或5-位(其中哌啶環(huán)的氮原子是1位)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，R3在哌啶環(huán)的4-位。在還另一個(gè)實(shí)施方案中，每個(gè)R3在哌啶環(huán)的2-位或6-位。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，R3在哌啶環(huán)的1-位，即在哌啶環(huán)的氮原子上，因此形成季銨鹽。在這一實(shí)施方案的一個(gè)特定方面，每個(gè)R3獨(dú)立地選自(1-4C)烷基；例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基和叔丁基。在另一方面，每個(gè)R3獨(dú)立地是甲基或乙基。
在還另一個(gè)實(shí)施方案中，兩個(gè)R3基團(tuán)結(jié)合以形成(1-3C)亞烷基或(2-3C)亞烯基基團(tuán)。例如，在哌啶環(huán)上2和6-位的兩個(gè)R3基團(tuán)能夠結(jié)合以形成亞乙基橋(即哌啶環(huán)和R3基團(tuán)形成8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛烷環(huán))；或者在哌啶環(huán)上1和4-位的兩個(gè)R3基團(tuán)能夠結(jié)合以形成亞乙基橋(即哌啶環(huán)和R3基團(tuán)形成1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷環(huán))；或在哌啶環(huán)上的2和6-位的兩個(gè)R3基團(tuán)可以結(jié)合形成亞乙烯基橋(即，哌啶環(huán)和R3基團(tuán)形成8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]-辛-6-烯環(huán))。在這一實(shí)施方案中，也可以存在如本文所定義的其它R3基團(tuán)。
在還另一個(gè)實(shí)施方案中，兩個(gè)R3基團(tuán)結(jié)合以形成環(huán)氧乙烷-2，3-二基基團(tuán)。例如，在哌啶環(huán)上2和6-位的兩個(gè)R3基團(tuán)能夠結(jié)合以形成3-氧雜三環(huán)[3.3.1.02，4]壬烷環(huán))。在這一實(shí)施方案中，也可以存在如本文所定義的其它R3基團(tuán)。
R3a、R3b、R3c、R3d、R3e、R3f和R3g每一個(gè)當(dāng)在R3中使用時(shí)獨(dú)立地是氫或(1-4C)烷基；例如氫、甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基和叔丁基。在一個(gè)實(shí)施方案中，這些基團(tuán)獨(dú)立地是氫或(1-3C)烷基。在另一個(gè)實(shí)施方案中，這些基團(tuán)獨(dú)立地是氫、甲基或乙基。
在式I化合物的一個(gè)實(shí)施方案中，R5是氫或(1-4C)烷基；例如氫、甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基和叔丁基。在另一個(gè)實(shí)施方案中，每個(gè)R5獨(dú)立地是氫、甲基或乙基。在特定實(shí)施方案中，R5是氫。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，R6是氫。在另一個(gè)實(shí)施方案中，R6是羥基。
在單獨(dú)的實(shí)施方案中、G1和G2選自G1是NH和G2是S；G1是NH和G2是NH；G1是NH和G2是O；G1是NH和G2是CH2；G1是S和G2是NH；G1是O和G2是NH；并且G1是CH2和G2是NH。
本發(fā)明的二價(jià)烴基，R4，含有4至28個(gè)碳原子并且任選含有1至10個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、氧、氮和硫的雜原子，條件是與R4連接的兩個(gè)氮原子之間的最短鏈上的鄰接原子的數(shù)目為4至16。在一個(gè)實(shí)施方案中，該基團(tuán)含有4至24個(gè)碳原子，包括6至20個(gè)碳原子，例如8至18個(gè)碳原子；并且任選含有1至8個(gè)雜原子，包括1至6個(gè)雜原子。
二價(jià)烴基可以含有原子的任意排列，包括亞烷基、亞環(huán)烷基、亞芳基、亞雜芳基和亞雜環(huán)基或它們的組合。所述烴基可以被一個(gè)或多個(gè)雜原子或雜原子的組合和C碳原子中斷形成不同的官能團(tuán)，例如醚、硫醚、胺、酰胺、酯、氨基甲酸酯、脲、砜、亞砜、氨磺酰等。
當(dāng)測(cè)定與二價(jià)烴基連接的兩個(gè)氮原子之間最短鏈上鄰接原子的數(shù)目時(shí)，從二價(jià)烴基中的第一個(gè)原子，即與式I中的氮雜環(huán)烷基基團(tuán)(即當(dāng)m是2時(shí)，為哌啶基團(tuán))的氮原子相鄰的原子開(kāi)始，到二價(jià)烴基中的最后一個(gè)原子，即與式I中的-NHCH(R5)-基團(tuán)的氮原子相鄰的原子結(jié)束，連續(xù)地計(jì)數(shù)鏈上的每個(gè)鄰接原子。當(dāng)兩個(gè)或更多個(gè)鏈?zhǔn)强赡軙r(shí)，使用最短鏈測(cè)定鄰接原子的數(shù)目。如下所示，例如，當(dāng)所述二價(jià)烴基是-(CH2)2-NHC(O)-CH2-(苯-1，4-亞基)-CH2-時(shí)，如下所示在最短的鏈上有10個(gè)鄰接的原子
在本發(fā)明的特殊方面，本發(fā)明化合物的二價(jià)烴基(例如，式I中的R4)是下式的二價(jià)基團(tuán)-(R4a)d-(A1)e-(R4b)f-Q-(R4c)g-(A2)h-(R4d)i-其中d、e、f、g、h和i各自獨(dú)立地選自0和1；R4a、R4b、R4c和R4d各自獨(dú)立地選自(1-10C)亞烷基、(2-10C)亞烯基和(2-10C)亞炔基，其中每個(gè)亞烷基、亞烯基或亞炔基未被取代或被1至5個(gè)取代基取代，該取代基獨(dú)立地選自(1-4C)烷基、氟、羥基、苯基和苯基-(1-4C)烷基；A1和A2各自獨(dú)立地選自(3-7C)亞環(huán)烷基、(6-10C)亞芳基、-O-(6-10C)亞芳基、(6-10C)亞芳基-O-、(2-9C)亞雜芳基、-O-(2-9C)亞雜芳基、(2-9C)亞雜芳基-O-和(3-6C)亞雜環(huán)基，其中每個(gè)亞環(huán)烷基未被取代或被1至4個(gè)取代基取代，該取代基獨(dú)立地選自(1-4C)烷基，并且每個(gè)亞芳基、亞雜芳基或亞雜環(huán)基未被取代或被1至4個(gè)取代基取代，該取代基獨(dú)立地選自鹵素、(1-4C)烷基、(1-4C)烷氧基、-S-(1-4C)烷基、-S(O)-(1-4C)烷基、-S(O)2-(1-4C)烷基、-C(O)O(1-4C)烷基、羧基、氰基、羥基、硝基、三氟甲基和三氟甲氧基；Q選自鍵、-O-、-C(O)O-、-OC(O)-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-N(Qa)C(O)-、-C(O)N(Qb)-、-N(Qc)S(O)2-、-S(O)2N(Qd)-、-N(Qe)C(O)N(Qf)-、-N(Qg)S(O)2N(Qh)-、-OC(O)N(Qi)-、-N(Qj)C(O)O-和-N(Qk)；Qa、Qb、Qc、Qd、Qe、Qf、Qg、Qh、Qi、Qj和Qk各自獨(dú)立地選自氫和(1-6C)烷基，A3和(1-4C)亞烷基-A4，其中烷基基團(tuán)是未取代的或被獨(dú)立地選自氟、羥基和(1-4C)烷氧基的1到3個(gè)取代基取代；或與它們連接的氮原子和基團(tuán)R4b或R4c一起形成4-6元的亞氮雜環(huán)烷基基團(tuán)；A3和A4各自獨(dú)立地選自(3-6C)環(huán)烷基、(6-10C)芳基、(2-9C)雜芳基和(3-6C)雜環(huán)基，其中每個(gè)環(huán)烷基未被取代或被1至4個(gè)取代基取代，該取代基獨(dú)立地選自(1-4C)烷基并且每個(gè)芳基、雜芳基或雜環(huán)基未被取代或被1至4個(gè)取代基取代，該取代基獨(dú)立地選自鹵素、(1-4C)烷基和(1-4C)烷氧基。
在這種實(shí)施方案中，選擇各組分R4a，A1、R4b、Q、R4c，A2和R4d的值，使得與二價(jià)烴基連接的兩個(gè)氮原子之間的最短鏈上的鄰接原子的數(shù)目在4至16的范圍內(nèi)，(具體地為，4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16)；包括8、9、10、11、12、13或14；例如8、9、10或11；或者9或10。在選擇每個(gè)變量的值時(shí)，本領(lǐng)域的技術(shù)人員將理解應(yīng)這樣選擇所述的值，使得形成化學(xué)穩(wěn)定的基團(tuán)。
在一個(gè)實(shí)施方案中，R4a選自(1-10C)亞烷基、(2-10C)亞烯基和(2-10C)亞炔基，其中亞烷基未被取代或或被1或2個(gè)獨(dú)立地選自(1-4C)烷基、羥基和苯基的取代基取代。R4a的特殊值的代表性實(shí)例是-(CH2)2-、-(CH2)3-、-(CH2)4-，-(CH2)5-、-(CH2)6-、-(CH2)7-、-(CH2)8-、-(CH2)9-、-(CH2)10-、-(CH2)CH(CH3)-、-(CH2)C(CH3)2-和-(CH2)2C(苯基)2-。在另一方面，R4a是-(CH2)C(＝CH2)-。
在一個(gè)實(shí)施方案中，d是1。
在一個(gè)實(shí)施方案中，A1是任選地取代的(3-7C)亞環(huán)烷基基團(tuán)；包括亞環(huán)己基基團(tuán)，例如環(huán)己-1，4-亞基和環(huán)己-1，3-亞基；和亞環(huán)戊基基團(tuán)，例如環(huán)戊-1，3-亞基。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，A1是任選地取代的(6-10C)亞芳基基團(tuán)，包括亞苯基基團(tuán)，例如苯-1，4-亞基、苯-1，3-亞基和苯-1，2-亞基；以及亞萘基基團(tuán)，例如萘-1，4-亞基和萘-1，5-亞基。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，A1任選地是取代的(2-9C)亞雜芳基基團(tuán)，包括亞吡啶基基團(tuán)，例如吡啶-1，4-亞基；亞呋喃基基團(tuán)，例如呋喃-2，5-亞基和呋喃-2，4-亞基；亞噻吩基基團(tuán)，例如噻吩-2，5-亞基和噻吩-2，4-亞基；以及亞吡咯基，例如吡咯-2，5-亞基和吡咯-2，4-亞基。
在還另一個(gè)實(shí)施方案中，A1是任選地取代的(3-6C)亞雜環(huán)基基團(tuán)，包括亞哌啶基基團(tuán)，例如哌啶-1，4-亞基；以及亞吡咯烷基基團(tuán)，例如吡咯烷-2，5-亞基。
在特定實(shí)施方案中，A1是任選地取代的亞苯基、亞噻吩基、亞環(huán)戊基、亞環(huán)己基或亞哌啶基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，e是0。
在特殊的實(shí)施方案中，R4b是(1-5C)亞烷基。R4b的殊值的實(shí)例是-CH2-、-(CH2)2-、-(CH2)3-、-(CH2)4-、-(CH2)5-；包括亞甲基、亞乙基和亞丙基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，f是0。
在特殊實(shí)施方案中、Q選自鍵、-N(Qa)C(O)-、-C(O)N(Qb)-、-N(Qc)S(O)2-、-S(O)2N(Qd)-、-N(Qe)C(O)N(Qf)-、-OC(O)N(Qi)-、-N(Qj)C(O)O-或-N(Qk)；例如其中Q是鍵、-N(Qa)C(O)-或-C(O)N(Qb)-。Q的特殊值的代表性實(shí)例是鍵、O、NH、-C(O)NH-、-C(O)N(CH3)-、-NHC(O)-，-N(CH3)C(O)-、-S(O)2NH-、-S(O)2N(CH3)-、-NHS(O)2-、-N(CH3)S(O)2-和-NHC(O)NH-。Q的值與R4c一起的另一個(gè)實(shí)例是-C(O)(哌啶-1，4-亞基)。
在一個(gè)實(shí)施方案中，Qa、Qb、Qc、Qd、Qe、Qf、Qg、Qh、Qi、Qj和Qk各自獨(dú)立地選自氫和(1-6C)烷基，其中該烷基未被取代或被1至3個(gè)獨(dú)立地選自氟、羥基和(1-4C)烷氧基的取代基取代。例如，Qa、Qb、Qc、Qd、Qe、Qf、Qg、Qh、Qi、Qj和Qk各自獨(dú)立地選自氫和(1-3C)烷基、包括氫、甲基、乙基、正丙基和乙丙基。Qa、Qb、Qc、Qd、Qe、Qf、Qg、Qh、Qi、Qj和Qk中每一個(gè)的值的實(shí)例是氫。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，Qa、Qb、Qc、Qd、Qe、Qf、Qg、Qh、Qi、Qj和Qk與它們所連接的氮原子和基團(tuán)R4b或R4c一起，形成4-6元亞氮雜環(huán)烷基。例如，Qa和Qb與它們所連接的氮原子和基團(tuán)R4b或R4c一起，形成哌啶-4-亞基。舉例說(shuō)明，當(dāng)Q代表-N(Qa)C(O)-并且Qa與它所連接的氮原子和基團(tuán)R4b-起形成哌啶-4-亞基時(shí)，R4是下式基團(tuán) 相似地，當(dāng)Q代表-C(O)N(Qb)-并且Qb與其所連接的氮原子和基團(tuán)R4c一起形成哌啶-4-亞基時(shí)，R4是下式基團(tuán) 在特殊的實(shí)施方案中，R4c是(1-5C)亞烷基。R4c的特殊值的代表性實(shí)例是-CH2-、-(CH2)2-、-(CH2)3-、-(CH2)4-、-(CH2)5-；包括亞甲基、亞乙基和亞丙基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，A2是任選地取代的(3-7C)亞環(huán)烷基基團(tuán)；包括亞環(huán)己基基團(tuán)，例如環(huán)己-1，4-亞基和環(huán)己-1，3-亞基；和亞環(huán)戊基基團(tuán)，例如環(huán)戊1，3-亞基。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，A2是任選地取代的(6-10C)亞芳基基團(tuán)，包括亞苯基基團(tuán)，例如苯-1，4-亞基、苯-1，3-亞基和苯-1，2-亞基；和亞萘基基團(tuán)，例如萘-1，4-亞基和萘-1，5-亞基。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，A2任選地是取代的(2-9C)亞雜芳基基團(tuán)，包括亞吡啶基基團(tuán)，例如吡啶-1，4-亞基；亞呋喃基基團(tuán)，例如呋喃-2，5-亞基和呋喃-2，4-亞基；亞噻吩基基團(tuán)，例如噻吩-2，5-亞基和噻吩-2，4-亞基；和亞吡咯基，例如吡咯-2，5-亞基和吡咯-2，4-亞基。
在還另一個(gè)實(shí)施方案中，A2是任選地取代的(3-6C)亞雜環(huán)基基團(tuán)，包括亞哌啶基基團(tuán)，例如哌啶-1，4-亞基；和亞吡咯烷基基團(tuán)，例如吡咯烷-2，5-亞基。
在特定實(shí)施方案中，A2是任選地取代的亞苯基、亞噻吩基、亞環(huán)戊基、亞環(huán)己基或亞哌啶基。
經(jīng)由說(shuō)明，A1或A2每一個(gè)或兩者可以是亞苯基，例如苯-1，4-亞基或苯-1，3-亞基，其中亞苯基基團(tuán)是未取代的或被獨(dú)立地選自鹵素、(1-4C)烷基、(1-4C)烷氧基、-S-(1-4C)烷基、-S(O)-(1-4C)烷基、-S(O)2-(1-4C)烷基、-C(O)O(1-4C)烷基、羧基、氰基、羥基、硝基、三氟甲基和三氟甲氧基的1到4個(gè)取代基取代。代表性的例子包括苯-1，3-亞基、苯-1，4-亞基、4-氯-苯-1，3-亞基、6-氯-苯-1，3-亞基、4-甲基-苯-1，3-亞基、2-氟-苯-1，4-亞基、2-氯-苯-1，4-亞基、2-溴-苯-1，4-亞基、2-碘-苯-1，4-亞基、2-甲基苯-1，4-亞基、2-甲氧基苯-1，4-亞基、2-三氟甲氧基苯-1，4-亞亞基、3-硝基苯-1，4-亞基、3-氯苯-1，4-亞基、2，5-二氟苯-1，4-亞基、2，6-二氯苯-1，4-亞基、2，6-二碘-苯1，4-亞基、2-氯-6-甲基苯-1，4-亞基、2-氯-5-甲氧基-苯1，4-亞基、2，3，5，6-四氟苯-1，4-亞基。
或者，A1或A2或兩者可以是亞環(huán)戊基或亞環(huán)己基；其中亞環(huán)戊基或亞環(huán)己基基團(tuán)是未取代的或被(1-4C)烷基取代。有代表性的例子包括順-環(huán)戊-1，3-亞基、反-環(huán)戊-1，3-亞基、順-環(huán)己-1，4-亞基和反-環(huán)己-1，4-亞基。A1或A2或兩者也可以是任選地取代的亞噻吩基或亞哌啶基，例如，噻吩-2，5-亞基或哌啶-1，4-亞基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，R4d選自(1-10C)亞烷基、(2-10C)亞烯基和(2-10C)亞炔基，其中亞烷基是未取代的或被獨(dú)立地選自(1-4C)烷基、羥基和苯基的1或2個(gè)取代基取代。R4d的特定值的代表性的例子是-(CH2)-、-(CH2)2-、-(CH2)3-、-(CH2)4-、-(CH2)5-、-(CH2)6-、-(CH2)7-、-(CH2)8-、-(CH2)9-、-(CH2)10-和-(CH2)CH(CH3)-(CH2)-C(CH3)2-(CH2)2-。
在一個(gè)特定實(shí)施方案中，所述二價(jià)烴基是下式的二價(jià)基團(tuán)-(R4a)d-，其中R4a是(4-10C)亞烷基。在這一實(shí)施方案的一個(gè)方面，二價(jià)烴基是下式的二價(jià)基團(tuán)-(CH2)j-其中j是8、9或10。在這一實(shí)施方案中所述二價(jià)烴基的特定值的例子是-(CH2)4-、-(CH2)5-、-(CH2)6-、-(CH2)7-、-(CH2)8-、-(CH2)9-和-(CH2)10-；包托-(CH2)8-、-(CH2)9-和-(CH2)10-。
在另一個(gè)特別的實(shí)施方案中，所述二價(jià)烴基是下式的二價(jià)基團(tuán)-(R4a)d-(A2)h-(R4d)i-其中R4a是(1-10C)亞烷基，例如-(CH2)-、-(CH2)2-、-(CH2)3-；A2是(6-10C)亞芳基，例如苯-1，4-亞基或苯-1，3-亞基，或(2-9C)亞雜芳基，例如噻吩-2，5-亞基或噻吩-2，4-亞基；和R4d是(1-10C)亞烷基，例如-(CH2)-、-(CH2)2-、-(CH2)3-。在這一實(shí)施方案中所述二價(jià)烴基的特定值的例子是-(CH2)-(苯-1，4-亞基)-(CH2)-；-(CH2)-(苯-1，4-亞基)-(CH2)2-；-(CH2)-(苯-1，4-亞基)-(CH2)3-；-(CH2)2-(苯-1，4-亞基)-(CH2)-；-(CH2)2-(苯-1，4-亞基)-(CH2)2-；-(CH2)2-(苯-1，4-亞基)-(CH2)3-；-(CH2)3-(苯-1，4-亞基)-(CH2)-；-(CH2)3-(苯-1，4-亞基)-(CH2)2-；-(CH2)3-(苯-1，4-亞基)-(CH2)3-、-(CH2)4-(苯-1，4-亞基)-(CH2)-；-(CH2)4-(苯-1，4-亞基)-(CH2)2-和-(CH2)4-(苯-1，4-亞基)-(CH2)3-。
在還另一個(gè)特別的實(shí)施方案中，所述二價(jià)烴基是下式的二價(jià)基團(tuán)-(R4a)d-Q-(A2)h-(R4d)i-其中Q是-O-或-N(Qk)-；Qk是氫或(1-3C)烷基，例如甲基或乙基；R4a是(1-10C)亞烷基，例如-(CH2)-、-(CH2)2-、-(CH2)3-；A2是(6-10C)亞芳基，例如苯-1，4-亞基或苯-1，3-亞基，或(2-9C)亞雜芳基，例如噻吩-2，5-亞基或噻吩-2，4-亞基；和R4d是(1-10C)亞烷基，例如-(CH2)-、-(CH2)2-、-(CH2)3-。在這一實(shí)施方案中所述二價(jià)烴基的特定值的例子是-(CH2)2-O-(苯-1，4-亞基)-(CH2)-；-(CH2)2-O-(苯-1，4-亞基)-(CH2)2-；-(CH2)2-O-(苯-1，4-亞基)-(CH2)3-；-(CH2)3-O-(苯-1，4-亞基)-(CH2)-；-(CH2)3-O-(苯-1，4-亞基)-(CH2)2-；-(CH2)3-O-(苯-1，4-亞基)-(CH2)3-；-(CH2)2-NH-(苯-1，4-亞基)-(CH2)-；-(CH2)2-NH-(苯-1，4-亞基)-(CH2)2-；-(CH2)2-NH-(苯-1，4-亞基)-(CH2)3-；-(CH2)3-NH-(苯-1，4-亞基)-(CH2)-；-(CH2)3-NH-(苯-1，4-亞基)-(CH2)2-和-(CH2)3-NH-(苯-1，4-亞基)-(CH2)3-。
在還另一個(gè)特別的實(shí)施方案中，所述二價(jià)烴基是下式的二價(jià)基團(tuán)-(R4a)d-(A1)e(R4b)-Q-(R4c)g-(A2)h-(R4d)i-其中Q是-N(Qa)C(O)-或-C(O)N(Qb)-。在這一實(shí)施方案中，所述二價(jià)烴基的特別的值是下式 其中m是2至10的整數(shù)；且n是2至10的整數(shù)；條件是m+n是4-12的整數(shù)。在R4的這一式中，d和g是1且e、f、h和i是0；和R4a是-(CH2)m-，R4c是-(CH2)n-和Q是-C(O)NH-。m的特定值是2或3；和n的特定值是4、5或6。
所述二價(jià)烴基的另一個(gè)特別的值是下式 其中o是2至7的整數(shù)；和p是1至6的整數(shù)；條件是o+p是3至8的整數(shù)。在R4的這一式中，d、h和i是1且e、f和g是0；和R4a是-(CH2)o-，A2是苯-1，4-亞基，R4d是-(CH2)p-和Q是-C(O)NH-。o的特定值是2或3；和p的特定值是1或2。在這一實(shí)施方案中，苯-1，4-亞基基團(tuán)可以任選地如本文對(duì)A2定義的被取代。
所述二價(jià)烴基的另一個(gè)特別的值是下式
其中q是2至6的整數(shù)；r是1至5的整數(shù)；和s是1至5的整數(shù)；條件是q+r+s是4至8的整數(shù)。在R4的這一式中，d、g、h和i是1且e和f是0；和R4a是-(CH2)q-，R4c是-(CH2)r-，A2是1，4-亞苯基，R4d是-(CH2)s-和Q是-C(O)NH-。q的特定值是2或3；r的特定值是1或2；且s的特定值是1或2。在這一實(shí)施方案中，苯-1，4-亞基基團(tuán)可以任選地如本文對(duì)A2定義的被取代。
所述二價(jià)烴基的另一個(gè)特別的值是下式 其中t是2-10的整數(shù)；和u是2-10的整數(shù)；條件是t+u是4-12的整數(shù)。在R4的這一式中，d和g是1且e、f、h和i是0；和R4a是-(CH2)t-，R4c是-(CH2)u-和Q是-NHC(O)-。t的特定值是2或3；和u的特定值是4、5或6。
所述二價(jià)烴基的另一個(gè)特別的值是下式 其中v是2至7的整數(shù)；和w是1至6的整數(shù)；條件是v+w是3至8的整數(shù)。在R4的這一式中，d、h和i是1和e、f和g是0；和R4a是-(CH2)v-，A2是1，4-亞苯基，R4d是-(CH2)w-和Q是-NHC(O)-。v的特定值是2或3；和w的特定值是1或2。在這一實(shí)施方案中，苯-1，4-亞基基團(tuán)可以任選地如本文對(duì)A2定義的被取代。
所述二價(jià)烴基的另一個(gè)特別的值是下式
其中x是2至6的整數(shù)；y是1至5的整數(shù)；和z是1至5的整數(shù)；條件是x+y+z是4至8的整數(shù)。在R4的這一式中，d、g、h和i是1且e和f是0；和R4a是-(CH2)x-，R4c是-(CH2)y-，A2是1，4-亞苯基，R4d是-(CH2)z-且Q是-NHC(O)-。x的特定值是2或3；y的特定值是1或2；和z的特定值是1或2。在這一實(shí)施方案中，苯-1，4-亞基基團(tuán)可以任選地如本文對(duì)A2定義的被取代。
經(jīng)由進(jìn)一步說(shuō)明，所述二價(jià)烴基可以是選自下列的基團(tuán)-(CH2)7-；-(CH2)8-；-(CH2)9-；-(CH2)10-；-(CH2)11-；-(CH2)2C(O)NH(CH2)5-；-(CH2)2N(CH3)C(O)(CH2)5-；-(CH2)2C(O)NH(苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2NHC(O)(苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2NHC(O)NH(CH2)5-；-(CH2)3NHC(O)NH(CH2)5-；-(CH2)2C(O)NHCH2(環(huán)己-1，3-亞基)CH2-；-(CH2)2NHC(O)(環(huán)戊-1，3-亞基)-；-(CH2)2NHC(O)NH(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；1-[-(CH2)2C(O)](哌啶-4-基)(CH2)2-；-(CH2)2NHC(O)(反-環(huán)己-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2NHC(O)(順-環(huán)戊-1，3-亞基)-；-(CH2)NH(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；1-[-(CH2)2NHC(O)](哌啶-4-基)(CH2)2-；-CH2(苯-1，4-亞基)NH(苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2C(O)NHCH2(苯-1，3-亞基)CH2-；
-(CH2)2C(O)NHCH2(吡啶-2，6-亞基)CH2-；-(CH2)2C(O)NH(順-環(huán)己-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2C(O)NH(反-環(huán)己-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2NHC(O)(順-環(huán)戊-1，3-亞基)CH2-；-(CH2)2N(CH3)C(O)(苯-1，3-亞基)CH2-；-(CH2)2N(CH3)C(O)(反-環(huán)己-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2C(O)NH(苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2C(O)NH(苯-1，4-亞基)C*H(CH3)-((S)-異構(gòu)體)；-(CH2)2C(O)NH(苯-1，4-亞基)C*H(CH3)-((R)-異構(gòu)體)；2-[(S)-(-CH2-](吡咯烷-1-基)C(O)(CH2)4-；2-[(S)-(-CH2-](吡咯烷-1-基)C(O)(苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2C(O)NH(4-氯苯-1，3-亞基)CH2-；-CH2(2-氟苯-1，3-亞基)CH2-；-(CH2)2C(O)NH(4-甲基苯-1，3-亞基)CH2-；-(CH2)2C(O)NH(6-氯苯-1，3-亞基)CH2-；-(CH2)2C(O)NH(2-氯苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2C(O)NH(2，6-二氯苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2NHC(O)NHCH2(苯-1，3-亞基)CH2-；4-[-CH2-](哌啶-1-基)C(O)(苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2C(O)N(CH2CH3)(苯-1，4-亞基)CH2-；1-[-(CH2)2NHC(O)](哌啶-4-基)-；-(CH2)2C(O)NH(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；-(CH2)2NHC(O)(噻吩-2，5-亞基)CH2-；-(CH2)2N(CH3)C(O)(3-硝基苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2N(CH3)C(O)(反-環(huán)己-1，4-亞基)-；1-[-CH2-(2-氟苯-1，3-亞基)CH2](哌啶-4-基)-；5-[-(CH2)2NHC(O)](吡啶-2-基)CH2-；-(CH2)2(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；-(CH2)3(噻吩-2，5-亞基)(CH2)3-；
-(CH2)2(苯-1，4-亞基)NH(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；-CH2(苯-1，2-亞基)NH(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；1-[-CH2(2-氟苯-1，3-亞基)CH2](哌啶-4-基)(CH2)2-；1-[-CH2(2-氟苯-1，3-亞基)CH2](哌啶-4-基)CH2-；-(CH2)2C(O)NH(3-氯苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2C(O)NH(2-(CF3O-)苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)3(苯-1，3-亞基)NH(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；-(CH2)2S(O)2NH(CH2)5-；-CH2(苯-1，3-亞基)NH(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；-(CH2)2C(O)NH(2-碘苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2C(O)NH(2-氯-5-甲氧基苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2C(O)NH(2-氯-6-甲基苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2N(CH3)S(O)2(苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2C(O)NH(2-溴苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)3(苯-1，4-亞基)NH(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；-(CH2)3(苯-1，2-亞基)NH(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；1-[-CH2(2-氟苯-1，3-亞基)CH2](哌啶-4-基)(CH2)3-；-(CH2)2C(O)NH(2-甲氧基苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)5NH(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；4-[-(CH2)2-](哌啶-1-基)(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；-(CH2)2C(O)NH(苯-1，4-亞基)CH(CH3)CH2-；-(CH2)2-(反-環(huán)己-1，4-亞基)NH(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；-(CH2)2C(O)NH(2-氟苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2(苯-1，3-亞基)NH(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；-(CH2)2C(O)NH(2，5-二氟苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2NHC(O)(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；1-[-CH2(吡啶-2，6-亞基)CH2](哌啶-4-基)CH2-；-(CH2)3NH(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；-(CH2)2NH(萘-1，4-亞基)(CH2)2-；
-(CH2)3O(苯-1，4-亞基)CH2-；1-[-(CH2)3](哌啶-4-基)CH2-；4-[-(CH2)2-](哌啶-1-基)C(O)(苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)3(苯-1，4-亞基)NHC(O)(CH2)2-；-(CH2)3O(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；2-[-(CH2)2](苯并咪唑-5-基)CH2-；-(CH2)2-(反-環(huán)己-1，4-亞基)NHC(O)(CH2)2-；-(CH2)2-(反-環(huán)己-1，4-亞基)NHC(O)(CH2)4-；-(CH2)2-(反-環(huán)己-1，4-亞基)NHC(O)(CH2)5-；4-[-(CH2)2](哌啶-1-基)C(O)(CH2)2-；-(CH2)2NHC(O)NH(苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2N(CH3)(CH2)2(順-環(huán)己-1，4-亞基)-；-(CH2)2C(O)NH(2，3，5，6-四氟苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2C(O)NH(2，6-二碘苯-1，4-亞基)CH2-；4-[-(CH2)2](哌啶-1-基)C(O)(CH2)3-；4-[-(CH2)2](哌啶-1-基)C(O)(CH2)4-；4-[-(CH2)2](哌啶-1-基)C(O)(CH2)5-；-(CH2)2C(O)NHCH2(苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2NHC(O)NHCH2(苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2C(O)NH(2-甲基苯-1，4-亞基)CH2-；1-[-(CH2)3O(苯-1，4-亞基)(CH2)2](哌啶-4-基)CH2-；-(CH2)2C(O)NHCH2(苯-1，3-亞基)(CH2)2-；-(CH2)2O(苯-1，3-亞基)CH2-；-(CH2)2N(CH3)C(O)CH2O(苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2N(CH3)C(O)CH2O(苯-1，3-亞基)CH2-；-(CH2)2N(CH3)C(O)(呋喃-2，5-亞基)CH2-；-(CH2)2N(CH3)C(O)(噻吩-2，5-亞基)CH2-；-(CH2)2O(苯-1，4-亞基)O(CH2)2-；-(CH2)2(反-環(huán)己-1，4-亞基)NHC(O)(苯-1，4-亞基)CH2-；
