多糖組合物及使用方法
【專利說明】多糖組合物及使用方法
[0001] 相關(guān)申請
[0002] 本申請要求2012年5月30日提交的美國臨時(shí)申請61/653389和2013年5月26 日提交的美國臨時(shí)申請61/827661的優(yōu)先權(quán)，這些臨時(shí)申請除權(quán)利要求外的內(nèi)容引入本文 作為參考。
[0003] 政府支持
[0004] 本發(fā)明部分地得到NIH(NIAID)基金號R01AI046706的支持。美國政府享有本發(fā) 明的某些權(quán)利。 發(fā)明領(lǐng)域
[0005] 本發(fā)明涉及某種多糖抗原和抗體組合物在檢測、預(yù)防和/或治療特定病原體引起 的感染中的用途。
[0006] 發(fā)明背景
[0007] 開發(fā)針對不論是細(xì)菌、病毒、真菌或天然寄生蟲導(dǎo)致的各種感染的免疫療法是高 度優(yōu)先的。許多當(dāng)前的免疫療法通過種屬特異性抗原靶向于特定的微生物物種。靶向于多 種微生物并對其有效的免疫療法較為少見。
[0008] 金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)和表皮葡萄球菌（S. epidermidis)在 其表面表達(dá)聚-N-乙?；咸前罚≒NAG)多糖抗原。PNAG由這些細(xì)菌體內(nèi)的ica基因座的 基因產(chǎn)物體內(nèi)合成。類似的，大腸桿菌和其他革蘭氏陰性菌含有稱為 pga位點(diǎn)的同源性基 因座，其同樣編碼可用于合成PNAG的蛋白質(zhì)的合成。因此，含有完整ica或pga位點(diǎn)的細(xì) 菌能產(chǎn)生PNAG。之前發(fā)現(xiàn)，該抗原的去乙?；问皆诖碳た乖禺愋缘拿庖邞?yīng)答方面特別 有效，其部分特征在于誘導(dǎo)調(diào)理素抗體。
[0009] 發(fā)明概述
[0010] 本發(fā)明部分地基于預(yù)料不到的和令人驚訝的發(fā)現(xiàn)，多糖聚N-乙酰基葡糖胺 (PNAG)由多種以前不知道或未提示能表達(dá)該多糖的病原體表達(dá)。本發(fā)明因此提供了包含該 多糖或其特異性抗體的組合物，其用于預(yù)防和/或治療由這些特定病原體引起的感染，并 且任選地用于治療和/或預(yù)防可由所述感染導(dǎo)致的疾病或障礙。
[0011] 令人驚訝的，根據(jù)本發(fā)明，發(fā)現(xiàn)表達(dá)PNAG的病原體包括許多種類和類型。這些種 類和特定的病原體如下：(a)革蘭氏陽性球菌：肺炎鏈球菌（Streptococcus pneumoniae) 的疫苗和非疫苗株，A組鏈球菌屬例如釀膿鏈球菌（Streptococcus pyogenes)、B組 鏈球菌例如無乳鏈球菌（Streptococcus agalactiae)和C組鏈球菌例如停乳鏈球菌 (Streptococcus dysagalactiae)和奠腸球菌(Enterococcus faecalis) ； (b)革蘭氏 陽性桿菌：單核細(xì)胞增生利斯特菌（Listeria monocytogenes)、難辨梭菌（Clostridium difficile)、枯草芽抱桿菌（Bacillus subtilis)、結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis)和恥垢分枝桿菌（M. smegmatis) ; (c)革蘭氏陰性球菌和球桿菌：腦膜炎 奈瑟球菌（Neisseria meningitides)、淋病奈瑟球菌（N.gonorrhoeae)、非典型流感嗜血 桿菌（Non-typable Hemophilus influenzae)、杜氏嗜血菌（Hemophilus ducreyi)、幽門 螺桿菌（Helicobacter pylori)和空腸彎曲桿菌（Campylobacter jejuni) ;(d)革蘭氏 陰性桿菌：脆弱擬桿菌（Bacteroides fragilis)、多形擬桿菌（B.thetaiotamicron)、B vulgatis、嗤齒類梓檬酸桿菌（Citrobacter rodentium)、霍亂弧菌（Vibrio cholerae)、 傷寒桿菌（Salmonella enterica serovar typhi)和鼠傷寒沙門氏菌（Salmonella enterica serovar typhimurium) ;(e)真菌：白色念珠菌（酵母）、白色念珠菌（菌絲）、黃 曲霉菌、鐮刀菌屬物種例如腐皮鐮刀菌（Fusarium solani)和新型隱球菌（Cryptococcus neoformans);以及（f)寄生蟲：伯氏皰原蟲（Plasmodium bergei)和惡性皰原蟲 (P. falciparum)(包括子孢子）；和陰道毛滴蟲（T. vaginalis)。這些病原體的PNAG表達(dá) 是尤其令人驚訝的，因?yàn)樗鼈兙鶝]有可鑒定的與葡萄球菌ica位點(diǎn)或大腸桿菌pga位點(diǎn)相 關(guān)的基因座，所述基因座編碼參與PNAG以及某些細(xì)菌中相關(guān)的多糖合成的蛋白。因此，這 些病原體在本文中被稱為非ica/pga的病原體，以表明其不含有可鑒別的ica或pga基因 座。
