專利名稱：：用于治療或預防退行性和炎癥性疾病的藥物組合物的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種藥物組合物和方法，所述的藥物組合物和方法用于治療或預防在炎癥性疾病中出現(xiàn)的發(fā)炎和細胞損傷，所述炎癥性疾病例如胃炎、胃潰瘍、胰腺炎、大腸炎、關節(jié)炎、糖尿病、動脈硬化、腎炎、肝炎、阿爾茨海默病、帕金森病和肌萎縮性脊髓側索硬化癥(LouGehrig'sdisease)。
背景技術：
：炎癥是一種血細胞膜和細胞抵抗由受損細胞和進入體內(nèi)的外來物質(zhì)引起的損傷因子而產(chǎn)生的反應。已知干預炎癥反應的物質(zhì)有l(wèi))花生四烯酸的代謝物，即，前列腺素、白三烯和脂氧素(lipoxins);2)血小板活化因子；3)細胞因子，例如肺瘤壞死因子-a、白細胞介素-l(IL-l)等，以及趨化因子，例如單核細胞趨化蛋白(MCP-1)、巨噬細胞炎癥蛋白-la(MCP-la)等；4)一氧化氮(NO);5)活性氧；6)血管舒張因子(vasodilatingfactors),例如組胺、5-羥色胺等。炎癥反應的主要目的是消除外來物質(zhì)和受損細胞(或細胞組織)，但是炎癥反應也可能導致像風濕性關節(jié)炎和動脈硬化這樣的慢性病。如果炎癥損傷的程度是輕微、有限和暫時的，炎癥反應的終止顯示，損傷因子被消除，組織恢復正常狀態(tài)。炎癥反應發(fā)生在有大的損傷的位置，或伴隨有主要組織損傷的再生能力較弱的位置，其有可能導致功能障礙。在風濕性關節(jié)炎、動脈硬化、肺結核、慢性肺部疾病等疾病中，長時間發(fā)生的慢性炎癥反應可能是造成致死組織損傷的原因(PathologicalBasisofDisease(疾病病理基礎)，pp47-86,第7版)。另外，有很多文獻公開了炎癥在退行性腦疾病(degenerativebraindisease)的病例生理學方面起到關鍵性作用。在阿爾茨海默病、帕金森病和肌萎縮性脊髓側索硬化癥中，存在于腦中的小膠質(zhì)細胞在神經(jīng)元損傷發(fā)生的位點被激活(LiuB和HongJS.JPharmacolExpTher.2003;304(1):1-7;OrrCF等，ProgNeurobiol.2002;68(5):325-40;和HenkelJS等,AnnNeurol.2004;55(2):221-35)。有活性的小膠質(zhì)細胞產(chǎn)生前列腺素、細胞因子、趨化因子、活性氧和NO等，這些物質(zhì)開始在腦部引起炎癥反應(MinghettiL.CurrOpinNeurol.2005;18(3):315-21;GaoHM,TrendsPharmacolSci.2003;24(8):395-401;WeydtP和MollerT.Neuroreport.2005;16(6):527-31;J丄M.HoozemansInt.J.DeviNeuroscience.2006;24:157-165)。因此，據(jù)報道，通過給予藥物抑制炎癥的方法抑制了阿爾茨海默病動物模型中15-淀粉樣蛋白和鼠疫的產(chǎn)生(TownsendKP和PraticoD.FASEBJ.2005;18:315-21)，保護了帕金森病動物模型中的多巴胺神經(jīng)細胞(FergerB等，NaunynSchmiedebergsArchPharmacol.1999;360(3):256-61;TeismannP,FergerB.Synapse.2001;39(2):167-74)，在肌萎縮性脊髓側索硬化癥才莫型中防止脊髓運動神經(jīng)元的死亡以及減小膠質(zhì)纟田胞的活性(KiaeiM等，JNeurochem.2005;93(2):403-ll)。實際上，在由挫傷等引起腦炎癥反應的患者中，阿爾茨海默病的罹患率很高(BreitnerJC.Neurology.1994;44(2):227-32)，而在長時間給予非甾體抗炎藥(NSAIDs)的風濕性關節(jié)炎患者中阿爾茨海默病的罹患率很低(McGeerPL等.，Lancet.1990;335(8696):1037)。另夕卜，據(jù)報道，給予NSAID不僅預防阿爾茨海默病，還延緩了損傷認知功能的發(fā)展(Rich等.，Neurology.1995)。這些結果表明，藥物抑制炎癥反應可以用于預防和治療退行性腦疾病。NSAIDs是抑制參與產(chǎn)生前列腺素的環(huán)氧合酶活性的藥物，該藥物已經(jīng)研發(fā)并廣泛用于減輕炎癥性疾病包括疼痛在內(nèi)的癥狀，但是由于具有不良反應而阻礙了NSAIDs的應用。特別是，在給予藥物后發(fā)生的不良反應通常為胃腸病，例如消化不良、胃炎、潰瘍、出血和穿孔。實際上，據(jù)報道，僅在美國就有107,000人由于NSAIDs的副作用而住院接受治療，并且有16,500人死亡。選擇性COX-2(環(huán)氣合酶-2)酶抑制劑塞來昔布(Celecoxib)和羅非昔布(Rofecoxib),對于胃腸損傷具有較低的不良反應，已經(jīng)被研發(fā)和用于治療關節(jié)炎和疼痛。但是，據(jù)U.S.FDA報道，長期給予塞來昔布、羅非昔布和伐地昔布(valdecoxib)6可能會導致心臟疾病，因而禁止了這些藥物作為治療關節(jié)炎藥物的使用。此外，由于其安全問題，評價塞來昔布、羅非昔布和伐地昔布對癡呆癥療效的臨床試驗也被中止。另外，在炎癥性疾病中由中性粒細胞、巨嗟細胞、單核細胞等產(chǎn)生的活性氧被認為是導致由介導炎癥反應造成組織損傷的主要原因。事實上，據(jù)報道通過給予藥物來消除活性氧能有效治療由炎癥性疾病產(chǎn)生的下列各種損傷胃損傷(Ma他ewsGM等，Helicobacter.2005;10(4):298-306)、胰腺損傷(ShiC等，Pancreatology.2005;5(4-5):492-500)、動脈粥樣石更化(TardifJC.CurrAtherosclerRep.2005;7(1):71國7)、結腸損傷(OzHS等，JNutrBiochem.2005;16(5):297-304)、關節(jié)損傷(HenrotinYE等，OsteoarthritisCartilage.2003;11(10):747-55)、腎損害(TianN等，Hypertension.2005;45(5):934-9)、流域損傷(riverdamage)(LoguercioC等，F(xiàn)reeRadicBiolMed.2003;34(l):l-10)和心血管損傷(HaidaraMAetal.，CurrVasePharmacol.2006;4(3):215-27)。此外，給予NSAlDs造成活性氧的產(chǎn)生，并且誘導胃粘膜的損傷。據(jù)報道，通過給予抗氧化物質(zhì)，這種胃損傷會有所減少(GrazianiG等，Gut2005;54(2):193-200)。炎癥在消化系統(tǒng)疾病、呼吸系統(tǒng)疾病或神經(jīng)元系統(tǒng)疾病的病理生理學中起到了重要作用，但是由于藥物的不良反應，現(xiàn)有的有效藥物的使用是有限的。作為一種抗炎藥，阿司匹林(乙酰水楊酸)^皮iL為抑制了NF-kB和c-Jun氨基末端激酶的作用(KoHW等，JNeurochem.1998;71(4):1390-5),并且柳氮磺胺吡咬被認為通過其抗氧化活性來保護細胞(RyuBR等，JPharmacolExpTher.2003;305(l):48-56)。然而，還存在一個缺點，阿司匹林和柳氮磺胺吡咬只有在高濃度下才會表現(xiàn)其細胞保護作用