-(CH2)2(反-環(huán)己-1，4-亞基)NHC(O)CH2O(苯-1，2-亞基)CH2-；-(CH2)2(反-環(huán)己-1，4-亞基)NHC(O)CH2O(苯-1，3-亞基)CH2-；-(CH2)2(反-環(huán)己-1，4-亞基)NHC(O)CH2O(苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2(反-環(huán)己-1，4-亞基)NHC(O)(呋喃-2，5-亞基)CH2-；-(CH2)2(反-環(huán)己-1，4-亞基)NHC(O)(噻吩-2，5-亞基)CH2-；4-[-(CH2)2](哌啶-1-基)C(O)CH2O(苯-1，2-亞基)CH2-；4-[-(CH2)2](哌啶-1-基)C(O)CH2O(苯-1，3-亞基)CH2-；4-[-(CH2)2](哌啶-1-基)C(O)CH2O(苯-1，4-亞基)CH2-；4-[-(CH2)2](哌啶-1-基)C(O)(呋喃-2，5-亞基)CH2-；4-[-(CH2)2](哌啶-1-基)C(O)(噻吩-2，5-亞基)CH2-；-(CH2)2(苯-1，4-亞基)NHC(O)(苯-1，3-亞基)CH2-；-(CH2)2(苯-1，4-亞基)NHC(O)(苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2(苯-1，4-亞基)NHC(O)CH2O(苯-1，2-亞基)CH2-；-(CH2)2(苯-1，4-亞基)NHC(O)CH2O(苯-1，3-亞基)CH2-；-(CH2)2(苯-1，4-亞基)NHC(O)CH2O(苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2(苯-1，4-亞基)NHC(O)(呋喃-2，5-亞基)CH2-；-(CH2)2(苯-1，4-亞基)NHC(O)(噻吩-2，5-亞基)CH2-；-(CH2)2(反-環(huán)己-1，4-亞基)NHC(O)(苯-1，3-亞基)CH2-；-(CH2)3O(苯-1，3-亞基)CH2-；-CH2CH(OH)CH2NH(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；-(CH2)4NH(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；-(CH2)2C(O)NH(苯-1，4-亞基)CH2NHC(O)CH2-；-(CH2)2C(O)NH(苯-1，4-亞基)(CH2)2NHC(O)CH2-；-(CH2)2C(O)NHCH2(反-環(huán)己-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2NHC(O)(CH2)5-；-(CH2)2O(苯-1，3-亞基)O(CH2)2-；-(CH2)2O(苯-1，2-亞基)O(CH2)2-；-CH2(苯-1，2-亞基)O(苯-1，2-亞基)CH2-；-(CH2)2C(O)NH(CH2)6-；
-(CH2)3(苯-1，4-亞基)(CH2)3-；-(CH2)3(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；-(CH2)4(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；-(CH2)3(呋喃-2，5-亞基)(CH2)3-；-(CH2)2N(CH3)C(O)NH(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；4-[-(CH2)2](哌啶-1-基)C(O)NH(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；-(CH2)3(苯-1，3-亞基)(CH2)3-；-(CH2)3(四氫呋喃-2，5-亞基)(CH2)3-；以及-(CH2)2O(苯-1，4-亞基)C(O)(CH2)2-。
有代表性的亞屬基團(tuán)下述亞屬式和基團(tuán)是為了提供本發(fā)明的各方面和實(shí)施方案的有代表性的例子，這樣除非另外指出，它們不排除其它實(shí)施方案或不限制本發(fā)明的范圍。
一個(gè)特定組的式I化合物是在2003年11月21日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)60/524,234中公開(kāi)的那些。該組包括式Ia的化合物；其中a是0或1至3的整數(shù)；每個(gè)R1獨(dú)立地選自(1-4C)烷基、(2-4C)烯基、(2-4C)炔基、(3-6C)環(huán)烷基、氰基、鹵素、-OR1a、-C(O)OR1b、SR1c、-S(O)R1d、-S(O)2R1e和-NR1fR1g；R1a、R1b、R1c、R1d、R1e、R1f和R1g中的每一個(gè)獨(dú)立地是氫或(1-4C)烷基；b是0或1至3的整數(shù)；每個(gè)R2獨(dú)立地選自(1-4C)烷基、(2-4C)烯基、(2-4C)炔基、(3-6C)環(huán)烷基、氰基、鹵素、-OR2a、-C(O)OR2b、SR2c、-S(O)R2d、-S(O)2R2e和-NR2fR2g；R2a、R2b、R2c、R2d、R2e、R2f和R2g中的每一個(gè)獨(dú)立地是氫或(1-4C)烷基；W連接至相對(duì)于哌啶環(huán)中氮原子的3-或4-位，并且代表O或NWa；
Wa是氫或(1-4C)烷基；c是0或1至4的整數(shù)；每個(gè)R3是獨(dú)立地選自(1-4C)烷基、(2-4C)烯基、(2-4C)炔基、(3-6C)環(huán)烷基、氰基、鹵素、-OR3a、-C(O)OR3b、SR3c、-S(O)R3d、-S(O)2R3e和-NR3fR3g的碳上取代基；R3a、R3b、R3c、R3d、R3e、R3f和R3g中的每一個(gè)獨(dú)立地是氫或(1-4C)烷基；R4是下式的二價(jià)基團(tuán)-(R4a)d-(A1)e-(R4b)f-Q-(R4c)g-(A2)h-(R4d)i-其中d、e、f、g、h和i各自獨(dú)立地選自0和1；R4a、R4b、R4c和R4d各自獨(dú)立地選自(1-10C)亞烷基、(2-10C)亞烯基和(2-10C)亞炔基，其中每個(gè)亞烷基、亞烯基或亞炔基基團(tuán)是未取代的或被獨(dú)立地選自(1-4C)烷基、氟、羥基、苯基和苯基(1-4C)-烷基的1-5個(gè)取代基取代；A1和A2各自獨(dú)立地選自(3-7C)亞環(huán)烷基、(6-10C)亞芳基、(2-9C)亞雜芳基和(3-6C)亞雜環(huán)基；其中每個(gè)亞環(huán)烷基是未取代的或被獨(dú)立地選自(1-4C)烷基的1到4個(gè)取代基取代且每個(gè)亞芳基、亞雜芳基或亞雜環(huán)基基團(tuán)是未取代的或被獨(dú)立地選自鹵素、(1-4C)烷基和(1-4C)烷氧基的1到4個(gè)取代基取代；Q選自鍵、-O-、-C(O)O、-OC(O)-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-N(Qa)C(O)-、-C(O)N(Qb)-、-N(Qc)S(O)2-、-S(O)2N(Qd)-、-N(Qe)C(O)N(Qf)-、-N(Qg)S(O)2N(Qh)-、-OC(O)N(Qi)-、-N(Qj)C(O)O-和-N(Qk)-；Qa、Qb、Qc、Qd、Qe、Qf、Qg、Qh、Qi、Qj和Qk各自獨(dú)立地選自氫、(1-6C)烷基、A3和(1-4C)亞烷基-A4；其中烷基基團(tuán)是未取代的或被獨(dú)立地選自氟、羥基和(1-4C)烷氧基的1到3個(gè)取代基取代；或與它們連接的氮原子和基團(tuán)R4b或R4c一起形成4-6元的亞氮雜環(huán)烷基基團(tuán)；A3和A4各自獨(dú)立地選自(3-6C)環(huán)烷基、(6-10C)芳基、(2-9C)雜芳基和(3-6C)雜環(huán)基；其中每個(gè)環(huán)烷基是未取代的或被獨(dú)立地選自(1-4C)烷基的1到4個(gè)取代基取代和每個(gè)芳基、雜芳基或雜環(huán)基基團(tuán)是未取代的或被獨(dú)立地選自鹵素、(1-4C)烷基和(1-4C)烷氧基的1到4個(gè)取代基取代；條件是與R4連接的兩個(gè)氮原子之間最短鏈中鄰接原子的數(shù)目在4至14的范圍內(nèi)；R5代表氫或(1-4C)烷基；R6代表氫或羥基；并且G1和G2中的一個(gè)代表NH，另一個(gè)代表S、NH、O或CH2；或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體。
另一特殊組的式I化合物的那些化合物其中a是0；b是0；c是0；d是0；m是2；W是O；W連接在哌啶基環(huán)的4-位；R5是氫；以及R4、R6、G1和G2如本申請(qǐng)中所定義；或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體。
另一特殊組的式I化合物是那些化合物其中a是0；b是0；c是0；d是1；m是2；W是O；W連接在哌啶基環(huán)的4-位；R5是氫；R7a和R7b是氫；并且R4、R6、G1和G2如本申請(qǐng)中所定義；或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體。
還另一特殊組的式I化合物那些化合物其中a是0；b是0；c是0；d是0；m是2；W是NH；W連接在哌啶基環(huán)的4-位；R5是氫；并且R4、R6、G1和G2如本申請(qǐng)中所定義；或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體。
另一特殊組的式I化合物是如本申請(qǐng)中所定義的式Ia的那些化合物；或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體。
另一特殊組的式I化合物是如本申請(qǐng)中所定義的式Ib的那些化合物；或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體。
另一特殊組的式I化合物是如本申請(qǐng)中所定義的式Ic的那些化合物；或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體。
另一特殊組的式I化合物是如本申請(qǐng)中所定義的式Id的那些化合物；或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體。
另一特殊組的式I化合物是如本申請(qǐng)中所定義的式Ia、Ib、Ic或Id的那些化合物，其中所述哌啶基環(huán)在4-位被甲基取代；或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體。
本發(fā)明的代表性化合物的進(jìn)一步實(shí)例是式Ie的化合物
其中W、R4和R6如表I中所定義；或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物。
表I
本發(fā)明的另一組代表性化合物是式If的化合物
其中W、R1A、R1B、R1C、R2A、R2B、R4和R6如表II中所定義；或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物。
表II
定義當(dāng)描述本發(fā)明的化合物、組合物、方法和過(guò)程時(shí)，除非另外指出，下述術(shù)語(yǔ)具有下述含義。
術(shù)語(yǔ)“烷基”指可以是直鏈或支鏈的一價(jià)飽和烴基。除非另外定義，這種烷基基團(tuán)通常包含1-10個(gè)碳原子。有代表性的烷基基團(tuán)包括，舉例來(lái)說(shuō)，甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基、正癸基等。
術(shù)語(yǔ)“亞烷基”指可以是直鏈或支鏈的二價(jià)飽和烴基。除非另外定義，這種亞烷基基團(tuán)通常包含1-10個(gè)碳原子。有代表性的亞烷基基團(tuán)包括，舉例來(lái)說(shuō)，亞甲基、乙烷-1、2-二基(“亞乙基”)、丙烷-1、2-二基、丙烷-1、3-二基、丁烷-1、4-二基、戊烷-1、5-二基等。
術(shù)語(yǔ)“烷氧基”指式(烷基)-O-的一價(jià)基團(tuán)，其中烷基如本文所定義。有代表性的烷氧基基團(tuán)包括，舉例來(lái)說(shuō)，甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、異丁氧基、叔丁氧基等。
術(shù)語(yǔ)“烯基”指可以是直鏈或支鏈的一價(jià)不飽和烴基，其具有至少1個(gè)，通常有1、2或3個(gè)碳碳雙鍵。除非另外定義，這種烯基基團(tuán)通常包含2-10個(gè)碳原子。有代表性的烯基基團(tuán)包括，通過(guò)舉例，乙烯基，正丙烯基，異丙烯基，正丁-2-烯基，正己-3-烯基等。術(shù)語(yǔ)“亞烯基”指二價(jià)烯基基團(tuán)。
術(shù)語(yǔ)“炔基”指可以是直鏈或支鏈的一價(jià)不飽和烴基，其具有至少1個(gè)，通常有1、2或3個(gè)碳碳三鍵。除非另外定義，這種炔基基團(tuán)通常包含2-10個(gè)碳原子。有代表性的炔基基團(tuán)包括，舉例來(lái)說(shuō)，乙炔基、正丙炔基、正丁-2-炔基、正己-3-炔基等。術(shù)語(yǔ)“亞炔基”指二價(jià)炔基基團(tuán)。
術(shù)語(yǔ)“芳基”指具有單環(huán)(即苯基)或稠合環(huán)(即萘)的一價(jià)芳族烴。除非另外定義，這種芳基基團(tuán)通常包含6-10個(gè)碳環(huán)原子。有代表性的芳基基團(tuán)包括，舉例來(lái)說(shuō)，苯基和萘-1-基、萘-2-基等。術(shù)語(yǔ)“亞芳基”指二價(jià)芳基基團(tuán)。
術(shù)語(yǔ)“氮雜環(huán)烷基”指包含一個(gè)氮原子的一價(jià)雜環(huán)，即其中一個(gè)碳原子被氮原子取代的環(huán)烷基基團(tuán)。除非另外定義，這類氮雜環(huán)烷基基團(tuán)通常包含2-9個(gè)碳原子。氮雜環(huán)烷基基團(tuán)的有代表性的例子是吡咯烷基和哌啶基基團(tuán)。術(shù)語(yǔ)“亞氮雜環(huán)烷基”指二價(jià)氮雜環(huán)烷基基團(tuán)。亞氮雜環(huán)烷基基團(tuán)的有代表性的例子是亞吡咯烷基和亞哌啶基基團(tuán)。
術(shù)語(yǔ)″氮雜雙環(huán)烷基″意指包含一個(gè)氮原子的一價(jià)雜雙環(huán)，即其中一個(gè)碳原子被氮原子取代的雙環(huán)烷基基團(tuán)。除非另外定義，這類氮雜雙環(huán)烷基基團(tuán)通常包含5-10個(gè)碳原子。有代表性的雙氮雜環(huán)烷基包括2-氮雜雙環(huán)[2.2.1]庚基，7-氮雜雙環(huán)[2.2.1]庚基，1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛基，2-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛基，9-氮雜雙環(huán)[4.2.1]壬基，3-氮雜雙環(huán)[3.3.2]癸基，9-氮雜雙環(huán)[3.3.2]癸基等。術(shù)語(yǔ)″亞氮雜雙環(huán)烷基″意指二價(jià)氮雜雙環(huán)烷基。
術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基”指一價(jià)飽和的碳環(huán)烴基。除非另外定義，這種環(huán)烷基基團(tuán)通常包含3-10個(gè)碳原子。有代表性的環(huán)烷基基團(tuán)包括，通過(guò)舉例、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基等。術(shù)語(yǔ)“亞環(huán)烷基”指二價(jià)環(huán)烷基基團(tuán)。
術(shù)語(yǔ)“鹵素”指氟、氯、溴和碘。
術(shù)語(yǔ)“雜芳基”指具有單環(huán)或兩個(gè)稠合環(huán)并且在環(huán)中包含至少一個(gè)選自氮、氧或硫的雜原子(通常1-3個(gè)雜原子)的一價(jià)芳基。除非另外定義，這種雜芳基基團(tuán)通常包含5-10個(gè)總環(huán)原子。有代表性的雜芳基基團(tuán)包括，通過(guò)舉例，一價(jià)類的吡咯，咪唑，噻唑，唑，呋喃，噻吩，三唑，吡唑，異唑，異噻唑，吡啶，吡嗪，噠嗪，嘧啶，三嗪，吲哚，苯并呋喃，苯并噻吩，苯并咪唑，苯并噻唑，喹啉，異喹啉，喹唑啉，喹啉等，其中連接點(diǎn)是在任何可用的碳或氮環(huán)原子。術(shù)語(yǔ)“亞雜芳基”指二價(jià)雜芳基基團(tuán)。
術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)基”或“雜環(huán)”指具有單環(huán)或多稠合環(huán)且在環(huán)中包含至少一個(gè)選自氮、氧或硫的雜原子(通常1-3個(gè)雜原子)的一價(jià)飽和或不飽和(非芳香)基團(tuán)。除非另外定義，這種雜環(huán)基團(tuán)通常包含2-9個(gè)總環(huán)碳原子。有代表性的雜環(huán)基團(tuán)包括，舉例來(lái)說(shuō)，一價(jià)類的吡咯烷、咪唑烷、吡唑烷、哌啶、1、4-二噁烷、嗎啉、硫代嗎啉、哌嗪、3-吡咯啉等，其中連接點(diǎn)是在任何可用的碳或氮環(huán)原子。術(shù)語(yǔ)“亞雜環(huán)基”指二價(jià)雜環(huán)基或雜環(huán)基團(tuán)，它如本申請(qǐng)所定義的那樣被取代和任選被取代。
術(shù)語(yǔ)″二價(jià)烴基″意指主要由碳和氫原子構(gòu)成并且任選含有一個(gè)或多個(gè)雜原子的二價(jià)烴基。這類二價(jià)烴基可以是支化的或未支化的、飽和的或未飽和的、無(wú)環(huán)或環(huán)狀的、脂族或芳族的、或它們的組合。二價(jià)烴基可以任選含有雜原子，該雜原子結(jié)合到烴鏈中或作為取代基與烴鏈連接。
關(guān)于本文采用的特定術(shù)語(yǔ)，當(dāng)意指碳原子的特定數(shù)目時(shí)，在術(shù)語(yǔ)前的括號(hào)中顯示碳原子數(shù)目。例如，術(shù)語(yǔ)“(1-4C)烷基”指具有1-4個(gè)碳原子的烷基基團(tuán)。
術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的鹽”指能被接受用來(lái)給予患者例如哺乳動(dòng)物的鹽(例如對(duì)于給定的劑量方案具有可接受的哺乳動(dòng)物安全性的鹽)。這種鹽可以衍生自藥學(xué)上可接受的無(wú)機(jī)堿或有機(jī)堿和衍生自藥學(xué)上可接受的無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸。衍生自藥學(xué)上可接受的無(wú)機(jī)堿的鹽包括銨、鈣、銅、三價(jià)鐵、二價(jià)鐵、鋰、鎂、三價(jià)錳、二價(jià)錳、鉀、鈉、鋅等。特別優(yōu)選的是銨、鈣、鎂、鉀和鈉鹽。衍生自藥學(xué)上可接受的有機(jī)堿的鹽包括伯胺鹽、仲胺鹽和叔胺鹽，包括取代的胺、環(huán)胺、天然形成的胺等，例如精氨酸、甜菜堿、咖啡因、膽堿、N、N′-二芐基乙二胺、二乙基胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基嗎啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、氨基葡糖、組氨酸、海巴明、異丙基胺、賴氨酸、甲基葡萄糖胺、嗎啉、哌啶(piperadine)、哌嗪、聚胺樹(shù)脂、普魯卡因、嘌呤、可可堿、三乙基胺、三甲基胺、三丙基胺、氨丁三醇等。衍生自藥學(xué)上可接受的酸的鹽包括醋酸鹽、抗壞血酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、樟腦磺酸鹽、檸檬酸鹽、乙磺酸鹽、乙二磺酸鹽、富馬酸鹽、龍膽酸鹽、葡糖酸鹽、葡萄糖醛酸鹽、谷氨酸鹽、馬尿酸鹽、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、羥乙磺酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、馬來(lái)酸鹽、蘋(píng)果酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、粘酸鹽、萘磺酸鹽、萘-1，5-二磺酸鹽、萘-2，6-二磺酸鹽、煙堿酸鹽、硝酸鹽、乳清酸鹽、雙羥萘酸鹽、泛酸鹽、磷酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、對(duì)-甲苯磺酸鹽、昔萘酸鹽等。特別優(yōu)選的是檸檬酸鹽、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、羥乙磺酸鹽、馬來(lái)酸鹽、萘-1，5-二磺酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽和酒石酸鹽。
術(shù)語(yǔ)“其鹽”指當(dāng)一種酸的氫被陽(yáng)離子例如金屬陽(yáng)離子或有機(jī)陽(yáng)離子等取代時(shí)形成的化合物。優(yōu)選地，該鹽是藥學(xué)上可接受的鹽，但是對(duì)于不是給予患者的中間體化合物的鹽來(lái)說(shuō)不需要這樣。
術(shù)語(yǔ)“溶劑化物”指通過(guò)溶質(zhì)即式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的一個(gè)或多個(gè)分子與溶劑的一個(gè)或多個(gè)分子形成的復(fù)合物或聚集體。這種“溶劑化物”通常是具有實(shí)質(zhì)上固定摩爾比的溶質(zhì)和溶劑的結(jié)晶固體。有代表性的溶劑包括，舉例來(lái)說(shuō)，水、甲醇、乙醇、異丙醇、醋酸等。當(dāng)溶劑是水時(shí)，形成的溶劑化物是水合物。
將理解，術(shù)語(yǔ)“或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體”指包括鹽、溶劑化物和立體異構(gòu)體的所有置換，例如本發(fā)明化合物的立體異構(gòu)體的藥學(xué)上可接受的鹽的溶劑化物。
術(shù)語(yǔ)“治療有效量”指當(dāng)給予需要治療的患者時(shí)足以實(shí)現(xiàn)治療的量。
本文采用的術(shù)語(yǔ)“治療(treating)”或“治療(treatment)”指治療患者例如哺乳動(dòng)物(尤其是人)的疾病或醫(yī)學(xué)狀況(例如COPD)，這包括
(a)預(yù)防疾病或醫(yī)學(xué)狀況發(fā)生，即預(yù)防性治療患者；(b)改善疾病或醫(yī)學(xué)狀況，即在患者中消除或使疾病或醫(yī)學(xué)狀況消退；(c)遏制疾病或醫(yī)學(xué)狀況，即在患者中延緩或阻止疾病或醫(yī)學(xué)狀況的發(fā)展；或者(d)在患者中減輕疾病或醫(yī)學(xué)狀況的癥狀。
術(shù)語(yǔ)“離去基團(tuán)”指在取代反應(yīng)例如親核取代反應(yīng)中能夠被另一官能團(tuán)或原子取代的官能團(tuán)或原子。舉例來(lái)說(shuō)，有代表性的離去基團(tuán)包括氯、溴和碘基團(tuán)；磺酸酯基團(tuán)，例如甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、對(duì)溴苯磺酸酯、對(duì)硝基苯磺酸酯等；和酰氧基基團(tuán)，例如乙酰氧基，三氟乙酰氧基等。
術(shù)語(yǔ)“其受保護(hù)的衍生物”指其中化合物的一個(gè)或多個(gè)官能團(tuán)被用保護(hù)或封端基團(tuán)保護(hù)不參與不需要的反應(yīng)的特定化合物的衍生物?？梢员槐Ｗo(hù)的官能團(tuán)包括，舉例來(lái)說(shuō)，羧酸基團(tuán)、氨基基團(tuán)、羥基基團(tuán)、硫羥基團(tuán)、羰基基團(tuán)等。對(duì)于羧酸的有代表性的保護(hù)基團(tuán)包括酯類(例如對(duì)甲氧基芐基酯)、酰胺類和酰肼類；對(duì)于氨基基團(tuán)，包括氨基甲酸酯類(例如叔-丁氧基羰基)和酰胺類；對(duì)于羥基基團(tuán)，包括醚類和酯類；對(duì)于硫羥基團(tuán)，包括硫醚類和硫酯類；對(duì)于羰基基團(tuán)，包括縮醛類和縮酮類；等等。這些保護(hù)基團(tuán)對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是公知的，并且例如在T.W.greene和G.M.Wuts，Protecting Groups In OrganicSynthesis，Third Edition，Wiley，New York，1999及其中引用的參考文獻(xiàn)中有描述。
術(shù)語(yǔ)“氨基-保護(hù)基團(tuán)”指適于在氨基基團(tuán)上防止不需要的反應(yīng)的保護(hù)基團(tuán)。有代表性的氨基-保護(hù)基團(tuán)包括，但不限于，叔丁氧基羰基(BOC)、三苯甲基(Tr)、芐氧基羰基(Cbz)、9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)、甲?；?、三甲基甲硅烷基(TMS)、叔-丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等。
術(shù)語(yǔ)“羧基-保護(hù)基團(tuán)”指適于在羧基基團(tuán)上防止不需要的反應(yīng)的保護(hù)基團(tuán)。有代表性的羧基-保護(hù)基團(tuán)包括，但不限于，酯，例如甲基、乙基、叔丁基、芐基(Bn)、對(duì)甲氧基芐基(PMB)、9-芴基甲基(Fm)、三甲基甲硅烷基(TMS)、叔-丁基二甲基甲硅烷基(TBS)、二苯基甲基(二苯甲基、DPM)等。
術(shù)語(yǔ)“羥基-保護(hù)基團(tuán)”指適于在羥基基團(tuán)上防止不需要的反應(yīng)的保護(hù)基團(tuán)。有代表性的羥基-保護(hù)基團(tuán)包括，但不限于，甲硅烷基基團(tuán)，包括三(1-6C)烷基甲硅烷基基團(tuán)，例如三甲基甲硅烷基(TMS)、三乙基甲硅烷基(TES)、叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等；酯類(酰基基團(tuán))包括(1-6C)烷?；鶊F(tuán)，例如甲?；?，乙酰基等；芳基甲基基團(tuán)，例如芐基(Bn)、對(duì)甲氧基芐基(PMB)、9-芴基甲基(Fm)、二苯基甲基(二苯甲基，DPM)等。此外，兩個(gè)羥基基團(tuán)也可以作為一個(gè)亞烷基被保護(hù)，例如丙-2-亞基(ylidine)，例如通過(guò)與酮例如丙酮反應(yīng)形成的。
一般合成方法本發(fā)明的化合物可以從容易獲得的原料，利用下述一般方法和步驟或通過(guò)應(yīng)用對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)容易獲得的其它信息制備。雖然本文會(huì)顯示或描述本發(fā)明的特定實(shí)施方案，但是本領(lǐng)域的技術(shù)人員將會(huì)認(rèn)識(shí)到，本發(fā)明的所有實(shí)施方案或方面可以利用本文描述的方法制備或者通過(guò)應(yīng)用對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它方法、試劑和原料制備。也將會(huì)理解，除非另外陳述，當(dāng)給出典型或優(yōu)選的方法條件(即反應(yīng)溫度、時(shí)間、反應(yīng)物的摩爾比、溶劑、壓力等)時(shí)，也能使用其它方法條件。雖然最佳反應(yīng)條件可以隨著采用的特定反應(yīng)物或溶劑變化，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員通過(guò)常規(guī)優(yōu)化程序能夠容易地決定這些條件。
此外，如對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員將顯而易見(jiàn)的是，常規(guī)保護(hù)基團(tuán)可以是必需或需要的以防止特定官能團(tuán)進(jìn)行不合需要的反應(yīng)。對(duì)于特定官能團(tuán)的合適保護(hù)基團(tuán)以及這種官能團(tuán)的保護(hù)和脫保護(hù)的合適條件的選擇，在本領(lǐng)域中是公知的。如果需要，可以采用除在本文描述的步驟中說(shuō)明的那些之外的保護(hù)基團(tuán)。例如，大量保護(hù)基團(tuán)，和它們的引入和除去，在T.W.greene和G.M.Wuts，Protecting Groups InOrganic Synthesis，Third Edition，Wiley，New York，1999及其中引用的參考文獻(xiàn)中有描述。
舉例說(shuō)明，本發(fā)明的化合物可以通過(guò)包括如下步驟的方法制備(a)使式1化合物 或其鹽；與式2的化合物反應(yīng) 其中X1代表離去基團(tuán)，R6a代表氫或OP1，并且P1和P2各獨(dú)立地代表氫原子或羥基-保護(hù)基；(b)使式3的化合物
或其鹽；與式4的化合物反應(yīng) 其中X2代表離去基團(tuán)、R6b代表氫或OP3，并且P3和P4各自獨(dú)立地代表氫原子或羥基-保護(hù)基；(c)使式5的化合物 與式6的化合物偶聯(lián) 其中XQa和XQb各自獨(dú)立地代表偶聯(lián)形成基團(tuán)Q的官能團(tuán)，P5a代表氫原子或氨基-保護(hù)基、R6c代表氫或OP5b，并且P5b和P6各自獨(dú)立地代表氫原子或羥基-保護(hù)基；
(d)對(duì)于其中R5代表氫原子的式I的化合物，在還原劑存在下，使式3的化合物與式7a或7b的化合物或其水合物(例如，乙二醛)反應(yīng) 其中P7代表氫原子或羥基-保護(hù)基；(e)在還原劑存在下，使式1的化合物與式8的化合物或其水合物反應(yīng) 其中R6d代表氫或OP8，P8和P9各自獨(dú)立地代表氫原子或羥基-保護(hù)基，P10代表氫原子或氨基-保護(hù)基，并且R4’代表殘基，在反應(yīng)時(shí)該殘基與其所連接的碳一起形成基團(tuán)R4；(f)使式9的化合物
其中X3代表離去基團(tuán)，與式10的化合物反應(yīng) 其中R6e代表氫或OP11，P11和P12各自獨(dú)立地代表氫原子或羥基-保護(hù)基，并且P13代表氫原子或氨基-保護(hù)基；或者(g)使式11的化合物或其水合物在還原劑存在下與式10的化合物反應(yīng) 其中R4’代表殘基，在反應(yīng)時(shí)該殘基與其所連接的碳一起形成基團(tuán)R4；然后除去任意保護(hù)基P1，P2，P3，P4，P5a，P5b，P6，P7，P8，P9，P10，P11，P12或P13，提供式I的化合物；并且任選形成其藥學(xué)上可接受的鹽。
一般說(shuō)來(lái)，如果在上述方法中使用所述原料之一的鹽，該鹽通常在反應(yīng)過(guò)程之前或反應(yīng)過(guò)程中被中和。該中和反應(yīng)通常通過(guò)使鹽與對(duì)于每摩爾當(dāng)量酸加成鹽來(lái)說(shuō)一摩爾當(dāng)量的堿接觸來(lái)完成。
在方法(a)中，即式1和2的化合物之間的反應(yīng)，X1代表的離去基團(tuán)可以是，例如，鹵素、例如氯、溴或碘，或磺酸酯基團(tuán)，例如甲磺酸酯或?qū)妆交撬狨??；鶊F(tuán)P1和P2可以分別為，例如，三甲基甲硅烷基和芐基或甲基。該反應(yīng)通常在惰性稀釋劑，例如乙腈中，在存在堿的情況下進(jìn)行。例如，該反應(yīng)可以存在叔胺，例如二異丙基乙胺的情況下進(jìn)行。一般說(shuō)來(lái)，該反應(yīng)在0℃至100℃的溫度下進(jìn)行直到實(shí)質(zhì)上完成。然后使用常規(guī)方法，例如提取法、重結(jié)晶法、色譜法等分離產(chǎn)物。
式1的化合物在本領(lǐng)域中總的來(lái)說(shuō)是已知的或者可以使用熟知的方法，由商業(yè)上可得到的原料和試劑來(lái)制備。例如，式1的化合物可以通過(guò)使式12的化合物脫保護(hù)來(lái)制備 其中P14代表氨基-保護(hù)基，例如芐基。舉例說(shuō)明，芐基可以通過(guò)使用例如，氫或甲酸銨和族VIII金屬催化劑，例如碳上鈀的還原反應(yīng)而被輕易地除去。當(dāng)W代表NWa時(shí)，氫化反應(yīng)通常使用Pearlman’s催化劑(即Pd(OH)2)來(lái)進(jìn)行。
式12的化合物可以通過(guò)使式13的異氰酸酯化合物
與式14的化合物反應(yīng)進(jìn)行制備 式2的化合物可以通過(guò)本申請(qǐng)中描述的各種方法或通過(guò)本領(lǐng)域的技術(shù)人員熟知的方法來(lái)制備。在這一方面，有關(guān)化合物的制備被描述在美國(guó)專利Nos.5,648,370；5,763,465；5,846,989；5,929,100；5,973,167；5,977,384；6,008,365和6,080,869；在國(guó)際專利公開(kāi)Nos.WO 92/08708；WO 93/23385；WO 93/24473；WO 97/10227；WO 97/23470；WO99/09018；WO00/50413和WO 2004/016601A1；以及在Weistock等，J.Med.Chem.1987，30，1166-1176。舉例說(shuō)明，使用熟知的試劑和方法，下式23化合物的羥基可以輕易地被轉(zhuǎn)化成離去基團(tuán)。例如，使用無(wú)機(jī)?；u，例如亞硫酰氯，三氯化磷，三溴化磷，磷酰氯等，或氫鹵酸，例如氫溴酸，羥基可以被轉(zhuǎn)化成鹵素基團(tuán)。
在方法(b)中，即式3化合物與式4化合物的反應(yīng)，X2代表的離去基團(tuán)可以為，例如，鹵素、例如氯、溴或碘，或磺酸酯基團(tuán)，例如甲磺酸酯或?qū)妆交撬狨??；鶊F(tuán)P3和P4可以分別為，例如，叔-丁基二甲基甲硅烷基和芐基或甲基。該反應(yīng)通常在存在堿，例如碳酸氫鈉，以及堿金屬碘化物，例如碘化鈉的情況下進(jìn)行。一般說(shuō)來(lái)，該反應(yīng)在惰性稀釋劑，例如四氫呋喃中，在25℃至100℃的溫度下進(jìn)行，直到反應(yīng)實(shí)質(zhì)上完成。然后使用常規(guī)方法，例如提取法、重結(jié)晶法、色譜法等分離反應(yīng)產(chǎn)物。
