的"氨基酸"和"氨基酸相同性"表示20種天然產(chǎn)生的氨基酸之一，或其 存在于具體限定位置的任何非天然類似物。因此，本文所用的"氨基酸"或"肽殘基"表示 天然產(chǎn)生的和合成的氨基酸（包括天然產(chǎn)生的氨基酸的類似物）。例如，為本發(fā)明的目的， 高苯丙氨酸（homophenylalanine)、瓜氨酸、2-氨基-3-胍基丙酸、2-氨基-3-脲基丙酸、 1^8(皿6)、1^8(皿6)2、1^8(皿6)3、鳥氨酸、〇-硝基-精氨酸、八找(皿6)2、€[-甲基八找、€[-甲 基Lys、β高賴氨酸（homolysine)、β高精氨酸（homoarginine)、正亮氨酸等視作氨基酸。 "氨基酸"還包括亞氨基酸殘基，例如脯氨酸和羥脯氨酸。側(cè)鏈可以是（R)或（S)構(gòu)型，可以 是D-或L-異構(gòu)體。在優(yōu)選的實施方式中，氨基酸是（S)或L-構(gòu)型，雖然可采用D-異構(gòu)體 來改善血清穩(wěn)定性。如果采用非天然側(cè)鏈，可采用非氨基酸取代基，例如以防止或延遲體內(nèi) 降解。
[0049] 本文所用的"母體分子"指隨后根據(jù)本發(fā)明說明對其進(jìn)行修飾的生物活性劑，以產(chǎn) 生"經(jīng)修飾的生物活性劑"。在一些實施方式中，母體分子可以是需要控釋的聚合物制劑以 供治療應(yīng)用的任何生物活性劑分子。如本文所述，可通過修飾母體分子，例如修飾母體分子 的等電點、凈電荷、溶解度等來控制包封和從聚合物釋放。
[0050] 類似地，本文所用的"母體肽分子"、"母體多肽"、"母體蛋白質(zhì)"等表示隨后經(jīng)修飾 產(chǎn)生"修飾肽分子"的多肽、蛋白質(zhì)等。例如，母體肽分子、母體多肽、母體蛋白質(zhì)等可用作至 少一種本文所述修飾，例如等電點修飾、凈電荷修飾、溶解度修飾等的模板和/或基礎(chǔ)。所 述母體肽分子可以是天然產(chǎn)生的多肽、或天然產(chǎn)生多肽的變體或工程改造形式。母體多肽 可以指多肽本身，包含母體多肽的組合物，或編碼它的氨基酸序列。
[0051] 本文所用的"等電點"、"pi"等表示肽分子不攜帶凈電荷時的pH?？捎檬熘姆?法，例如等電聚焦法測定等電點。
[0052] 在肽分子較小時，還可計算出其近似的pi。肽分子的pi通常取決于其堿性和酸性 基團的PKa值，例如，當(dāng)只由編碼的氨基酸形成肽時，其pi取決于N末端或賴氨酸側(cè)鏈的伯 胺、精氨酸側(cè)鏈的胍基、組氨酸的咪唑環(huán)體系和肽C-末端、天冬氨酸側(cè)鏈和谷氨酸側(cè)鏈的 羧酸基團的PKa值。
[0053] 可通過，例如化學(xué)方法修飾母體肽分子的pI。此類修飾的非限制性例子包括N-末 端氨基的?；?、烷化或其它化學(xué)修飾；C-末端羧酸基團的酰胺化、酯化或其它化學(xué)修飾；用 非電離的氨基酸殘基取代賴氨酸、組氨酸、精氨酸、谷氨酸、天冬氨酸或含酸性或堿性基團 的其它非編碼氨基酸；賴氨酸、組氨酸、精氨酸的側(cè)鏈基團或其它非編碼氨基酸的堿性官能 團的?；⑼榛蚱渌瘜W(xué)修飾；側(cè)鏈羧酸基團的酰胺化、酯化或其它化學(xué)修飾，與能改變 Pi的輔助分子偶聯(lián)，等等。在電離肽的情況中，其鹽形式的Pi還取決于抗衡離子的pKa。
[0054] 本文所用的母體肽分子的"凈電荷"取決于其pi和肽溶液的pH?？赏ㄟ^以下非 限制性例子的任何一種修飾母體肽分子的凈電荷：N-末端氨基的酰化、烷化或其它化學(xué)修 飾；C-末端羧酸基團的酰胺化、酯化或其它化學(xué)修飾；用非電離的氨基酸殘基取代賴氨酸、 組氨酸、精氨酸、谷氨酸、天冬氨酸或含酸性或堿性基團的其它非編碼氨基酸；修飾母體肽 的等電點；與帶正電荷或負(fù)電荷的輔助分子偶聯(lián)，等等。
[0055] 如本文所述，修飾電荷的分布和/或密度也視作對母體肽的聚合物包封和釋放特 性的調(diào)節(jié)。增加的電荷密度可以均勻或非均勻地分布在修飾的肽分子中。在一個實施方式 中，增加的負(fù)電荷或正電荷為非均勻分布，包括這種增加的負(fù)電荷或正電荷分別聚集在肽 鏈內(nèi)的一個或多個位置。增加的負(fù)電荷或正電荷可沿著肽的任何位置聚集，例如接近或在 肽的末端，接近或在肽的中心等等，但優(yōu)選位于距離肽活性位點的遠(yuǎn)處，通過參考母體分子 的已知特征不難確定這點?；蛘?，增加的負(fù)電荷或正電荷可沿著聚合物均勻分布。