發(fā)明內(nèi)容技術問題有鑒于此，本發(fā)明的目的是提供一種用于治療或預防炎癥性疾病的藥物組合物，該藥物組合物沒有例如胃損傷和心血管病這樣的不良反應；本發(fā)明還提7供了該藥物組合物對炎癥性疾病的治療或預防的用途；本發(fā)明還提供了一種包含給予該組合物在內(nèi)的治療或預防炎癥性疾病的方法。為了實現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明提供了一種用于治療或預防炎癥性疾病的藥物組合物，該藥物組合物的有效成分包括由下列化學式1表示的2-羥基苯曱酸衍生物或其藥學上可接受的鹽[化學式1]其中，n為2到5的整數(shù)；Rj為氫或烷基；R2為氫、烷基或醛基(alkanoyl);R3為氫或乙酰氧基；以及X為獨立的氫、硝基、卣素、烷基、卣代烷基、烷氧基、卣代烷氧基。優(yōu)選的，本發(fā)明的提供的藥物組合物所治療的炎癥性疾病，選自以下列疾病構成的組中的任意一種胃炎、大腸炎、關節(jié)炎、糖尿病炎癥、動脈硬化、腎炎、肝炎、阿爾茨海默病、帕金森病和肌萎縮性脊髓側索硬化癥。本發(fā)明還提供了一種用于治療或預防炎癥性疾病的方法，該方法包括給予患有炎癥性疾病的病人或動物有效治療劑量的、由下列化學式1表示的2-羥基苯曱酸衍生物或其藥學上可接受的鹽。本發(fā)明制備和評價了許多化合物，成功發(fā)現(xiàn)了以下事實2-羥基苯曱酸衍生物或其藥學上可接受的鹽對治療或預防炎癥性疾病更為有效，并且也很安全。以下，將更詳細地說明用于治療或預防炎癥性疾病的藥物組合物，以及治療或預防炎癥性疾病的方法。技術方案本發(fā)明提供了一種新用途，即，由下列化學式1表示的2-羥基苯曱酸衍生物或其藥學上可接受的鹽治療或預防炎癥性疾病的用途，并且還^^供了一種使用2-羥基苯曱酸衍生物或其藥學上可接受的鹽治療或預防炎癥性疾病的方法。-苯曱酸(化合物2)、2-羥基-5-[2-(3-三氟甲基-苯基)-乙氨基]-苯甲酸(化合物3)、5-[2-(3,5-雙-三氟曱基-苯基)-乙氨基]-2-羥基-苯曱酸(化合物4)、2-羥基-5-[2-(2-硝基-笨基)-乙氨基]-苯甲酸(化合物5)、5-[2-(4-氯-苯基)-乙氨基]-2-羥基-苯曱酸(化合物6)、5-[2-(3,4-二氟-苯基)-乙氨基]-2-羥基-苯甲酸(化合物7)、5-[2-(3,4-二氯-笨基)-乙氨基]-2-羥基-苯甲酸(化合物8)、5-[2-(4-氟-2-三氟曱基-苯基)-乙氨基]-2-羥基-苯甲酸(化合物9)、5-[2-(2-氟-4-三氟甲基-苯基)-乙氨基]-2-羥基-苯曱酸(化合物10)、2-羥基-5-[2-(4-曱氧基-苯基)-乙氨基]-苯甲酸(化合物11)、2-羥基-5-(2-0-甲苯基-乙氨基)-苯曱酸(化合物12)、2-羥基-5-(3-苯基-丙氨基)-苯曱酸(化合物13)、2-羥基-5-[3-(4-三氟曱基-苯基)-丙氨基]-苯曱酸(化合物14)、5-[3-(4-氟-苯基)-丙氨基]-2-羥基-苯曱酸(化合物15)、5-[3-(3，4-二氯-笨基)-丙氨基]-2-羥基-苯曱酸(化合物16)、2-羥基-5-(3-p-曱苯基-丙氨基)-苯甲酸(化合物17)、2-乙酰氧基_5_[2—(4-三氟甲基_苯基)_乙氨基]-苯甲酸(化合物18)、5-[2-(2-氯-苯基)-乙氨基]_2_羥基_苯曱酸(化合物19)。在上述優(yōu)選化合物中，作為治療炎癥性疾病的治療劑，2-羥基-5-[2-(4-三氟曱基-苯基)-乙氨基]-苯曱酸(化合物2)和2-乙酰氧基-5-[2-(4-三氟曱基-苯基)-乙氨基]-苯甲酸(化合物18)比其他2-羥基苯甲酸衍生物更為優(yōu)選。特別是，當用于治療細胞損傷和退行性腦疾病的炎癥時，化合物2比其他2-羥基苯曱酸衍生物更為優(yōu)選。與一些具有類似化學結構的化合物相比，化合物2顯示出更好的抗炎癥作用和對fJ-淀粉樣蛋白的產(chǎn)生更好的抑制效果。當僅考慮類似對NO的產(chǎn)生的抑制作用這樣的一項試驗時，即使有些化合物顯示出比化合物2更好的效果，但是由于該化合物在其他試驗中表現(xiàn)出相關的較差作用，故作為治療退行性腦病的治療劑，比不上化合物2(例如，一些化合物對NO的產(chǎn)生顯示出比化合物2更好的抑制作用，但是這些化合物對fi-淀粉樣蛋白的產(chǎn)生表現(xiàn)出非常弱的抑制作用，而！5-淀粉樣蛋白對于治療退^f亍性腦病是非常重要的因素)。另外，一些化合物雖然在所有藥效試驗中都表現(xiàn)出很好的療效，但是與化合物2相比，在以下的毒性試驗中表現(xiàn)出較差的安全性結果。同樣地，在優(yōu)選的化合物中，化合物18在治療炎癥性疾病方面比其他2-羥基笨甲酸衍生物更為優(yōu)選。與具有類似化學結構的化合物相比，化合物18在抗炎藥效試驗中表現(xiàn)出更優(yōu)秀的效果，但在下列毒性試驗中化合物2比化合物18更為優(yōu)選。本發(fā)明的2-羥基苯曱酸衍生物可通過但不限于下列反應方案制備。本發(fā)明的2-羥基苯曱酸衍生物也可通過現(xiàn)有技術中已知的常規(guī)合成方法來制備。<反應方案1><formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>反應條件三乙胺，四丁基嫌化銨，N,N-二曱基甲酰胺，室溫，3小時<反應方案2><formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>反應條件(a)乙醇，H2S04,回流，6小時；(b)乙酸酐，曱醇，0°C,30分鐘；(c)乙酸酐，H2S04，0°C,30分鐘另夕卜，本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例中，2-羥基-5-[2-(4-三氟曱基-苯基)-乙氨基]-苯曱酸(化合物2)可通過但不限于下列反應方案3制備。<反應方案3〉<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>化肉桂酸，PC15，二甲苯，回流，12小時；(b)乙酰氯，DMF/K2C03，室溫，2小時；(c)NaBH4,乙H，4-二氧六環(huán)，95°C,50分鐘；(d)HCl/H20，乙酸本發(fā)明涉及的"藥學上可接受的鹽"是指由無毒或毒性小的堿生成的鹽。