式3的化合物可以通過(guò)使式15的化合物脫保護(hù)來(lái)制備 其中P15和P16中的一個(gè)或二者獨(dú)立地代表保護(hù)基，例如叔丁氧羰基，并且任意剩余部分代表氫原子。例如，叔丁氧羰基可以通過(guò)用三氟乙酸處理被保護(hù)的化合物而被除去。
式15的化合物可以通過(guò)使式1化合物與式16化合物反應(yīng)而被制備X3-R4-NP15P1616其中X3代表離去基團(tuán)例如鹵素，例如氯、溴或碘，或磺酸酯基團(tuán)，例如甲磺酸酯或?qū)妆交撬狨?。該反?yīng)通常通過(guò)使式1化合物與式16化合物在惰性稀釋劑，例如乙腈、DMF或它們的混合物中，在約0℃至約100℃的溫度下接觸而進(jìn)行，直到反應(yīng)實(shí)質(zhì)上完成。
或者，式3的化合物可以通過(guò)式11的化合物的還原氨化來(lái)獲得。還原氨化可以通過(guò)在存在碳上鈀的情況下，使式11的化合物與，例如，芐胺和氫反應(yīng)來(lái)進(jìn)行。
式11的化合物可以通過(guò)使用適合的氧化劑，例如三氧化硫吡啶絡(luò)合物和二甲亞砜，氧化式17相應(yīng)的醇來(lái)制備
該氧化反應(yīng)通常在惰性稀釋劑，例如二氯甲烷中，在存在叔胺，例如二異丙基乙胺的情況下，在約-20℃至約25℃的溫度下進(jìn)行。
式17的化合物可以使式1化合物與式18化合物反應(yīng)來(lái)制備X4-R4-OH18其中X4代表離去基團(tuán)例如鹵素、例如氯、溴或碘，或磺酸酯基團(tuán)，例如甲磺酸酯或?qū)妆交撬狨ァ?br> 其中R6b代表OP3的式4化合物可以被如下制備使式19的化合物 與還原劑，例如硼烷反應(yīng)，然后如果需要，保護(hù)所得到的羥基。如果期望，這樣的還原可以在存在手性催化劑的情況下進(jìn)行，以提供手性形式的式4化合物。例如，式19的化合物可以在存在手性催化劑的情況下被還原，所述手性催化劑由(R)-(+)-α，α-二苯基-2-吡咯烷甲醇和三甲基硼氧六環(huán)形成；或可替代地，由(S)-(-)-α，α-二苯基-2-吡咯烷甲醇和三甲基硼氧六環(huán)形成。然后所得到的羥基可以用羥基-保護(hù)基，P3，通過(guò)與，例如，叔-丁基二甲基甲硅烷基三氟甲磺酸酯的反應(yīng)進(jìn)行保護(hù)。
其中X2代表溴原子式19的化合物可以通過(guò)使式20化合物 與溴，在存在路易斯酸，例如三氟化硼二乙醚合物的情況下反應(yīng)來(lái)制備。式20的化合物是本領(lǐng)域中熟知的或者可以使用商業(yè)上可得到的原料和試劑，通過(guò)熟知的方法進(jìn)行制備。
關(guān)于方法(c)，即式5化合物與式6化合物的反應(yīng)，將要理解的是，應(yīng)選擇基團(tuán)XQa和XQb，以便在反應(yīng)完成時(shí)得到期望的基團(tuán)Q。例如，當(dāng)期望的基團(tuán)Q是酰胺基團(tuán)，即-N(Qa)C(O)-或-C(O)N(Qb)時(shí)，XQa和XQb中的一個(gè)可以為胺基(即-NHQa或-NHQb)，另一個(gè)可以為羧基(即-COOH)或其反應(yīng)性衍生物(例如酰鹵，例如酰氯或酰溴)?；鶊F(tuán)P5a，P5b和P6可以分別為，例如，芐基，三甲基甲硅烷基和芐基或甲基。當(dāng)Q是酰胺基團(tuán)，該反應(yīng)可以在常規(guī)酰胺偶聯(lián)條件下進(jìn)行。相似地，當(dāng)期望的基團(tuán)Q是磺酰胺，即-N(Qc)S(O)2-或-S(O)2N(Qd)-時(shí)，XQa和XQb中的一個(gè)可以為胺基、-NHQc或-NHQd，另一個(gè)可以為磺酰鹵基(例如磺酰氯或磺酰溴)。
式5的化合物可以被制備如下使式1的化合物與式21的化合物反應(yīng)
X5-(R4a)d-(A1)e-(R4b)f-XQa’21其中X5代表離去基團(tuán)包括鹵素，例如氯、溴或碘，以及磺酸酯基團(tuán)，例如甲磺酸酯或?qū)妆交撬狨ィ徊⑶襒Qa’代表XQa，例如羧基或氨基NHQa，或它們被保護(hù)的衍生物，例如(1-6C)烷氧羰基氨基或叔丁氧羰基氨基。該反應(yīng)通常通過(guò)與用于制備式3化合物的方法類似的方法來(lái)進(jìn)行，接著除去XQa’中的任意保護(hù)基。
式6的化合物可以被制備如下使式10的化合物(其中P5a＝P13，P6＝P12，并且R6c＝R6e)與式22的化合物反應(yīng)XQb’-(R4c)g-(A2)h-(R4d)i-X622其中X6代表離去基團(tuán)包括鹵素，例如氯、溴或碘，并且磺酸酯基團(tuán)，例如甲磺酸酯或?qū)妆交撬狨?；并且XQb’代表XQb，例如羧基或氨基NHQb，或它們被保護(hù)的衍生物，例如(1-6C)烷氧羰基或叔丁氧羰基氨基。該反應(yīng)通常通過(guò)與用于制備式3化合物的方法類似的方法進(jìn)行，接著除去XQb’中的任意保護(hù)基。
關(guān)于方法(d)，即式3化合物與式7a或7b化合物的反應(yīng)，在該反應(yīng)中可以使用任意適合的還原劑。例如，在存在族VIII金屬催化劑，例如碳上鈀的情況下，還原劑可以為氫；或金屬氫化物還原劑，例如三乙酰氧基硼氫化鈉。基團(tuán)P7可以為，例如，芐基或甲基。該反應(yīng)通常在惰性稀釋劑和質(zhì)子溶劑，例如二氯乙烷和甲醇的混合物中，在0℃至100℃的溫度下進(jìn)行，直到反應(yīng)實(shí)質(zhì)上完成。
水合物形式的式7a或7b化合物可以通過(guò)常規(guī)方法制備。例如，式7a的化合物可以被制備如下使式20的化合物二溴化，然后水解所得到的二溴化物形成乙二醛或其水合物。例如，可以將式20的化合物與氫溴酸反應(yīng)，然后用水水解，形成相應(yīng)的乙二醛水合物。式7b的化合物可以被制備如下例如，通過(guò)使用常規(guī)試劑和方法，氧化相應(yīng)的醇或還原相應(yīng)的腈或羧酸或酯。
關(guān)于方法(e)，即式1化合物與式8化合物的反應(yīng)，在該反應(yīng)中可以使用任意適合的還原劑。例如，在存在族VIII金屬催化劑，例如碳上鈀的情況下，還原劑可以是氫；或金屬氫化物還原劑，例如三乙酰氧基硼氫化鈉?；鶊F(tuán)P8，P9和P10可以分別為，例如，三甲基甲硅烷基，芐基或甲基和芐基。典型地，該還原反應(yīng)在惰性稀釋劑和質(zhì)子溶劑，例如二氯乙烷和甲醇中，在0℃至100℃的溫度下進(jìn)行，直到反應(yīng)實(shí)質(zhì)上完成。
式8的化合物可以被制備如下通過(guò)使用任何適合的氧化劑，例如三氧化硫吡啶絡(luò)合物和二甲亞砜，氧化式23的化合物。
該反應(yīng)是典型地在存在叔胺，例如二異丙基乙胺的情況下，在約-20℃至約25℃的溫度下進(jìn)行，直到氧化實(shí)質(zhì)完成。
式23的化合物可以被制備如下使式10的化合物(其中P10＝P13，P9＝P12，并且R6d＝R6e)與式24的化合物反應(yīng)HO-R4-X724其中X7代表離去基團(tuán)包括鹵素、例如氯、溴或碘，以及磺酸酯基團(tuán)，例如甲磺酸酯或?qū)妆交撬狨ァ?br> 關(guān)于方法(f)，即式9化合物與式10化合物的反應(yīng)，X3代表的離去基團(tuán)可以為，例如，鹵素、例如氯、溴或碘，或磺酸酯基團(tuán)，例如甲磺酸酯或?qū)妆交撬狨??；鶊F(tuán)P11，P12和P13可以分別為，例如，三甲基甲硅烷基，芐基或甲基和芐基。該反應(yīng)典型地在惰性稀釋劑，例如乙腈中，在存在適合的堿的情況下進(jìn)行。例如，該反應(yīng)可以在存在叔胺，例如二異丙基乙胺的情況下進(jìn)行。一般說(shuō)來(lái)，該反應(yīng)在0℃至100℃的溫度下進(jìn)行，直到反應(yīng)實(shí)質(zhì)上完成。
式9的化合物可以通過(guò)與本申請(qǐng)(a)至(e)方法中的那些步驟類似的步驟，從式1的化合物開(kāi)始進(jìn)行制備。另外，式10的化合物可以從式4的化合物，通過(guò)與式P13NH2的胺反應(yīng)進(jìn)行制備。
關(guān)于方法(g)，即式11化合物與式10化合物的反應(yīng)，在該反應(yīng)中可以使用任意適合的還原劑。例如，在存在族VIII金屬催化劑，例如碳上鈀的情況下還原劑可以是氫；或金屬氫化物還原劑，例如三乙酰氧基硼氫化鈉。基團(tuán)P11，P12和P13可以分別為，例如，叔-丁基二甲基甲硅烷基，芐基和芐基。典型地，該還原反應(yīng)在惰性稀釋劑和質(zhì)子溶劑，例如二氯乙烷和甲醇中，在0℃至100℃的溫度下進(jìn)行直到反應(yīng)實(shí)質(zhì)上完成。
通過(guò)氧化相應(yīng)的醇或通過(guò)水解相應(yīng)的乙縮醛，輕易地制備式11的化合物。在該反應(yīng)中可以使用任意適合的氧化劑，例如三氧化硫吡啶絡(luò)合物和二甲亞砜，以提供醛?？梢栽诔Ｒ?guī)條件下，使用含水酸水解乙縮醛，以提供醛。
在特殊實(shí)施方案中，某些式I化合物通過(guò)包括如下步驟的方法進(jìn)行制備(h)使式25的化合物
25與選自三溴化硼、三氯化硼、氫溴酸和鹽酸接觸，形成式I的化合物或或其鹽或立體異構(gòu)體；并且，任選地，形成式I化合物的藥學(xué)上可接受的鹽。
關(guān)于方法(h)，該反應(yīng)典型地通過(guò)使式25的化合物與過(guò)量的，例如約2至約6摩爾當(dāng)量的三溴化硼，在約-30℃至約30℃的溫度下，接觸約1至約24小時(shí)或直到反應(yīng)實(shí)質(zhì)上完成而進(jìn)行。然后使用常規(guī)方法，例如提取法、重結(jié)晶法、色譜法等分離反應(yīng)產(chǎn)物。式25的化合物可以通過(guò)本申請(qǐng)中描述的方法，例如通過(guò)方法(a)至(g)進(jìn)行制備。
關(guān)于具體反應(yīng)條件和制備本發(fā)明典型化合物的其它方法的進(jìn)一步細(xì)節(jié)，被描述在下面的實(shí)施例中。
藥物組合物和制劑本發(fā)明的化合物通常是以藥物組合物或制劑形式被給予患者。這類藥物組合物可以通過(guò)任何可接受的給藥途徑被給予患者，包括但不限于，吸入、口服、鼻用、局部(包括透皮)和腸胃外給藥方式。
應(yīng)該理解，適于特定給藥模式的本發(fā)明化合物的任何形式(即游離堿、藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物等等)可以被用在本文討論的藥物組合物中。
因此，在本發(fā)明組合物方面之一，本發(fā)明涉及包含藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑和治療有效量的本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物。任選地，如果需要，這種藥物組合物可以包含其它治療劑和/或制劑用物質(zhì)。
本發(fā)明的藥物組合物通常包含治療有效量的本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。通常，這種藥物組合物將包含約0.01至約95％重量的活性劑；包括約0.01至約30％重量；例如約0.01至約10％重量的活性劑。
任何常規(guī)載體或賦形劑可以被用在本發(fā)明組合物中。特定載體或賦形劑或載體或賦形劑的組合的選擇將取決于被用于治療特定患者的給藥模式或醫(yī)學(xué)狀況或疾病狀態(tài)的類型。在這點(diǎn)上，用于特定給藥模式的合適的藥物組合物的制備完全在藥物領(lǐng)域技術(shù)人員的范圍內(nèi)。此外，用于這種組合物的成分是商業(yè)上可購(gòu)得的，例如購(gòu)自Sigma，P.O.Box 14508，St.Louis，MO 63178。通過(guò)進(jìn)一步說(shuō)明，常規(guī)制劑技術(shù)在RemingtonThe Science and Practice of Pharmacy，第20版，Lippincott Williams & White，Baltimore，Maryland(2000)；和H.C.Ansel等人，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems，第7版，Lippincott Williams & White，Baltimore，Maryland(1999)中有所描述。
可以用作藥學(xué)上可接受的載體的有代表性的例子包括，但不限于下面的物質(zhì)(1)糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，例如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；(3)纖維素及其衍生物，例如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素和醋酸纖維素；(4)西黃蓍膠粉；(5)麥芽；(6)明膠；(7)滑石粉；(8)賦形劑，例如可可豆脂和栓劑蠟類；(9)油，例如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油和大豆油；(10)二醇，例如丙二醇；(11)多元醇，例如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；(12)酯，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)瓊脂；(14)緩沖劑，例如氫氧化鎂和氫氧化鋁；(15)海藻酸；(16)無(wú)熱原的水；(17)等滲鹽水；(18)林格溶液；(19)乙醇；(20)磷酸鹽緩沖液；(21)壓縮推進(jìn)氣體，例如氯氟碳和氫氟碳；和(22)其它用在藥物組合物中的無(wú)毒相容性物質(zhì)。
本發(fā)明的藥物組合物通常是通過(guò)徹底地和密切地混合或摻合本發(fā)明的化合物和藥學(xué)上可接受的載體和一種或多種任選的成分而制備的。如果必需或需要，得到的均勻混合的混合物可以利用常規(guī)方法和設(shè)備被塑形成或加載到片劑、膠囊、丸劑、罐、藥筒等中。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物適于吸入給藥。用于吸入給藥的適合藥物組合物通常是氣霧劑或粉末形式。這種組合物通常利用公知的給藥裝置給藥，例如霧化器吸入器、定量吸入器(MDI)、干粉吸入器(DPI)或類似的給藥裝置。
在本發(fā)明的特定實(shí)施方案中，包含活性劑的藥物組合物是利用霧化器吸入器通過(guò)吸入給藥的。這種霧化器裝置通常產(chǎn)生高速氣流，它使得包含活性劑的藥物組合物以霧的形式噴射，該霧被攜帶到患者的呼吸道中。因此，當(dāng)被制備用于霧化器吸入器中時(shí)，活性劑通常被溶解在合適的載體中以形成溶液?；蛘撸钚詣┛梢员晃⒎刍遗c合適的載體組合以形成可吸入大小的微粉化顆粒的混懸液，微粉化通常被定義為大約90％或更多的顆粒具有小于約10μm的直徑。合適的霧化器裝置被商業(yè)上提供，例如由PARI GmbH(Starnberg，德國(guó))。其它的霧化器裝置包括Respimat(Boehringer Ingelheim)和那些例如在美國(guó)專利No.6,123,068和WO 97/12687中公開(kāi)的裝置。
用于霧化器吸入器的有代表性的藥物組合物包括包含約0.05μg/mL至約10mg/mL本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或其立體異構(gòu)體的等滲水溶液。
在本發(fā)明的另一個(gè)特定實(shí)施方案中，包含活性劑的藥物組合物是利用干粉吸入器通過(guò)吸入給藥的。這種干粉吸入器通常給藥在吸入期間分散在患者氣流中的自由流動(dòng)粉末形式的活性劑。為了獲得自由流動(dòng)粉末，活性劑通常與合適的賦形劑例如乳糖或淀粉一起配制。
用于干粉吸入器的有代表性的藥物組合物的例子包括顆粒大小在約1μm和約100μm之間的干乳糖，和本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體的微粉化顆粒。
這種干粉制劑可以，例如通過(guò)將乳糖和活性劑混合，然后干混合組分來(lái)制備?；蛘?，如果需要，活性劑可以不用賦形劑來(lái)配制。然后通常將藥物組合物裝入干粉分配器中，或裝入與干粉給藥裝置一起使用的吸入藥筒或膠囊。
干粉吸入器給藥裝置的例子包括Diskhaler(GlaxoSmithKline，Research Triangle Park，NC)(例如見(jiàn)美國(guó)專利No.5,035,237)；Diskus(GlaxoSmithKline)(例如見(jiàn)美國(guó)專利No.6,378,519；Turbuhaler(AstraZeneca，Wilmington，DE)(例如見(jiàn)美國(guó)專利No.4,524,769)；Rotahaler(GlaxoSmithKline)(例如見(jiàn)美國(guó)專利No.4,353,365)和Handihaler(Boehringer Ingelheim)。合適的DPI裝置的另外的例子在美國(guó)專利Nos.5,415,162、5,239,993和5,715,810及其中引用的參考文獻(xiàn)中有描述。
在本發(fā)明的還另一個(gè)特定實(shí)施方案中，包含活性劑的藥物組合物是利用定量吸入器通過(guò)吸入給藥的。這種定量吸入器通常利用壓縮推進(jìn)氣體放出測(cè)定量的活性劑或其藥學(xué)上可接受的鹽。因此，利用定量吸入器給藥的藥物組合物通常包含在液化推進(jìn)劑中的溶液或混懸液?？梢圆捎萌魏魏线m的液化推進(jìn)劑，包括含氯氟烴，例如CCl3F和氫氟烷類(HFAs)，例如1，1，1，2-四氟乙烷(HFA 134a)和1，1，1，2，3，3，3-庚氟-正-丙烷，(HFA 227)。由于擔(dān)心含氯氟烴影響臭氧層，通常優(yōu)選包含HFAs的制劑。HFA制劑的另外任選的成分包括共溶劑，例如乙醇或戊烷和表面活性劑，例如三油酸山梨坦、油酸、卵磷脂和甘油。例如見(jiàn)美國(guó)專利No.5,225,183、EP 0717987 A2和WO92/22286。
用于定量吸入器的有代表性的藥物組合物包含約0.01％-約5％重量的本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體；約0％-約2％重量的乙醇；和約0％-約5％重量的表面活性劑；余下的是HFA推進(jìn)劑。
這種組合物通常通過(guò)向包含活性劑、乙醇(如果存在)和表面活性劑(如果存在)的合適的容器中加入冰冷的或加壓的氫氟烷類進(jìn)行制備。為制備混懸液，將活性劑微粉化然后與推進(jìn)劑混合。然后將該制劑裝入氣霧劑罐，其形成定量吸入器裝置的一部分。特別為與HFA推進(jìn)劑一起使用而開(kāi)發(fā)的定量吸入器裝置的例子在美國(guó)專利Nos.6,006,745和6,143,277中提供?；蜻@混懸制劑可以通過(guò)噴霧干燥在活性劑微粉化顆粒上的表面活性劑包衣來(lái)制備。例如見(jiàn)WO99/53901和WO 00/61108。
至于制備可吸入顆粒的方法和制劑以及適用于吸入給藥的裝置的其它例子，見(jiàn)美國(guó)專利Nos.6,268,533、5,983,956、5,874,063和6,221,398和WO 99/55319和WO 00/30614。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物適于口服給藥。用于口服給藥的合適的藥物組合物可以是膠囊、片劑、丸劑、錠劑、扁膠囊、糖衣丸、粉劑、顆粒劑形式；或作為在含水或無(wú)水液體中的溶液或混懸液；或作為水包油或油包水乳劑；或作為酏劑或糖漿等；每個(gè)包含預(yù)定量的作為活性成分的本發(fā)明的化合物。
當(dāng)用于呈固體劑型(即作為膠囊、片劑、丸劑等)口服給藥時(shí)，本發(fā)明的藥物組合物將通常包含作為活性成分的本發(fā)明的化合物和一種或多種藥學(xué)上可接受的載體，例如檸檬酸鈉或磷酸二鈣。任選地或可選擇地，這種固體劑型也可以包含(1)填充劑或增充劑，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和/或硅酸；(2)粘合劑，例如羧甲基纖維素、褐藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯膠；(3)濕潤(rùn)劑，例如甘油；(4)崩解劑，例如瓊脂-瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或木薯淀粉、褐藻酸、特定硅酸鹽和/或碳酸鈉；(5)溶液阻滯劑，例如石蠟；(6)吸收加速劑，例如季銨化合物；(7)潤(rùn)濕劑，例如十六醇和/或單硬脂酸甘油酯；(8)吸收劑，例如高嶺土和/或膨潤(rùn)土；(9)潤(rùn)滑劑，例如滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、月桂基硫酸鈉和/或它們的混合物；(10)著色劑；和(11)緩沖劑。
釋放劑、濕潤(rùn)劑、包衣劑、甜味劑、調(diào)味劑和香味劑、防腐劑和抗氧化劑也可以存在于本發(fā)明的藥物組合物中。藥學(xué)上可接受的抗氧化劑的例子包括(1)水溶性抗氧化劑，例如抗壞血酸、鹽酸半胱氨酸、硫酸氫鈉、偏硫酸氫鈉、亞硫酸鈉等；(2)油溶性抗氧化劑，例如抗壞血酸棕櫚酸鹽、丁基化的羥基苯甲醚(BHA)、丁基化的羥基甲苯(BHT)、卵磷脂、丙基沒(méi)食子酸酯、α-生育酚等；和(3)金屬螯合劑，例如檸檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨醇、酒石酸、磷酸等。用于片劑、膠囊、丸劑等的包衣劑包括那些用于腸溶衣的，例如醋肽纖維素(CAP)、聚乙酸乙烯鄰苯二甲酸酯(PVAP)、羥丙甲基纖維素鄰苯二甲酸酯、甲基丙烯酸-甲基丙烯酸酯共聚物、乙酸-1，2，4-苯三酸纖維素(CAT)、羧甲基乙基纖維素(CMEC)、羥丙甲基纖維素乙酸琥珀酸酯(HPMCAS)等。
如果需要，本發(fā)明的藥物組合物也可以被制劑以提供活性成分的緩慢或控制釋放，舉例來(lái)說(shuō)，利用不同比例的羥丙甲基纖維素；或其它聚合物基質(zhì)、脂質(zhì)體和/或微球。
此外，本發(fā)明的藥物組合物可以任選地包含遮光劑和可以被制劑，使得它們僅僅或優(yōu)先地在胃腸道的特定部分釋放活性成分，任選地，以延遲的方式?？梢员徊捎玫陌窠M合物的例子包括聚合的物質(zhì)和蠟。活性成分也可以是微囊化形式，如果合適，與一種或多種上述賦性劑一起。
用于口服給藥的合適的液體劑型包括，舉例來(lái)說(shuō)，藥學(xué)上可接受的乳劑、微乳、溶液、混懸液、糖漿和酏劑。這種液體劑型通常包含活性成分和惰性稀釋劑，例如水或其它溶劑、增溶劑和乳化劑，例如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸芐酯、丙二醇、1，3-丁二醇、油類(特別是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氫呋喃醇、聚乙二醇和脫水山梨糖醇的脂肪酸酯和它們的混合物。除活性成分以外，混懸液可以包含混懸劑例如乙氧基化的異硬酯醇、聚氧乙烯山梨糖醇和脫水山梨糖醇酯、微晶纖維素、偏氫氧化鋁、膨潤(rùn)土、瓊脂-瓊脂和西黃蓍膠和它們的混合物。
當(dāng)想用于口服給藥時(shí)，本發(fā)明的藥物組合物優(yōu)選地被包裝為單元?jiǎng)┬汀Ｐg(shù)語(yǔ)“單元?jiǎng)┬汀敝高m于給藥患者的物理上離散的單元，即每個(gè)單元包含被計(jì)算單獨(dú)或與一個(gè)或多個(gè)另外的單元結(jié)合產(chǎn)生需要的治療效果的預(yù)定量的活性劑。例如，這種單元?jiǎng)┬涂梢允悄z囊、片劑、丸劑等。
本發(fā)明的化合物也可以利用已知的透皮給藥系統(tǒng)和賦形劑透皮給藥。例如，本發(fā)明的化合物能夠與滲透促進(jìn)劑混合，例如丙二醇、聚乙二醇單月桂酸酯、氮雜環(huán)烷-2-酮等，并被加入貼片或相似的給藥系統(tǒng)。如果需要，可以在這種透皮組合物中使用另外的賦形劑包括膠凝劑、乳化劑和緩沖劑。
本發(fā)明的藥物組合物也可以包含其它與本發(fā)明化合物，或其可藥用鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體共同給藥的其它治療劑。例如，本發(fā)明的藥物組合物可以進(jìn)一步包含一種或多種選自其它支氣管擴(kuò)張劑(例如PDE3抑制劑、腺苷2b調(diào)質(zhì)和β2腎上腺素受體激動(dòng)劑)；抗炎劑(例如甾體抗炎劑，例如皮質(zhì)類固醇類；非甾體抗炎劑(NSAIDs)和PDE4抑制劑)；其它毒蕈堿性受體拮抗劑(即抗膽堿能劑)；抗感染劑(例如革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性抗生素或抗病毒藥)；抗組胺藥；蛋白酶抑制劑；和傳入阻滯劑(例如D2激動(dòng)劑和神經(jīng)激肽調(diào)質(zhì))的治療劑。其它治療劑可以以藥物上可接受的鹽或溶劑化物的形式應(yīng)用。此外，如果合適，其它治療劑可以作為光學(xué)純立體異構(gòu)體使用。
能夠與本發(fā)明化合物組合使用的(除本發(fā)明化合物以外)有代表性的β2腎上腺素受體激動(dòng)劑包括，但不限于沙美特羅、沙丁胺醇、福莫特羅、沙甲胺醇、非諾特羅、特布他林、沙丁胺醇、異他林、奧西那林、比托特羅、吡布特羅、左沙丁胺醇等，或它們的藥學(xué)上可接受的鹽。可以與本發(fā)明化合物組合使用的其它β2腎上腺素受體激動(dòng)劑包括但不限于3-(4-{[6-({(2R)-2-羥基-2-[4-羥基-3-(羥基甲基)-苯基]乙基}氨基)-己基]氧}丁基)苯磺酰胺和3-(3-{[7-({(2R)-2-羥基-2-[4-羥基-3-(羥基甲基)苯基]乙基}-氨基)庚基]氧}-丙基)苯磺酰胺和在2002年8月29日公布的WO 02/066422中公開(kāi)的相關(guān)化合物；3-[3-(4-{[6-([(2R)-2-羥基-2-[4-羥基-3-(羥基甲基)苯基]乙基]氨基)己基]氧}丁基)-苯基]咪唑烷-2，4-二酮和在2002年9月12日公布的WO 02/070490中公開(kāi)的相關(guān)化合物；3-(4-{[6-({(2R)-2-[3-(甲?；被?-4-羥基苯基]-2-羥基乙基}氨基)己基]氧}丁基)-苯磺酰胺；3-(4-{[6-({(2S)-2-[3-(甲?；被?-4-羥基苯基]-2-羥基乙基}氨基)己基]氧}丁基)-苯磺酰胺，3-(4-{[6-({(2R/S)-2-[3-(甲?；被?-4-羥基苯基]-2-羥基乙基}氨基)己基]氧}丁基)-苯磺酰胺，N-(叔丁基)-3-(4-{[6-({(2R)-2-[3-(甲?；被?-4-羥基苯基]-2-羥基乙基}氨基)己基]-氧}丁基)苯磺酰胺，N-(叔丁基)-3-(4-{[6-({(2S)-2-[3-(甲酰基氨基)-4-羥基苯基]-2-羥基乙基}氨基)-己基]氧}丁基)-苯磺酰胺，N-(叔-丁基)-3-(4-{[6-({(2R/S)-2-[3-(甲?；被?-4-羥基苯基]-2-羥基乙基}氨基)己基]-氧}丁基)苯磺酰胺和在2002年10月3日公布的WO02/076933中公開(kāi)的相關(guān)化合物；4-{(1R)-2-[(6-{2-[(2，6-二氯芐基)氧]乙氧基}己基)氨基]-1-羥乙基}-2-(羥甲基)苯酚和在2003年3月27日公布的WO03/024439中公開(kāi)的相關(guān)化合物；和它們的藥學(xué)上可接受的鹽。當(dāng)使用時(shí)，β2-腎上腺受體激動(dòng)劑將以治療有效量存在于藥物組合物中。通常，β2-腎上腺素受體激動(dòng)劑以足以提供每劑量約0.05μg-約500μg的量存在。
能夠與本發(fā)明化合物組合使用的有代表性的甾體抗炎劑包括，但不限于，甲基潑尼松龍、潑尼松龍、地塞米松、丙酸氟替卡松、6，9-二氟-17-[(2-呋喃基羰基)氧]-11-羥基-16-甲基-3-氧雄甾-1，4-二烯-17-硫代羥酸S-氟甲基酯、6，9-二氟-11-羥基-16-甲基-3-氧-17-丙酰氧基-雄甾-1，4-二烯-17-硫代羥酸S-(2-氧-四氫呋喃-3S-基)酯、倍氯米松酯(例如17-丙酸酯或17，21-二丙酸酯)、布地奈德、氟尼縮松、莫米松酯(例如糠酸酯)、曲安西龍、羅氟奈德、環(huán)索奈德、布替可特丙酸酯、RPR-106541、ST-126等，或它們的藥學(xué)上可接受的鹽。當(dāng)使用時(shí)，甾體抗炎劑將以治療有效量存在于藥物組合物中。通常，甾體抗炎劑將以足以提供每劑量約0.05μg-約500μg的量存在。
其它合適的組合包括，例如其它抗炎劑，例如NSAIDs(例如色甘酸鈉；奈多羅米鈉；磷酸二酯酶(PDE)抑制劑(例如茶堿、PDE4抑制劑或混合的PDE3/PDE4抑制劑)；白細(xì)胞三烯拮抗劑(例如孟魯司特)；白細(xì)胞三烯合成的抑制劑；iNOS抑制劑；蛋白酶抑制劑，例如類胰蛋白酶和彈性酶抑制劑；β-2整聯(lián)蛋白拮抗劑和腺苷受體激動(dòng)劑或拮抗劑(例如腺苷2a激動(dòng)劑)；細(xì)胞因子拮抗劑(例如趨化因子拮抗劑例如白細(xì)胞介素抗體(IL抗體)，特別地，IL-4療法，IL-13療法或它們的組合)；或細(xì)胞因子合成的抑制劑。
例如，能夠與本發(fā)明化合物組合使用的有代表性的磷酸二酯酶-4(PDE4)抑制劑或混合的PDE3/PDE4抑制劑包括，但不限于順式4-氰基-4-(3-環(huán)戊氧基-4-甲氧基苯基)環(huán)己烷-l-羧酸、2-甲酯基-4-氰基-4-(3-環(huán)丙基甲氧基-4-二氟甲氧基苯基)環(huán)己烷-1-酮；順-[4-氰基-4-(3-環(huán)丙基甲氧基-4-二氟甲氧基苯基)環(huán)己烷-1-醇]；順-4-氰基-4-[3-(環(huán)戊氧基)-4-甲氧基苯基]環(huán)己烷-1-羧酸等，或它們的藥學(xué)上可接受的鹽。其它有代表性的PDE4或混合的PDE4/PDE3抑制劑包括AWD-12-281(elbion)；NCS-613(INSERM)；D-4418(Chiroscience和Schering-Plough)；CI-1018或PD-168787(Pfizer)；在WO99/16766(Kyowa Hakko)中公開(kāi)的苯并間二氧雜環(huán)戊烯化合物；K-34(Kyowa Hakko)；V-11294A(Napp)；羅氟司特(Byk-Gulden)；在WO99/47505(Byk-Gulden)中公開(kāi)的pthalazinone化合物；普馬芬群(Byk-Gulden，now Altana)；阿羅茶堿(Almirall-Prodesfarma)；VM554/UM565(Vernalis)；T-440(Tanabe Seiyaku)；和T2585(TanabeSeiyaku)。
可以與本發(fā)明化合物組合使用的(除了本發(fā)明的化合物以外)有代表性的毒蕈堿性拮抗劑(即抗膽堿能劑)包括，但不限于阿托品、硫酸阿托品、氧阿托品、甲基硝酸阿托品、氫溴酸后馬托品、氫溴酸莨菪堿(d，l)、氫溴酸東莨菪堿、異丙托溴銨、氧托溴銨、噻托溴銨、溴甲胺太林、丙胺太林溴化物、辛托品甲基溴化物、克利溴銨、copyrrolate(甘羅溴銨)、異丙碘銨、溴美噴酯、氯化三乙己苯銨(Pathilone)、甲硫己環(huán)銨、鹽酸環(huán)戊通、托吡卡胺、鹽酸苯海索、哌侖西平、替侖西平、AF-DX 116和美索曲明等，或它們的藥學(xué)上可接受的鹽；或者，鹽形式的列出的那些化合物，它們的可替換的藥學(xué)上可接受的鹽。
可以與本發(fā)明化合物組合使用的有代表性的抗組胺藥(即H1-受體拮抗劑)包括，但不限于，乙醇胺類，例如馬來(lái)酸卡比沙明、富馬酸氯馬斯汀、鹽酸苯海拉明和茶苯海明；乙二胺類，例如馬來(lái)酸(amleate)美吡拉敏、鹽酸芐吡二胺和檸檬酸芐吡二胺；烷基胺類，例如氯苯那敏和阿伐斯??；哌嗪類，例如鹽酸羥嗪、雙羥萘酸羥嗪、鹽酸苯甲嗪、乳酸賽克利嗪、鹽酸美克洛嗪和鹽酸西替立嗪；哌啶類，例如阿司咪唑、左卡巴斯汀鹽酸鹽、氯雷他定或它的descarbo乙氧基類似物、特非那定和鹽酸非索那定；鹽酸氮卓斯丁等，或它們的藥學(xué)上可接受的鹽；或者，鹽形式的列出的那些化合物，它們的可替換的藥學(xué)上可接受的鹽。
與本發(fā)明化合物組合給藥的其它治療劑的適合劑量在大約每天0.05g至大約每天100mg范圍內(nèi)。
下述制劑舉例說(shuō)明本發(fā)明的有代表性的藥物組合物制劑實(shí)施例A如下制備通過(guò)吸入給藥的干粉成分量本發(fā)明化合物0.2mg乳糖25mg有代表性的方法將本發(fā)明化合物微粉化，然后與乳糖混合。將該混合的混合物裝入明膠吸入藥筒。利用粉末吸入器給藥藥筒內(nèi)容物。
制劑實(shí)施例B如下制備用在干粉吸入裝置中的干粉制劑有代表性的方法制備本發(fā)明微粉化化合物與乳糖混合制劑的比為1∶200的藥物組合物。將該組合物裝入每劑量能夠傳遞約10μg至100μg本發(fā)明化合物的干粉吸入裝置。
制劑實(shí)施例C如下制備在定量吸入器中通過(guò)吸入給藥的干粉有代表性的方法通過(guò)將10g平均粒徑小于10μm的呈微粉化顆粒形式的本發(fā)明化合物分散在由溶解在200mL軟化水中0.2g卵磷脂形成的溶液中來(lái)制備包含5wt％本發(fā)明化合物和0.1wt％卵磷脂的混懸液。將該混懸液噴霧干燥并將得到的物質(zhì)微粉化成平均直徑小于1.5μm的顆粒。將顆粒裝入有加壓的1，1，1，2-四氟乙烷的藥筒中。
制劑實(shí)施例D如下制備用于定量吸入器的藥物組合物有代表性的方法通過(guò)將5g平均粒徑小于10μm的呈微粉化顆粒形式的活性成分分散在由0.5g海藻糖和0.5g卵磷脂溶解在100mL軟化水中形成的膠體溶液中來(lái)制備包含5％本發(fā)明化合物、0.5％卵磷脂和0.5％海藻糖的混懸液。將該混懸液噴霧干燥并將得到的物質(zhì)微粉化成平均直徑小于1.5μm的顆粒。將顆粒裝入有加壓的1，1，1，2-四氟乙烷的灌中。
制劑實(shí)施例E如下制備用于霧化器吸入器的藥物組合物有代表性的方法用于霧化器的水性氣溶膠制劑是通過(guò)將0.1mg本發(fā)明化合物溶解在用檸檬酸酸化的1mL 0.9％的氯化鈉溶液中進(jìn)行制備的。攪拌并超聲混合物直到活性成分溶解。通過(guò)緩慢滴加NaOH將溶液的pH調(diào)整至3-8范圍內(nèi)的值。
制劑實(shí)施例F如下制備用于口服給藥的硬明膠膠囊成分量本發(fā)明化合物250mg乳糖(噴霧干燥的)200mg硬脂酸鎂10mg有代表性的方法將成分徹底混合，然后裝入硬明膠膠囊(每個(gè)膠囊460mg組合物)。
制劑實(shí)施例G如下制備用于口服給藥的混懸液
成分量本發(fā)明化合物1.0g富馬酸 0.5g氯化鈉 2.0g對(duì)羥基苯甲酸甲酯0.15g對(duì)羥基苯甲酸丙酯0.05g粒狀糖 25.5g山梨醇(70％溶液)12.85gVeegum k(Vanderbilt Co.)1.0g調(diào)味劑 0.035mL著色劑 0.5mg蒸餾水 適量至100mL有代表性的方法將成分混合以形成每10mL混懸液包含100mg活性成分的混懸液。
制劑實(shí)施例H如下制備可注射制劑成分量本發(fā)明化合物0.2g醋酸鈉緩沖溶液(0.4M)2.0mLHCl(0.5N)或NaOH(0.5N) 適量至pH4水(蒸餾的，無(wú)菌)適量至20mL有代表性的方法混合上述成分，用0.5N HCl或0.5N NaOH將pH調(diào)整至4±0.5。