[0012] 本發(fā)明還提供了用于檢測任何前述病原體的方法，例如使用對PNAG特異性的抗 體。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種方法，包括： 向具有或有風(fēng)險(xiǎn)發(fā)生非ica/pga的PNAG陽性的病原體感染的個(gè)體施用能誘導(dǎo)針對病 原體的免疫應(yīng)答的有效量的具有下式的分離多糖
其中n至少是5, R選自-NH-CO-CH3和-NH 2,條件是低于50%的R基團(tuán)是-NH-CO-CH3。
2. -種方法，包括向具有或有風(fēng)險(xiǎn)發(fā)生非ica/pga的PNAG陽性的病原體感染的個(gè)體施 用能誘導(dǎo)針對病原體的免疫應(yīng)答的有效量的與載體綴合的分離多糖，其中所述多糖具有下 式結(jié)構(gòu)
其中n是5或更多，R選自基團(tuán)-NH-CO-CH3和-NH 2,條件是低于50 %的R基團(tuán) 是-NH-CO-CH3。
3. 權(quán)利要求2的方法，其中分離的多糖與載體通過接頭綴合。
4. 權(quán)利要求2或3的方法，其中載體是膚載體。
5. 前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，其中低于30%、低于20%、低于10%或低于5%的R基 團(tuán)是-NH-CO-CH3。
6. 前述任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，其中沒有R基團(tuán)是-NH-CO-CH 3。
7. 權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)的方法，其中n至少是15、至少是20,至少是50,至少是100,至 少100,至少200,至少300,至少400或至少500。
8. 權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)的方法，其中分離的多糖的分子量為100-500kDa。
9. 權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)的方法，其中所述非ica/pga的PNAG陽性的病原體是非ica/ pga的PNAG陽性的革蘭氏陽性球菌。

10. 權(quán)利要求9的方法，其中所述非ica/pga的PNAG陽性的革蘭氏陽性球菌是肺炎鏈 球菌、A組鏈球菌、B組鏈球菌或腸球菌屬。
11. 權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)的方法，其中所述非ica/pga的PNAG陽性的病原體是非ica/ pga的PNAG陽性的革蘭氏陽性桿菌。
12. 權(quán)利要求11的方法，其中所述非ica/pga的PNAG陽性的革蘭氏陽性桿菌是利斯特 菌屬、難辨梭菌、枯草芽抱桿菌、結(jié)核分枝桿菌或恥垢分枝桿菌。
13. 權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)的方法，其中所述非ica/pga的PNAG陽性的病原體是非ica/ pga的PNAG陽性的革蘭氏陰性球菌或球桿菌。
14. 權(quán)利要求13的方法，其中所述非ica/pga的PNAG陽性的革蘭氏陰性球菌或球桿菌 是腦膜炎奈瑟球菌、淋病奈瑟球菌、非典型流感嗜血桿菌、螺桿菌屬或彎曲桿菌屬。
15. 權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)的方法，其中所述非ica/pga的PNAG陽性的病原體是非ica/ pga的PNAG陽性的革蘭氏陰性桿菌。
16. 權(quán)利要求15的方法，其中所述非ica/pga的PNAG陽性的革蘭氏陰性桿菌是脆弱 擬桿菌、多形擬桿菌、B. vulgatis、曬齒類巧樣酸桿菌、霍亂弧菌、傷寒桿菌或鼠傷寒沙口氏 -tt： 園〇
17. 權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)的方法，其中所述非ica/pga的PNAG陽性的病原體是非ica/ pga的PNAG陽性的真菌。
18. 權(quán)利要求17的方法，其中所述非ica/pga的PNAG陽性的真菌是白色念珠菌（酵 母）、白色念珠菌（菌絲）、曲霉屬、鑲刀菌屬或隱球菌屬。
19. 權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)的方法，其中所述非ica/pga的PNAG陽性的病原體是非ica/ pga的PNAG陽性的寄生蟲。
20. 權(quán)利要求19的方法，其中所述非ica/pga的PNAG陽性的寄生蟲是伯氏追原蟲或惡 性追原蟲。
21. 任一前述權(quán)利要求的方法