如果本發(fā)明的化合物是酸性的，可通過使該化合物的游離堿與足量的想要的堿以及充足的惰性溶劑反應，來制備本發(fā)明的化合物的堿加成鹽。藥學上可接受的堿加成鹽包括但不限于鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、銨鹽、鎂鹽或由有機氨制成的鹽。如果本發(fā)明的化合物是堿性的，可通過使該化合物的游離堿與足量并適當?shù)乃岷统渥愕亩栊匀軇┓磻?，來制備該化合物的酸加成鹽。藥學上可接受的酸加成鹽包括但不限于丙酸鹽、異丁酸鹽、草酸鹽、蘋果酸鹽、丙二酸鹽、苯甲酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、富馬酸鹽、扁桃酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、曱基磺酸鹽、鹽酸鹽、溴酸鹽、硝酸鹽、碳酸鹽、碳酸氫鹽、磷酸鹽、磷酸一氫鹽、磷酸二氫鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、氬^f典酸鹽和亞磷酸鹽。另外，本發(fā)明的藥學上可接受的鹽包括但不限于氨基酸鹽，例如精氨酸鹽；以及有機酸鹽的類似物，例如葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸(galactunoric)。例如，本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例中，2-羥基-5-[2-(4-三氟甲基-苯基)-乙氨基]-苯甲酸(化合物2)的一種藥學上可接受的鹽可通過下列反應方案4來制備。但是，下列反應方法是說明性的，并非用來限制本發(fā)明的范圍。<反應方案4>12在該反應方案中，M為藥學上可接受的金屬或堿性有機化合物，例如二乙胺、鋰、鈉和鉀。更詳細地，二乙胺鹽可采用下列方法制備將化合物溶解于乙醇中，滴加二乙胺，攪拌混合物，真空蒸餾，加入醚而使殘留物質(zhì)結晶。堿金屬鹽可通過下列方法制備在溶劑中用無機試劑制備適當?shù)柠}，之后經(jīng)冷凍干燥，所述無機試劑例如可為氫氧化4里、氫氧化鈉、氫氧化鉀，所述)容劑例如可為乙醇、丙酮、乙腈。另外，依照類似的方法，鋰鹽可用醋酸鋰制備，鈉鹽可用2-乙基己酸鈉或醋酸鈉制備，鉀鹽可用醋酸鉀制備。本發(fā)明的一些化合物可為水合式，并且能以溶劑化形態(tài)或非溶劑化形態(tài)存在。根據(jù)本發(fā)明得到的一部分化合物以晶型或非晶型存在，并且任何物質(zhì)形態(tài)都被包含于本發(fā)明的范圍內(nèi)。另外，本發(fā)明的一些化合物可能包含了一個或更多個的不對稱碳原子或雙鍵，因此，會存以兩個或更多的立體異構形態(tài)存在，例如外消旋體、對映體、非對映異構體、幾何異構體等。本發(fā)明包括了這些本發(fā)明的化合物單獨的立體異構體。本發(fā)明也提供了一種藥物組合物，該藥物組合物包含由上述化學式1表示的2-羥基苯甲酸衍生物或其藥學上可接受的鹽，以及藥學上可接受的賦形劑或添加劑。本發(fā)明的化合物或其藥學上可接受的鹽可單獨給藥，或者與任何便利的載體或稀釋劑等一同給藥，并且給藥的劑型可以是單劑量單位或者多劑量單位。本發(fā)明的藥物組合物能以固體形態(tài)或液體形態(tài)給藥。固體劑型包括粉末、顆粒、片劑、膠囊、栓劑等，但并非僅限于此。并且，固體劑型還可以進一步包括稀釋劑、增味劑、粘結劑、防腐劑、崩解劑、潤滑劑、填料等，但并非僅限于此。液體劑型包括^象水溶液和丙二醇溶液這樣的溶液、懸浮液、乳劑等，但并非僅限于此，還可以通過添加適當?shù)奶砑觿﹣碇苽洌鎏砑觿├缈蔀橹珓?、增味劑、穩(wěn)定劑、增稠劑等。例如，粉末可通過簡單地混合本發(fā)明的2-羥基苯曱酸衍生物和藥學上可接受的賦形劑來制備，其中藥學上可接受的賦形劑例如可為乳糖、淀粉、微晶纖維素。顆?？捎上铝蟹椒ㄖ苽浠旌匣衔锘蚱渌帉W上可接受的鹽、藥學上可接受的稀釋劑和藥學上可接受的粘結劑；用適當?shù)娜軇┻M行濕法造粒，或用壓縮力進行直接壓縮。其中，藥學上可接受的粘結劑例如可為聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基纖維素，適當?shù)娜軇├缈蔀樗?、乙醇、異丙醇等。另外，片劑可通過用像硬脂酸鎂這樣的藥學上可接受的潤滑劑來混合顆粒，再對混合物進4亍壓片而制成。根據(jù)要治療的疾病和病人的狀態(tài)，本發(fā)明的藥物組合物可以采用但不限于下列形式給藥口服制劑、注射劑(例如肌肉、腹腔、靜脈、灌注、皮下、植入)、吸入、鼻腔、陰道、直腸、舌下、透皮、局部等，。根據(jù)給藥途徑，本發(fā)明的組合物可制備成適當劑量單位，其包括可藥用并且無毒的載體、添加劑和/或賦形劑，這些物質(zhì)均常在現(xiàn)有技術中使用。本發(fā)明的范圍還包括能夠在適當時間內(nèi)持續(xù)釋放藥物的儲存型制劑(Depottypeofformulation)。本發(fā)明還提供了2-羥基苯曱酸衍生物或其藥學上可接受的鹽用于治療和/或預防炎癥性疾病的用途。即，本發(fā)明提供了一種用于治療或預防炎癥性疾病的藥物組合物，該藥物組合物包含由上述化學式1表示的2-羥基笨曱酸衍生物或其藥學上可接受的鹽。更明確地，2-羥基苯曱酸衍生物或其藥學上可接受的鹽可用于治療或預防下列疾病胃炎、胃潰瘍、胰腺炎、大腸炎、關節(jié)炎、糖尿病、動脈硬化、腎炎和肝炎，以及細胞損傷或在退行性腦病中產(chǎn)生的炎癥，例如阿爾茨海默病、帕金森病和肌萎縮性脊髓側索硬化癥。但是，根據(jù)本發(fā)明，2-羥基苯曱酸衍生物或其藥學上可接受的鹽的用途并非僅限于上述具體疾病的名稱。為了治療炎癥性疾病，本發(fā)明的化合物可采用每日給藥的方式，給藥劑量為大約0.01mg/kg至大約100g/kg，優(yōu)選為大約0.1mg/kg至大約10g/kg。但是，也可根據(jù)患者的條件(年齡、性別、體重等)、患者嚴重程度的需要、使用的有效成分、飲食等情況而采用各種不同的給藥劑量。根據(jù)需要，本發(fā)明的化合物可以每日給藥一次或每日若干次分次給藥。附圖簡述圖1表示化合物2沒有對胃粘膜造成損傷，表明化合物2是安全的。通過口服給予不同劑量的測試樣品來評價胃粘膜損傷的程度。將阿司匹林作為對照O口O0圖2表示胃粘膜損傷程度的結果。以所說明的劑量口服測試樣品。高劑量的化合物18沒有對胃粘膜造成損傷。將吲咮美辛(Indomethacine)、布洛芬(ibuprofen)以及塞來昔布(celecoxib)作為對照品。圖3表示化合物2對由幽門螺桿菌(Helicobacter)誘導的胃粘膜損傷的細胞保護作用的結果。將幽門螺桿菌(43504，5xl()ScfWml)單獨或與具有所說明濃度的樣品來一起加入到培養(yǎng)的AGS(人胃癌)細胞中。