實(shí)用性本發(fā)明的化合物具有β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑和毒蕈堿性受體拮抗劑兩種活性，因此，預(yù)期這樣的化合物適用于治療由β2腎上腺素能受體或毒蕈堿性受體介導(dǎo)的醫(yī)學(xué)狀況，即通過(guò)用β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑或毒蕈堿性受體拮抗劑能緩解的醫(yī)學(xué)狀況。這種醫(yī)學(xué)狀況包括，舉例來(lái)說(shuō)，與可逆的氣道阻塞有關(guān)的肺病癥或疾病，例如慢性阻塞性肺病(例如慢性和喘鳴的支氣管炎和肺氣腫)、哮喘、肺纖維化等。其它可以被治療的狀況包括早產(chǎn)、抑郁、充血性心力衰竭、皮膚病(例如，炎性、過(guò)敏性、牛皮癬和增生性皮膚病)，降低消化酸度的狀況是合乎需要的(例如消化和胃潰瘍)和肌肉萎縮性疾病。
因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及治療肺病的方法，該方法包括給予需要治療的患者有效量的本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體。當(dāng)用于治療肺病時(shí)，本發(fā)明化合物通常通過(guò)以每天多劑量、每日單次劑量或每周單次劑量吸入被給藥。通常，用于治療肺病的劑量為約10μg/天至約200μg/天。
當(dāng)通過(guò)吸入給藥時(shí)，本發(fā)明化合物通常具有提供支氣管擴(kuò)張的作用。因此，在它的方法方面的另一方面，本發(fā)明涉及在患者中提供支氣管擴(kuò)張的方法，該方法包括給予需要支氣管擴(kuò)張的患者治療有效量的本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體。通常，提供支氣管擴(kuò)張的劑量將在約10μg/天至約200μg/天的范圍內(nèi)。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及治療慢性阻塞性肺病或哮喘的方法，該方法包括給予需要治療的患者治療有效量的本發(fā)明化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體。當(dāng)用來(lái)治療COPD或哮喘時(shí)，本發(fā)明化合物將通常通過(guò)以每日多劑量或每日單劑量吸入給藥。通常，治療COPD或哮喘的劑量將在10μg/天至200μg/天的范圍內(nèi)。
當(dāng)在本文使用時(shí)，COPD包括慢性阻塞性支氣管炎和肺氣腫(例如見(jiàn)Barnes，Chronic ObstructivePulmonary disease，N Engl J Med2000343269-78)。
當(dāng)用于治療肺病時(shí)，本發(fā)明化合物任選地與其它治療劑組合給藥。尤其是組合本發(fā)明化合物和甾體抗炎劑(例如皮質(zhì)類固醇)，本發(fā)明的藥物組合物僅用兩種活性成分就可以提供三重治療，即β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑、毒蕈堿性受體拮抗劑和抗炎活性。由于與包含三種活性成分的組合物相比，包含兩種活性成分的藥物組合物通常更容易被制備，所以這種雙組分組合物顯著優(yōu)于包含三種活性組分的組合物。因此，在特定實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物和方法進(jìn)一步包含治療有效量的甾體抗炎劑。
本發(fā)明的化合物顯示毒蕈堿性受體拮抗劑和β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑兩種活性。因此，在其它性質(zhì)中，特別感興趣的化合物是證明在M3毒蕈堿性受體結(jié)合的抑制常數(shù)Ki值和β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑活性的EC50值小于約100nM；尤其是小于10nM的那些。在這些化合物中，特別感興趣的化合物包括當(dāng)以本文描述的體外試驗(yàn)或以相似試驗(yàn)測(cè)定時(shí)，用在M3毒蕈堿性受體結(jié)合的抑制常數(shù)Ki表示的毒蕈堿活性大約等于用半數(shù)最大有效濃度EC50表示的化合物的β2腎上腺素能激動(dòng)劑活性的那些。例如，特別感興趣的化合物是在M3毒蕈堿性受體結(jié)合的抑制常數(shù)Ki與β2腎上腺素能受體的EC50的比為約30∶1至約1∶30；包括約20∶1至約1∶20；例如約10∶1至約1∶10的那些。
由于本發(fā)明的化合物既具有β2腎上腺素能激動(dòng)劑活性也具有毒蕈堿性受體拮抗劑活性，這種化合物也被適用作調(diào)查或研究具有β2腎上腺素能受體或毒蕈堿性受體的生物系統(tǒng)或樣本的研究工具，或用作發(fā)現(xiàn)既具有β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑活性也具有毒蕈堿性受體拮抗劑活性的新化合物的研究工具。這種生物系統(tǒng)或樣本可以包含β2腎上腺素能受體和/或毒蕈堿性受體。任何合適的具有β2腎上腺素能和/或毒蕈堿性受體的生物系統(tǒng)或樣本都可以被用在這種研究中，其可以在體外或體內(nèi)進(jìn)行。適用于這種研究的有代表性的生物系統(tǒng)或樣本包括，但不限于細(xì)胞、細(xì)胞提取物、質(zhì)膜、組織樣本、哺乳動(dòng)物(例如小鼠、大鼠、豚鼠、兔、狗、豬等)等。
在這一實(shí)施方案中，使包含β2腎上腺素能受體或毒蕈堿性受體的生物系統(tǒng)或樣本與β2腎上腺素能受體激動(dòng)量或毒蕈堿性受體拮抗量的本發(fā)明的化合物相接觸。然后利用常規(guī)方法和設(shè)備測(cè)定效果，例如放射配基結(jié)合試驗(yàn)和功能試驗(yàn)。這種功能試驗(yàn)包括配基介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)環(huán)磷腺苷(cAMP)的變化，配基介導(dǎo)的酶腺苷酸環(huán)化酶(其合成cAMP)活性的變化，配基介導(dǎo)的經(jīng)由受體催化的[35S]gTP S對(duì)GDP的交換將鳥(niǎo)苷5′-O-(-硫代)三磷酸酯([35S]gTP S)引入分離的膜變化，配基介導(dǎo)的游離細(xì)胞內(nèi)鈣離子變化(例如用來(lái)自molecular Devices，Inc.的熒光聯(lián)合成像板讀出器或FLIPR測(cè)量)。本發(fā)明化合物將激動(dòng)或引起β2腎上腺素能受體的活化并在上述列出的任何功能試驗(yàn)或類似性質(zhì)的試驗(yàn)中拮抗或減少毒蕈堿性受體的活化。在這些研究中采用的化合物的量將通常在約0.1納摩爾至約100納摩爾的范圍內(nèi)。
此外，本發(fā)明的化合物可以被用作發(fā)現(xiàn)具有β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑和毒蕈堿性受體拮抗劑兩種活性的新化合物的研究工具。在這一實(shí)施方案中，將試驗(yàn)化合物或試驗(yàn)化合物組的β2腎上腺素能受體和毒蕈堿性受體結(jié)合數(shù)據(jù)(例如，通過(guò)體外放射性配基置換試驗(yàn)測(cè)定的)與本發(fā)明化合物的β2腎上腺素能受體和毒蕈堿性受體結(jié)合數(shù)據(jù)相比較，來(lái)鑒別那些具有大約相同的或更好的β2腎上腺素能受體和/或毒蕈堿性受體結(jié)合的那些試驗(yàn)化合物，如果有的話。本發(fā)明的這一方面包括，作為單獨(dú)的實(shí)施方案，產(chǎn)生比較數(shù)據(jù)(利用合適的試驗(yàn))和試驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析來(lái)鑒定感興趣的試驗(yàn)化合物。
本發(fā)明化合物的性質(zhì)和實(shí)用性可以利用對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的各種體外和體內(nèi)試驗(yàn)來(lái)證明。例如，在下述實(shí)施例中進(jìn)一步詳細(xì)描述了有代表性的試驗(yàn)。
實(shí)施例提供下述制備和實(shí)施例來(lái)舉例說(shuō)明本發(fā)明的特定實(shí)施方案。然而，除非特別指出，這些特定實(shí)施方案不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
除非另外指出，下述縮寫(xiě)具有下述含義，未定義的本文采用的任何其它縮寫(xiě)具有它們的標(biāo)準(zhǔn)含義AC 腺苷酸環(huán)化酶Ach乙酰膽堿
ATCC美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心BSA 牛血清白蛋白cAMP3′-5′環(huán)腺苷一磷酸CHO 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢cM5克隆的黑猩猩M5受體DCM 二氯甲烷(即氯化亞甲)DIPEA N，N-二異丙基乙胺dPBSDulbecco磷酸鹽緩沖鹽水DMEMDulbecco改良伊格爾(氏)培養(yǎng)基DMSO二甲基亞砜EDTA乙二胺四乙酸Emax最大效能EtOAc 乙酸乙酯EtOH乙醇FBS 胎牛血清FLIPR 熒光測(cè)定成像板讀出器Gly 甘氨酸HATUO-(7-氮雜苯并三唑-1-基-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸鹽HBSSHank′s緩沖鹽溶液HEK 人胚腎細(xì)胞HEPES 4-(2-羥基乙基)-1-哌嗪乙磺酸hM1克隆的人M1受體hM2克隆的人M2受體hM3克隆的人M3受體hM4克隆的人M4受體hM5克隆的人M5受體HPLC高效液相色譜法IBMX3-異丁基-1-甲基黃嘌呤
％Eff 百分率功效PBS磷酸鹽緩沖鹽水PyBOP 苯并三唑-1-基氧三吡咯烷磷六氟磷酸鹽rpm每分鐘轉(zhuǎn)數(shù)TFA三氟醋酸THF四氫呋喃Tris 三(羥甲基)氨基甲烷除非另外指出，試劑、原料和溶劑購(gòu)自商品提供商(例如Aldrich，F(xiàn)luka、Sigma等)并且使用無(wú)需進(jìn)一步純化。
在下述實(shí)施例中，利用具有3.5微米顆粒尺寸由Agilent提供的有Zorbax Bonus RP 2.1×50mm柱(C14柱)的Agilent(Palo Alto，CA)Series 1100儀器進(jìn)行HPLC分析。檢測(cè)是通過(guò)在214nm處的UV吸收。經(jīng)6分鐘用0.5mL/分鐘10％-70％B的流速獲得HPLC 10-70數(shù)據(jù)。流動(dòng)相A是2％-98％-0.1％ACN-水-TFA；流動(dòng)相B是90％-10％-0.1％CAN-水-TFA。應(yīng)用上述流動(dòng)相A和B，用5分鐘梯度獲得HPLC 5-35數(shù)據(jù)和HPLC 10-90數(shù)據(jù)。
用Applied Biosystems(Foster City，CA)型API-150EX儀器獲得液相色譜質(zhì)譜(LCMS)數(shù)據(jù)。用10％-90％流動(dòng)相B經(jīng)5分鐘梯度獲得LCMS 10-90數(shù)據(jù)。
利用來(lái)自Applied Biosystems的API 150EX Prep工作站系統(tǒng)進(jìn)行小規(guī)模純化。流動(dòng)相是A水+0.05％v/v TFA；和B乙腈+0.05％v/vTFA。至于排列(通常約3-50mg回收的樣本大小)采用下述條件20mL/分鐘流速；15分鐘梯度和有5微米顆粒的20mm×50mmPrismRP柱(Thermo Hypersil-Keystone，Bellefonte，PA)。至于更大規(guī)模純化(通常大于100mg粗制樣本)，采用下述條件60ml/分鐘流速；30分鐘梯度和有10微米顆粒的41.4mm×250mm Microsorb BDS柱(Varian，Palo Alto，CA)。
在20℃利用有鎢鹵素光源和589nm過(guò)濾器的Jasco旋光儀(型號(hào)P-1010)測(cè)定手性化合物的比旋度(稱作[α]20D)。典型地以1mg/mL水測(cè)定試驗(yàn)化合物的樣品。
實(shí)施例1聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-{9-[2-(4-羥基-2-氧代-2，3-二氫苯并噻唑-7-基)-乙氨基]壬基}哌啶-4-基酯雙(三氟乙酸)鹽步驟1-聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸哌啶-4-基酯將聯(lián)苯基-2-異氰酸酯(97.5g，521mmol)和4-羥基-1-芐基哌啶(105g，549mmol)，二者都可從Aldrich，Milwaukee，WI商業(yè)獲得，在70℃一起加熱12小時(shí)，在該期間通過(guò)LCMS監(jiān)測(cè)聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-芐基哌啶-4-基酯的形成。然后將反應(yīng)混合物冷卻至50℃并添加乙醇(1L)，然后緩慢添加6M鹽酸(191ml)。然后將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，加入甲酸銨(98.5g，1.56mol)并使氮?dú)鈩×夜呐萃ㄟ^(guò)溶液20分鐘。然后加入鈀(10Wt.％(干基重)活性炭上)(20g)。在40℃加熱反應(yīng)混合物12h，然后通過(guò)硅藻土墊過(guò)濾。然后減壓除去溶劑并向粗殘余物中加入1M鹽酸(40ml)。然后加入氫氧化鈉(10N)調(diào)節(jié)pH至12。用乙酸乙酯(2×150ml)提取水層，干燥(硫酸鎂)，然后減壓除去溶劑得到標(biāo)題化合物(155g，100％收率)。HPLC(10-70)Rt＝2.52；MS m/z[M+H+]C18H20N2O2計(jì)算值297.15；實(shí)測(cè)值297.3。
步驟2-聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(9-羥基壬基)哌啶-4-基酯將聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸哌啶-4-基酯(5g，16.9mmol)、9-溴-1-壬醇(4.9g，22mmol)和N，N-二異丙基乙胺(8.8ml，50.7mmol)在乙腈中(100ml)中的溶液加熱至60℃達(dá)12小時(shí)。冷卻反應(yīng)混合物并濃縮至干。將殘余物溶解在二氯甲烷(50ml)中，用0.05N HCl(50ml)和鹽水洗滌該溶液，然后用硫酸鎂干燥。蒸發(fā)溶劑得到標(biāo)題化合物，(6g，81％收率)，沒(méi)有進(jìn)一步純化將它用于下個(gè)步驟。MS m/z[M+H+]C27H38N2O3計(jì)算值439.3；實(shí)測(cè)值439.3。
步驟3-聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(9-氧代壬基)哌啶-4-基酯將步驟2的產(chǎn)物(6g，13.7mmol)、N，N-二異丙基乙胺(7.15ml，41.1mmol)和二甲亞砜(20ml)在二氯甲烷(100ml)中的溶液冷卻至0℃。15分鐘后，向冷卻的反應(yīng)混合物中分兩部分加入三氧化吡啶硫(6.54g，41.1mmol)。在0℃2小時(shí)后，用水(50ml)猝滅反應(yīng)。然后用水(3X50ml)洗滌有機(jī)層并濃縮得到標(biāo)題化合物(5.8g)，沒(méi)有進(jìn)一步純化將它用于下個(gè)步驟。MS m/z[M+H+]計(jì)算值C27H36N2O3437.3；實(shí)測(cè)值437.4。
步驟4-7-(2-氨乙基)-4-甲氧基-1，3-苯并噻唑-2(3H)-酮鹽酸鹽(a)7-乙腈-2，4-二甲氧基苯并噻唑使用在J.Weinstock et al.，J.Med.Chem.，1987，30，1166-1176中描述的方法制備標(biāo)題化合物。按照Weinstock第1173頁(yè)中步驟和使用2-甲氧基-5-甲基苯基硫脲(Lancaster Synthesis，Ltd.，Windham，NewHampshire)，制備標(biāo)題化合物，在合成2，4-二甲氧基苯并噻唑-7-乙腈中具有下面的少量改進(jìn)(1)用2，2′-偶氮二異丁腈(Aldrich，Milwaukee，WI)替換過(guò)氧化苯甲酰；并且(2)反應(yīng)混合物在氮?dú)庀禄亓?0分鐘，而不是用150-W鎢燈照射，然后冷卻反應(yīng)混合物至10℃并過(guò)濾。
(b)7-(2-氨乙基)-4-甲氧基-3H-苯并噻唑-2-酮使用在J。Weinstock et al.，J.Med.Chem.，1987，30，1166-1176的1173頁(yè)上描述的步驟制備標(biāo)題化合物。MS m/z[M+H+]計(jì)算值C10H12N2O2S 225.1；實(shí)測(cè)值225.1。1H NMR(CDCl3)δ＝2.60(t，2H，CH2)，2.80(t，2H，CH2)，3.60(s，3H，OCH3)，6.82(dd，2H Ar)。
步驟5-聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-{9-[2-(4-甲氧基-2-氧代-2，3-二氫苯并噻唑-7-基)-乙氨基]壬基}哌啶-4-基酯向步驟4的產(chǎn)物(153mg，0.35mmol)和N，N-二異丙基乙胺(0.061ml，0.35mmol)在二氯甲烷(1.75ml)中的混合物中加入步驟3的產(chǎn)物(91mg，0.35mmol)，并將所得到的混合物在室溫下攪拌2小時(shí)。添加三乙酰氧基硼氫化鈉(88mg，0.42mmol)和混合物在室溫下攪拌12小時(shí)，此時(shí)，通過(guò)LCMS(10-90)分析測(cè)定反應(yīng)完成。然后用6N氯化銨溶液(2ml)猝滅反應(yīng)混合物并分離有機(jī)層。用鹽水洗滌有機(jī)層，用硫酸鎂干燥并濃縮得到標(biāo)題化合物(145mg)。MS m/z[M+H+]計(jì)算值C37H48N4O4S 645.3；實(shí)測(cè)值645.8。
步驟6-聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-{9-[2-(4-羥基-2-氧代-2，3-二氫苯并噻唑-7-基)-乙氨基]壬基}哌啶-4-基酯雙(三氟乙酸)鹽將步驟5的產(chǎn)物(138mg，0.21mmol)在二氯甲烷(1ml)中的溶液冷卻至-10℃并加入二氯甲烷(1.1ml)中的1.0M三溴化硼。10分鐘后，去除冰浴并讓反應(yīng)混合物緩慢溫至室溫。3小時(shí)后，通過(guò)MS分析測(cè)定反應(yīng)完成。然后用甲醇(1ml)猝滅反應(yīng)混合物并真空濃縮。通過(guò)HPLC(5-35)純化殘余物，得到標(biāo)題化合物(9.8mg，98％純)。HPLC(10-70)Rt＝2.9；MS m/z[M+H+l計(jì)算值C36H46N4O4S 631.3；實(shí)測(cè)值631.8。
實(shí)施例2聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(4-{[2-(4-羥基-2-氧代-2，3-二氫苯并噻唑-7-基)乙氨基]甲基}苯基氨基甲?；?乙基]-哌啶-4-基酯雙(三氟乙酸)鹽步驟1-N-(4-羥基甲基苯基)丙烯酰胺將對(duì)-氨基芐醇(12.31g，100mmol)溶解在含有N，N-二異丙基乙胺(35ml，200mmol)的二氯甲烷(200ml)和四氫呋喃(20ml)的混合物中。然后將所得到的均質(zhì)溶液冷卻至0℃并在30分鐘時(shí)間內(nèi)滴加烯丙酰氯(8.2ml，100mmol)，同時(shí)保持反應(yīng)物的內(nèi)部溫度低于20℃。在0℃攪拌反應(yīng)混合物約60分鐘。將反應(yīng)混合物倒入冰冷的1M鹽酸(0.6L)并分離有機(jī)層和蒸發(fā)至干得到粗物質(zhì)(5g)，該粗物質(zhì)主要由雙-?；碑a(chǎn)物組成。用乙酸乙酯(2X200ml)提取酸性水層并且合并的乙酸乙酯層用硫酸鈉干燥、過(guò)濾和減壓濃縮產(chǎn)生殘余物。殘余物用乙酸乙酯研制得到標(biāo)題化合物(10.5g，98.5％純)。通過(guò)研制從二氯甲烷層獲得的粗物質(zhì)而得到另外2g標(biāo)題化合物。
步驟2-聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(4-羥基甲基苯基氨基甲酰基)乙基]-哌啶-4-基酯將步驟1的產(chǎn)物(10g，57mmol)和來(lái)自實(shí)施例1，步驟1的聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸哌啶-4-基酯(17.8g，60mmol)溶解在甲醇(100ml)和二氯甲烷(100ml)的混合物中和所得到的混合物在55℃加熱(回流)18小時(shí)。然后減壓除去大部分溶劑并將所得到的殘余物用乙酸乙酯(200ml)研制得到通過(guò)過(guò)濾分離的固體。真空干燥固體得到標(biāo)題化合物(25g)。
步驟3-聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(4-甲?；交被柞；?乙基]哌啶-4-基酯將步驟2的產(chǎn)物(20g，42.3mmol)溶解在含有DMSO(18ml，254mmol)和N，N-二異丙基乙胺(37ml，211.5mmol)的無(wú)水二氯甲烷(200ml)中。將所得到的均質(zhì)溶液冷卻至-20℃，然后在30分鐘內(nèi)分次加入三氧化硫吡啶絡(luò)合物(20.2g)，同時(shí)保持反應(yīng)混合物的溫度低于-10℃。然后在-10℃攪拌反應(yīng)混合物約30分鐘。然后將反應(yīng)混合物倒入冰冷的1M鹽酸(100ml)和水(500ml)(混合物具有約6的pH)的混合物中。用二氯甲烷(300ml)提取混合物然后用鹽水(200ml)洗滌二氯甲烷層，用硫酸鈉干燥并減壓濃縮。在溶劑除去過(guò)程中觀察到一些沉淀。向所得到的稠漿液中加入乙酸乙酯(100ml)。通過(guò)過(guò)濾分離所得到的固體并真空干燥得到標(biāo)題化合物(11g，99％用HPLC測(cè)定的純度)。減壓濃縮漿液溶劑得到另外的通過(guò)過(guò)濾分離的固體并真空干燥得到標(biāo)題化合物(5.4g，96％用HPLC測(cè)定的純度)。HPLC(2％-70％乙腈在水/0.1％TFA中)；Rt＝5.7。MS m/z[M+H+]計(jì)算值C28H29N3O4472.2；實(shí)測(cè)值472.0。
步驟4-聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(4-{[2-(4-甲氧基-2-氧代-2，3-二氫苯并噻唑-7-基)乙氨基]甲基}苯基氨基甲酰基)乙基]-哌啶-4-基酯向?qū)嵤├?，步驟4的產(chǎn)物(100mg，0.38mmol)和N，N-二異丙基乙胺(0.067ml，0.38mmol)在二氯甲烷(1.75ml)中的混合物中加入步驟3的產(chǎn)物(163mg，0.35mmol)和將所得到的混合物在室溫下攪拌2小時(shí)。加入三乙酰氧基硼氫化鈉(122mg，0.58mmol)并將所得到的混合物在室溫下攪拌約2小時(shí)。反應(yīng)混合物用6N氯化銨(2ml)猝滅并分離有機(jī)層。用鹽水洗滌有機(jī)層，用硫酸鎂干燥和真空濃縮得到固體形式的標(biāo)題化合物(127mg)。MS m/z[M+H+]計(jì)算值C38H41N5O5S 680.3；實(shí)測(cè)值680.8。
步驟5-聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(4-{[2-(4-羥基-2-氧代-2，3-二氫苯并噻唑-7-基)乙氨基]甲基}苯基氨基甲?；?乙基]-哌啶-4-基酯雙(三氟乙酸)鹽將步驟4的產(chǎn)物(127mg，0.19mmol)在二氯甲烷(1ml)中的溶液冷卻至-10℃并加入1M三溴化硼在二氯甲烷(0.94ml)中的溶液。10分鐘后，去除冰浴并讓反應(yīng)混合物緩慢溫至室溫。3小時(shí)后，通過(guò)MS分析測(cè)定反應(yīng)完成。通過(guò)緩慢加入甲醇(1ml)猝滅反應(yīng)混合物，然后真空濃縮。然后使用HPLC(5-35)純化粗混合物，得到粉末形式的標(biāo)題化合物(11.7mg，98％純度)。MS m/z[M+H+]計(jì)算值C37H39N5O5S666.3；實(shí)測(cè)值666.5。
實(shí)施例33-[4-(3-聯(lián)苯基-2-基脲基)哌啶-1-基]-N-(4-{[2-(4-羥基-2-氧代-2，3-二氫-苯并噻唑-7-基)乙氨基]甲基}-苯基)丙酰胺步驟1-N-1，1’-聯(lián)苯基-2-基-N’-4-哌啶基脲(a)N-1，1’-聯(lián)苯基-2-基-N’-4-(1-芐基)哌啶基脲在室溫下將聯(lián)苯基-2-異氰酸酯(50g，256mmol)溶解在乙腈中(400ml)。冷卻至0℃后，在5分鐘內(nèi)添加4-氨基-N-芐基哌啶(48.8g，256mmol)在乙腈中(400ml)中的溶液。立即觀察到沉淀。15分鐘后，添加乙腈(600ml)，并且在35℃將所得到的粘性混合物攪拌12小時(shí)。過(guò)濾固體和用冷的乙腈洗滌，然后真空干燥，得到標(biāo)題化合物(100g，98％收率)。MS m/z[M+H+]計(jì)算值C25H27N3O 386.22；實(shí)測(cè)值386.3。
(b)N-1，1’-聯(lián)苯基-2-基-N’-4-哌啶基脲將步驟(a)的產(chǎn)物(20g，52mmol)溶解在無(wú)水甲醇和無(wú)水DMF的混合物(3∶1v/v，800ml)中。添加含水鹽酸(0.75ml的37％濃溶液，7.6mmol)并使氮?dú)鈩×夜呐萃ㄟ^(guò)溶液20分鐘。在將反應(yīng)混合物置于氫氣氛(氣球)下之前，在氮?dú)饬飨绿砑覲earlman′s催化劑(Pd(OH)2，5g)。讓反應(yīng)混合物攪拌4天，然后兩次通過(guò)硅藻土墊，以除去催化劑。然后減壓除去溶劑，得到標(biāo)題化合物(13g，85％收率)。MS m/z[M+H+]計(jì)算值C18H21N3O 296.2；實(shí)測(cè)值296.0。
或者，通過(guò)在70℃一起加熱聯(lián)苯基-2-異氰酸酯(50g，256mmol)和4-氨基-1-芐基哌啶(51.1g，269mmol)12小時(shí)(通過(guò)LCMS分析監(jiān)測(cè))，合成N-1，1’-聯(lián)苯基-2-基-N’-4-哌啶基脲。冷卻反應(yīng)混合物至50℃并添加乙醇(500ml)，接著添加6M鹽酸(95ml)。冷卻反應(yīng)混合物至室溫。向反應(yīng)混合物中添加甲酸銨(48.4g，768mmol)并在添加鈀(10Wt.％(干基重)活性炭上)(10g)之前，使氮?dú)馔ㄟ^(guò)溶液劇烈鼓泡20分鐘。在40℃加熱反應(yīng)混合物12小時(shí)，然后通過(guò)硅藻土墊過(guò)濾和減壓除去溶劑。向粗殘余物中添加1M鹽酸(20ml)并且添加10N氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至12。用乙酸乙酯(2×80ml)提取水層，干燥(硫酸鎂)和減壓除去溶劑，得到固體形式的標(biāo)題化合物(71.7g，95％收率)。MS m/z[M+H+]計(jì)算值C18H21N3O 296.2；實(shí)測(cè)值296.0。
步驟2-N-(4-(1，3-二氧戊環(huán)-2-基)苯基)丙烯酰胺(a)2-(4-硝基苯基)-[1，3]-二氧戊環(huán)在裝備有Dean-Stark儀器、回流冷凝器和機(jī)械攪拌器的3-頸圓底燒瓶中，將對(duì)-硝基苯甲醛(101.5g，672mmol)，乙二醇(112ml，2.0mol)和對(duì)-甲苯磺酸(12.8g，67.2mmol，10％mol)懸浮在甲苯(800ml)中，然后在120℃加熱4小時(shí)。冷卻反應(yīng)混合物至室溫并減壓除去甲苯。添加飽和氫氧化鈉水溶液(800ml)，并且將所得到的漿在室溫下攪拌15分鐘，然后過(guò)濾并真空干燥得到固體形式的標(biāo)題化合物(121.8g)。1H NMR(DMSO-d6)δ＝8.12(d，2H)，7.59(d 2H)，5.78(s，1H)，3.8-4.0(m，4H)。
(b)4-([1，3]二氧戊環(huán)-2-基)苯胺將步驟(a)的產(chǎn)物(10g，51mmol)溶解在四氫呋喃(50ml)和乙醇(50ml)的混合物中，然后在50Psi下使用氧化鉑催化劑(PtO2)(116mg，0.51mmol)氫化18小時(shí)。通過(guò)硅藻土過(guò)濾反應(yīng)混合物，然后減壓除去溶劑得到標(biāo)題化合物(8g)，其沒(méi)有進(jìn)一步純化被用于下面步驟中。1H NMR(DMSO-d6)δ＝6.98(d，2H)，6.42(d，2H)，5.39(s，1H)，5.08(s，2H)3.7-3.9(m，4H)。
(c)N-(4-([1，3]二氧戊環(huán)-2-基)苯基)丙烯酰胺將步驟(b)的產(chǎn)物(8g，48.5mmol))和三乙胺(10.1ml，72.75mmol)溶解在二氯甲烷(100ml)中。所得到的均質(zhì)溶液冷卻至0℃并滴加烯丙酰氯(4.81ml，58.2mmol)。在0℃攪拌反應(yīng)混合物1小時(shí)，然后用水(100ml)猝滅。用水(50ml)洗滌有機(jī)層，用硫酸鈉干燥和減壓濃縮，以除去大部分二氯甲烷。將乙酸乙酯(100ml)添加到殘余物中并通過(guò)過(guò)濾收集所得到的沉淀，然后真空干燥，得到標(biāo)題化合物(8.5g)。1HNMR(DMSO-d6)δ＝10.10(s，1H)，7.61(d，2H)，7.25(d，2H)，6.1-6.4(m，2H)，5.62(d，1H)，5.58(s，1H)，3.7-4.0(m，4H)。
步驟3-3-[4-(3-聯(lián)苯基-2-基脲基)哌啶-1-基]-N-(4-([1，3]二氧戊環(huán)-2-基)苯基)-丙酰胺將步驟1的產(chǎn)物(543mg，1mmol)添加到步驟2的產(chǎn)物(385mg，1.7mmol)在甲醇(3ml)和二氯甲烷(3ml)的混合物中的溶液中并將所得到的混合物加熱至回流12小時(shí)。然后冷卻反應(yīng)混合物和真空濃縮。用乙酸乙酯研制殘余物并通過(guò)過(guò)濾分離所得到的沉淀，得到固體形式的標(biāo)題化合物(731mg)。MS m/z[M+H+]計(jì)算值C30H34N4O4515.3；實(shí)測(cè)值515.5。
步驟4-3-[4-(3-聯(lián)苯基-2-基脲基)哌啶-1-基]-N-(4-甲?；交?丙酰胺向步驟3的產(chǎn)物(731mg，1.4mmol)在甲醇中的溶液中添加1M鹽酸(2ml)并將所得到的混合物在室溫下攪拌兩小時(shí)。然后真空濃縮粗反應(yīng)混合物，然后用二氯甲烷稀釋。用飽和的碳酸氫鈉(2×5ml)洗滌有機(jī)層，然后用鹽水(5ml)洗滌。用硫酸鎂干燥有機(jī)層，過(guò)濾，并且濃縮得到油狀的標(biāo)題化合物(600mg)。MS m/z[M+H+]計(jì)算值C28H30N4O3471.2；實(shí)測(cè)值471.5。
步驟5-3-[4-(3-聯(lián)苯基-2-基脲基)哌啶-1-基]-N-(4-{[2-(4-甲氧基-2-氧代-2，3-二氫苯并噻唑-7-基)乙氨基]甲基}苯基)丙酰胺將實(shí)施例1，步驟4的產(chǎn)物(131mg，0.58mmol)添加到步驟4的產(chǎn)物(183mg，0.39mmol)和N，N-二異丙基乙胺(0.102ml，0.58mmol)在二氯甲烷(1ml)和甲醇(1mL)的混合物中的溶液中并在室溫下將所得到的混合物攪拌30分鐘。30分鐘后，添加三乙酰氧基硼氫化鈉(123mg，0.58mmol)并在室溫下繼續(xù)攪拌。2小時(shí)后，用6N含水氯化銨(2ml)猝滅反應(yīng)混合物并分離有機(jī)層，用飽和的碳酸氫鈉(2×5ml)洗滌有機(jī)層，然后用鹽水(5ml)洗滌。用硫酸鎂干燥有機(jī)層，過(guò)濾，然后真空濃縮得到固體形式的標(biāo)題化合物(169mg)。MS m/z[M+H+]計(jì)算值C38H42N6O4S 679.3；實(shí)測(cè)值679.5。
步驟6-3-[4-(3-聯(lián)苯基-2-基脲基)哌啶-1-基]-N-(4-{[2-(4-羥基-2-氧代-2，3-二氫苯并噻唑-7-基)乙氨基]甲基}苯基)丙酰胺將步驟5的產(chǎn)物(169mg，0.25mmol)在二氯甲烷(1.2ml)中的溶液在冰/丙酮浴中冷卻。約10分鐘后，將1.0M三溴化硼在二氯甲烷(1.2ml)中的溶液緩慢地加到反應(yīng)混合物中，同時(shí)在冰/丙酮浴中攪拌反應(yīng)混合物。30分鐘后，從冰浴中移開(kāi)反應(yīng)混合物并緩慢地溫至室溫。15小時(shí)后，用甲醇(2ml)緩慢猝滅反應(yīng)混合物并真空濃縮。在小規(guī)模HPLC上純化反應(yīng)，得到標(biāo)題化合物(8.7mg，71％純度)。MS m/z[M+H+]計(jì)算值C37H40N6O4S 665.3；實(shí)測(cè)值665.5。HPLC(10-70)Rt＝2.97。
實(shí)施例4聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(4-{2-[2-(4-羥基-2-氧代-2，3-二氫苯并噻唑-7-基)-乙氨基]乙基}苯基氨基甲酰基)乙基]-哌啶-4-基酯雙(三氟乙酸)鹽步驟1-3-[4-(聯(lián)苯基-2-基氨基甲酰氧基)哌啶-1-基]丙酸(a)3-[4-(聯(lián)苯基-2-基氨基甲酰氧基)哌啶-1-基]丙酸甲酯在50℃將3-溴丙酸甲酯(553μL，5.07mmol)添加到實(shí)施例1，步驟1的產(chǎn)物(1.00g，3.38mmol)和二異丙基乙胺(1.76ml，10.1mmol)在乙腈中(34ml)的攪拌的溶液中并在50℃加熱反應(yīng)混合物過(guò)夜。然后減壓除去溶劑，并且將殘余物溶解在二氯甲烷(30ml)中。用飽和氫氧化鈉水溶液(10ml)洗滌所得到的溶液，用硫酸鎂干燥，過(guò)濾并減壓濃縮。通過(guò)柱色譜法純化粗殘余物，得到標(biāo)題化合物(905mg，70％收率)。
(b)3-[4-(聯(lián)苯基-2-基氨基甲酰氧基)哌啶-1-基]丙酸在30℃將步驟(a)的產(chǎn)物(902mg，2.37mmol)和氫氧化鋰(171mg，7.11mmol)在四氫呋喃(12ml)和水(12ml)的50％混合物中的攪拌的溶液加熱過(guò)夜，然后用濃鹽酸酸化。凍干所得到的混合物，得到標(biāo)題化合物(～100％收率，含有一些氯化鋰)。