[0056] 在一個實施方式中，與母體肽分子相比，經(jīng)修飾的肽分子可包含更多的負(fù)電荷或 正電荷，例如通過合適的氨基酸取代。在一個實施方式中，用賴氨酸、精氨酸、組氨酸或其類 似物取代母體肽分子中帶負(fù)電和/或不可電離的氨基酸來加入正電荷。在另一實施方式 中，用甘氨酸、天冬氨酸、谷氨酸或其類似物（例如，任何α或β氨基鏈烷二酸，如氨基辛 二酸）取代母體肽分子中帶正電和/或不可電離的氨基酸來加入負(fù)電荷。
[0057] 在一個實施方式中，與母體肽分子相比，經(jīng)修飾的肽分子可包含更多的負(fù)電荷或 正電荷，例如通過分別與一個或多個帶負(fù)電荷的輔助分子或一個或多個帶正電荷的輔助分 子偶聯(lián)。與僅是絡(luò)合或其它緊密物理結(jié)合相反，本文所用的"偶聯(lián)"指兩個分子的共價連接。 示范性帶負(fù)電荷的輔助分子包括肽的任何常見化學(xué)官能團，例如酪氨酸、蘇氨酸和絲氨酸 側(cè)鏈的羥基，半胱氨酸側(cè)鏈的巰基或精氨酸和賴氨酸側(cè)鏈的N-末端氨基或氨基與磷脂（磷 酸酰胺結(jié)合）的單、雙-和/或三-磷酸根、硫酸根、檸檬酸根、酒石酸、聚天冬氨酸、聚谷氨 酸和二酸（例如，草酸、丙二酸、琥珀酸等）的偶聯(lián)。示范性帶負(fù)電荷的結(jié)構(gòu)還包括但不限 于：聚（谷氨酸）、陰離子脂質(zhì)、聚（天冬氨酸）和藻酸鹽。在一些情況中，還可誘生或引入 肽的化學(xué)官能團以促進(jìn)偶聯(lián)（例如，形成反應(yīng)活性硫酯、醛、羥胺、烷基溴、馬來酰亞胺等）。 示范性帶正電荷的輔助分子包括聚賴氨酸、聚精氨酸、聚組氨酸、聚（烯丙基胺）、聚（乙基 亞胺）、殼聚糖或帶正電荷的脂質(zhì)結(jié)構(gòu)。
[0058] 輔助分子還可包含正或負(fù)氨基酸的"尾"，可通過更加中性的接頭部分，例如聚乙 二醇（PEG)、聚-CH2-等將其偶聯(lián)于生物活性劑。
[0059] 修飾的肽分子還可包含藥學(xué)上可接受的抗衡離子，其代表性例子見下表1。
[0060] 表1.潛在的抗衡離子
[0061]
【主權(quán)項】
1. 一種控釋藥物制劑，其包含聚合物包封的經(jīng)修飾的生物活性劑，其中與母體分子相 比，所述經(jīng)修飾的生物活性劑的等電點提高，從而提高了藥物的加載效率。
2. 如權(quán)利要求1所述的控釋藥物制劑，其特征在于，與母體分子相比，所述經(jīng)修飾的生 物活性劑包含增加的正電荷。
3. 如權(quán)利要求2所述的控釋藥物制劑，其特征在于，所述經(jīng)修飾的生物活性劑偶聯(lián)于 帶正電荷的輔助分子。
4. 如權(quán)利要求2所述的控釋藥物制劑，其特征在于，所述經(jīng)修飾的生物活性劑包含帶 正電荷的氨基酸取代。
5. 如權(quán)利要求3所述的控釋藥物制劑，其特征在于，所述經(jīng)修飾的生物活性劑是具有 SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的肽。
6. 如權(quán)利要求4所述的控釋藥物制劑，其特征在于，所述經(jīng)修飾的生物活性劑是具有 SEQ ID NO:9所示氨基酸序列的肽。
7. -種控釋藥物制劑，其包含生物可降解聚合物包封的經(jīng)修飾的生物活性劑，其中與 母體分子相比，所述經(jīng)修飾的生物活性劑的等電點提高或降低，從而提高了其侵蝕性釋放 速率。
8. 如權(quán)利要求7所述的控釋藥物制劑，其特征在于，與母體分子相比，所述經(jīng)修飾的生 物活性劑包含增加的正電荷。
9. 如權(quán)利要求8所述的控釋藥物制劑，其特征在于，所述經(jīng)修飾的生物活性劑偶聯(lián)于 帶正電荷的輔助分子。
10. 如權(quán)利要求8所述的控釋藥物制劑，其特征在于，所述經(jīng)修飾的生物活性劑包含帶 正電荷的氨基酸取代。
【專利摘要】本文描述了控釋肽制劑，具體是通過直接修飾生物活性劑的等電點和/或凈電荷來調(diào)節(jié)聚合物遞送系統(tǒng)所包封生物活性劑的釋放和/或藥物加載特征的方法和組合物。
【IPC分類】A61K38-08, A61K47-34, A61K38-16, A61K47-48
【公開號】CN104873979
【申請?zhí)枴緾N201510144336
【發(fā)明人】K·伯頓, T·沃爾, T·R·泰斯, M·阿尤伯
【申請人】健贊股份有限公司, 瑟摩迪克斯制藥股份有限公司
【公開日】2015年9月2日
【申請日】2009年8月28日
【公告號】CA2735581A1, CN102958512A, CN102958512B, EP2331075A2, EP2331075B1, US8951973, US20120027805, US20150148295, WO2010025435A2, WO2010025435A3