加入后24小時，用MTT法測定胃粘膜細胞的存活率。圖4表示化合物2對由舒林酸(sulindac)(—種NSAID)誘導的胃粘膜損傷的細胞保護作用的結果。將100pM的舒林酸單獨或與具有所說明濃度的樣品一起加入到培養(yǎng)的AGS細胞中。加入后16小時，用MTT法測定胃粘膜細胞的存活率。圖5表示化合物2對由H202(氧化應激)誘導的胃粘膜損傷的細胞保護作用的結果。單獨使用或與具有所說明濃度的樣品一起使用10(VMH202來處理培養(yǎng)的AGS細胞8小時，，并用培養(yǎng)基洗滌。24小時后用MTT法測定胃粘膜細胞的存活率。圖6表示化合物2對由酒精(乙醇)誘導的胃粘膜損傷的細胞保護作用的結果。單獨使用或與具有所說明濃度的樣品一起使用25mM乙醇來處理培養(yǎng)的AGS細胞24小時，。然后用MTT法測定胃粘膜細胞的存活率。圖7是表示TNF-amRNA表達程度的照片。將培養(yǎng)的AGS細胞，單獨使用或與具有所說明濃度的化合物2—起使用25mM乙醇處理24小時。然后提取mRNA，并用RT-PCR法進行測定。圖8表示化合物2對乙醇/鹽酸(EtOH/HCl)誘導的消化道出血的保護作用的結果。A是正常大鼠胃的照片。B是對200250g大鼠禁食24小時后口服給予60%EtOH/150mMHC1造成消化道出血的大鼠胃的照片。C是在給予大鼠乙醇/鹽酸之前30分鐘預先給予化合物2,并在消化道出血90分鐘后取出大鼠胃的照片。D是通過定量損傷區(qū)域來評價胃損傷程度的圖表。圖9表示化合物2對酒精性胃炎的保護作用的結果。A是正常大鼠胃的照片。B是對250g大鼠禁食24小時后口服給予乙醇(4ml/kg)造成消化道出血的大鼠胃的照片。C是在誘導消化道出血之前1小時預先給予化合物2，并在消化道出血90分鐘后取出大鼠胃的照片。D是對胃損傷程度進行定量的圖表。圖10表示化合物2對NSAID誘導的胃炎的保護作用的結果。對250g大鼠禁食24小時后，口服給予吲哚美辛造成消化道出血(A和C)。NSAID誘導消化道出血之前1小時預先給予化合物2(B和D),并在消化道出血6小時(A和B)或12小時(C和D)后取出大鼠胃。圖ll是通過角叉菜膠誘導的熱痛覺過敏(一種關節(jié)炎動物模型)考察化合物2有效性的結果。對大鼠足跖皮內(nèi)注射2%角叉菜膠誘導熱痛覺過敏。口服給予化合物2(B和D),將布洛芬作為對照品。圖12是通過酵母聚糖(zymosan)誘導的TNF-a水平(一種關節(jié)炎動物才莫型)考察化合物2有效性的結果。用氣嚢(airpouch)給予大鼠1%酵母聚糖，并在給予酵母聚糖之前1小時按指示劑量口服給予化合物2。4小時后用ELISA法測定氣嚢滲出物中的TNF-a水平。圖13是表示化合物2對酵母聚糖誘導的IL-la水平(一種關節(jié)炎動物才莫型)減少程度的圖表。用氣嚢給予大鼠1%酵母聚糖，并在給予酵母聚糖之前l(fā)小時按指示劑量口服給予化合物2。4小時后用ELISA法測定氣囊滲出物中的IL-la水平。圖14是通過膠原(collagen)誘導的關節(jié)炎動物模型考察有效性的結果。圖14顯示了"交原導致的足肺脹。假手術正常小鼠膠原給予膠原的小鼠化合物18:腹腔注射25mg/kg化合物18的小鼠圖15是通過膠原誘導的關節(jié)炎動物模型考察有效性的結果。在給予膠原后，腹腔注射25mg/kg化合物2、3、18以及曱氨嘌呤(對照，MTX,lmg/kg/week)。然后棵眼觀察小鼠4周，并用關節(jié)炎指標評價結果。圖16是通過膠原誘導的關節(jié)炎動物模型考察化合物6和ll有效性的結果。隔兩周皮內(nèi)注射膠原兩次。一周后，腹腔注射化合物6、化合物11和曱氨嘌呤(對照)。然后，每天觀察動物23周，并用關節(jié)炎指標評價結果。圖17是通過5%葡聚糖硫酸鈉(DDS)模型(炎性腸病動物模型)考察有效性的結果。用DDS處理后，口服10、25和50mg/kg的懸浮于于10%載體中的化合物18。假手術表示正常小鼠的結腸，DSS表示用5%DSS處理后的小鼠結腸。其它的是給予指示劑量化合物18的小鼠結腸照片。圖18和圖19對圖17的結果進行定量的圖表。圖18是結腸的長度，圖19是結腸的寬度。圖20是使用DSS考察化合物18有效性的測試結果。在用DDS處理后，口服給予混懸于10%介質(zhì)中的化合物18(25mg/kg)。然后，將結腸損傷導致的血<更(bloodyexcrement)、腹瀉和污穢(dirtiness)的程度作為糞^更評分(fecesscore)來進行評價。圖21是使用雨蛙肽(cerulein)誘導的急性胰腺炎模型考察有效性的測試結果。給予50|ig/kg雨蛙肽。2小時后，給予LPS誘導腫脹。A-C是結果圖，D是表示胰腺重量的圖表。A:正常Wistar大鼠B:纟會予雨蛙肽的Wistar大鼠C:給予化合物18(25mg/kg)的Wistar大鼠圖22是使用雨蛙肽誘導的急性胰腺炎模型考察有效性的測試結果。給予50lig/kg雨蛙肽。2小時后，給予LPS誘導肺脹。然后給予25mg/kg化合物18,并對淀粉酶和脂肪酶這兩種胰消化酶的變化進行定量。圖23和24是使用雨蛙肽誘導的胰腺炎模型考察有效性的測試結果。給予50pg/kg雨蛙肽。評價本發(fā)明2-羥基苯甲酸衍生物對炎癥標志物TNF-a,IL-113andPGE2的作用。圖25是表示10.5個月大的APP/PS1老年癡呆小鼠(dementiamouse)(Tg+)腦中的TNF-a、IL-1J3及IL-6水平的圖表。該水平是使用ELISA法測定的。用混合了化合物2(25mg/kg/day)或布洛芬(62.5mg/kg/day)的飼料，將3個月大的小鼠喂養(yǎng)7個月。圖26是表示化合物2對腦血管屏障(brain-bloodvesselbarrier)的保護作用的照片(低和高的放大倍率)。A:正常小鼠B/F:APP/PS1老年癡呆小鼠C/G:給予化合物2的小鼠(25mg/kg/day)D/H:給予布洛芬的小鼠(62.5mg/kg/day圖27是表示10.5個月大的正常小鼠(A)、10.5個月大的APP/PS1老年癡呆d、鼠(B，Tg+)腦中產(chǎn)生的淀粉樣蛋白斑塊(amyloidplaque)的照片。APP/PS1老年癡呆小鼠是用混合了化合物2(25mg/kg/d,C)或布洛芬(62.5mg/kg/d,D)的飼料，將3.5個月大的小鼠喂養(yǎng)7個月后的小鼠。使用硫代磺色素S(Thioflavin-Spigment)著色。E是對A-D的結果進行定量的圖表。圖28是表示對10.5個月大的正常小鼠、10.5個月大的APP/PS1老年癡呆小鼠以及用混合了化合物2(25mg/kg/d)的飼料將3.5個月大的小鼠喂養(yǎng)7個月的APP/PS1老年癡呆小鼠進行高架十字迷宮實驗的實驗結果。記錄在開臂內(nèi)的停留時間，并作為有效性結果。圖29是表示G93A小鼠小膠質(zhì)細胞(一種炎癥標志物)活性的照片。用番茄凝集素對結果進行免疫組化染色。