步驟2-聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-{2-[4-(2-羥基乙基)苯基氨基甲?；鵠乙基}-哌啶-4-基酯將4-氨基苯乙醇(0.092mg，0.67mmol)(Sigma Aldrich)添加到步驟1的產(chǎn)物(226mg，0.61mmol)和N，N-二異丙基乙胺(0.161ml，0.67mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(3.3ml)中的溶液中。將所得到的混合物在室溫下攪拌45分鐘。然后加入HATU(257mg，0.67mmol)和反應(yīng)混合物在室溫下攪拌12小時(shí)。然后真空濃縮反應(yīng)混合物至其體積的一半，然后用二氯甲烷稀釋。用飽和的碳酸氫鈉(2×5ml)洗滌有機(jī)層，然后用鹽水(5ml)洗滌。有機(jī)層用硫酸鎂干燥，過(guò)濾，并且濃縮得到標(biāo)題化合物(299mg)。MS m/z[M+H+]計(jì)算值C29H33N3O4488.3；實(shí)測(cè)值488.3。
步驟3-聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-{2-[4-(2-氧代乙基)苯基氨基甲?；鵠乙基}-哌啶-4-基酯在冰/水浴中將步驟2的產(chǎn)物(295mg，0.61mmol)在二氯甲烷(3ml)中的溶液冷卻至-5℃。添加二甲亞砜(0.258ml，0.36mmol)和N，N-二異丙基乙胺(0.316ml，1.8mmol)并在-5℃下將反應(yīng)混合物攪拌10分鐘。然后在攪拌下加入三氧化吡啶硫絡(luò)合物(289mg，1.8mmol)，同時(shí)保持反應(yīng)混合物的溫度在-5℃。2小時(shí)后，如通過(guò)MS分析測(cè)定，反應(yīng)完成。然后用水(5ml)猝滅反應(yīng)混合物并用水(3×5ml)洗滌有機(jī)層，用硫酸鎂干燥，過(guò)濾，并且濃縮得到固體形式的標(biāo)題化合物(176mg)。MSm/z[M+H+]計(jì)算值C29H31N3O4486.2；實(shí)測(cè)值486.3。
或者，可以通過(guò)用4-氨基苯乙醇代替對(duì)-氨基芐醇作為實(shí)施例2，步驟1中的原料，并按照實(shí)施例2，步驟1至3中概述的合成方法，來(lái)合成聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-{2-[4-(2-氧代乙基)苯基氨基甲?；鵠-乙基}哌啶-4-基酯。
步驟4-聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(4-{2-[2-(4-甲氧基-2-氧代-2，3-二氫苯并噻唑-7-基)-乙氨基]乙基}苯基氨基甲?；?乙基]哌啶-4-基酯將步驟3的產(chǎn)物(176mg，0.36mmol)添加到實(shí)施例1，步驟4的產(chǎn)物(106mg，0.47mmol)在二氯甲烷(2ml)中的溶液中并將所得到的混合物在室溫下攪拌1小時(shí)。添加三乙酰氧基硼氫化鈉(84mg，0.40mmol)并將所得到的混合物在室溫下攪拌2小時(shí)。反應(yīng)混合物用6N氯化銨(5ml)猝滅。分離有機(jī)層并用飽和的碳酸氫鈉(2×5ml)，然后用鹽水(5ml)洗滌。有機(jī)層用硫酸鎂干燥，過(guò)濾，并且濃縮得到固體形式的標(biāo)題化合物(207mg)。MS m/z[M+H+]計(jì)算值C39H43N5O5S 694.3；實(shí)測(cè)值694.3。
步驟5-聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(4-{2-[2-(4-羥基-2-氧代-2，3-二氫苯并噻唑-7-基)-乙氨基]乙基}苯基氨基甲酰基)乙基]哌啶-4-基酯雙(三氟乙酸)鹽將步驟4的產(chǎn)物(207mg，0.30mmol)在二氯甲烷(1.5ml)中的溶液在冰/水浴中冷卻至5℃。約10分鐘后，向反應(yīng)混合物中添加1.0M三溴化硼在二氯甲烷(0.90ml，0.90mmol)中的溶液。約5.5小時(shí)后，從冰浴中移開(kāi)反應(yīng)混合物并在室溫下攪拌。12小時(shí)后，反應(yīng)混合物濃縮至干并用HPLC純化，得到標(biāo)題化合物(8mg，99％純度)，為雙(三氟乙)酸鹽。MS m/z[M+H+]計(jì)算值C38H41N5O5S 680.3；實(shí)測(cè)值680.0。
另外，可以使用下面的中間體制備本發(fā)明的其它化合物。
制備1N-1，1’-聯(lián)苯基-2-基-N’-4-[1-(9-羥基壬基)]哌啶基脲在50℃下將9-溴-1-壬醇(4.84g，21.7mmol)添加到實(shí)施例3，步驟1的產(chǎn)物(5.8g，19.7mmol)和二異丙基乙胺(10.29ml，59.1mmol)在乙腈(99ml)中的攪拌的溶液中。在50℃加熱反應(yīng)混合物8h。然后讓反應(yīng)混合物冷卻并減壓除去溶劑。將殘余物溶解在二氯甲烷(100ml)中，用飽和的碳酸氫鈉水溶液(2×50ml)洗滌，干燥(硫酸鎂)。減壓除去溶劑。通過(guò)急驟色譜法(二氯甲烷∶甲醇∶氨系統(tǒng))純化粗產(chǎn)物，得到標(biāo)題化合物(7.1g，16.2mmol，82％收率)。
制備2N-1，1’-聯(lián)苯基-2-基-N’-4-[1-(9-氧代壬基)]哌啶基脲在-10℃下，在氮?dú)夥障?，將二甲亞?490μL，6.9mmol)，接著將二異丙基乙胺(324μL，3.45mmol)添加到制備1的產(chǎn)物(500mg，1.15mmol)在二氯甲烷(11.5ml)的溶液中。在-15℃攪拌反應(yīng)混合物15分鐘，然后分部分添加三氧化硫吡啶絡(luò)合物(549mg，3.45mmol)。在-15℃攪拌反應(yīng)混合物1小時(shí)，然后添加水(10ml)。然后分離有機(jī)相，用水(10ml)洗滌，并且干燥(硫酸鈉)。減壓除去溶劑，得到標(biāo)題化合物(475mg，1.09mmol，95％收率)。HPLC(10-70)Rt＝3.39。
制備3N，N-(二-叔丁氧羰基)-9-溴壬胺將二-叔丁氧羰基胺(3.15g，14.5mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(0.28ml)中的溶液冷卻至0℃約10分鐘。添加氫化鈉，60％在礦物油中(0.58g，14.5mmol)并在0℃攪拌反應(yīng)混合物10分鐘。反應(yīng)混合物從冰浴中移開(kāi)并讓其溫至室溫約30分鐘。然后冷卻反應(yīng)混合物降到0℃并添加1，9-二溴壬烷(2.46ml，12.1mmol)在二甲基甲酰胺(100ml)中的溶液。在室溫下攪拌反應(yīng)混合物過(guò)夜。24小時(shí)后，MS分析顯示反應(yīng)完成。將反應(yīng)混合物濃縮至干并用乙酸乙酯(100ml)稀釋。用飽和的碳酸氫鈉(2×100ml)、鹽水(100ml)洗滌有機(jī)層，干燥(硫酸鎂)和減壓濃縮，得到粗產(chǎn)物，通過(guò)硅膠色譜法將其純化，使用在己烷中的5％乙酸乙酯，得到標(biāo)題化合物。MS m/z[M+H+]計(jì)算值C19H36N1O4Br 423.18；實(shí)測(cè)值423。
制備4聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(9-二-叔丁氧羰基氨基)壬基]哌啶-4-基酯將1∶1乙腈和N，N-二甲基甲酰胺的混合物(50ml)添加到實(shí)施例1，步驟1的產(chǎn)物(3.0g，10.1mmol)和制備3的產(chǎn)物(5.1g，12.2mmol)和三乙胺(1.42ml，10.1mmol)中。在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)混合物24小時(shí)并通過(guò)LCMS監(jiān)測(cè)分析。然后濃縮反應(yīng)混合物并用乙酸乙酯(50ml)稀釋。用飽和的碳酸氫鈉(2×50ml)和鹽水(50ml)洗滌有機(jī)層。然后用用硫酸鎂干燥有機(jī)相并濃縮得到6.5g粗油。通過(guò)硅膠色譜法，使用1∶1己烷/乙酸乙酯純化油，提供標(biāo)題化合物(3g)。MS m/z[M+小時(shí)+]計(jì)算值C37H55N3O6638.41；實(shí)測(cè)值639。
制備5聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(9-氨基壬基)哌啶-4-基酯將三氟乙酸(11ml)添加到制備4的產(chǎn)物(7.2g，11.3mmol)在二氯甲烷(56ml)的溶液中。2小時(shí)后，LCMS分析顯示反應(yīng)完成。然后濃縮反應(yīng)混合物至干燥并用乙酸乙酯(75ml)稀釋。然后加入氫氧化鈉(1N)直到混合物的pH達(dá)到14。然后收集有機(jī)相并用飽和的碳酸氫鈉(2×50ml)和鹽水(50ml)洗滌。然后用硫酸鎂干燥有機(jī)相并濃縮，提供標(biāo)題化合物(5.5g)。MS m/z[M+小時(shí)+]計(jì)算值C27H39N3O2438.30；實(shí)測(cè)值439。
制備6聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(9-氧代壬基)哌啶-4-基酯(a)9-溴壬醛在氮?dú)庀?，向裝配有磁力攪拌器、添加漏斗和溫度控制器的100-mL圓底燒瓶中，添加9-溴壬醇(8.92g，40mmol)和二氯甲烷(30ml)。將所得到的混合物冷卻至5℃并添加碳酸氫鈉(0.47g，5.6mmol)和溴化鉀(0.48g，4mmol)在水(10ml)中的溶液。添加2，2，6，6-四甲基-1-哌啶氧基游離基團(tuán)(TEMPO)(63mg，0.4mmol)，然后以一定的速率通過(guò)滴加漏斗添加10至13％的漂白溶液(27ml)，該速率使得用冰冷浴(在約40分鐘內(nèi))保持溫度在約8℃(+/-2℃)。漂白溶液添加完成后，攪拌混合物30分鐘。同時(shí)保持溫度在約0℃。添加亞硫酸氫鈉(1.54g)在水(10ml)中的溶液并將所得到的混合物在室溫下攪拌30分鐘。然后分離混合物的層，并且用二氯甲烷(1×20ml)提取乳狀水層。合并的二氯甲烷層用水(1×30ml)洗滌，干燥(MgSO4)，過(guò)濾和減壓濃縮，得到標(biāo)題中間體(8.3g，94％收率)，沒(méi)有進(jìn)一步純化將它用于下個(gè)步驟。
(b)9-溴-1，1-二甲氧基壬烷向100ml圓底燒瓶中添加9-溴壬醛(7.2g，32.5mmol)、甲醇(30ml)和原甲酸三甲酯(4ml，36.5mmol)。添加4N鹽酸在二氧雜環(huán)己烷(0.2ml，0.8mmol)中的溶液并將所得到的混合物回流3小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并添加固體碳酸氫鈉(100mg，1.2mmol)。在堿壓下，濃縮所得到的混合物至其原始體積的四分之一，然后添加乙酸乙酯(50ml)。用水(2×40ml)洗滌有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過(guò)濾和減壓濃縮，得到液體形式的標(biāo)題中間體(8.44g，(97％收率))，沒(méi)有進(jìn)一步純化將其用于下一步驟。
(c)聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(9，9-二甲氧基壬基)哌啶-4-基酯向50ml三頸、圓底燒瓶中添加聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸哌啶-4-基酯(1g，3.38mmol)和乙腈(10ml)，形成漿。向該漿中添加9-溴-1，1-二甲氧基壬烷(1.1g，1.3mmol)和三乙胺(0.57g，4.1mmol)并將所得到的混合物在65℃加熱6小時(shí)(通過(guò)HPLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)，直到原料＜5％)。然后將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，此時(shí)混合物形成了稠漿液。添加水(5ml并過(guò)濾混合物，以在粗多孔玻璃過(guò)濾器上收集固體。用乙腈(10ml)和水(5ml)的預(yù)混合溶液洗滌固體，然后用另一份乙腈(10ml)和水(2ml)的預(yù)混合溶液洗滌固體?？諝飧稍锼玫降墓腆w，得到白色固體形式的標(biāo)題中間體(1.37g，84％，純度＞96％用LC測(cè)定，1H NMR)。
(d)聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(9-氧代壬基)哌啶-4-基酯向500ml具有磁力攪拌器的圓底燒瓶中添加聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(9，9-二甲氧基壬基)哌啶-4-基酯(7.7g，15.9mmol)，然后添加乙腈(70ml)和含水1M鹽酸(70ml)。所得到的混合物在室溫下攪拌1小時(shí)，然后添加二氯甲烷(200ml)。攪拌該混合物15分鐘，然后分離層。干燥(MgSO4)有機(jī)層，過(guò)濾和減壓濃縮，得到標(biāo)題中間體(6.8g)。
制備72-(N-芐氧羰基-N-甲氨基)乙醛(a)2-(N-芐氧羰基-N-甲氨基)乙醇在0℃下，在15分鐘內(nèi)將在THF(20ml)中的氯甲酸芐基酯(19g，111.1mmol)滴加到2-(甲氨基)乙醇(10g，133.3mmol)在THF(100ml)和含水碳酸鈉(100ml)中的攪拌的溶液中。反應(yīng)混合物在0℃攪拌12小時(shí)，然后用EtOAc(2×200ml)提取。用含水碳酸鈉(200ml)洗滌有機(jī)層，干燥(碳酸鉀)并減壓除去溶劑，得到標(biāo)題化合物(22.5g，97％收率)。
(b)2-(N-芐氧羰基-N-甲氨基)乙醛在-10℃下，將DMSO(71ml，1mol)和DIPEA(87.1ml，0.5mol)添加到步驟(a)的產(chǎn)物(20.9g，0.1mol)在二氯甲烷(200ml)中的攪拌的溶液中。反應(yīng)混合物在-10℃攪拌15分鐘，然后添加三氧化硫吡啶絡(luò)合物(79.6g，0.5mol)并將所得到的混合物攪拌1小時(shí)。添加1M鹽酸(200ml)猝滅反應(yīng)混合物。分離有機(jī)層并用飽和的碳酸氫鈉水溶液(100ml)、鹽水(100ml)洗滌，干燥(碳酸鉀)并在堿壓下除去溶劑，得到標(biāo)題化合物(20.7g，～100％收率)。
制備8聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(甲氨基)乙基]哌啶-4-基酯向制備7的產(chǎn)物(20.7g，100mmol)和實(shí)施例1，步驟1的產(chǎn)物(25g，84.7mmol)在MeOH(200ml)中的攪拌的溶液中添加三乙酰氧基硼氫化鈉(21.2g，100mmol)。在室溫下攪拌反應(yīng)混合物12小時(shí)，然后用2M鹽酸猝滅它并減壓除去溶劑。將殘余物溶解在在乙酸乙酯(200ml)中并用飽和氫氧化鈉水溶液(100ml)和鹽水(50ml)洗滌，然后干燥(硫酸鎂)并減壓除去溶劑。通過(guò)柱色譜法(50-90％EtOAc/己烷)純化粗殘余物，得到油狀的聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(芐氧羰基-甲氨基)乙基]哌啶-4-基酯。
將油溶解在甲醇(100ml)中并添加鈀(10Wt.％(干基重)活性炭上)(5g)。反應(yīng)混合物在氫氣(30Psi)下攪拌12小時(shí)，然后通過(guò)硅藻土過(guò)濾，用甲醇洗滌，并且蒸發(fā)溶劑，得到標(biāo)題化合物(13.2g，44％收率)。
制備9聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-{2-[(6-溴己酰)甲氨基]乙基}哌啶-4-基酯將6-溴己酰氯(3.23ml，21.1mmol)添加到攪拌的制備8的產(chǎn)物(6.2g，17.6mmol)和DIPEA(6.13ml，35.2mmol)在二氯乙烷(170ml)的溶液中。反應(yīng)混合物攪拌1小時(shí)，然后用EtOAc(250ml)稀釋并用飽和氫氧化鈉水溶液(2×200ml)和鹽水(200ml)洗滌，然后干燥(硫酸鎂)。減壓除去溶劑，得到標(biāo)題化合物(6.6g，73％收率)。
制備10聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(4-(氨基甲基)苯基氨基甲?；?-乙基]哌啶-4-基酯向攪拌的4-(N-叔丁氧羰基氨基甲基)苯胺(756mg，3.4mmol)，實(shí)施例4，步驟1的產(chǎn)物(1.5g，4.08mmol)和HATU(1.55g，4.08mmol)在DMF(6.8ml)中的溶液中添加DIPEA(770μL，4.42mmol)。反應(yīng)混合物在50℃下攪拌過(guò)夜，然后減壓除去溶劑。將所得到的殘余物溶解在二氯甲烷(20ml)中并用飽和氫氧化鈉水溶液(10ml)洗滌。然后干燥(硫酸鎂)有機(jī)相并減壓除去溶劑。通過(guò)急驟色譜法(5-10％MeOH/DCM)純化粗產(chǎn)物，得到固體，將其溶解在TFA/DCM(25％，30ml)中并在室溫下攪拌2小時(shí)。然后減壓除去溶劑，將殘余物溶解在二氯甲烷(30ml)中，并用N氫氧化鈉(15ml)洗滌。分離有機(jī)相，干燥(硫酸鎂)并減壓除去溶劑，得到標(biāo)題化合物(1.5g，94％，兩個(gè)步驟)。
制備11聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-叔丁氧羰基氨乙基)哌啶-4-基酯在50℃下，向攪拌的實(shí)施例1，步驟18的產(chǎn)物(2.00g，6.76mmol)和DIPEA(3.54ml，20.3mmol)在乙腈(67.6ml)中的溶液中添加2-叔丁氧羰基氨乙基溴化物(1.82g，8.11mmol)并在50℃下加熱反應(yīng)混合物過(guò)夜。然后減壓除去溶劑，將殘余物溶解在二氯甲烷(60ml)并用飽和氫氧化鈉水溶液(30ml)洗滌。干燥(硫酸鎂)有機(jī)相并減壓除去溶劑。通過(guò)柱色譜法(5％MeOH/DCM)純化粗殘余物，得到固體形式的標(biāo)題化合物(2.32g，78％收率)。
制備12聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-氨乙基)哌啶-4-基酯將制備11的產(chǎn)物溶解在TFA/DCM(25％，52ml)中并在室溫下攪拌2小時(shí)。然后減壓除去溶劑，將粗殘余物溶解在二氯甲烷(30ml)中并用1N氫氧化鈉(15ml)洗滌。分離有機(jī)相，干燥(硫酸鎂)并減壓除去溶劑得到標(biāo)題化合物(1.61g，90％收率)。
制備13聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(4-氨基甲基苯甲酰氨基)乙基]哌啶-4-基酯向攪拌的制備12的產(chǎn)物(339mg，1mmol)、4-(叔丁氧羰基氨基甲基)苯甲酸(301mg，1.2mmol)和HATU(456mg，1.2mmol)在DMF(2ml)中的溶液中添加DIPEA(226μL，1.3mmol)。反應(yīng)混合物在攪拌室溫過(guò)夜，然后減壓除去溶劑。將所得到的殘余物溶解在二氯甲烷(20ml)中并用飽和氫氧化鈉水溶液(10ml)洗滌。干燥(硫酸鎂)有機(jī)相并減壓除去溶劑。將粗產(chǎn)物溶解在TFA/DCM(25％，10ml)中并在室溫下攪拌該混合物2小時(shí)。減壓除去溶劑并將粗殘余物溶解在二氯甲烷(15ml)中并用1N氫氧化鈉(5ml)洗滌。分離有機(jī)相，干燥(硫酸鎂)并減壓除去溶劑，得到標(biāo)題化合物(472mg，～100％，兩個(gè)步驟)。
制備14聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-氨乙基)哌啶-4-基酯將2-叔丁氧羰基氨乙基溴化物(1.22g，5.44mmol)添加到實(shí)施例1，步驟1的產(chǎn)物(1.46g，4.95mmol)和二異丙基乙胺(1.03ml，5.94mmol)在乙腈中(24ml)中的溶液中。在65℃攪拌反應(yīng)混合物12小時(shí)，此時(shí)MS分析顯示反應(yīng)完成。反應(yīng)混合物濃縮至干，然后添加二氯甲烷(10ml)。將三氟乙酸添加到該混合物中并將混合物在室溫下攪拌4小時(shí)，此時(shí)MS分析顯示反應(yīng)完成。然后濃縮混合物至其體積的一半，將1N氫氧化鈉添加到溶液中，直到調(diào)節(jié)pH至14。用鹽水洗滌有機(jī)層，然后用硫酸鎂干燥并過(guò)濾。濃縮濾液得到1.6g固體形式的標(biāo)題化合物。MS m/z[M+小時(shí)+]計(jì)算值C20H25N3O2340.2；實(shí)測(cè)值340。
制備151-[1-(9-芐基氨基壬基)哌啶-4-基]-3-聯(lián)苯基-2-基脲將N-芐胺(0.903ml，8.30mmol)添加到制備2的產(chǎn)物(2.40g，5.52mmol)在甲醇(25ml)中的溶液中并在室溫?cái)嚢杷玫降幕旌衔铩?0分鐘后，向反應(yīng)混合物中添加三乙酰氧基硼氫化鈉(1.75g，8.30mmol)。通過(guò)HPLC分析跟蹤反應(yīng)的進(jìn)展。在室溫下2小時(shí)后，用水(5ml)猝滅反應(yīng)，然后真空下濃縮至其體積的一半。用二氯甲烷(15ml)稀釋反應(yīng)混合物并用1N氫氧化鈉(2×10ml)洗滌，然后鹽水(5ml)洗滌。用硫酸鎂干燥有機(jī)層并濃縮得到標(biāo)題化合物。
制備16
2-芐氧基-5-(2-溴乙酰)苯甲酸甲基酯(a)2-芐氧基-5-乙酰苯甲酸甲基酯在2L燒瓶中，在回流條件和氮?dú)夥障?，?-乙酰水楊酸甲酯(100g，0.515mol)溶解在乙腈(1L)中。在15分鐘內(nèi)分次添加碳酸鉀(213.5g，1.545mol)。在15分鐘內(nèi)，使用滴加漏斗添加溴化芐(67.4ml，0.566mol)。將反應(yīng)加熱至85℃9小時(shí)，然后過(guò)濾和用乙腈(100ml)洗滌。在堿壓下濃縮溶液至約300ml體積并在水(1L)和乙酸乙酯(1L)之間分配。用飽和的氯化鈉(250ml)洗滌有機(jī)層，使用硫酸鎂(75g)干燥，然后過(guò)濾并用乙酸乙酯(100ml)洗滌。濃縮有機(jī)層，得到固體形式的2-芐氧基-5-乙酰苯甲酸甲基酯(100％收率)。
(b)2-芐氧基-5-(2-溴乙酰)苯甲酸甲基酯在氮?dú)夥障?，?00ml燒瓶中，將步驟(a)的產(chǎn)物(10.0g，35.2mmol)溶解在氯仿(250ml)中。使用滴液漏斗在30分鐘內(nèi)添加溶解在氯仿(50ml)中的溴(1.63ml，31.7mmol)。反應(yīng)混合物攪拌2.5小時(shí)，然后濃縮，得到固體。在溫和加熱下，將固體溶解在甲苯(150ml)中，接著添加乙醚(150ml)，得到結(jié)晶固體形式的標(biāo)題化合物(55％收率)。
制備175-[2-(芐基-{9-[4-(3-聯(lián)苯基-2-基脲基)哌啶-1-基]壬基}氨基)乙酰]-2-芐氧基苯甲酸甲基酯將制備16的產(chǎn)物(371mg，1.00mmol)添加到制備15的產(chǎn)物(448mg，0.85mmol)在二甲亞砜(4.5ml)中的溶液中，接著添加碳酸鉀(234mg，1.7mmol)。反應(yīng)混合物在40℃攪拌6小時(shí)，此時(shí)通過(guò)HPLC分析不再觀察到制備15的產(chǎn)物。冷卻反應(yīng)混合物至室溫和過(guò)濾，然后用乙醇(4ml)稀釋。向反應(yīng)混合物中添加硼氫化鈉(63mg，1.7mmol)并在室溫?cái)嚢璺磻?yīng)24小時(shí)。反應(yīng)混合物用0.5M氯化銨(5ml)猝滅并提取到乙酸乙酯(2×10ml)中。合并的有機(jī)層用飽和的碳酸氫鈉(10ml)洗滌，然后用鹽水(5ml)洗滌。有機(jī)層用硫酸鎂干燥并減壓除去溶劑。粗殘余物通過(guò)硅膠色譜法(氯仿中的3％甲醇)純化得到標(biāo)題化合物。
制備181-[1-(9-{芐基-[2-(4-芐氧基-3-羥基甲基苯基)-2-羥基乙基]氨基}壬基)哌啶-4-基]-3-聯(lián)苯基-2-基脲將制備17的產(chǎn)物(163mg，0.20mmol)在四氫呋喃(1.00ml)中的溶液冷卻至0℃。將氫化鋰鋁(1.0M THF；0.50ml，0.50mmol)滴加到混合物中。1小時(shí)后，反應(yīng)混合物用水(1ml)猝滅并用乙酸乙酯(2ml)稀釋。用鹽水洗滌有機(jī)層，用硫酸鎂干燥，合并有機(jī)提取物并濃縮得到標(biāo)題化合物。
制備19聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-{2-[((1R，3S)-3-氨基環(huán)戊烷羰基)氨基]-乙基}哌啶-4-基酯向攪拌的制備14的產(chǎn)物(318mg，0.94mmol)、(1R，3S)-3-叔丁氧羰基氨基環(huán)戊烷羧酸(258mg，1.1mmol)和HATU(428mg，1.1mmol)在DMF(5ml)中的溶液中添加DIPEA(245μL，1.09mmol)。反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，然后減壓除去溶劑。將所得到的殘余物溶解在二氯甲烷(20ml)中并用飽和氫氧化鈉水溶液(10ml)洗滌。干燥(硫酸鎂)有機(jī)層并減壓除去溶劑。通過(guò)急驟色譜法(5-10％MeOH/DCM)純化粗產(chǎn)物，然后溶解在三氟乙酸/DCM混合物(1ml/5ml)中并在室溫下攪拌1小時(shí)。減壓除去溶劑。將殘余物溶解在二氯甲烷(20ml)中并用1M氫氧化鈉(10ml)洗滌，干燥(硫酸鎂)并減少溶劑，得到標(biāo)題化合物(167mg，39％收率)。
制備204-(叔丁氧羰基氨基甲基)-2-氯苯胺將攪拌的4-氨基甲基-2-氯苯胺(940mg，6mmol)和重碳酸二-叔-丁基酯(1.44g，6.6mmol)在二氯甲烷(30ml)中的溶液在室溫下攪拌4小時(shí)，此時(shí)通過(guò)LCMS測(cè)定反應(yīng)完成。然后用飽和的碳酸氫鈉水溶液(15ml)洗滌反應(yīng)混合物，用硫酸鈉干燥有機(jī)層并減壓除去溶劑。所得到的橙色固體從乙酸乙酯中重結(jié)晶，得到白色固體形式的標(biāo)題中間體(～100％收率)。
制備21N-[4-(叔丁氧羰基氨基甲基)-2-氯苯基]丙烯酰胺向攪拌的制備20的產(chǎn)物(1.54g，6.0mmol)在二乙醚(35ml)和1M氫氧化鈉(35ml)的混合物中的溶液中滴加烯丙酰氯(687μL，8.45mmol)。1小時(shí)后，分離有機(jī)層，干燥(Na2SO4)并減壓除去溶劑，得到白色固體形式的標(biāo)題中間體(1.8g，96％收率)。
制備22聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(4-(叔丁氧羰基氨基甲基)-2-氯苯基氨基甲?；?乙基]哌啶-4-基酯在60℃下，將實(shí)施例1，步驟1的產(chǎn)物(1.04g，3.5mmol)和制備21的產(chǎn)物(1.19g，3.85mmol)在二氯甲烷和甲醇的混合物(12ml，1∶1)中的溶液加熱12小時(shí)。讓反應(yīng)混合物冷卻并減壓除去溶劑。粗物質(zhì)通過(guò)柱色譜法(5-10％MeOH/DCM)純化，得到白色固體形式的標(biāo)題中間體(2.00g，94％收率)。
制備23聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(4-氨基甲基-2-氯苯基氨基甲?；?乙基]-哌啶-4-基酯攪拌制備22的產(chǎn)物(2.00g，3.3mmol)在二氯甲烷(24ml)和TFA(8ml)中的溶液1小時(shí)，然后減壓除去溶劑。將粗反應(yīng)混合物溶解在二氯甲烷(30ml)中并用1M氫氧化鈉(2×30ml)洗滌。干燥(Na2SO4)有機(jī)層并減壓除去溶劑，得到油狀白色固體形式的標(biāo)題中間體(1.46g，88％收率)。
制備242-氯乙磺酸(5-叔丁氧羰基氨基戊基)酰胺在0℃下，向攪拌的5-(叔丁氧羰基氨基)戊胺(1.00g，4.94mmol)和三乙胺(689μL g，4.94mmol)在二氯甲烷(22ml)中的溶液中添加2-氯-1-乙磺酰氯(470μL，4.50mmol)。在室溫下攪拌反應(yīng)混合物2小時(shí)，然后用飽和氫氧化鈉水溶液(15ml)洗滌。干燥(Na2SO4)有機(jī)層并減壓除去溶劑，得到標(biāo)題化合物(100％收率)，其沒(méi)有進(jìn)一步純化被用于下面步驟中。
制備25聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(5-叔丁氧羰基氨基戊基氨磺酰)-乙基]哌啶-4-基酯在60℃將實(shí)施例1，步驟1的產(chǎn)物(1.33g，3.5mmol)和制備24的產(chǎn)物(1.62g，4.94mmol)在二氯甲烷和甲醇(22ml，1∶1)中的溶液加熱5小時(shí)。讓反應(yīng)混合物冷卻至室溫并減壓除去溶劑。將粗殘余物溶解在二氯甲烷(20ml)中并用飽和氫氧化鈉水溶液(10ml)洗滌。干燥(Na2SO4)有機(jī)層并在堿壓下除去溶劑。粗殘余物通過(guò)柱色譜法(5-10％MeOH/DCM)純化，得到白色固體形式的標(biāo)題中間體(1.6g，55％)。MS m/z M+H+＝589.6。
制備26聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(5-氨基戊基氨磺酰)乙基]哌啶-4-基酯攪拌制備25的產(chǎn)物(1.6g，2.72mmol)在二氯甲烷(21ml)和TFA(7ml)中的溶液1小時(shí)，然后減壓除去溶劑。將粗反應(yīng)混合物溶解在二氯甲烷(30ml)中并用1M氫氧化鈉(2×30ml)洗滌。干燥(Na2SO4)有機(jī)層，然后減壓除去溶劑，得到油狀白色固體的標(biāo)題中間體(1.19g，90％收率)。
制備27
聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-{2-[(4-甲?；交酋；?甲氨基]-乙基}哌啶-4-基酯向攪拌制備8的產(chǎn)物(350mg，1mmol)和三乙胺(167μL，1.2mmol)在二氯甲烷(5ml)中的溶液中添加4-甲?；交酋Ｂ?225mg，1.1mmol)。在室溫下1小時(shí)后，通過(guò)MS分析反應(yīng)完成和然后用飽和氫氧化鈉水溶液(5ml)洗滌反應(yīng)混合物。然后干燥(Na2SO4)有機(jī)層并在堿壓下除去溶劑，得到標(biāo)題中間體(323mg，62％收率)。MS m/z M+H+＝522.4。
制備28(3-氨基甲基苯基)甲醇鹽酸鹽(a)(3-叔丁氧羰基甲基苯基)甲醇將硼烷二甲基硫化物(2.05ml，21.6mmol)添加到3-(叔丁氧羰基氨基甲基)苯甲酸(1.81g，7.20mmol)在四氫呋喃(24ml)中的溶液中，并將所得到的混合物在室溫下攪拌3小時(shí)。然后用乙酸乙酯(20ml)稀釋反應(yīng)混合物并分離層。用飽和的碳酸氫鈉、飽和的氯化鈉洗滌有機(jī)層，用硫酸鎂干燥和濃縮得到黃色油狀的標(biāo)題化合物(1.71g)。
(b)(3-氨基甲基苯基)甲醇鹽酸鹽向步驟(a)的產(chǎn)物(1.71g，7.2mmol)中添加4M鹽酸在二氧雜環(huán)己烷(9ml，36mmol)中的溶液并將所得到的混合物在室溫下攪拌1小時(shí)。然后濃縮反應(yīng)混合物并用二乙醚(50ml)稀釋殘余物和過(guò)濾，提供白色固體形式的標(biāo)題化合物(1.09g)。
制備29聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-{2-[3-(3-羥基甲基芐基)脲基]乙基}哌啶-4-基酯將0.2M制備12的產(chǎn)物(760mg，2.24mmol)在N，N-二甲基甲酰胺中的溶液滴加到1，1′-羰基二咪唑(364mg，2.24mmol)和二異丙基乙胺(0.31ml，2.24mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(11ml)中的溶液中并將所得到的混合物在室溫下攪拌2小時(shí)。添加二異丙基乙胺(0.31ml，2.24mmol)和制備28的產(chǎn)物(578mg，3.4mmol)并將該混合物在50℃攪拌12小時(shí)。然后濃縮反應(yīng)混合物至干燥，用二氯甲烷(20ml)稀釋殘余物并用飽和的碳酸氫鈉(2X)、飽和的氯化鈉洗滌該溶液，用硫酸鎂干燥，并濃縮，提供標(biāo)題化合物(1.12g)。LCMS(2-90)Rt＝4.01分鐘；MS m/z M+H＝503.5。
制備30聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-{2-[3-(3-甲?；S基)脲基]乙基}哌啶-4-基酯將制備29的產(chǎn)物(1.12g，2.23mmol)在二氯甲烷(11.1ml)中的溶液冷卻至0℃并添加二異丙基乙胺(1.17ml，6.70mmol)和二甲亞砜(0.949ml，13.4mmol)。約10分鐘后，添加三氧化吡啶硫絡(luò)合物(1.06g，6.70mmol)并將所得到的混合物在0℃攪拌2小時(shí)。然后用水(15ml)猝滅反應(yīng)并用冷水(3X)洗滌有機(jī)層，用硫酸鎂干燥并濃縮，提供松脆的標(biāo)題化合物(609mg)。LCMS(2-90)Rt＝4.13分鐘；MS m/z M+H＝501.3。
制備31聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-[(E)-3-(4-硝基苯基)烯丙基]哌啶-4-基酯在50ml二氯甲烷中攪拌實(shí)施例1，步驟1的產(chǎn)物(2.96g，0.01mol)和對(duì)-硝基肉桂醛(1.77g，0.01mol)2小時(shí)。添加三乙酰氧基硼氫化鈉(6.33g，0.03mol)并將所得到的混合物攪拌2小時(shí)。然后用10ml水猝滅反應(yīng)和并用二氯甲烷(100ml)稀釋該混合物。用飽和的碳酸氫鈉(2X)、鹽水洗滌有機(jī)層，用Na2SO4干燥，過(guò)濾并濃縮，提供黃色泡沫形式的標(biāo)題化合物(3.8g，80％收率)。
制備32聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-[3-(4-氨基苯基)丙基]哌啶-4-基酯將制備31的產(chǎn)物(2.5g，5.4mmol)溶解在100ml乙醇中并將所得到的溶液用氮?dú)馇逑?0分鐘。然后添加碳上鈀(2.5g；50％w/w水；10％Pd；1.1mmol Pd)，同時(shí)用氮?dú)饷摎狻Ｔ撊缓髮⒃摶旌衔镏糜跉錃庀?50Psi)，直到不再消耗氫氣(～30分鐘)。然后用氮?dú)馇逑椿旌衔?，通過(guò)硅藻土過(guò)濾并濃縮。將殘余物溶解在乙酸乙酯中并用飽和的碳酸氫鈉(2X)、鹽水洗滌該混合物，干燥(Na2SO4)，過(guò)濾并濃縮，提供標(biāo)題化合物(2.08g，90％收率)。MS m/z M+H＝430.5。
制備33聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-[2-氟-3-(4-羥基甲基哌啶-1-基甲基)-芐基]哌啶-4-基酯將實(shí)施例1，步驟1的產(chǎn)物(500mg，1.69mmol)、2，6-雙(溴甲基)-1-氟苯(476mg，1.69mmol、哌啶-4-基甲醇(195mg，1.69mmol)和碳酸鉀(466mg，3.37mmol)懸浮在乙腈(5ml)中并在室溫下攪拌18小時(shí)。然后濃縮反應(yīng)混合物并將殘余物溶解在二氯甲烷/水。分離層和用水(2X)、鹽水洗滌有機(jī)層，干燥(MgSO4)并濃縮。通過(guò)硅膠柱色譜法用3％甲醇/氯仿洗脫，純化粗物質(zhì)，得到白色泡沫形式的標(biāo)題化合物(282mg)。MS m/z M+H＝532.3。