A:正常小鼠B:G93A小鼠C:給予化合物2(5mg/kg/day)的G93A小鼠圖30是表示G93A小鼠炎性細胞因子(TNF-aandIL-1B)(—種炎癥標志物)的mRNA水平的結果。試驗中使用了RT-PCR法(逆轉錄-聚合酶鏈式反應)。圖31是表示化合物2在帕金森病動物模型中對炎癥抑制作用的照片。用CD1lb對結果進行免疫組化染色。A:給予MPTP的小鼠B:給予化合物2(50mg/kg/d)的小鼠圖32是根據(jù)本發(fā)明對多個2-輕基苯甲酸衍生物進行單劑量毒性試驗的結果。實施發(fā)明的方式以下，為了幫助本領域技術人員理解本發(fā)明，將對本發(fā)明進行非常詳細地說明。但是以下提出的實施例是說明性的，且并非限制本發(fā)明的范圍。明顯地，在不背離本發(fā)明的本質(zhì)和不超出本發(fā)明的范圍，或者不損害其所有的實質(zhì)性優(yōu)點的情況下，可以對本發(fā)明作出各種修改。<合成實施例1>2-羥基-5-(4-(三氟曱基-苯基)-乙氨基)苯曱酸(化合物2)的制備在室溫和氮氣環(huán)境下，將5-氨基水楊酸(0.51g，3.90毫摩爾)加入到N,N-二甲基曱酰胺(20.0ml)中，并攪拌反應混合物。然后加入三乙胺(0.50ml)和四丁基碘化銨(10.1mg),攪拌30分鐘。再加入l-(2-(溴乙基)-4-三氟曱基)苯，室溫下攪拌3小時。加冰終止反應。過濾產(chǎn)生的晶體，再次用丙酮和己烷攪拌，并再次過濾。然后將過濾后的固體用醋酸乙酯溶解，再用0.5N鹽酸和鹽水洗滌，用無水硫酸鎂干燥，并真空蒸餾，得到0.54g(收率21%)2-羥基-5-(4-(三氟曱基-苯基)-乙氨基)笨甲酸。'HNMR(DMSO-d6):7.62(d,2H)，7.48(d,2H),6.98(d，1H)，6.88(q,1H),6.76(d,1H),3.24(t，2H),2.91(t，2H)<合成實施例2>2-羥基-5-[2-(4-三氟曱基-苯基)-乙氨基]-苯甲酸鉀鹽的制備向合成實施例1中制備的2-羥基-5-[2-(4-三氟曱基-苯基)-乙氨基]-苯曱酸19(10g,30.7毫摩爾)中加入無水乙醇(100ml),并加熱到50°C至完全溶解。再將溶液冷卻至0。C。然后用85%氫氧化鐘(2.03g,30.7毫摩爾)和無水乙醇(20ml)溶液調(diào)pH至6.8~7.0，并在室溫下攪拌2小時。過濾并干燥析出的晶體，得到10.4g(收率93%)2-羥基-5-(4-(三氟曱基)苯乙氨基)苯甲酸鉀鹽。力NMR(DMSO-d6):7.62(d,2H)，7.48(d，2H),6.98(d,1H),6.90(q，1H),6.84(d,1H),3.24(t,2H)，2.91(t,2H)<合成實施例3>2-羥基-5-[2-(4-硝基苯)乙氨基]-苯曱酸的制備按照與合成實施例l相似的步驟，通過使用5-氨基水楊酸(500mg,3.26毫摩爾)和4-硝基苯溴乙烷(900mg,3.92毫摩爾)，獲得890mg(收率50%)2-羥基-5-[2-(4-硝基苯)乙氨基]-苯曱酸淡黃色固體。熔點234-236°C。<:151114>1205的元素分析<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table><合成實施例4>2-羥基-5-[3-(4-硝基苯)-n-丙氨基]-苯曱酸的制備按照與合成實施例1相似的步驟，通過使用5-氨基水楊酸(500mg,3.26毫摩爾)和3-(4-硝基苯)溴丙烷(950mg，3.92毫摩爾)，獲得520mg(收率50%)2-羥基-5-[3-(4-硝基笨)-n-丙氨基]-苯曱酸淡黃色固體。熔點229-231°C。(:161116化05的元素分析[表2]<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>〈合成實施例5>按照與合成實施例l相似的步驟來制備其它化合物。分析結果如表3所示。[表3]<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>化合物47.97(s,2H),7.88(s,1H),7.28(s,1H)，7.15(t，1H),6.82(d,1H),3.42(t,2H),3.09(t,2H)化合物57.91(d，1H),7.58(t,1H),7.51(d,1H),7.43(t，1H)，7.10(d,1H)，6.64(q,1H)，6.51(d,1H),3.21(t,2H),3.04(t,2H)化合物67.31(d，2H)，7.26(d,2H)，7.05(s,1H)，6.58(d，1H)，6.49(d,1H)，3.18(t，2H),2.81(t,2H)化合物77.31(m,2H),7.11(s,1H)，6.94(d,1H),6.87(d,1H),6.74(d,1H)，3.17(t,2H),2.87(t，2H)化合物87.51(q,2H),7.19(d,1H),6.97(t,1H),6.75(t，1H)，6.44(d，1H)，3.22(t,2H)，2.91(t,2H)化合物97.94(s,1H),7.64(q,2H),7.45(q,2H)，7.10(d，1H)，3.48(t，2H),3.21(t,2H)化合物107.83(t,1H),7.64(d,1H),7.35(t，1H)，6.96(q，1H)，6.52(t,1H),3.20(t，2H)，3.11(t，2H)化合物117.32(d，1H)，7.14(d，2H),6.82(d,2H)，6.78(q,1H),6.64(d,1H)，3.79(s,3H),3.24(t,2H),2.80(t，2H)化合物127.21-7.11(m,5H),6.93(d,1H)，6.78(d,1H)3.17(t,2H)，2.82(t，2H)化合物137.27-7.11(m，5H),6.95(d,1H),6.81(q,1H)，6.70(m,1H),2.97(t，2H),2.64(t，2H),1.82(m,2H)化合物147.61(d,2H),7.43(d,2H)，6.97(s,1H),6.85(t，1H),6.78(d，1H),3.04(t，2H)，2.78(t,2H)，1.87(m,2H)化合物157.17(t，3H),7.02(t,2H)，6.94(d,1H)，6.78(d,1H),2.99(t,2H),2.63(t,2H)，1.82(m,2H)化合物167.45(q,2H),7.15(d,1H),7.05(d,1H),6.92(q,1H)，6.77(d1H)，2.96(t,2H),2.66(t,2H),1.82(m，2H)化合物177.32(s,1H),7.18(d,1H),7.06(s,4H),6.84(d，1H)，3.01(t，2H),2.61(t,2H)，2.20(s，3H),1.83(m,2H)<合成實施例6〉2-乙酰氧基-5-[2-(4-三氟曱基-苯基)-乙氨基]-苯甲酸(化合物18)的制備通過以下反應方案來制備化合物18?