制備34聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-[2-氟-3-(4-甲酰基哌啶-1-基甲基)芐基]-哌啶-4-基酯將制備33的產(chǎn)物(282mg，0.53mmol)溶解在二氯甲烷并向該混合物中添加二異丙基乙胺(280μL，1.6mmol)和二甲亞砜(115μL，1.6mmol)。在氮?dú)庀吕鋮s反應(yīng)混合物至-15℃并添加三氧化吡啶硫絡(luò)合物(255mg，1.6mmol)并將所得到的混合物攪拌40分鐘。然后用水猝滅反應(yīng)并分離層。用NaH2PO4水溶液(1M×3)、鹽水洗滌有機(jī)層，干燥(MgSO4)并濃縮，提供泡沫形式的標(biāo)題化合物(253mg)。MS m/z M+H＝530.4。
制備352-[4-(3-溴丙氧基)苯基]乙醇向4-羥基苯乙醇(4.37g，31.0mmol)和碳酸鉀(6.55g，47.0mmol)在乙腈中(62.0ml)中的溶液中添加1，3二溴丙烷(31.0ml，316mmol)。加熱反應(yīng)混合物至70℃12小時(shí)，然后冷卻至室溫，過(guò)濾并真空濃縮。使用4∶1己烷和乙酸乙酯的混合物，通過(guò)硅膠色譜法純化所得到的油，得到白色固體形式的標(biāo)題化合物(6.21g)。
制備36聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-{3-[4-(2-羥基乙基)苯氧基]丙基}哌啶-4-基酯向制備35的產(chǎn)物(1.11g，4.30mmol)和二異丙基乙胺(0.90ml，5.10mmol)在乙腈(21.5ml)中的溶液中添加實(shí)施例1，步驟1的產(chǎn)物(1.27g，4.30mmol)并將所得到的混合物在60℃攪拌12小時(shí)。然后反應(yīng)混合物用二氯甲烷(20ml)稀釋并用飽和的碳酸氫鈉(25ml)、飽和的氯化鈉(25ml)洗滌，用硫酸鎂干燥并濃縮，提供標(biāo)題化合物(1.98g，85％純度)。MS m/z M+H＝475.5。
制備37聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-{3-[4-(2-氧代乙基)苯氧基]丙基}哌啶-4-基酯將制備36的產(chǎn)物(723mg，1.53mmol)和二氯甲烷(75ml)的溶液冷卻至約5℃并添加二異丙基乙胺(798ml，4.58mmol)和二甲亞砜(649ml，9.15mmol)。然后加入三氧化吡啶硫(728mg，4.58mmol)并將所得到的混合物在5℃攪拌45分鐘。然后用二氯甲烷(20ml)稀釋反應(yīng)混合物并用飽和的碳酸氫鈉(25ml)、飽和的氯化鈉(25ml)洗滌，用硫酸鎂干燥并濃縮，提供標(biāo)題化合物(604mg)。MS m/z M+H＝473.4。
制備38甲基4-碘苯基乙酸酯向攪拌的4-碘苯乙酸(5.0g，19.1mmol)在MeOH(200ml)中的溶液中添加在二氧雜環(huán)己烷(10ml)中的4N鹽酸。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌24小時(shí)然后減壓除去溶劑得到標(biāo)題化合物(5.17g，98％收率)，在沒(méi)有進(jìn)一步純化的情況下使用它。
制備39甲基[4-(4-羥基丁-1-炔基)苯基]乙酸酯向攪拌的制備38的產(chǎn)物(4.5g，16.3mmol)在二乙胺(100ml)中的溶液中添加丁-3-炔-1-醇(1.9ml，32.6mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(500mg，1.63mmol)和CuI(154mg，0.815mmol)并將得到的混合物在室溫下攪拌17小時(shí)。然后減壓除去溶劑、將殘余物溶解在二乙醚(200ml)中并將該溶液過(guò)濾以除去鹽。然后減壓除去溶劑并通過(guò)硅膠色譜法(60％EtOAc/Hexane)純化粗產(chǎn)物，得到標(biāo)題中間體(3.03g，91％收率)。
制備40甲基[4-(4-羥基丁基)苯基]乙酸酯攪拌的制備39的產(chǎn)物(2.8g，12.8mmol)在甲醇(50ml)中的溶液用氮?dú)鉀_洗，然后添加10％碳上鈀(400mg，20％Wt/wt)。然后可替代地將反應(yīng)燒瓶置于真空下并用氫氣沖洗幾個(gè)循環(huán)，然后在氫氣下攪拌14小時(shí)。反應(yīng)混合物用氮?dú)鉀_洗，然后過(guò)濾并減壓除去溶劑，得到標(biāo)題化合物(2.75g，97％收率)，在沒(méi)有進(jìn)一步純化的情況下使用它。
制備41甲基(4-{4-[4-(聯(lián)苯基-2-基氨基甲酰氧基)哌啶-1-基]丁基}苯基)乙酸酯(a)甲基{4-[4-(甲苯-4-磺酰氧基)丁基]苯基}乙酸酯向攪拌的制備40的產(chǎn)物(2.6g，12.5mmol)在THF(100ml)中的溶液中添加DABCO(2.6g，25.0mmol)，然后添加對(duì)-甲苯磺酰氯(2.44g，13.75mmol)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌23小時(shí)，然后減壓除去溶劑并將殘余物溶解在二氯甲烷(200ml)中。然后用水(2×100ml)，1N鹽酸(100ml)、飽和的氯化鈉水溶液(100ml)洗滌有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過(guò)濾并減壓除去溶劑，得到標(biāo)題化合物，在沒(méi)有進(jìn)一步純化的情況下使用它。
(b)甲基(4-{4-[4-(聯(lián)苯基-2-基氨基甲酰氧基)哌啶-1-基]丁基}苯基)乙酸酯向步驟(a)的粗產(chǎn)物中添加DMF(50ml)、二異丙基乙胺(3.0ml，17.3mmol)和制備8的產(chǎn)物(2.4g，8.1mmol)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌18小時(shí)，然后減壓除去溶劑得到標(biāo)題化合物(3.5g，86.3％收率)。MS m/z 501.6(MH+)，Rf4.89分鐘(10-70％ACN∶H2O，反相HPLC)。
制備42聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-{4-[4-(2-羥基乙基)苯基]丁基}哌啶-4-基酯向攪拌的制備41的產(chǎn)物(2.0g，4.0mmol)在THF(100ml)中的溶液中滴加DIBAL(24ml，24mmol，1.0分鐘THF)。添加完成后，反應(yīng)混合物攪拌3小時(shí)，然后通過(guò)緩慢添加甲醇(直到氣體逸出停止)猝滅?；旌衔锶缓髷嚢?0分鐘，然后添加乙酸乙酯(200ml)和1N氫氧化鈉水溶液(200ml)。分離有機(jī)層并用飽和的氯化鈉水溶液(100ml)洗滌，干燥(MgSO4)，過(guò)濾并減壓除去溶劑，得到標(biāo)題化合物(1.3g，69％收率)，在沒(méi)有進(jìn)一步純化的情況下使用它。MS m/z 473.4(MH+)，Rf4.53分鐘(10-70％ACN∶H2O，反相HPLC)。
制備43乙基3-[5-(2-乙氧羰基乙烯基)噻吩-2-基]丙烯酸酯向攪拌的氫化鈉(2.1g，53mmol，60％在礦物油中)在THF(200ml)中的溶液中緩慢添加三乙基膦酰乙酸酯(10ml，50mmol)。觀察到氫氣逸出，然后攪拌反應(yīng)直到氣體選出停止(約30分鐘)。向該反應(yīng)混合物中添加2，5-噻吩二甲醛(3g，21mmol)并將反應(yīng)混合物攪拌1小時(shí)。減壓除去溶劑并將殘余物溶解在二氯甲烷(200ml)中。用水(100ml)、1N鹽酸水溶液(100ml)、飽和的氯化鈉水溶液(100ml)洗滌有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過(guò)濾并減壓除去溶劑，得到標(biāo)題化合物(5.8g，98％收率)，在沒(méi)有進(jìn)一步純化的情況下使用它。
制備44乙基3-[5-(2-乙氧羰基乙基)噻吩-2-基]丙酸酯攪拌的制備43的產(chǎn)物(5.8g，21mmol)在甲醇(200ml)中的溶液用氮?dú)鉀_洗并添加10％碳上鈀(576mg，10％Wt/wt)。將反應(yīng)燒瓶可替代地置于真空下并用氫氣沖洗3個(gè)循環(huán)，然后反應(yīng)混合物在氫氣下攪拌1小時(shí)?；旌衔锶缓笥玫?dú)鉀_洗，過(guò)濾并減壓除去溶劑，得到標(biāo)題化合物(5.8g，99％收率)，在沒(méi)有進(jìn)一步純化的情況下使用它。
制備453-[5-(3-羥基丙基)噻吩-2-基]丙烷-1-醇在-78℃下向攪拌的DIBAL(88ml，88mmol，1.0M在環(huán)己烷中)在THF(300ml)中的溶液中滴加制備44的產(chǎn)物(5.0g，17.6mmol)。添加完成后，在30分鐘內(nèi)將反應(yīng)混合物溫至室溫，然后通過(guò)緩慢添加1N鹽酸水溶液(200ml)猝滅。添加二氯甲烷(400ml)并分離層。水層用二氯甲烷(4×100ml)洗滌并將合并的有機(jī)層用飽和的氯化鈉水溶液(100ml)洗滌，干燥(MgSO4)，過(guò)濾并減壓除去溶劑，得到標(biāo)題化合物(3.0g，85％收率)，在沒(méi)有進(jìn)一步純化的情況下使用它。
制備46聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-{3-[5-(3-羥基丙基)噻吩-2-基]丙基}哌啶-4-基酯
(a)甲苯-4-磺酸3-[5-(3-羥基丙基)噻吩-2-基]丙基酯向攪拌的制備45的產(chǎn)物(423mg，2.1mmol)在THF(20ml)中的溶液中添加DABCO(420mg，4.2mmol)，然后添加對(duì)-甲苯磺酰氯(442mg，2.3mmol)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2小時(shí)，然后減壓除去溶劑并將殘余物溶解在二氯甲烷(200ml)中。用水(2×100ml)、飽和的氯化鈉水溶液(100ml)洗滌有機(jī)層，干燥(MgSO4)，過(guò)濾并減壓除去溶劑，得到標(biāo)題化合物，在沒(méi)有進(jìn)一步純化的情況下使用它。
(b)聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-{3-[5-(3-羥基丙基)噻吩-2-基]丙基}哌啶-4-基酯向步驟(a)的產(chǎn)物中添加乙腈(20ml)、二異丙基乙胺(0.5ml，2.8mmol)和實(shí)施例1，步驟1的產(chǎn)物(626mg，2.11mmol)。加熱反應(yīng)混合物至50℃20小時(shí)，然后冷卻至室溫并減壓除去溶劑。殘余物通過(guò)硅膠色譜法(5％MeOH/DCM具有0.6％NH3(aq))純化，得到標(biāo)題化合物(450mg，44％收率)。MS m/z(MH+)479.6；Rf4.15分鐘(10-70％ACN∶H2O，反相HPLC)。
制備47甲基4-氨基-5-氯-2-甲氧基苯甲酸酯在0℃下向4-氨基-5-氯-2-甲氧基苯甲酸(1.008g，5.0mmol)在甲苯(9ml)和甲醇(1ml)的混合物中的溶液中滴加(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷(2.0M在己烷中，3.0ml，6.0mmol)。然后將反應(yīng)混合物溫至室溫并攪拌16小時(shí)。通過(guò)添加乙酸猝滅過(guò)量(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷直到反應(yīng)混合物的亮黃色消失。然后真空濃縮混合物，得到灰白色固體形式的標(biāo)題化合物，在沒(méi)有進(jìn)一步純化的情況下使用它。
制備48甲基4-丙烯酰氨基-5-氯-2-甲氧基苯甲酸酯向制備47的粗產(chǎn)物中添加二氯甲烷(10ml，0.5M)和三乙胺(2.1ml，15mmol)。將該混合物冷卻至0℃并在攪拌下滴加烯丙酰氯(812μL，10mmol)。2小時(shí)后，在0℃下通過(guò)添加甲醇(約2ml)猝滅溶液并將所得到的混合物在室溫下攪拌15分鐘，然后真空濃縮。添加二氯甲烷(30ml)和水(30ml)到殘余物中并將該混合物充分混合。分離層并且用二氯甲烷(20ml)提取水層。合并有機(jī)層，干燥(Na2SO4)，過(guò)濾和真空除去溶劑，得到棕色泡沫狀固體形式的標(biāo)題化合物，在沒(méi)有進(jìn)一步純化的情況下使用它。
制備49甲基4-{3-[4-(聯(lián)苯基-2-基氨基甲酰氧基)哌啶-1-基]丙酰氨基}-5-氯-2-甲氧基苯甲酸酯向制備48的粗產(chǎn)物中添加實(shí)施例1，步驟1的產(chǎn)物(1.33g，4.5mmol)和THF(22.5ml)和甲醇(2.5ml)的混合物。在50℃攪拌下，將該混合物加熱16小時(shí)，然后真空除去溶劑。將殘余物進(jìn)行色譜法(硅膠；EtOAc)得到灰白色泡沫狀固體形式的標(biāo)題化合物(0.82g；Rf＝0.4，29％收率，3個(gè)步驟)。MS m/z 566.4(M+H，C30H32ClN3O6的預(yù)期值565.20)。
制備50聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(2-氯-4-羥基甲基-5-甲氧基-苯基氨基甲?；?乙基]哌啶-4-基酯在0℃向制備49的產(chǎn)物(0.82mg，1.45mmol)在THF(4.5ml)和甲醇(0.5ml)的混合物中的溶液中添加硼氫化鋰(32mg，1.45mmol)。讓反應(yīng)混合物溫至室溫并攪拌41小時(shí)。然后在0℃通過(guò)添加1N含水鹽酸猝滅反應(yīng)直到不再觀察到鼓泡并攪拌該混合物10分鐘。真空除去溶劑并將殘余物溶解在乙腈(約2ml)中。該溶液通過(guò)制備性RP-HPLC(梯度2至50％乙腈在水中，具有0.05％TFA)純化。收集和合并適合的級(jí)份并凍干得到三氟乙酸鹽形式的標(biāo)題化合物。將該鹽與乙酸異丙酯(10ml)和1N氫氧化鈉水溶液(10ml)反應(yīng)并收集有機(jī)層，干燥(Na2SO4)，過(guò)濾和真空除去溶劑，得到白色泡沫狀固體形式的標(biāo)題化合物(161mg，21％收率)。MS m/z 538.4(M+H，C29H32ClN3O5的預(yù)期值537.20)。
制備51聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(2-氯-4-甲?；?5-甲氧基苯基氨基甲?；?-乙基]哌啶-4-基酯向制備50的產(chǎn)物(161mg，0.3mmol)在二氯甲烷(3ml)中的溶液中添加二甲亞砜(213μL，3.0mmol)和二異丙基乙胺(261μL，1.5mmol)。將該混合物冷卻至-20℃并緩慢添加三氧化硫吡啶絡(luò)合物(238mg，1.5mmol)。30分鐘后，反應(yīng)混合物通過(guò)添加水(約3ml)猝滅。分離層并干燥(Na2SO4)有機(jī)層，過(guò)濾和真空除去溶劑，得到亮黃色固體形式的標(biāo)題化合物。MS m/z 536.3(M+H，C29H30ClN3O5的預(yù)期值535.19)。
制備52聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(4-[1，3]二氧戊環(huán)-2-基苯基氨基甲酰基)-乙基]-4-甲基哌啶-4-基酯在50℃，在氮?dú)庀聦⒙?lián)苯基-2-基氨基甲酸4-甲基哌啶-4-基酯(2.73g，8.79mmol)和N-(4-[1，3]二氧戊環(huán)-2-基-苯基)丙烯酰胺(2.05g，8.80mmol)的混合物在100ml 1∶1甲醇/二氯甲烷中加熱1小時(shí)。該溶液然后用乙酸乙酯稀釋并用水、鹽水洗滌有機(jī)層，干燥(MgSO4)和減壓濃縮，得到標(biāo)題化合物。MS m/z C31H35N3O5(M+H)+計(jì)算值530.6；實(shí)測(cè)值530.4。
制備53聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(4-甲?；交被柞；?乙基]-4-甲基哌啶-4-基酯將制備52的產(chǎn)物再溶解在40ml甲醇中并添加25ml 1N鹽酸水溶液。將所得到的混合物在室溫下攪拌過(guò)夜并減壓除去有機(jī)溶劑。將殘余物溶解在乙酸乙酯中并用水、鹽水洗滌有機(jī)層，干燥(MgSO4)并減壓除去溶劑。產(chǎn)物用二氯甲烷研制，得到包色粉末形式的標(biāo)題化合物(2.47g)。LCMS(2-90)Rt＝4.27分鐘；MS m/z C29H31N3O4(M+H)+計(jì)算值486.6，實(shí)測(cè)值486.5。
制備54聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸(R)-(1-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-4-基)酯在110℃將2-聯(lián)苯基異氰酸酯(1.00g，5.12mmol)和(R)-(-)-3-奎寧環(huán)醇鹽酸鹽(921mg，5.63mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(2.06ml)中一起加熱12小時(shí)。冷卻反應(yīng)混合物并用稀釋乙酸乙酯(15ml)，然后用飽和的碳酸氫鈉水溶液(2X10ml)洗滌。有機(jī)層用1M鹽酸(3×20ml)提取并用碳酸鉀將合并的水性提取物調(diào)成堿性pH 8-9。水層用乙酸乙酯(3×20ml)提取、干燥(硫酸鎂)合并的有機(jī)層并減壓除去溶劑，得到黃色油狀的標(biāo)題化合物(1.64g，99％收率)。
制備55(R)-4-(聯(lián)苯基-2-基氨基甲酰氧基)-1-(9-溴壬基)-1-氮鎓雙環(huán)[3.2.1]辛烷溴化物向攪拌的制備54的產(chǎn)物(1.21g，3.76mmol)和三乙胺(1.05ml，7.52mmol)在乙腈中(18.8ml)中的溶液中添加1，9-二溴壬烷(994μL，4.89mmol)并在50℃加熱反應(yīng)混合物4小時(shí)。然后冷卻反應(yīng)混合物并減壓除去溶劑。將殘余物溶解在二氯甲烷(20ml)中并用飽和的碳酸氫鈉水溶液(10ml)洗滌有機(jī)層，干燥(硫酸鎂)并在堿壓下除去溶劑。通過(guò)急驟色譜法(10％甲醇/二氯甲烷，0.5％氫氧化銨)純化粗產(chǎn)物，得到標(biāo)題化合物(1.04g，1.97mmol，52％收率)。
制備56(R)-1-(9-N，N-二(叔丁氧羰基)氨基壬基)-4-(聯(lián)苯基-2-基氨基甲酰氧基)-1-氮鎓雙環(huán)[3.2.1]辛烷溴化物在氮?dú)夥障?，?℃向攪拌的氫化鈉(60％在礦物油中的分散體)(126mg，3.15mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(10ml)中的溶液中添加在N，N-二甲基甲酰胺(5ml)中的二-叔-丁基亞氨基二羧酸酯(513mg，2.36mmol)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌15分鐘，然后將它冷卻至0℃并添加在N，N-二甲基甲酰胺(5ml)中的制備55的產(chǎn)物(1.04g，1.97mmol)。在12小時(shí)內(nèi)讓反應(yīng)混合物溫至室溫，然后減壓除去溶劑得到標(biāo)題化合物，在沒(méi)有進(jìn)一步純化的情況下使用它。
制備57(R)-1-(9-氨基壬基)-4-(聯(lián)苯基-2-基氨基甲酰氧基)-1-氮鎓雙環(huán)[3.2.1]辛烷溴化物將制備56的產(chǎn)物(1.31g，1.97mmol)溶解在二氯甲烷(15ml)中并緩慢添加三氟乙酸(5ml)。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1小時(shí)，然后減壓除去溶劑。將殘余物溶解在二氯甲烷(20ml)中并用1M氫氧化鈉水溶液(20ml)洗滌。有機(jī)層用1M鹽酸(3×20ml)提取、用碳酸鉀將合并的水性提取物調(diào)成堿性并用二氯甲烷(3×20ml)提取。干燥(硫酸鎂)合并的有機(jī)層并減壓除去溶劑，得到標(biāo)題化合物(210mg，23％收率，兩個(gè)步驟)。
制備A細(xì)胞培養(yǎng)和由表達(dá)人β1、β2或β3腎上腺素能受體的細(xì)胞制備膜在存在500μg/mL遺傳霉素下，使分別地穩(wěn)定表達(dá)克隆的人β1、β2或β3腎上腺素能受體的中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO)細(xì)胞系在有10％FBS的Hams F-12培養(yǎng)基中生長(zhǎng)至接近匯合。用在PBS中的2mM EDTA提起細(xì)胞單層。通過(guò)在1000rpm離心來(lái)沉淀細(xì)胞，將細(xì)胞沉淀在-80℃冷凍儲(chǔ)存或立即制備膜供使用。對(duì)于β1和β2受體表達(dá)性膜的制備，將細(xì)胞沉淀再混懸在細(xì)胞溶解緩沖液(10mM HEPES/HCl，10mMEDTA，pH7.4，在4℃)中且利用緊密適合的Dounce玻璃勻漿器在冰上勻化(30沖擊)。對(duì)于更蛋白酶敏感的β3受體表達(dá)性膜，使細(xì)胞沉淀物在每50mL緩沖液補(bǔ)充有一片“有2mM EDTA的完全蛋白酶抑制劑雞尾酒片”的細(xì)胞溶解緩沖液(Roche Catalog No.1697498，Rochemolecular Biochemicals，Indianapolis，IN)中勻化。將該勻漿物在20,000Xg離心，并用細(xì)胞溶解緩沖液通過(guò)如上所述再混懸和離心來(lái)洗滌一次得到的沉淀。然后將最終的沉淀再混懸在冰冷的結(jié)合試驗(yàn)緩沖液(75mM Tris/HCl PH 7.4，12.5mM MgCl2，1mM EDTA)中。通過(guò)在Lowry等，1951，Journal of Biological Chemisty，193，265；和Bradford，Analytical Biochemistry，1976，72，248-54中描述的方法，測(cè)定膜混懸液的蛋白質(zhì)濃度。將所有膜以等分樣在-80℃冷凍儲(chǔ)存或立即使用。
制備B細(xì)胞培養(yǎng)和由表達(dá)人M1、M2、M3和M4毒蕈堿性受體的細(xì)胞制備膜使分別地穩(wěn)定表達(dá)克隆的人hM1、hM2、hM3和hM4毒蕈堿性受體亞型的CHO細(xì)胞系在補(bǔ)充有10％FBS和250μg/mL遺傳霉素的HAM′s F-12培養(yǎng)基中生長(zhǎng)至接近匯合。使細(xì)胞在5％CO2，37℃培養(yǎng)箱中生長(zhǎng)并用在dPBS中的2mM EDTA提起它。通過(guò)在650Xg離心5分鐘收集細(xì)胞，將細(xì)胞沉淀在-80℃冷凍儲(chǔ)存或立即制備膜供使用。至于膜制備，將細(xì)胞沉淀再混懸在細(xì)胞溶解緩沖液中并用PolytronPT-2100組織破裂儀(Kinematica AG；20秒X2次破裂)勻漿。在4℃在40,000Xg離心粗制膜15分鐘。然后將膜沉淀用再混懸緩沖液再混懸，并再次用Polytron組織破裂儀勻漿。通過(guò)在Lowry等，1951，Journal of Biochemistry，193，265中描述的方法來(lái)測(cè)定膜混懸液的蛋白質(zhì)濃度。將所有膜以等分量在-80℃冷凍儲(chǔ)藏或立即使用。制備的hM5受體膜的等分樣直接購(gòu)自Perkin Elmer且儲(chǔ)存在-80℃直到使用。
試驗(yàn)檢測(cè)方法A人β1、β2和β3腎上腺素能受體的放射配體結(jié)合試驗(yàn)在96孔微量滴定板中以100μL的總試驗(yàn)體積進(jìn)行結(jié)合試驗(yàn)，試驗(yàn)緩沖液(75mM tris/HCl PH 7.4，在25℃，12.5mM MgCl2，1mMEDTA，0.2％BSA)中有10-15μg包含人β1、β2或β3腎上腺素能受體的膜蛋白質(zhì)。測(cè)定放射配體Kd值的飽和結(jié)合研究是利用對(duì)于β1和β2受體的[3H]-二氫阿普洛爾(NET-720，100 Ci/mmol，PerkinElmer LifeSciences Inc.，Boston，MA)和[125I]-(-)-碘氰基吲哚洛爾(NEX-189，220Ci/mmol，PerkinElmer Life Sciences Inc.，Boston，MA)，以0.01nM至20nM范圍內(nèi)的10或11個(gè)不同濃度進(jìn)行的。對(duì)于在10pM至10μM范圍內(nèi)的10或11個(gè)不同濃度的試驗(yàn)化合物，測(cè)定試驗(yàn)化合物Ki值的置換試驗(yàn)是用1nM[3H]-二氫阿普洛爾和0.5nM[125I]-(-)-碘氰基吲哚洛爾進(jìn)行的。在10μM普奈洛爾存在下，測(cè)定非特異性結(jié)合。將試驗(yàn)物在37℃培養(yǎng)1小時(shí)，然后對(duì)于β1和β2受體通過(guò)GF/B玻璃纖維濾板或?qū)τ讦?受體通過(guò)GF/C玻璃纖維濾板(Packard BioScience Co.，Meriden，CT)快速過(guò)濾來(lái)終止結(jié)合反應(yīng)，所述玻璃纖維濾板預(yù)先浸在0.3％聚乙烯亞胺中。用過(guò)濾緩沖液(75MM tris/HClPH 7.4在4℃，12.5mM MgCl2，1mM EDTA)洗滌濾板三次來(lái)除去未結(jié)合放射性。然后干燥該板，加入50μl Microscint-20液體閃爍液(Packard BioScienceCo.，Meriden，CT)并在Packard Topcount液體閃爍計(jì)數(shù)儀(PackardBioScience Co.，Meriden，CT)中計(jì)數(shù)該板。利用一位點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)的3-參數(shù)模型，用GraphPadPrism軟件包(GraphPad Software，Inc.，SanDiego，CA)通過(guò)非線性回歸分析來(lái)分析結(jié)合數(shù)據(jù)。當(dāng)在10μM普奈洛爾存在下測(cè)定時(shí)，將曲線最小值固定在非特異性結(jié)合的值。利用Cheng-Prusoff方程式從觀察到的IC50值和放射配體的Kd值計(jì)算試驗(yàn)化合物的Ki值(Cheng Y和Prusoff WH.，BiochemicalPharmacology，1973，22，23，3099-108)。
在這一試驗(yàn)中，更低的Ki值表明試驗(yàn)化合物對(duì)受試的受體具有更高的結(jié)合親和性。發(fā)現(xiàn)通常在這一試驗(yàn)中受試的本發(fā)明的示例化合物對(duì)β2腎上腺素能受體具有小于約300nM的Ki值。例如，發(fā)現(xiàn)實(shí)施例1至3的化合物具有小于30nM的Ki值。
試驗(yàn)檢測(cè)方法B對(duì)毒蕈堿性受體的放射配體結(jié)合試驗(yàn)在96孔微量滴定板中以100μl的總試驗(yàn)體積進(jìn)行克隆的人毒蕈堿性受體的放射配體結(jié)合試驗(yàn)。將穩(wěn)定表達(dá)hM1、hM2、hM3、hM4或hM5毒蕈堿亞型的CHO細(xì)胞膜稀釋在試驗(yàn)緩沖液中至下述特定的靶蛋白濃度(μg/孔)對(duì)于hM110μg，對(duì)于hM210-15μg，對(duì)于hM310-20μg，對(duì)于hM410-20μg以及對(duì)于hM510-12μg，得到相似的信號(hào)(cpm)。在試驗(yàn)板加入之前，利用Polytron組織破裂儀短暫地勻化該膜(10秒)。測(cè)定放射配體KD值的飽和結(jié)合研究是利用在0.001nM-20nM濃度的L-[N-甲基-3H]氯甲東莨菪堿([3H]-NMS)(TRK666，84.0 Ci/mmol，Amersham Pharmacia Biotech，Buckinghamshire，England)進(jìn)行的。測(cè)定試驗(yàn)化合物Ki值的置換試驗(yàn)是用1nM [3H]-NMS和11個(gè)不同試驗(yàn)化合物濃度進(jìn)行的。首先將試驗(yàn)化合物溶解在稀釋緩沖液中至濃度為400μM，然后用稀釋緩沖液連續(xù)地稀釋5×至最終濃度為10pM至100μM。添加至試驗(yàn)板的順序和體積如下25μL放射配體，25μL稀釋的試驗(yàn)化合物和50μL膜。在37℃培養(yǎng)試驗(yàn)板60分鐘。通過(guò)經(jīng)在1％BSA中預(yù)處理的GF/B玻璃纖維濾板(PerkinElmer Inc.，Wellesley，MA)快速過(guò)濾來(lái)終止結(jié)合反應(yīng)。用洗滌緩沖液(10mM小時(shí)EPES)沖洗濾板三次來(lái)除去未結(jié)合放射性。然后空氣干燥該板，并向每個(gè)孔加入50μL Microscint-20液體閃爍液(Perk in Elmer Inc.，Wellesley，MA)。然后在PerkinElmerTopcount液體閃爍計(jì)數(shù)儀(PerkinElmer Inc.，Wellesley，MA)中計(jì)數(shù)該板。利用一位點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)模型，用GraphPad Prism軟件包(GraphPadSoftware，Inc.，San Diego，CA)通過(guò)非線性回歸分析來(lái)分析結(jié)合數(shù)據(jù)。利用Cheng-Prusoff方程式從觀察到的IC50值和放射配體的KD值計(jì)算試驗(yàn)化合物的Ki值(Cheng Y；Prusoff WH.(1973)BiochemicalPharmacology，22(23)3099-108)。將Ki值轉(zhuǎn)化成pKi值來(lái)確定幾何平均數(shù)和95％置信區(qū)間。然后將這些概括的統(tǒng)計(jì)數(shù)字再轉(zhuǎn)化回Ki值，用于數(shù)據(jù)報(bào)告。
在這一試驗(yàn)中，更低的Ki值表明試驗(yàn)化合物對(duì)受試的受體具有更高的結(jié)合親和性。發(fā)現(xiàn)通常在這一試驗(yàn)中受試的本發(fā)明的舉例化合物對(duì)于M3毒蕈堿性受體具有小于約300nM的Ki值。例如，發(fā)現(xiàn)實(shí)施例1至4的化合物具有小于10nM的Ki值。
試驗(yàn)檢測(cè)方法C在異源性表達(dá)人β1、β2或β3腎上腺素能受體的CHO細(xì)胞系中的全細(xì)胞cAMP快速板(flashplate)試驗(yàn)按照生產(chǎn)商的用法說(shuō)明，利用有[125I]-cAMP的快速板腺苷酸環(huán)化酶激活試驗(yàn)系統(tǒng)，以放射免疫測(cè)定格式進(jìn)行cAMP試驗(yàn)(NENSMP004，PerkinElmer Life SciencesInc.，Boston，MA)。對(duì)于β受體激動(dòng)劑效能(EC50)的測(cè)定，使穩(wěn)定表達(dá)克隆的人β1、β2或β3腎上腺素能受體的CHO-K1細(xì)胞系在補(bǔ)充有10％FBS和遺傳霉素(250μg/ml)的HAM’s F-12培養(yǎng)基中生長(zhǎng)至接近匯合。用PBS沖洗細(xì)胞，并在包含2mM EDTA或胰蛋白酶-EDTA溶液(0.05％胰蛋白酶/0.53mM EDTA)的dPBS(Dulbecco′s磷酸鹽緩沖鹽水，無(wú)CaCl2和MgCl2)中分離細(xì)胞。在Coulter細(xì)胞計(jì)數(shù)器中計(jì)數(shù)細(xì)胞后，通過(guò)在1000rpm離心來(lái)沉淀細(xì)胞和再混懸在預(yù)先暖至室溫的包含IBMX的刺激緩沖液(PerkinElmer試劑盒)中至濃度為每毫升1.6×106至2.8×106細(xì)胞。在這一試驗(yàn)中使用每孔大約60000-80000個(gè)細(xì)胞。將受試化合物(10mM在DMSO中)在Beckman Biomek-2000中稀釋在包含0.1％BSA的PBS中，并在100μM-1pM的11個(gè)不同濃度下試驗(yàn)。將反應(yīng)物在37℃培養(yǎng)10分鐘，并通過(guò)加入包含[125I]-cAMP的100μL冰冷檢測(cè)緩沖液(NEN SMP004，PerkinElmer Life Sciences，Boston，MA)來(lái)停止反應(yīng)?；谟^察到的樣本的計(jì)數(shù)和在生產(chǎn)商用戶手冊(cè)中描述的cAMP標(biāo)準(zhǔn)來(lái)計(jì)算產(chǎn)生的cAMP的量(pmol/孔)。使用GraphPadPrism軟件包(GraphPad Software，Inc.，San Diego，CA)，用sigmoidal方程式通過(guò)非線性回歸分析來(lái)分析數(shù)據(jù)。使用Cheng-Prusoff方程式(Cheng Y和Prusoff WH.，Biochemical Pharmacology，1973，22，23，3099-108)來(lái)計(jì)算EC50值。
在這一試驗(yàn)中，更低的EC50值表明受試化合物對(duì)受試的受體具有更高的功能活性。發(fā)現(xiàn)通常在這一試驗(yàn)中受試的本發(fā)明的舉例化合物對(duì)于β2腎上腺素能受體具有小于約300nM的EC50值。例如，實(shí)施例1至4的化合物被發(fā)現(xiàn)具有小于30nM的EC50值。
如果需要，受試化合物的受體亞型選擇性可以被計(jì)算為EC50(β1)/EC50(β2)的比值或EC50(β3)/EC50(β2)的比值。通常，本發(fā)明化合物證明與β1或β3腎上腺素能受體相比，在β2腎上腺素能受體上有更大的功能活性，即EC50(β1)或EC50(β3)通常大于EC50(β2)。通常，相對(duì)于β1或β3腎上腺素能受體，對(duì)β2腎上腺素能受體具有選擇性的化合物是優(yōu)選的；特別是具有大于約5；并且尤其是大于約10的選擇性的化合物。舉例來(lái)說(shuō)，實(shí)施例1至4的化合物具有大于10的EC50(β1)/EC50(β2)的比值。
試驗(yàn)檢測(cè)方法D對(duì)毒蕈堿性受體亞型的拮抗作用的功能試驗(yàn)A.cAMP累積的激動(dòng)劑介導(dǎo)的抑制的阻滯在這一試驗(yàn)中，通過(guò)測(cè)量試驗(yàn)化合物阻滯在表達(dá)hM2受體的CHO-K1細(xì)胞中毛喉素-介導(dǎo)的cAMP累積的氧化震顫素抑制的能力，來(lái)測(cè)定受試化合物的功能效力。按照生產(chǎn)商的用法說(shuō)明，利用有125I-cAMP的快速板腺苷酸環(huán)化酶激活試驗(yàn)系統(tǒng)，以放射免疫測(cè)定格式，進(jìn)行cAMP試驗(yàn)(NEN SMP004B，PerkinElmer Life Sciences Inc.，Boston，MA)。用dPBS沖洗細(xì)胞一次，并用如在上面細(xì)胞培養(yǎng)和膜制備部分中描述的胰蛋白酶-EDTA溶液(0.05％胰蛋白酶/0.53mMEDTA)浮起細(xì)胞。通過(guò)在50mL dPBS中在650X g離心五分鐘來(lái)洗滌分離的細(xì)胞兩次。然后將細(xì)胞沉淀再混懸在10mL dPBS中，并用Coulter Z1二元粒子計(jì)數(shù)器(Beckman Coulter，F(xiàn)ullerton，CA)來(lái)計(jì)數(shù)細(xì)胞。在650Xg再次離心該細(xì)胞五分鐘，并再混懸在刺激緩沖液中至分析濃度為每毫升1.6×106-2.8×106個(gè)細(xì)胞。
最初將受試化合物溶解在稀釋緩沖液(補(bǔ)充有1mg/mL BSA(0.1％)的dPBS)中至濃度為400μM，然后連續(xù)地用稀釋緩沖液稀釋至最終摩爾濃度為100μM至0.1nM。以相似的方式稀釋氧化震顫素。
為測(cè)定腺苷酸環(huán)化酶(AC)活性的氧化震顫素抑制，將25μL毛喉素(稀釋在dPBS中25μM最終濃度)、25μL稀釋的氧化震顫素和50μL細(xì)胞加入激動(dòng)劑試驗(yàn)孔。為測(cè)定受試化合物阻滯氧化震顫素抑制的AC活性的能力，將25μL毛喉素和氧化震顫素(分別為稀釋在dPBS中的25μM和5μM最終濃度)、25μL稀釋的受試化合物和50μL細(xì)胞加入剩余的試驗(yàn)孔。
將反應(yīng)物在37℃培養(yǎng)10分鐘并通過(guò)加入100μL冰冷的檢測(cè)緩沖液來(lái)停止反應(yīng)。密封板，在室溫培養(yǎng)過(guò)夜并在次日早晨在PerkinElmerTopCount液體閃爍計(jì)數(shù)儀(PerkinElmer Inc.，Wellesley，MA)上計(jì)數(shù)?；谟^察到的樣本的計(jì)數(shù)和在生產(chǎn)商用戶手冊(cè)中描述的cAMP標(biāo)準(zhǔn)，來(lái)計(jì)算產(chǎn)生的cAMP的量(pmol/孔)。使用GraphPad Prism軟件包(GraphPad Software，Inc.，San Diego，CA)，利用非線性回歸、一位點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)方程式，通過(guò)非線性回歸分析來(lái)分析數(shù)據(jù)。使用Cheng-Prusoff方程式來(lái)計(jì)算Ki，分別利用氧化震顫素濃度-響應(yīng)曲線的EC50和氧化震顫素試驗(yàn)濃度作為KD和[L]。
在這一試驗(yàn)中，更低的Ki值表明受試化合物在受試的受體具有較高的結(jié)合親和性。對(duì)于阻滯在表達(dá)hM2受體的CHO-K1細(xì)胞中毛喉素-介導(dǎo)的cAMP累積的氧化震顫素抑制，預(yù)期本發(fā)明的舉例化合物具有小于約300nM的Ki值。
B.激動(dòng)劑介導(dǎo)的[35S]GTPγS結(jié)合的阻滯在第二個(gè)功能試驗(yàn)中，通過(guò)測(cè)定化合物在表達(dá)hM2受體的CHO-K1細(xì)胞中阻滯氧化震顫素刺激的[35S]GTPγS的結(jié)合的能力，來(lái)測(cè)定受試化合物的功能效力。
在使用時(shí)，解凍冷凍的膜，然后稀釋在每孔有5-10μg蛋白質(zhì)的最終靶組織濃度的試驗(yàn)緩沖液中。利用Polytron PT-2100組織破裂儀短暫地勻化膜，然后加入試驗(yàn)板。
在每個(gè)試驗(yàn)中，測(cè)定激動(dòng)劑氧化震顫素刺激[35S]GTPγS結(jié)合的EC90值(對(duì)于90％最大響應(yīng)的有效濃度)。
為測(cè)定試驗(yàn)化合物抑制氧化震顫素-刺激的[35S]GTPγS結(jié)合的能力，將下述物質(zhì)加入96孔板的每個(gè)孔中25μL有[35S]GTPγS(0.4nM)的試驗(yàn)緩沖液，25μL氧化震顫素(EC90)和GDP(3uM)，25μL稀釋的受試化合物和25μL表達(dá)hM2受體的CHO細(xì)胞膜。然后在37℃培養(yǎng)試驗(yàn)板60分鐘。利用PerkinElmer 96-孔收獲儀經(jīng)1％BSA預(yù)處理的GF/B濾器過(guò)濾試驗(yàn)板。用冰冷的沖洗緩沖液沖洗板3×3秒，然后空氣或真空干燥。將Microscint-20閃爍液(50μL)加入每個(gè)孔中，密封每個(gè)板，并在Topcounter(PerkinElmer)上計(jì)數(shù)放射性。用GraphPad Prism軟件包(GraphPad Software，Inc.，San Diego，CA)，利用非線性回歸、一位點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)方程式，通過(guò)非線性回歸分析來(lái)分析數(shù)據(jù)。使用Cheng-Prusoff方程式來(lái)計(jì)算Ki，分別利用試驗(yàn)化合物的濃度-響應(yīng)曲線的IC50值和試驗(yàn)中的氧化震顫素濃度作為KD和[L]，配體濃度。
在這一試驗(yàn)中，更低的Ki值表明受試化合物在受試的受體上具有更高的功能活性。發(fā)現(xiàn)通常在這一試驗(yàn)中受試的本發(fā)明的舉例化合物對(duì)于在表達(dá)hM2受體的CHO-K1細(xì)胞中氧化震顫素-刺激的[35S]GTPγS結(jié)合的阻滯，具有小于約300nM的Ki值。例如，發(fā)現(xiàn)實(shí)施例1的化合物具有小于10nM的Ki值。
C.經(jīng)由FLIPR試驗(yàn)的激動(dòng)劑-介導(dǎo)的鈣釋放的阻滯與Gq蛋白偶聯(lián)的毒蕈堿性受體亞型(M1、M3和M5受體)，在激動(dòng)劑結(jié)合受體時(shí)激活磷脂酶C(PLC)通路。結(jié)果，活化的PLC水解磷脂酰肌醇二磷酸(PIP2)成二?；视?DAG)和磷脂酰-1，4，5-三磷酸(IP3)，其又從細(xì)胞內(nèi)存儲(chǔ)處即內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和肌質(zhì)網(wǎng)產(chǎn)生鈣釋放。FLIPR(molecular Devices，Sunnyvale，CA)試驗(yàn)通過(guò)使用當(dāng)游離鈣結(jié)合時(shí)發(fā)熒光的鈣敏感性染料(Fluo-4AM，molecular Probes，Eugene，OR)，來(lái)利用細(xì)胞內(nèi)鈣的這一增加。用FLIPR實(shí)時(shí)測(cè)定該熒光事件，其檢測(cè)到用人M1和M3以及黑猩猩M5受體克隆的單層細(xì)胞的熒光變化。通過(guò)拮抗劑抑制激動(dòng)劑介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)鈣增加的能力能測(cè)定拮抗劑效能。
對(duì)于FLIPR鈣刺激試驗(yàn)，在進(jìn)行試驗(yàn)前一晚上，將穩(wěn)定表達(dá)hM1、hM3和cM5受體的CHO細(xì)胞接種入96-孔FLIPR板。通過(guò)Cellwash(MTX Labsystems，Inc.)用FLIPR緩沖液(10mM HEPES，PH7.4，2MM氯化鈣，在無(wú)鈣和鎂的Hank′s緩沖鹽溶液(HBSS)中的2.5MM丙璜舒)洗滌接種的細(xì)胞兩次，來(lái)除去生長(zhǎng)培養(yǎng)基和殘留的50μL/孔的FLIPR緩沖液。然后用50μL/孔的4μM FLUO-4AM(制成2X溶液)在37℃，5％二氧化碳下培養(yǎng)細(xì)胞40分鐘。在染料培養(yǎng)期后，用FLIPR緩沖液洗滌細(xì)胞兩次，留下50μL/孔的總體積。
為測(cè)定拮抗劑效力，首先測(cè)定氧化震顫素的細(xì)胞內(nèi)Ca2+釋放的劑量依賴性刺激，以使隨后可以測(cè)量在EC90濃度抗氧化震顫素刺激的拮抗劑效力。首先用化合物稀釋緩沖液培養(yǎng)細(xì)胞20分鐘，隨后加入激動(dòng)劑，這是通過(guò)FLIPR進(jìn)行的。按照在FLIPR測(cè)量中的詳細(xì)方法和下面的數(shù)據(jù)歸納部分，結(jié)合公式ECF＝((F/100-F)^1/H)*EC50，產(chǎn)生氧化震顫素的EC90值。在刺激板中制備3X ECF的氧化震顫素濃度，將EC90濃度的氧化震顫素加入拮抗劑抑制試驗(yàn)板的每個(gè)孔中。
用于FLIPR的參數(shù)是曝光時(shí)長(zhǎng)為0.4秒，激光強(qiáng)度為0.5瓦特，激發(fā)波長(zhǎng)為488nm和發(fā)射波長(zhǎng)為550nm。通過(guò)在添加激動(dòng)劑前測(cè)量熒光變化10秒鐘，來(lái)確定基線。在激動(dòng)劑刺激后，F(xiàn)LIPR每0.5-1秒連續(xù)地測(cè)量熒光變化1.5分鐘，來(lái)捕捉最大熒光變化。
熒光變化被表示為每孔最大熒光減去基線熒光。利用sigmoidal劑量-響應(yīng)的嵌入模型，用GraphPad Prism(GraphPad Software，Inc.，San Diego，CA)通過(guò)非線性回歸，對(duì)藥物濃度的對(duì)數(shù)分析原始數(shù)據(jù)。按照Cheng-Prusoff方程式(Cheng & Prusoff，1973)，利用氧化震顫素EC50值作為KD和配體濃度的氧化震顫素EC90，通過(guò)Prism確定拮抗劑Ki值。
在這一試驗(yàn)中，更低的Ki值表明受試化合物在受試的受體上具有更高的功能活性。預(yù)期本發(fā)明的舉例化合物對(duì)于阻滯在穩(wěn)定地表達(dá)hM1、hM3和cM5受體的CHO細(xì)胞中激動(dòng)劑介導(dǎo)的鈣釋放，具有小于約300nM的Ki值。
試驗(yàn)檢測(cè)方法E用內(nèi)源性表達(dá)人β2腎上腺素能受體的肺上皮細(xì)胞系的全細(xì)胞cAMP快速板試驗(yàn)為了測(cè)定在表達(dá)β2腎上腺素能受體內(nèi)源性水平的細(xì)胞系中激動(dòng)劑效力和功效(內(nèi)在活性)，采用人肺上皮細(xì)胞系(BEAS-2B)(ATCCCRL-9609，美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，Manassas，VA)(January B，等British Journal of Pharmacology，1998，123，4，701-11)。使細(xì)胞在完全、無(wú)血清的培養(yǎng)基(包含腎上腺素和維A酸的LHC-9培養(yǎng)基，cat#181-500，Biosource International，Camarillo，CA)中生長(zhǎng)至75％-90％匯合。在試驗(yàn)前一天，將培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換成LHC-8(無(wú)腎上腺素或維A酸cat#141-500，Biosource International，Camarillo，CA)。按照生產(chǎn)商的說(shuō)明利用有[125I]-cAMP的快速板腺苷酸環(huán)化酶激活試驗(yàn)系統(tǒng)以放射免疫測(cè)定格式進(jìn)行cAMP試驗(yàn)(NEN SMP004，PerkinElmer LifeSciencesInc.，Boston，MA)。在試驗(yàn)當(dāng)天，用PBS沖洗細(xì)胞，通過(guò)用在PBS中的5mM EDTA刮而浮起細(xì)胞并計(jì)數(shù)。通過(guò)在1000rpm離心來(lái)沉淀細(xì)胞，并再混懸在預(yù)先暖至37℃的刺激緩沖液中，最終濃度為600,000細(xì)胞/mL。在這一試驗(yàn)中在100000-120000細(xì)胞/孔的最終濃度使用細(xì)胞。在Beckman Biomek-2000中，將受試化合物連續(xù)稀釋入試驗(yàn)緩沖液(75MM Tris/HCl PH 7.4在25℃，12.5mM MgCl2，1mMEDTA，0.2％BSA)。在試驗(yàn)中在10μM-10pM的11個(gè)不同濃度下試驗(yàn)受試化合物。在37℃培養(yǎng)反應(yīng)物10分鐘，并通過(guò)添加100μL冰冷的檢測(cè)緩沖液來(lái)停止反應(yīng)。密封板，在4℃培養(yǎng)過(guò)夜并在次日早晨在Topcount閃爍計(jì)數(shù)器(Packard BioScience Co.，Meriden，CT)中計(jì)數(shù)。基于觀察到的樣本的計(jì)數(shù)和在生產(chǎn)商用戶手冊(cè)中描述的cAMP標(biāo)準(zhǔn)，來(lái)計(jì)算每毫升反應(yīng)產(chǎn)生的cAMP的量。用GraphPad Prism軟件包(GraphPad Software，Inc.，San Diego，CA)用sigmoidal劑量-響應(yīng)的4-參數(shù)模型通過(guò)非線性回歸分析來(lái)分析數(shù)據(jù)。
在這一試驗(yàn)中，更低的EC50值表明受試化合物在受試的受體上具有更高的功能活性。發(fā)現(xiàn)通常在這一試驗(yàn)中受試的本發(fā)明的舉例化合物對(duì)于β2腎上腺素能受體具有小于約300nM的EC50值。例如，發(fā)現(xiàn)實(shí)施例1至3的化合物具有小于10nM至小于200nM的EC50值。
試驗(yàn)檢測(cè)方法F乙酰膽堿誘導(dǎo)的或組胺誘導(dǎo)的支氣管收縮的豚鼠模型中支氣管保護(hù)的持續(xù)時(shí)間采用這些體內(nèi)試驗(yàn)來(lái)評(píng)價(jià)顯示毒蕈堿性受體拮抗劑和β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑兩種活性的受試化合物的支氣管保護(hù)作用。為分離乙酰膽堿誘導(dǎo)的支氣管收縮模型中的毒蕈堿拮抗劑活性，在給藥乙酰膽堿前，給予動(dòng)物心得安—一種阻斷β受體活性的化合物。在組胺誘導(dǎo)的支氣管收縮模型中支氣管保護(hù)的持續(xù)時(shí)間反映了β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑的活性。
通過(guò)籠子卡片單個(gè)鑒定重250-350g的6只雄性豚鼠的組(Duncan-Hartley(HsdPocDH)Harlan，Madison，WI)。在整個(gè)研究中，允許動(dòng)物隨意接觸食物及水。
在全身體暴露給藥室(R & S molds，San Carlos，CA)中經(jīng)10分鐘通過(guò)吸入給予試驗(yàn)化合物。安排給藥室，以便從中央總管能同時(shí)給予6個(gè)單獨(dú)的室氣霧劑。將豚鼠暴露于受試化合物或載體(WFI)的氣霧劑中。該氣霧劑產(chǎn)生自水溶液，例用LC Star霧化器裝置(Model22F51，PARI Respiratory Equipment，Inc.Midlothian，VA)在22psi的壓力下，由氣體混合物(CO2＝5％，O2＝21％和N2＝74％)推進(jìn)。在該操作壓力下，通過(guò)霧化器的氣體流量是大約3L/分鐘。通過(guò)正壓將產(chǎn)生的氣霧劑驅(qū)趕入室。在給藥?kù)F化的溶液過(guò)程中不使用稀釋空氣。在10分鐘霧化期間，大約1.8mL的溶液被霧化。通過(guò)比較填充的霧化器霧化前和霧化后的重量來(lái)重量分析地計(jì)算該值。
在給藥后1.5、24、48和72小時(shí)，利用全身體積掃描術(shù)評(píng)價(jià)經(jīng)由吸入給予的受試化合物的支氣管保護(hù)作用。
在肺評(píng)價(jià)開(kāi)始前四十五分鐘，用氯胺酮(43.75mg/kg)，甲苯噻嗪(3.50mg/kg)和乙酰丙嗪(1.05mg/kg)肌內(nèi)注射來(lái)麻醉每只豚鼠。在手術(shù)位置備皮并用70％乙醇清潔后，做頸腹面的2-3cm正中切口。然后分離頸靜脈并插入充滿鹽水的聚乙烯導(dǎo)管(PE-50，Becton Dickinson，Sparks，MD)以使得輸注在鹽水中的乙酰膽堿(Ach)或組胺。然后解剖使開(kāi)氣管游離并插入14G特氟隆管(#NE-014，SmallParts，MiamiLakes，F(xiàn)L)。如果需要，通過(guò)進(jìn)一步肌內(nèi)注射前面提及的麻醉混合物來(lái)維持麻醉。如果動(dòng)物對(duì)掐它的爪響應(yīng)或如果呼吸速度大于100次呼吸/分鐘，監(jiān)測(cè)和調(diào)節(jié)麻醉深度。
一旦插管完成，就將動(dòng)物置于體積掃描器(#PLY 3114，BuxcoElectronics，Inc.，Sharon，CT)中和插入食管壓力導(dǎo)管(PE-160，Becton Dickinson，Sparks，MD)來(lái)測(cè)量肺驅(qū)動(dòng)壓(壓力)。將特氟隆氣管導(dǎo)管連接至體積掃描器的開(kāi)口以使豚鼠能從室外呼吸空氣。然后密封室。使用加熱燈維持體溫，并利用10mL校準(zhǔn)注射器(#5520 Series，Hans Rudolph，Kansas City，MO)用4mL空氣使豚鼠的肺膨脹3次，以確保下氣道不崩塌且該動(dòng)物不會(huì)通氣過(guò)度。
一旦測(cè)定順應(yīng)性基線值在0.3-0.9mL/cm H2O范圍內(nèi)，且阻力基線值在0.1-0.199cm H2O/mL/秒范圍內(nèi)，就開(kāi)始肺評(píng)價(jià)。Buxco肺測(cè)量計(jì)算機(jī)程序使得能夠收集和導(dǎo)出肺的值。
開(kāi)始這一程序來(lái)啟動(dòng)試驗(yàn)方案和數(shù)據(jù)收集。通過(guò)Buxco壓力傳感器，測(cè)量隨每次呼吸在體積掃描器內(nèi)發(fā)生的體積隨時(shí)間的變化。通過(guò)隨時(shí)間整合該信號(hào)，計(jì)算每次呼吸的流量測(cè)量值。通過(guò)Buxco(MAX2270)前置放大器連接該信號(hào)和利用Sensym壓力傳感器(#TRD4100)收集的肺驅(qū)動(dòng)壓力變化至數(shù)據(jù)收集界面(#’s SFT3400和SFT3813)。從這兩個(gè)輸入導(dǎo)出所有其它肺參數(shù)。
收集基線值5分鐘，之后用Ach或組胺攻擊豚鼠。當(dāng)評(píng)價(jià)毒蕈堿拮抗劑作用時(shí)，在用Ach攻擊前15分鐘給予心得安(5mg/Kg，iv)(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)。從試驗(yàn)開(kāi)始以下述劑量和給定的時(shí)間從注射器泵(sp210iw，World Precision Instruments，Inc.，Sarasota，F(xiàn)L)靜脈內(nèi)輸注Ach(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)(0.1mg/mL)1分鐘在第5分鐘1.9μg/分鐘，在第10分鐘3.8μg/分鐘，在第15分鐘7.5μg/分鐘，在第20分鐘15.0μg/分鐘，在第25分鐘30μg/分鐘和在第30分鐘60μg/分鐘?；蛘?，在不用β阻斷化合物預(yù)處理的乙酰膽堿攻擊模型中評(píng)價(jià)受試化合物的支氣管保護(hù)作用。
在評(píng)價(jià)受試化合物的β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑作用時(shí)，從試驗(yàn)開(kāi)始，以下述劑量和給定的時(shí)間從注射器泵靜脈內(nèi)輸注組胺(25μg/mL)(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)1分鐘在第5分鐘0.5μg/分鐘，在第10分鐘0.9μg/分鐘，在第15分鐘1.9μg/分鐘，在第20分鐘3.8μg/分鐘，在第25分鐘7.5μg/分鐘和在第30分鐘15μg/分鐘。如果在每次Ach或組胺劑量后3分鐘阻力或順應(yīng)性不返回基線值，則從10mL校正注射器用4mL空氣膨脹豚鼠的肺3次。記錄的肺參數(shù)包括呼吸頻率(呼吸/分鐘)、順應(yīng)性(mL/cm H2O)和肺阻力(cm H2O/mL/秒)。一旦在該方案的第35分鐘完成肺功能測(cè)定，就從體積掃描器移去豚鼠和通過(guò)二氧化碳窒息來(lái)處死豚鼠。
以兩種方式中的一種來(lái)評(píng)價(jià)數(shù)據(jù)(a)從“壓力變化”與“流量變化”的比值計(jì)算肺阻力(RL，cmH2O/mL/秒)。計(jì)算介質(zhì)和受試化合物組對(duì)Ach(60μg/min，IH)的RL響應(yīng)。計(jì)算在介質(zhì)處理動(dòng)物中在每個(gè)處理前時(shí)間的平均ACh響應(yīng)，并用來(lái)在相應(yīng)的處理前時(shí)間，在每個(gè)受試化合物劑量下，計(jì)算ACh響應(yīng)的抑制百分率。利用GraphPad Prism，用于Windows的3.00版(GraphPad Software，San Diego，California)使‘RL’的抑制劑量響應(yīng)曲線與四參數(shù)邏輯方程擬合，來(lái)估計(jì)支氣管保護(hù)ID50(抑制ACh(60μg/分鐘)支氣管收縮響應(yīng)50％所需的劑量)。使用的方程式如下Y＝Min+(Max-Min)/(l+10((logID50-X)*希爾斜率))
其中X是劑量的對(duì)數(shù)，Y是響應(yīng)(ACh誘導(dǎo)的RL增加的抑制百分率)。Y在Min起始并漸進(jìn)靠近Max，具有S形狀。
(b)量PD2，其被定義為引起基線肺阻力加倍需要的量，利用下述方程式(衍生自臨床中用于計(jì)算PC20值的方程式(見(jiàn)Am.ThoracicSoc，2000)，利用一系列Ach或組胺攻擊期間從流量和壓力衍生的肺阻力值來(lái)計(jì)算PD2=antilog[logC1+(logC2-logC1)(2R0-R1)R2-R1]]]>其中C1＝C2前的Ach或組胺的濃度C2＝導(dǎo)致肺阻力(RL)至少2倍增加的Ach或組胺的濃度。
R0＝基線RL值R1＝C1后的RL值R2＝C2后的RL值利用雙尾-Students t-檢驗(yàn)，進(jìn)行該數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。P值＜0.05被認(rèn)為顯著。
預(yù)期本發(fā)明的舉例化合物產(chǎn)生抗MCh誘導(dǎo)的支氣管收縮和His誘導(dǎo)的支氣管收縮的劑量-依賴性支氣管保護(hù)作用。通常，在本試驗(yàn)中，對(duì)ACh誘導(dǎo)的支氣管收縮有低于約300μg/mL和對(duì)His誘導(dǎo)的支氣管收縮有低于約300μg/mL的效力(在給藥后1.5h的ID50)的受試化合物通常是優(yōu)選的。此外，在這一試驗(yàn)中，具有至少約24小時(shí)的支氣管保護(hù)活性的持續(xù)時(shí)間(PD T1/2)的受試化合物通常是優(yōu)選的。
試驗(yàn)檢測(cè)方法G測(cè)量豚鼠通氣變化的Einthoven模型在麻醉的豚鼠模型(Einthoven模型)中，評(píng)價(jià)受試化合物的支氣管擴(kuò)張劑活性，其使用通氣壓力作為氣道阻力的代用物量度。例如見(jiàn)Einthoven(1892)Pfugers Arch.51367-445；和Mohammed等(2000)Pulm Pharmacol Ther.L3(6)287-92。在該模型中，通過(guò)測(cè)定抗乙酰甲膽堿(MCh)和組胺(His)誘導(dǎo)的支氣管收縮的保護(hù)作用，來(lái)評(píng)價(jià)毒蕈堿性拮抗劑和β2激動(dòng)劑活性。
利用重300-400g的Duncan-Hartley豚鼠(Harlan，Indianapolis，IN)進(jìn)行該試驗(yàn)。
利用5mL給藥溶液，在全身體暴露給藥室(R+S molds，San Carlos，CA)中，經(jīng)10分鐘時(shí)間通過(guò)吸入(IH)給予受試化合物或介質(zhì)(即無(wú)菌水)。動(dòng)物被暴露于氣霧劑，其產(chǎn)生自LC Star Nebulizer Set(型號(hào)22F51，PARI Respiratory Equipment，Inc.Midlothian，VA)，在22psi的壓力下由Bioblend—一種氣體混合物(5％CO2；21％O2；和74％N2)推進(jìn)。在吸入給藥后不同時(shí)間點(diǎn)評(píng)價(jià)肺功能。
在肺功能評(píng)價(jià)開(kāi)始前四十五分鐘，用氯胺酮(13.7mg/kg)/甲苯噻嗪(3.5mg/kg)/乙酰丙嗪(1.05mg/kg)的混合物肌內(nèi)(IM)注射來(lái)麻醉豚鼠。在需要時(shí)給藥補(bǔ)充劑量的該混合物(初始劑量的50％)。分離頸靜脈和頸動(dòng)脈，并插入充滿鹽水的聚乙烯導(dǎo)管(分別是micro-renathane和PE-50，Becton Dickinson，Sparks，MD)。將頸動(dòng)脈與壓力傳感器連接使得能測(cè)量血壓，頸靜脈插管被用于MCh或His的IV注射。然后解剖游離氣管并插入14G針(#NE-014，Small Parts，Miami Lakes，F(xiàn)L)。一旦插管完成，就利用設(shè)置在每100g體重1mL動(dòng)體積但是不超過(guò)2.5mL體積的呼吸機(jī)(型號(hào)683，HarvardApparatus，Inc.，MA)，以每分鐘100搏的速度給豚鼠通氣。利用與Biopac(TSD 137C)前置放大器連接的Biopac傳感器，在氣管套管中測(cè)量通氣壓力(VP)。利用加熱墊將體溫維持在37℃。在開(kāi)始數(shù)據(jù)收集前，腹膜內(nèi)(IP)給藥戊巴比妥(25mg/kg)來(lái)抑制自發(fā)的呼吸和獲得穩(wěn)定的基線。將VP變化記錄在BiopacWindows數(shù)據(jù)收集界面上。收集基線值至少5分鐘，之后用2倍增加量的支氣管收縮劑(MCh或His)非累積地IV攻擊豚鼠。當(dāng)MCh被用作支氣管收縮劑時(shí)，用心得安(5mg/kg，IV)預(yù)處理動(dòng)物以隔離受試化合物的抗毒蕈堿作用。利用Acknowledge Data Collection Software(Santa Barbara，CA)記錄VP變化。在研究完成后，處死動(dòng)物。
以cm水測(cè)量VP變化。VP變化(cm H2O)＝峰壓(支氣管收縮劑攻擊后)-峰基線壓。利用GraphPad Prism，Windows 3.00版本(GraphPad Software，San Diego，California)，將MCh或His劑量響應(yīng)曲線擬合線四參數(shù)邏輯方程。使用的方程式如下Y＝Min+(Max-Min)/(l+10(logID50-x)*希爾斜率))其中X是劑量的對(duì)數(shù)，Y是響應(yīng)。Y在Min起始并逐漸靠近Max，具有S形狀。
利用下述方程式，在受試化合物的每個(gè)劑量下，計(jì)算對(duì)MCh或His次最大劑量的支氣管收縮劑響應(yīng)的百分率抑制響應(yīng)的百分率抑制＝100-((峰壓(在支氣管收縮劑攻擊后，處理的)-峰基線壓(給藥組)*100％/(峰壓(支氣管擴(kuò)張劑攻擊后，水)-峰基線壓(水))。利用GraphPad軟件的四參數(shù)邏輯方程式擬合抑制曲線。當(dāng)需要時(shí)，也估計(jì)ID50(產(chǎn)生支氣管收縮劑響應(yīng)50％抑制所需的劑量)和Emax(最大抑制)。
利用吸入受試化合物后不同時(shí)間點(diǎn)的支氣管保護(hù)量值，來(lái)估算藥效半衰期(PD T1/2)。利用單相指數(shù)式衰減方程式(GraphPad Prism，4.00版)Y＝跨距*指數(shù)(-K*X)+坪值，利用非線性回歸擬合來(lái)確定PD T1/2；在跨距+坪值開(kāi)始并以速度常數(shù)K衰減至坪值。PD T1/2＝0.69/K。強(qiáng)制坪值回0。
預(yù)期本發(fā)明的舉例化合物產(chǎn)生抗MCh誘導(dǎo)的支氣管收縮和His-誘導(dǎo)的支氣管收縮的劑量依賴性支氣管保護(hù)作用。通常，在該試驗(yàn)中在給藥后1.5小時(shí)對(duì)于MCh誘導(dǎo)的支氣管收縮具有小于約300μg/mL的ID50和對(duì)于His誘導(dǎo)的支氣管收縮具有小于約300μg/mL的ID50的受試化合物是優(yōu)選的。此外，在該試驗(yàn)中，具有至少約24小時(shí)的支氣管保護(hù)活性的持續(xù)時(shí)間(PD T1/2)的受試化合物通常是優(yōu)選的。
試驗(yàn)檢測(cè)方法H
吸入豚鼠流涎試驗(yàn)使重200-350g的豚鼠(Charles River，Wilmington，MA)在到達(dá)后適應(yīng)屋內(nèi)豚鼠居住地至少3天。在餡餅形狀的給藥室(R+S molds，San Carlos，CA)中，經(jīng)10分鐘時(shí)間通過(guò)吸入(IH)給藥試驗(yàn)化合物或介質(zhì)。將試驗(yàn)溶液溶解在無(wú)菌水中并利用充滿5.0mL給藥溶液的霧化器給藥。將豚鼠限制在吸入室中30分鐘。在這一時(shí)間期間，將豚鼠限制在大約110平方厘米的區(qū)域內(nèi)。這一空間對(duì)于動(dòng)物自由轉(zhuǎn)向，自己復(fù)位和允許理毛行為是足夠的。在適應(yīng)20分鐘后，使動(dòng)物暴露于在22psi壓力下由屋空氣推進(jìn)的產(chǎn)生于LS Star Nebulizer Set(型號(hào)22F51，PARI Respiratory Equipment，Inc.Midlothian，VA)的氣霧劑。在霧化完成時(shí)，在處理后1.5、6、12、24、48或72小時(shí)評(píng)價(jià)豚鼠。
在試驗(yàn)前一小時(shí)，以0.88mL/kg體積肌內(nèi)(IM)注射氯胺酮43.75mg/kg、甲苯噻嗪3.5mg/kg和乙酰丙嗪1.05mg/kg的混合物來(lái)麻醉豚鼠。將動(dòng)物的腹部朝上放在加熱(37℃)的毯子上，它們的頭在向下的斜坡上有20度的傾斜。將4-層2X 2英寸紗布?jí)|(Nu-沙布通用棉球，Johnson and Johnson，Arlington，TX)塞入豚鼠嘴中。五分鐘后，給藥毒蕈堿激動(dòng)劑毛果蕓香堿(3.0mg/kg、S.c.)并立即丟掉紗布?jí)|并替換新的預(yù)先稱重的紗布?jí)|。收集唾液10分鐘，在該點(diǎn)稱重紗布?jí)|并用記錄的重量差來(lái)確定累積的唾液的量(mg)。計(jì)算對(duì)接受介質(zhì)和每個(gè)劑量受試化合物的動(dòng)物收集的唾液的平均量。介質(zhì)組平均值被認(rèn)為100％是流涎。結(jié)果是利用結(jié)果平均值計(jì)算的(n＝3或更多)。利用雙因素ANOVA對(duì)每個(gè)時(shí)間點(diǎn)每個(gè)劑量計(jì)算置信區(qū)間(95％)。該模型是在Rechter，″Estimation of anticholinergic drug effects in Mice byantagonism against Pilocarpine-induced salivation″Ata PharmacolToxicol，1996，24243-254中描述的模型的改進(jìn)形式。
計(jì)算在每個(gè)治療前時(shí)間，在介質(zhì)處理的動(dòng)物中唾液的平均重量，并用于在每個(gè)劑量下在相應(yīng)的治療前時(shí)間，計(jì)算流涎的抑制百分率。利用GraphPad Prism，Windows 3.00版(GraphPad Software，SanDiego，California)將抑制量響應(yīng)數(shù)據(jù)擬合成四參數(shù)邏輯方程式，來(lái)估計(jì)抗催涎劑ID50(抑制50％的毛果蕓香堿誘發(fā)的流涎所需的劑量)。采用的方程式如下Y＝Min+(Max-Min)/(l+10(logID50-x*希爾斜率))其中X是劑量的對(duì)數(shù)，Y是響應(yīng)(流涎的抑制百分率)。Y在Min開(kāi)始且逐漸靠近Max，具有S形狀。
抗-催涎劑ID50與支氣管保護(hù)ID50的比值被用來(lái)計(jì)算受試化合物的表觀肺選擇性指數(shù)。通常，具有大于約5的表觀肺選擇性指數(shù)的化合物是優(yōu)選的。
試驗(yàn)檢測(cè)方法I克隆人多巴胺D2S受體中的放射配體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合試驗(yàn)在本試驗(yàn)中，使用放射配體結(jié)合試驗(yàn)，測(cè)定試驗(yàn)化合物對(duì)轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞中人D2S受體的結(jié)合親和力(Grady等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 869762(1989)。
在22℃，存在或不存在試驗(yàn)化合物下，將細(xì)胞膜勻漿物(5-10μg蛋白質(zhì))與0.3nM[3H]螺哌隆一起在含有50mM Tris-HCl(pH 7.4)、120mMNaCl、5mM KCl、5mM MgCl2和1mM EDTA的緩沖液中孵育60分鐘。以100nM的試驗(yàn)濃度使用所述試驗(yàn)化合物。在存在10μM(+)-布他拉莫下測(cè)定非特異性結(jié)合。
孵育后，真空下通過(guò)用0.3％聚乙烯亞胺預(yù)先浸濕的玻璃纖維濾器(GF/B，Packard)快速過(guò)濾樣品并使用96-樣品細(xì)胞收獲器(Unifilter，Packard)用冰冷的50mM Tris-HCl沖洗幾次。干燥濾器，然后在閃爍計(jì)數(shù)器(Topcount，Packard)中使用閃爍混合液(Microscint 0，Packard)對(duì)放射活性進(jìn)行記數(shù)。
將結(jié)果表示為對(duì)照放射配體非特異結(jié)合的百分比抑制。發(fā)現(xiàn)在本試驗(yàn)中測(cè)試的本發(fā)明的示范性化合物在100nM的濃度下具有大于約30％的百分比抑制，包括大于約75％。例如，實(shí)施例1的化合物具有大于約75％的百分比抑制；實(shí)施例2的化合物具有大于約30％的百分比抑制。
雖然本發(fā)明用具體方面或它的實(shí)施方案作了描述，但是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)該理解在不偏離本發(fā)明真是精神和范圍的情況下可以做各種改變或可以做等同替換。此外，在申請(qǐng)的專利狀態(tài)和規(guī)則允許的范圍，本文引用的專利和專利申請(qǐng)都被完全引入至相同的范圍作為參考，似乎每篇文章都是被本文單獨(dú)引入作為參考。
權(quán)利要求