；衔颾化合物18化合物a:室溫下，向溶于200mL^120:1,4-二惡烷(l:l)溶液的化合物2(50.0g,154毫摩爾)溶液中加入Na2C03(32.6g,307毫摩爾)、雙碳酸二叔丁酯(40.3g,185毫摩爾)。攪拌8小時后，再加入另外的雙碳酸二叔丁酯(16.8g,76.9毫摩爾)。室溫下再攪拌8小時后，用2NHC1水溶液中和反應混合物(pH~6)。之后用乙酸乙酯(2x200mL)萃取得到的混合物。合并有機相并用鹽水(100mL)洗滌，再用MgS04干燥并過濾。濃縮得到黃色泡沫化合物a。粗提物a不進行進一步純化。&畫R(400MHz,CDC13)S10.52(1H,brS),7.53(d,2H,/=8Hz),7.53(br,1H)，7.28(d,2H,/=8Hz),7.26(br，1H)，6.94(d，1H,8.8Hz)，3.85(t,2H,/=7.2Hz),2.94(t，2H,/=7.2Hz)，1.43(brs,9H).化合物b:(TC下，向溶于二氯曱烷(200mL)的由上述方法得到的化合物a溶液中加入A^V-二異丙基乙胺(80.3mL，461毫摩爾)和乙酰氯(21.9mL，307毫摩爾)。將反應混合物加熱至室溫并攪拌5小時。然后將1NHC1(100mL)水溶液加入反應混合物中。溶液分層后用二氯曱烷(100mL)萃取水層。合并有機相并用鹽水(100mL)洗滌，再用MgS04干燥、過濾并濃縮。之后在二乙醚中重結晶粗產(chǎn)物，得到白色固體22(51.5g,兩個步驟71.7%)。!H畫R(400MHz,CDC13)S7.82(brs,1H),7.54(d,2H,/=8Hz),7.38-7.24(m，1H),7.28(d,1H,J=8Hz),7.08(d，1H，/=7.6Hz),3.91(t，2H,/=7.2Hz),2.98(t，2H，7.2Hz)，2.34(s,3H),1.42(brs,9H).化合物18:(TC下，用溶于1，4-二惡烷(200mL)的4NHC1溶液處理溶于二氯曱烷(200mL)的化合物b(51.5g,110毫摩爾)溶液。將反應混合物加熱至室溫。攪拌5小時后濃縮懸浮液。在二乙醚(500mL)中磨碎(triturate)殘余物。過濾，并用二氯曱烷(500mL)和二乙醚(500mL)洗滌，得到白色固體化合物18(46.0g,82.5mmol,92.3%)。麗R(400MHz,DMSO-d6)S7.66(d,2H,/=7.6Hz),7.52(d,2H，《/=7.6Hz),7.15(s，1H),6.91(d,1H，《/=8.6Hz),6.85(d,1H，8.6Hz),3.32(t,2H,/=7Hz),2.95(t,2H,/=7Hz)，2.18(s，3H));LCMScalc.C18H16F3N04(M+H+):368，測定值368.22<實施例1>細胞中的抗炎癥作用1-1.對NO產(chǎn)生的抑制作用制作用。BV2小膠質(zhì)細胞系采用誘導細胞毒性的脂多糖(LPS)處理，同時加入1030或者100的本發(fā)明化合物。24小時醉育后，將50pl培養(yǎng)液收集于96孔板中。然后加入50^格里斯試劑，室溫賻育10分鐘。ELISA檢測儀測定540nm的吸光值。每個化合物的ICso值經(jīng)過計算，結果見下表4("NO"在"BV"中)。如表4所示，化合物9和14的IC5o值分別為1.79pM和6.7這些值處于最高的水平。IC5o值用于評價對NO產(chǎn)物的抑制作用時，大多數(shù)化合物的值都比100pM低。如結果所示，本發(fā)明的2-羥基苯曱酸衍生物可以作為抗炎癥試劑，因為化合物抑制了NO誘導的炎癥反應。1-2對基因表達的抑制作用2-羥基苯曱酸衍生物對BV2細胞系中iNOS基因表達的抑制作用進行了評估。1x106BV2細胞系的細胞在100mm皿培養(yǎng)，采用炎癥誘導物質(zhì)的脂多糖和本發(fā)明110(VM的2-羥基苯甲酸衍生物同時處理，濃度為常規(guī)的濃度區(qū)間。經(jīng)過24小時的孵育，提取RNA。提取得到的RNA用于逆轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)，基因表達對照組為肺瘤壞死因子TNF-a、IL-ll3和iNOS。結果見下表4。如表4所見，炎性細胞因子的基因表達與對照(LPS)相比，化合物2使TNF-a基因的表達減少了63.24%，化合物8使其減少77.05%，化合物9使其減少61.67%?；衔?使IL-lfi基因的表達減少了75.1%,化合物5使其減少67.7%。化合物8、9、10和14使其減少超過50%。而且，化合物2，5,8,10,15和17抑制iNOS基因的表達超過50%。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>、"ND"表示"未確定"。1-3對細胞因子產(chǎn)物的抑制作用2-羥基苯甲酸衍生物對BV2細胞系中細胞因子產(chǎn)物的作用進行了評估。1x106BV2細胞系的細胞接種于24孔板，采用炎癥誘導物質(zhì)的脂多糖和1OOuM樣本(2-羥基苯曱酸衍生物或者對照藥)同時處理。經(jīng)過24小時的孵育，收集培養(yǎng)液。培養(yǎng)液中細胞因子TNF-a和IL-6的水平采用ELISA的方法測定。結果見下表5。如表5所示，TNF-a水平與對照(LPS)相比，化合物2使TNF-a的產(chǎn)生減少了62.26%，化合物34吏其減少31.90%,化合物14使其減少62.6%。然而，相同濃度的對照藥(布洛芬和阿司匹林)并未顯示出相同的減少效果。類似的，化合物也使IL-6產(chǎn)生的水平顯著減少，但布洛芬和阿司匹林只減少了IL-6極其少的部分。表5<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>表5中，"ND"表示"未確定"。<實施例2〉基本毒性試驗2-羥基苯曱酸衍生物的單劑量毒性被進行評估。結果如圖32所示。如圖32所示，本發(fā)明的較優(yōu)例，化合物2和18的LD5。超過3g/kg,這說明化合物是安全的?；瘜W物19的035()為0.5-1g/kg,化學物19的安全性較差。另外，化合物4顯示出較好的抗炎癥效果等，但化合物4在毒性試驗中沒有顯示劑量依賴結果，因為它在3g/kg的劑量試驗中引起小鼠的猝死?；衔?和14與化合物2有類似的化學結構，也在抗炎癥試驗中表現(xiàn)出與化合物2類似的治療效果，但顯示出較強的毒性或與劑量無關的毒性。<實施例3>關于誘導胃粘膜損傷的安全性試驗傳統(tǒng)的非甾體抗炎藥具有兩面性，會引起胃粘膜的損傷。因此，化合物2是否在抗炎癥的同時引起胃粘膜損傷被進4亍評估。30,100或300mg/kg的阿司匹林口服作為對照組。本發(fā)明的化合物2甚至在口服1000mg/kg時也未引起胃粘膜損傷。由此可見，本發(fā)明的2-羥基苯甲酸衍生物相信是非常安全的(圖1)。