1.式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體 其中G1和G2中的一個(gè)代表NH，另一個(gè)代表S、NH、O或CH2；W代表O或NWa；其中Wa是氫或(1-4C)烷基；每個(gè)R1獨(dú)立地選自(1-4C)烷基、(2-4C)烯基、(2-4C)炔基、(3-6C)環(huán)烷基、氰基、鹵素、-OR1a、-C(O)OR1b、-SR1c、-S(O)R1d、-S(O)2R1e和-NR1fR1g；其中R1a、R1b、R1c、R1d、R1e、R1f和R1g中的每一個(gè)獨(dú)立地是氫、(1-4C)烷基或苯基-(1-4C)烷基；每個(gè)R2獨(dú)立地選自(1-4C)烷基、(2-4C)烯基、(2-4C)炔基、(3-6C)環(huán)烷基、氰基、鹵素、-OR2a、-C(O)OR2b、-SR2c、-S(O)R2d、-S(O)2R2e和-NR2fR2g；其中R2a、R2b、R2c、R2d、R2e、R2f和R2g中的每一個(gè)獨(dú)立地是氫、(1-4C)烷基或苯基-(1-4C)烷基；每個(gè)R3獨(dú)立地選自(1-4C)烷基、(2-4C)烯基、(2-4C)炔基、(3-6C)環(huán)烷基、氰基、鹵素、-OR3a、-C(O)OR3b、-SR3c，-S(O)R3d、-S(O)2R3e和-NR3fR3g；或兩個(gè)R3基團(tuán)結(jié)合形成(1-3C)亞烷基、(2-3C)亞烯基或環(huán)氧乙烷-2，3-二基；其中R3a、R3b、R3c、R3d、R3e、R3f和R3g中的每一個(gè)獨(dú)立地是氫或(1-4C)烷基；R4代表二價(jià)烴基，含有4至28個(gè)碳原子并且任選含有獨(dú)立地選自鹵素、氧、氮和硫的1至10個(gè)雜原子，條件是與R4連接的兩個(gè)氮原子之間的最短鏈上的鄰接原子的數(shù)目在4至16的范圍內(nèi)；R5代表氫或(1-4C)烷基；R6代表氫或羥基；每個(gè)R7a和R7b獨(dú)立地選自氫、(1-4C)烷基、羥基和氟；a是0或1至3的整數(shù)；b是0或1至3的整數(shù)；c是0或1至4的整數(shù)；d是0或1至5的整數(shù)；并且m是0或1至3的整數(shù)。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中W代表O。
3.權(quán)利要求1的化合物，其中a，b，和c各是0，并且R5是氫。
4.權(quán)利要求1的化合物，其中d是0。
5.權(quán)利要求1的化合物，其中d是1；并且R7a和R7b都是氫。
6.權(quán)利要求1的化合物，其中m是2。
7.權(quán)利要求1的化合物，其中G1是S和G2是NH。
8.權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)的化合物，其中R6是氫。
9.權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)的化合物，其中R6是羥基。
10.權(quán)利要求1的化合物，其中R4是下式的二價(jià)基團(tuán)-(R4a)d-(A1)e-(R4b)f-Q-(R4c)g-(A2)h-(R4d)i-其中d、e、f、g、h和i各自獨(dú)立地選自0和1；R4a、R4b、R4c和R4d各自獨(dú)立地選自(1-10C)亞烷基、(2-10C)亞烯基和(2-10C)亞炔基，其中每個(gè)亞烷基、亞烯基或亞炔基未被取代或被1至5個(gè)獨(dú)立地選自(1-4C)烷基、氟、羥基、苯基和苯基-(1-4C)烷基的取代基取代；A1和A2各自獨(dú)立地選自(3-7C)亞環(huán)烷基、(6-10C)亞芳基、-O-(6-10C)亞芳基、(6-10C)亞芳基-O-、(2-9C)亞雜芳基、-O-(2-9C)亞雜芳基、(2-9C)亞雜芳基-O-和(3-6C)亞雜環(huán)基，其中每個(gè)亞環(huán)烷基未被取代或被1至4個(gè)取代基取代，該取代基獨(dú)立地選自(1-4C)烷基，并且每個(gè)亞芳基、亞雜芳基或亞雜環(huán)基未被取代或被1至4個(gè)取代基取代，該取代基獨(dú)立地選自鹵素、(1-4C)烷基、(1-4C)烷氧基、-S-(1-4C)烷基、-S(O)-(1-4C)烷基、-S(O)2-(1-4C)烷基，-C(O)O(1-4C)烷基、羧基、氰基、羥基、硝基、三氟甲基和三氟甲氧基；Q選自鍵、-O-、-C(O)O-、-OC(O)-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-，-N(Qa)C(O)-、-C(O)N(Qb)-、-N(Qc)S(O)2-、-S(O)2N(Qd)-、-N(Qe)C(O)N(Qf)-、-N(Qg)S(O)2N(Qh)-、-OC(O)N(Qi)-、-N(Qj)C(O)O-和-N(Qk)；Qa、Qb、Qc、Qd、Qe、Qf、Qg、Qh、Qi、Qj和Qk各自獨(dú)立地選自氫、(1-6C)烷基、A3和(1-4C)亞烷基-A4，其中該烷基未被取代或被1至3個(gè)獨(dú)立地選自氟、羥基和(1-4C)烷氧基的取代基取代；或與它們所連接的氮原子和基團(tuán)R4b或R4c一起形成4-6元亞氮雜環(huán)烷基；A3和A4各自獨(dú)立地選自(3-6C)環(huán)烷基、(6-10C)芳基、(2-9C)雜芳基和(3-6C)雜環(huán)基，其中每個(gè)環(huán)烷基未被取代或被1至4個(gè)取代基取代，該取代基獨(dú)立地選自(1-4C)烷基，并且每個(gè)芳基、雜芳基或雜環(huán)基未被取代或被1至4個(gè)取代基取代，該取代基獨(dú)立地選自鹵素、(1-4C)烷基和(1-4C)烷氧基。
11.權(quán)利要求10的化合物，其中R4是下式的二價(jià)基團(tuán)-(R4a)d-其中R4a是(4-10C)亞烷基。
12.權(quán)利要求11的化合物，其中R4是-(CH2)4-、-(CH2)5-、-(CH2)6-、-(CH2)7-、-(CH2)8-、-(CH2)9和-(CH2)10-。
13.權(quán)利要求10的化合物，其中R4是下式的二價(jià)基團(tuán)-(R4a)d-(A2)h-(R4d)i-其中R4a是(1-10C)亞烷基；A2是(6-10C)亞芳基或(2-9C)雜亞芳基；并且R4d是(1-10C)亞烷基。
14.權(quán)利要求10的化合物，其中R4是下式的二價(jià)基團(tuán)-(R4a)d-Q-(A2)h-(R4d)i-其中Q是-O-或-N(Qk)-；Qk是氫或(1-3C)烷基；R4a是(1-10C)亞烷基；A2是(6-10C)亞芳基或(2-9C)雜亞芳基；并且R4d是(1-10C)亞烷基。
15.權(quán)利要求10的化合物，其中Q是-N(Qa)C(O)-或-C(O)N(Qb)-。
16.權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物對(duì)M3毒蕈堿性受體的抑制常數(shù)(Ki)小于約100nM并且對(duì)β2腎上腺素能受體的激動(dòng)的半數(shù)最大有效濃度EC50小于約100nM。
17.權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物的對(duì)M3毒蕈堿性受體的抑制常數(shù)(Ki)與對(duì)β2腎上腺素能受體的激動(dòng)的EC50的比值為約30∶1至約1∶30。
18.權(quán)利要求16或17的化合物，其中所述化合物還具有D2多巴胺激動(dòng)劑活性。
19.權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物具有式Ia的結(jié)構(gòu)
20.權(quán)利要求19的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體，其中a是0或1至3的整數(shù)；每個(gè)R1獨(dú)立地選自(1-4C)烷基、(2-4C)烯基、(2-4C)炔基、(3-6C)環(huán)烷基、氰基、鹵素、-OR1a、-C(O)OR1b、SR1c、-S(O)R1d、-S(O)2R1e和-NR1fR1g；R1a、R1b、R1c、R1d、R1e、R1f和R1g中的每一個(gè)獨(dú)立地是氫或(1-4C)烷基；b是0或1至3的整數(shù)；每個(gè)R2獨(dú)立地選自(1-4C)烷基、(2-4C)烯基、(2-4C)炔基、(3-6C)環(huán)烷基、氰基、鹵素、-OR2a、-C(O)OR2b、SR2c、-S(O)R2d、-S(O)2R2e和-NR2fR2g；R2a、R2b、R2c、R2d、R2e、R2f和R2g中的每一個(gè)獨(dú)立地是氫或(1-4C)烷基；W連接至相對(duì)于哌啶環(huán)中的氮原子的3-或4-位并代表O或NWa；Wa是氫或(1-4C)烷基；c是0或1至4的整數(shù)；每個(gè)R3是獨(dú)立地選自(1-4C)烷基、(2-4C)烯基、(2-4C)炔基、(3-6C)環(huán)烷基、氰基、鹵素、-OR3a、-C(O)OR3b、SR3c、-S(O)R3d、-S(O)2R3e和-NR3fR3g的碳上取代基；R3a、R3b、R3c、R3d、R3e、R3f和R3g中的每一個(gè)獨(dú)立地是氫或(1-4C)烷基；R4是下式的二價(jià)基團(tuán)-(R4a)d-(A1)e-(R4b)f-Q-(R4c)g-(A2)h-(R4d)i-其中d、e、f、g、h和i各自獨(dú)立地選自0和1；R4a、R4b、R4c和R4d各自獨(dú)立地選自(1-10C)亞烷基、(2-10C)亞烯基和(2-10C)亞炔基，其中每個(gè)亞烷基、亞烯基或亞炔基未被取代或被1至5個(gè)獨(dú)立地選自(1-4C)烷基、氟、羥基、苯基和苯基(1-4C)-烷基的取代基取代；A1和A2各自獨(dú)立地選自(3-7C)亞環(huán)烷基、(6-10C)亞芳基、(2-9C)亞雜芳基和(3-6C)亞雜環(huán)基；其中每個(gè)亞環(huán)烷基未被取代或被1至4個(gè)取代基取代，該取代基獨(dú)立地選自(1-4C)烷基，并且每個(gè)亞芳基、亞雜芳基或亞雜環(huán)基未被取代或被1至4個(gè)取代基取代，該取代基獨(dú)立地選自鹵素、(1-4C)烷基和(1-4C)烷氧基；Q選自鍵、-O-、-C(O)O-、-OC(O)-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-N(Qa)C(O)-、-C(O)N(Qb)-、-N(Qc)S(O)2-、-S(O)2N(Qd)-、-N(Qe)C(O)N(Qf)-、-N(Qg)S(O)2N(Qh)-、-OC(O)N(Qi)-、-N(Qj)C(O)O-和-N(Qk)-；Qa、Qb、Qc、Qd、Qe、Qf、Qg、Qh，Qi、Qj和Qk各自獨(dú)立地選自氫、(1-6C)烷基、A3和(1-4C)亞烷基-A4；其中該烷基未被取代或被1至3個(gè)獨(dú)立地選自氟、羥基和(1-4C)烷氧基的取代基取代；或與它們所連接的氮原子和基團(tuán)R4b或R4c一起形成4-6元亞氮雜環(huán)烷基；A3和A4各自獨(dú)立地選自(3-6C)環(huán)烷基、(6-10C)芳基、(2-9C)雜芳基和(3-6C)雜環(huán)基；其中每個(gè)環(huán)烷基未被取代或被1至4個(gè)取代基取代，該取代基獨(dú)立地選自(1-4C)烷基，并且每個(gè)芳基、雜芳基或雜環(huán)基未被取代或被1至4個(gè)取代基取代，該取代基獨(dú)立地選自鹵素、(1-4C)烷基和(1-4C)烷氧基；條件是與R4連接的兩個(gè)氮原子之間的最短鏈上的鄰接原子的數(shù)目在4至14的范圍內(nèi)；R5代表氫或(1-4C)烷基；R6代表氫或羥基；并且G1和G2中的一個(gè)代表NH，并且另一個(gè)代表S、NH、O或CH2。
21.權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物具有式Ib的結(jié)構(gòu)
22.權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物具有式Ic的結(jié)構(gòu)
23.權(quán)利要求19、21或22的化合物，其中W代表O。
24.權(quán)利要求19、21或22的化合物，其中a、b和c是0。
25.權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物具有式Id的結(jié)構(gòu)
26.權(quán)利要求19、21、22或25的化合物，其中R4選自-(CH2)7-；-(CH2)8-；-(CH2)9-；-(CH2)10-；-(CH2)11-；-(CH2)2C(O)NH(CH2)5-；-(CH2)2N(CH3)C(O)(CH2)5-；-(CH2)2C(O)NH(苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2NHC(O)(苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2NHC(O)NH(CH2)5-；-(CH2)3NHC(O)NH(CH2)5-；-(CH2)2C(O)NHCH2(環(huán)己-1，3-亞基)CH2-；-(CH2)2NHC(O)(環(huán)戊-1，3-亞基)-；-(CH2)2NHC(O)NH(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；1-[-(CH2)2C(O)](哌啶-4-基)(CH2)2-；-(CH2)2NHC(O)(反式-環(huán)己-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2NHC(O)(順式-環(huán)戊-1，3-亞基)-；-(CH2)2NH(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；1-[-(CH2)2NHC(O)](哌啶-4-基)(CH2)2-；-CH2(苯-1，4-亞基)NH(苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2C(O)NHCH2(苯-1，3-亞基)CH2-；-(CH2)2C(O)NHCH2(吡啶-2，6-亞基)CH2-；-(CH2)2C(O)NH(順式-環(huán)己-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2C(O)NH(反式-環(huán)己-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2NHC(O)(順式-環(huán)戊-1，3-亞基)CH2-；-(CH2)2N(CH3)C(O)(苯-1，3-亞基)CH2-；-(CH2)2N(CH3)C(O)(反式-環(huán)己-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2C(O)NH(苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2C(O)NH(苯-1，4-亞基)C*H(CH3)-((S)-異構(gòu)體)；-(CH2)2C(O)NH(苯-1，4-亞基)C*H(CH3)-((R)-異構(gòu)體)；2-[(S)-(-CH2-](吡咯烷-1-基)C(O)(CH2)4-；2-[(S)-(-CH2-](吡咯烷-1-基)C(O)(苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2C(O)NH(4-苯-1，3-亞基)CH2-；-CH2(2-氟苯-1，3-亞基)CH2-；-(CH2)2C(O)NH(4-甲基苯-1，3-亞基)CH2-；-(CH2)2C(O)NH(6-氯苯-1，3-亞基)CH2-；-(CH2)2C(O)NH(2-氯苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2C(O)NH(2，6-二氯苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2NHC(O)NHCH2(苯-1，3-亞基)CH2-；4-[-CH2-](哌啶-1-基)C(O)(苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2C(O)N(CH2CH3)(苯-1，4-亞基)CH2-；1-[-(CH2)2NHC(O)](哌啶-4-基)-；-(CH2)2C(O)NH(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；-(CH2)2NHC(O)(噻吩-2，5-亞基)CH2-；-(CH2)2N(CH3)C(O)(3-硝基苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2N(CH3)C(O)(反式-環(huán)己-1，4-亞基)-；1-[-CH2(2-氟苯-1，3-亞基)CH2](哌啶-4-基)-；5-[-(CH2)2NHC(O)](吡啶-2-基)CH2-；-(CH2)2(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；-(CH2)3(噻吩-2，5-亞基)(CH2)3-；-(CH2)2(苯-1，4-亞基)NH(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；-CH2(苯-1，2-亞基)NH(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；1-[-CH2(2-氟苯-1，3-亞基)CH2](哌啶-4-基)(CH2)2-；1-[-CH2(2-氟苯-1，3-亞基)CH2](哌啶-4-基)CH2-；-(CH2)2C(O)NH(3-氯苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2C(O)NH(2-(CF3O-)苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)3(苯-1，3-亞基)NH(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；-(CH2)2S(O)2NH(CH2)5-；-CH2(苯-1，3-亞基)NH(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；-(CH2)2C(O)NH(2-碘苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2C(O)NH(2-氯-5-甲氧基苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2C(O)NH(2-氯-6-甲基苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2N(CH3)S(O)2(苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2C(O)NH(2-溴苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)3(苯-1，4-亞基)NH(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；-(CH2)3(苯-1，2-亞基)NH(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；1-[-CH2(2-氟苯-1，3-亞基)CH2](哌啶-4-基)(CH2)3-；-(CH2)2C(O)NH(2-甲氧基苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)5NH(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；4-[-(CH2)2-](哌啶-1-基)(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；-(CH2)2C(O)NH(苯-1，4-亞基)CH(CH3)CH2-；-(CH2)2-(反式-環(huán)己-1，4-亞基)NH(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；-(CH2)2C(O)NH(2-氟苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2(苯-1，3-亞基)NH(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；-(CH2)2C(O)NH(2，5-二氟苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2NHC(O)(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；1-[-CH2(吡啶-2，6-亞基)CH2](哌啶-4-基)CH2-；-(CH2)3NH(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；-(CH2)2NH(萘-1，4-亞基)(CH2)2-；-(CH2)3O(苯-1，4-亞基)CH2-；1-[-(CH2)3](哌啶-4-基)CH2-；4-[-(CH2)2](哌啶-1-基)C(O)(苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)3(苯-1，4-亞基)NHC(O)(CH2)2-；-(CH2)3O(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；2-[-(CH2)2](苯并咪唑-5-基)CH2-；-(CH2)2-(反式-環(huán)己-1，4-亞基)NHC(O)(CH2)2-；-(CH2)2-(反式-環(huán)己-1，4-亞基)NHC(O)(CH2)4-；-(CH2)2-(反式-環(huán)己-1，4-亞基)NHC(O)(CH2)5-；4-[-(CH2)2](哌啶-1-基)C(O)(CH2)2-；-(CH2)2NHC(O)NH(苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2N(CH3)(CH2)2(順式-環(huán)己-1，4-亞基)-；-(CH2)2C(O)NH(2，3，5，6-四氟苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2C(O)NH(2，6-二碘苯-1，4-亞基)CH2-；4-[-(CH2)2](哌啶-1-基)C(O)(CH2)3-；4-[-(CH2)2](哌啶-1-基)C(O)(CH2)4-；4-[-(CH2)2](哌啶-1-基)C(O)(CH2)5-；-(CH2)2C(O)NHCH2(苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2NHC(O)NHCH2(苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2C(O)NH(2-甲基苯-1，4-亞基)CH2-；1-[-(CH2)3O(苯-1，4-亞基)(CH2)2](哌啶-4-基)CH2-；-(CH2)2C(O)NHCH2(苯-1，3-亞基)(CH2)2-；-(CH2)2O(苯-1，3-亞基)CH2-；-(CH2)2N(CH3)C(O)CH2O(苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2N(CH3)C(O)CH2O(苯-1，3-亞基)CH2-；-(CH2)2N(CH3)C(O)(呋喃-2，5-亞基)CH2-；-(CH2)2N(CH3)C(O)(噻吩-2，5-亞基)CH2-；-(CH2)2O(苯-1，4-亞基)O(CH2)2-；-(CH2)2(反式-環(huán)己-1，4-亞基)NHC(O)(苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2(反式-環(huán)己-1，4-亞基)NHC(O)CH2O(苯-1，2-亞基)CH2-；-(CH2)2(反式-環(huán)己-1，4-亞基)NHC(O)CH2O(苯-1，3-亞基)CH2-；-(CH2)2(反式-環(huán)己-1，4-亞基)NHC(O)CH2O(苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2(反式-環(huán)己-1，4-亞基)NHC(O)(呋喃-2，5-亞基)CH2-；-(CH2)2(反式-環(huán)己-1，4-亞基)NHC(O)(噻吩-2，5-亞基)CH2-；4-[-(CH2)2](哌啶-1-基)C(O)CH2O(苯-1，2-亞基)CH2-；4-[-(CH2)2](哌啶-1-基)C(O)CH2O(苯-1，3-亞基)CH2-；4-[-(CH2)2](哌啶-1-基)C(O)CH2O(苯-1，4-亞基)CH2-；4-[-(CH2)2](哌啶-1-基)C(O)(呋喃-2，5-亞基)CH2-；4-[-(CH2)2](哌啶-1-基)C(O)(噻吩-2，5-亞基)CH2-；-(CH2)2(苯-1，4-亞基)NHC(O)(苯-1，3-亞基)CH2-；-(CH2)2(苯-1，4-亞基)NHC(O)(苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2(苯-1，4-亞基)NHC(O)CH2O(苯-1，2-亞基)CH2-；-(CH2)2(苯-1，4-亞基)NHC(O)CH2O(苯-1，3-亞基)CH2-；-(CH2)2(苯-1，4-亞基)NHC(O)CH2O(苯-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2(苯-1，4-亞基)NHC(O)(呋喃-2，5-亞基)CH2-；-(CH2)2(苯-1，4-亞基)NHC(O)(噻吩-2，5-亞基)CH2-；-(CH2)2(反式-環(huán)己-1，4-亞基)NHC(O)(苯-1，3-亞基)CH2-；-(CH2)3O(苯-1，3-亞基)CH2-；-CH2CH(OH)CH2NH(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；-(CH2)4NH(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；-(CH2)2C(O)NH(苯-1，4-亞基)CH2NHC(O)CH2-；-(CH2)2C(O)NH(苯-1，4-亞基)(CH2)2NHC(O)CH2-；-(CH2)2C(O)NHCH2(反式-環(huán)己-1，4-亞基)CH2-；-(CH2)2NHC(O)(CH2)5-；-(CH2)2O(苯-1，3-亞基)O(CH2)2-；-(CH2)2O(苯-1，2-亞基)O(CH2)2-；-CH2(苯-1，2-亞基)O(苯-1，2-亞基)CH2-；-(CH2)2C(O)NH(CH2)6-；-(CH2)3(苯-1，4-亞基)(CH2)3-；-(CH2)3(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；-(CH2)4(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；-(CH2)3(呋喃-2，5-亞基)(CH2)3-；-(CH2)2N(CH3)C(O)NH(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；4-[-(CH2)2](哌啶-1-基)C(O)NH(苯-1，4-亞基)(CH2)2-；-(CH2)3(苯-1，3-亞基)(CH2)3-；-(CH2)3(四氫呋喃-2，5-亞基)(CH2)3-；以及-(CH2)2O(苯-1，4-亞基)C(O)(CH2)2-。
27.化合物，其選自聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-{9-[2-(4-羥基-2-氧代-2，3-二氫苯并噻唑-7-基)-乙氨基]壬基}哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(4-{[2-(4-羥基-2-氧代-2，3-二氫苯并噻唑-7-基)乙氨基]甲基}苯基氨基甲?；?乙基]-哌啶-4-基酯；3-[4-(3-聯(lián)苯基-2-基脲基)哌啶-1-基]-N-(4-{[2-(4-羥基-2-氧代-2，3-二氫-苯并噻唑-7-基)乙氨基]甲基}-苯基)丙酰胺；以及聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(4-{2-[2-(4-羥基-2-氧代-2，3-二氫苯并噻唑-7-基)-乙氨基]乙基}苯基氨基甲?；?乙基]-哌啶-4-基酯；或它們的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物。
28.藥物組合物，它包含藥學(xué)上可接受的載體和治療有效量的權(quán)利要求1、19、20、21、22、25或27中任一項(xiàng)的化合物。
29.權(quán)利要求28的藥物組合物，其中該組合物還包含治療有效量的甾體抗炎劑。
30.權(quán)利要求28的藥物組合物，其中該組合物還包含治療有效量的磷酸二酯酶-4抑制劑。
31.治療肺病的方法，該方法包括對(duì)需要治療的患者給予治療有效量的權(quán)利要求1、19、20、21、22、25或27中任一項(xiàng)的化合物。
32.在患者中產(chǎn)生支氣管擴(kuò)張的方法，該方法包括對(duì)患者給予產(chǎn)生支氣管擴(kuò)張量的權(quán)利要求1、19、20、21、22、25或27中任一項(xiàng)的化合物。
33.治療慢性阻塞性肺病或哮喘的方法，該方法包括對(duì)需要治療的患者給予治療有效量的權(quán)利要求1、19、20、21、22、25或27中任一項(xiàng)的化合物。
34.研究生物系統(tǒng)或樣品的方法，其中所述系統(tǒng)或樣品包含毒蕈堿性受體或β2腎上腺素能受體或它們的組合；該方法包括(a)使生物系統(tǒng)或樣品與權(quán)利要求1的化合物接觸；并且(b)測(cè)量生物系統(tǒng)或樣品中對(duì)所述化合物的反應(yīng)。
35.制備權(quán)利要求1的化合物的方法，該方法包括(a)使式1化合物 或其鹽；與式2化合物反應(yīng) 其中X1代表離去基團(tuán)，R6a代表氫或OP1，并且P1和P2各自獨(dú)立地代表氫原子或羥基-保護(hù)基；(b)使式3化合物 或其鹽；與式4化合物反應(yīng) 其中X2代表離去基團(tuán)，R6b代表氫或OP3，并且P3和P4各自獨(dú)立地代表氫原子或羥基-保護(hù)基；(c)將式5化合物 與式6化合物偶聯(lián) 其中XQa和XQb各自獨(dú)立地代表偶聯(lián)形成基團(tuán)Q的官能團(tuán)，P5a代表氫原子或氨基-保護(hù)基、R6c代表氫或OP5b，并且P5b和P6各自獨(dú)立地代表氫原子或羥基-保護(hù)基；(d)對(duì)于其中R5代表氫原子的式I的化合物，在還原劑存在下，使式3化合物與式7a或7b合物或其水合物(例如，乙二醛)反應(yīng) 其中P7代表氫原子或羥基-保護(hù)基；(e)在還原劑存在下，使式1化合物與式8化合物或其水合物反應(yīng) 其中R6d代表氫或OP8，P8和P9各自獨(dú)立地代表氫原子或羥基-保護(hù)基，P10代表氫原子或氨基-保護(hù)基，并且R4’代表殘基，在反應(yīng)完成時(shí)該殘基與它所連接的碳一起形成基團(tuán)R4；(f)使式9化合物 其中X3代表離去基團(tuán)，與式10化合物反應(yīng) 其中R6e代表氫或OP11，P11和P12各自獨(dú)立地代表氫原子或羥基-保護(hù)基，并且P13代表氫原子或氨基-保護(hù)基；或(g)使式11化合物 或其水合物在還原劑存在下與式10的化合物反應(yīng)；其中R4’代表殘基，在反應(yīng)完成時(shí)該殘基與它所連接的碳一起形成基團(tuán)R4；然后除去任意保護(hù)基P1，P2，P3，P4，P5a，P5b，P6，P7，P8，P9，P10，P11，P12或P13提供式I的化合物。
36.制備權(quán)利要求1的化合物的方法，該方法包括(h)使式25的化合物 與選自三溴化硼、三氯化硼、氫溴酸和鹽酸的試劑接觸，形成式I的化合物或其鹽或立體異構(gòu)體。
37.權(quán)利要求35或36的方法，其中該方法還包括形成式I化合物的藥學(xué)上可接受的鹽。
38.式25的化合物或其鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體 其中G1和G2中的一個(gè)代表NH，另一個(gè)代表S、NH、O或CH2；W代表O或NWa；其中Wa是氫或(1-4C)烷基；每個(gè)R1獨(dú)立地選自(1-4C)烷基、(2-4C)烯基、(2-4C)炔基、(3-6C)環(huán)烷基、氰基、鹵素、-OR1a、-C(O)OR1b、-SR1c、-S(O)R1d、-S(O)2R1e和-NR1fR1g；其中R1a、R1b、R1c、R1d、R1e、R1f和R1g中的每一個(gè)獨(dú)立地是氫、(1-4C)烷基或苯基-(1-4C)烷基；每個(gè)R2獨(dú)立地選自(1-4C)烷基、(2-4C)烯基、(2-4C)炔基、(3-6C)環(huán)烷基、氰基、鹵素、-OR2a、-C(O)OR2b、-SR2c、-S(O)R2d、-S(O)2R2e和-NR2fR2g；其中R2a、R2b、R2c、R2d、R2e、R2f和R2g中的每一個(gè)獨(dú)立地是氫、(1-4C)烷基或苯基-(1-4C)烷基；每個(gè)R3獨(dú)立地選自(1-4C)烷基、(2-4C)烯基、(2-4C)炔基、(3-6C)環(huán)烷基、氰基、鹵素、-OR3a、-C(O)OR3b、-SR3c，-S(O)R3d、-S(O)2R3e和-NR3fR3g；或兩個(gè)R3基團(tuán)結(jié)合形成(1-3C)亞烷基、(2-3C)亞烯基或環(huán)氧乙烷-2，3-二基；其中R3a、R3b、R3c、R3d、R3e、R3f和R3g中的每一個(gè)獨(dú)立地是氫或(1-4C)烷基；R4代表二價(jià)烴基，含有4至28個(gè)碳原子并且任選含有獨(dú)立地選自鹵素、氧、氮和硫的1至10個(gè)雜原子，條件是與R4連接的兩個(gè)氮原子之間的最短鏈上的鄰接原子的數(shù)目在4至16的范圍內(nèi)；R5代表氫或(1-4C)烷基；R6代表氫或羥基；每個(gè)R7a和R7b獨(dú)立地選自氫、(1-4C)烷基、羥基和氟；a是0或1至3的整數(shù)；b是0或1至3的整數(shù)；c是0或1至4的整數(shù)；d是0或1至5的整數(shù)；并且m是0或1至3的整數(shù)。
39.用于治療或作為藥物的權(quán)利要求1至27中任一項(xiàng)的化合物。
40.用于治療肺病的權(quán)利要求1至27中任一項(xiàng)的化合物。
41.含有權(quán)利要求1至27中任一項(xiàng)的化合物的藥物。
42.權(quán)利要求1至27中任一項(xiàng)的化合物在制備藥物中的用途。
43.權(quán)利要求42的用途，其中所述藥物用于治療肺病。
全文摘要
本發(fā)明涉及式I的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構(gòu)體，其中R
文檔編號(hào)C07D417/12GK1882556SQ200480034201
公開(kāi)日2006年12月20日 申請(qǐng)日期2004年11月19日 優(yōu)先權(quán)日2003年11月21日
發(fā)明者M·馬梅恩, S·鄧納姆 申請(qǐng)人:施萬(wàn)制藥