另外，化合物18的安全性也進行了評估，對照是p引，味美辛和布洛芬(其他的非甾體抗炎藥)和塞來昔布(一種選擇性COX-2抑制劑)?；衔?8在口服大劑量時也未引起胃粘膜損傷(圖2)。<實施例4>細胞保護作用本發(fā)明2-羥基苯曱酸衍生物的細胞保護作用被進行評估。AGS細胞系(人胃癌細胞，lx105細胞)接種于96孔板。分別經(jīng)過24小時的幽門螺桿菌的處理(圖3)、16小時的舒林酸(sulindoc)處理(圖4)，8小時恥2處理(圖5)，或24小時酒精處理(圖6)引發(fā)胃粘膜的死亡。另外，一些AGS細胞系一起用1OuM,30uM或1OOuM的化合物2處理。這些細胞孵育24小時。四曱基偶氮唑鹽液加入到每一個孔中，37。C孵育4小時。之后，用ELISA檢測儀測定吸光值，計算胃粘膜細胞存活率。結果，1uM和10uM化合物2表現(xiàn)出超過50%的細胞保護作用，100uM的化合物2在大多數(shù)細胞致死模型中表現(xiàn)出超過70%的細胞保護效果。作為炎癥的一個標志，TNF-amRNA的表達水平通過RT-PCR的方法測定。樣品經(jīng)過24小時處理后待用。1~100uM的化合物2徹底抑制TNF-amRNA的表達(圖7)。從這些結果中可以看出，本發(fā)明2-羥基苯曱酸衍生物對炎癥疾病具有有效的抑制作用，特別對胃部由各種原因引起的細胞保護和炎癥抑制。另外，本發(fā)明2-羥基笨甲酸衍生物表現(xiàn)出比膜固思達和PPI更好的效果，膜固思達和PPI作為治療炎癥的試劑而廣為人知。<實施例5〉胃腸道出血的保護效果5-1鹽酸和酒精引起的胃炎2-羥基苯曱酸衍生物對酒精和鹽酸引起的胃炎的作用進行評估。200250gSD雄性大鼠禁食24小時，口服60%EtOH/150mMHC1以誘導胃出血(胃損傷)?；衔?根據(jù)預防劑量，于胃出血前30分鐘口服，胃出血后90分鐘檢測胃損傷程度。結果，化合物2保護胃出血量的減少，也沒有表現(xiàn)出任何毒性。結果見圖8。5-2酒精性胃炎2-羥基苯曱酸衍生物對酒精性胃炎的作用進行評估。250g的大鼠禁食24小時，口服酒精以引起胃出血(B)。部分大鼠在口服酒精前1小時采用化合物2預處理，這些大鼠表現(xiàn)出顯著的出血量減少(D)。從這些結果可以看出，本發(fā)明的化合物2對酒精性胃炎具有強的保護作用。治療酒精性胃炎比治療其他原因引起的胃炎難，因為采用抑制胃液分泌或者加強胃保護因子都不容易。這是因為酒精引起各種疾病包括直接介導毒性和炎癥，包括出血等。本發(fā)明化合物2被認為顯著減少這種類型的酒精直接毒性。5-3非甾體抗炎藥引起的胃炎2-羥基苯曱酸衍生物對非甾體抗炎藥引起的胃炎的作用進行評估。在由非甾體抗炎藥(indomethacine消炎痛)施用6小時引起的弱胃損傷才莫型(圖10中A),和由indomethacine施用12小時引起的弱胃損傷模型(圖10中C),化合物2在胃(圖10中B和D)表現(xiàn)出卓越的保護效果。<實施例6>動物關節(jié)炎模型的功效試驗6-l卡拉膠誘導炎癥一莫型止痛效果的評估作為2-羥基苯曱酸衍生物的一個例，化合物2的止痛效果通過關節(jié)炎模型來評估。2%卡拉膠皮內(nèi)注射入大鼠的左足，口服3-300mg/kg的化合物2以檢測化合物2在熱痛覺過^:關節(jié)炎it型中的效果。結果見圖10。化合物2減少了在劑量依賴模式中的熱痛覺過敏。300mg/kg的化合物2減少熱痛覺過敏超過90%。另外，50mg/kg的布洛芬的減少效果，與100mg化合物處理的效果水平相當。6-2酵母多糖誘導的炎癥模型:細胞因子的評估化合物2的抗炎癥效果在酵母多糖引起的關節(jié)炎模型中被評估。0.5ml的1%酵母多糖和airpouch—起施用，在施用酵母多糖的1小時前口服3-300mg/kg化合物2。水腫，關節(jié)炎的一個主要癥狀，和細胞因子水平在4小時后觀測到。結果，超過30mg/kg的化合物2減少TNF-alpha的水平優(yōu)于對照組，減少的水平到300mg/kg符合劑量依賴模式。作為一個比較例，布洛芬(50mg/kg),—種著名的抗炎癥藥物，也被施用(圖12)。類似的，IL-1alpha也減少，符合劑量依賴模式(圖13)。從這些結果可知，本發(fā)明2-羥基苯曱酸衍生物被認為能夠用于治療炎癥疾病，特別是關節(jié)炎。6-3膠原引起的關節(jié)炎動物評估模型為評估2-羥基苯曱酸衍生物的作用，膠原引起的關節(jié)炎模型(風濕性關節(jié)炎動物模型)被使用。牛II型膠原與弗氏完全佐劑充分混合成乳液后，皮內(nèi)注射入8-10周DBA/lLacJ小鼠尾部原點。兩周后進行同樣的皮內(nèi)注射。在第二次膠原皮下注射后，腹腔注射25mg/kg/day的化合物2,3和18,1mg/kg/week的甲氨蝶呤(對比例)或者10%媒介物(對照)(圖15)。普通大鼠、注射膠原的大鼠(膠原)和注射化合物18的大鼠(化合物18,注射25mg/kg/day)的足部水腫的照片見圖14。另外，50mg/kg/day的化合物6和11、5mg/kg/2days的曱氨蝶呤(對比例)被皮內(nèi)注射入大鼠。磷酸緩沖鹽溶液作為對照注射(圖16)。2-3周后，根據(jù)下列的水腫參數(shù)每天觀測關節(jié)炎的程度。如關節(jié)炎參數(shù)結果所示，化合物2、3和18,和化合物6和ll表現(xiàn)出顯著的減小效果(圖15和16)。-關節(jié)炎參數(shù)-4足以0-4分計數(shù)，總分16O分-正常足l分-輕微水肺和房水閃光，僅限于跗骨2分-輕微水胂和房水閃光，從踝骨到跗骨3分-中度水腫和房水閃光，從踝骨延伸到跖骨4分-水腫和房水閃光，從踝骨到腳趾<實施例7>炎癥性腸病動物模型中的功效測定5%葡聚糖硫酸鈉(DSS)模型用于炎癥性腸病動物模型。5%葡聚糖硫酸鈉與水混合后口服。模型中主要觀察5%葡聚糖硫酸鈉引起的上皮細胞損傷、左結腸潰瘍和結腸長度的減少。該模型簡單，可重復，并且可以通過劑量調(diào)控炎癥的程度。因此，該模型經(jīng)常用于評估藥物候選物。葡聚糖硫酸鈉在水瓶中繼續(xù)施用。2-幾基苯甲酸衍生物在10%的媒介物中暫停和口服。葡聚糖硫酸鈉的施用改變了結腸的長度和寬度?；衔?8的療效顯著改善j活鵬的tc厭7p見乂x、園丄/、丄87f口丄y入餳結禾衣明奪反明^^、i^》丁i夏結/坊火模型具有保護效果。另外，每天的糞便情況包括便血、腹瀉和污秒程度也進行了評估。柳氮磺胺吡啶和化合物18比單純使用葡聚糖硫酸鈉的顯著減少糞便分數(shù)(圖20)。<實施例8>急性胰腺炎動物模型的功效測定雨蛙肽引起的胰腺炎模型作為急性胰腺炎模型。雨蛙肽是一種縮膽嚢素類似物和胰腺中激素引起分泌的胰腺消化酶。腹腔注射雨蛙肽(50ug/kg)引起消化酶過分分泌進入胰腺。2小時后注射LPS以引起水腫。當雨蛙肽施用后，可以觀察到脾臟的大量水腫。另外，當25mg/kg的化合物18施用是，水腫減少(圖21)。圖21的D是胰腺因為水肺而增重?；衔?8的施用組顯著減少胰腺重量。圖22顯示了血漿中的淀粉酶、脂肪酶和胰消化酶的水平。該模型過分增加消化酶，使得消化酶進入血液中。也就是說，血液中的消化酶減少可以作為減小胰腺炎的間接證據(jù)。如圖22所示，淀粉酶和脂肪酶在胰腺炎動物^=莫型中的血液增加，施用25mg/kg的化合物18顯著減少了這種增加。為了確認這種對炎癥的^f呆護效果，；險測了炎癥細力包因子TNF-a和IL-1J3的水平。COX-2(炎癥酶)的產(chǎn)物——PGE2,通過ELISA的方法檢測。TNF-a、IL-1I3和PGE2在胰腺炎模型中過分增長，化合物18可以顯著減少這些炎癥制造者(圖23和24)。<實施例9〉化合物2在APP^e/PSlAE9雙轉基因癡呆小鼠模型中的功效測定9-1ELISA方法確定細胞因子的減少量APP/PS1轉基因癡呆小鼠以含有25mg/kg/day的化合物2或者62.5mg/kg/day布洛芬的食物(chow)飼養(yǎng)，飼養(yǎng)7個月后處死(從3.5-10.5個月)。施用藥物7個月后，TNF-a,IL-1B和IL-6采用ELISA(mean士SEM,n=3-5)定量檢測。*，與對照(僅用普通食物飼養(yǎng)的APP/PS1轉基因癡呆小鼠)有顯著差異，才艮據(jù)Student-Neuman-Keuls，測試，采用單因素方差分析/K0.05。結果，與對照(僅用普通食物飼養(yǎng)的APP/PS1轉基因癡呆小鼠)相比，化合物2的施用顯著減少了TNF-a,IL-1J3和IL-6的水平(圖25)。9-2化合物2對腦血栓的保護作用在阿爾茨海默病中腦血栓的損害是眾所周知的。化合物2和布洛芬(對比例)對腦血栓的保護作用進行了評估。3ml/g的2%伊文思藍施用于5個月大的APP/PS1轉基因癡呆小鼠的血栓中。提供有2個月大到5個月大的含有25mg/kg/day的化合物2或者62.5mg/kg/day布洛芬的chow。結果，如圖26的B和F所示，與普通小鼠相比，伊文思藍的滲透性在皮層、海馬區(qū)和丘腦部分有增加。另外，如圖26所示，施用化合物2和施用布洛芬的實驗組對腦血栓都具有保護作用。9-3硫代磺色素-S染色法分析化合物2對淀粉樣斑塊的減少2-羥基苯甲酸衍生物對癡呆的效果采用硫代磺色素-S染色法分析。與對照(僅用普通食物飼養(yǎng)的APP/PS1轉基因癡呆小鼠)相比，25mg/kg/day的化合物2對祠養(yǎng)7個月(從3.5個月飼養(yǎng)到10.5個月的APP/PS1)的療效，減少了53%的淀粉樣斑塊(圖27)。另外，與對照(僅用普通食物飼養(yǎng)的APP/PS1轉基因癡呆小鼠)相比，25mg/kg/day的化合物2對飼養(yǎng)4個月(/人8.5個月飼養(yǎng)到3012.5個月的APP/PS1)的療效，顯著減少了49.3%的淀粉樣斑塊。9-4在高架十字迷宮模型中化合物2的行為改善作用僅用食物或含有含有25mg/kg/day的化合物2的食物飼養(yǎng)APP/PS1轉基因癡呆小鼠7個月(從3.5個月飼養(yǎng)到10.5個月)。經(jīng)過7個月后的施用，高架十字迷宮測驗用以確定行為改善作用。高架十字迷宮有兩個開放臂(30cmx6cmx0.5cm)和兩個閉合臂(30cmx6cmx15cm),也具有一個6cmx6cm的中心平臺。在高架十字迷宮模型中，小鼠被小心地放置于平臺上，小鼠的頭部靠近開放臂。小鼠在開放臂上的時間被記錄5分鐘(mean±SEM,n=3-5)。*,與對照(僅用普通食物飼養(yǎng)的APP/PS1轉基因癡呆小鼠)具有顯著不同，根據(jù)Student-Neunian-Keuls測試，采用單因素方差分析p<0.05。結果，與對照(僅用普通食物飼養(yǎng)的APP/PS1轉基因癡呆小鼠)相比，含有25mg/kg/day的化合物2伺養(yǎng)7個月的APP/PS1轉基因癡呆小鼠減少了在開放臂上的時間(圖28)。<實施例10>化合物2在G93AALS動物實驗中的功效測定10-1小膠質(zhì)細胞活化的減少具有與病人的l幾萎縮側索^&更化癥ALS相似癥狀的G93A(甘氨酸—丙氨酸)轉基因小鼠，被用于評估藥物對ALS的治療效果，ALS是一種主要的腦退化疾病。表達在腹側的G93A小鼠的小膠質(zhì)細胞(腦炎模型的一種標志物)的活化程度采用番茄凝集素染料評估。G93A小鼠的小膠質(zhì)細胞比野生型小鼠的活化程度要高。另外，施用5mg/kg/day的化合物2，能夠減少小膠質(zhì)細胞的數(shù)量和活化程度(圖29)。10-2細月包因子表達的減少僅以普通食物飼養(yǎng)的16周G93A小鼠和以含有5mg/kg/day化合物2的食物飼養(yǎng)的16周G93A小鼠，其腰段被提取并分離其RNA。炎癥細胞因子TNF-a和IL-1J3的mRNA表達水平通過RT-PCR檢測。結果，化合物2的施用有效減少了炎癥細月包因子(圖30)。<實施例12〉化合物2在帕金森動物模型的功效測定MPTP(40mg/kg)皮下注射進入C57/BL6小鼠(雄性/8周齡)。部分小鼠每天在注射MPTP前30分鐘先皮下注射50mg/kg的化合物2。2天后，腦組織凈皮提取并用CDllb進行免疫印跡。反應后，DAB(二氨基聯(lián)苯胺)用于色譜法，采用光學顯微鏡測定小膠質(zhì)細胞(腦炎模型的一種標志物)的活化程度(圖31)。結果，MPTP引起的小膠質(zhì)細胞的活化在施用化合物2后減少。本發(fā)明的化合物或者其藥學上可接受的鹽的具體適用癥描述如下。但，這些適用癥不能用于限制本發(fā)明的范圍。<應用實施例1>胃炎本發(fā)明2-鞋基苯曱酸衍生物能在培養(yǎng)細胞的實驗中有效地抑制細胞凋亡，引起凋亡的原因可以是酒精、幽門螺桿菌、非甾體抗炎藥和H202。本發(fā)明的化合物表現(xiàn)出比膜固思達(Mucosta)或者PP1更好的效果，膜固思達和PPI是在胃炎細胞保護效果方面的知名藥物。另外，本發(fā)明的化合物在酒精誘導胃炎動物模型和非甾體抗炎藥誘導的輕微胃炎中，表現(xiàn)出更好的治療效果。本發(fā)明的化合物在比阿司匹林高得多的劑量中也未引起胃出血，表現(xiàn)出良好的安全性。因此，本發(fā)明的2-羥基苯曱酸衍生物能夠有效治療和預防胃炎。<應用實施例2>炎癥性腸病(InflammatoryBowlDisease,IBD)前列腺素(環(huán)氧化酶的產(chǎn)物)和白三烯(脂氧酶的產(chǎn)物)在炎癥疾病中起到重要作用，例如潰瘍性結腸炎。齊留通(zileuton),5-脂氧酶的一種抑制劑，和柳氮磺胺吡咬減少MPO(髓過氧物酶)的活性，MPO作為腸道損傷動物模型中的發(fā)炎程度的標志物((SinghVP等，IndianJExpBiol.2004;42(7):667-73)。另外，尼美舒利(一種選擇性COX-2抑制劑)在兩個模型(乙酸引起的IBD和LTB4引起的IBD)中表現(xiàn)出保護效果。尼美舒利在炎癥反應中過分抑制MPO的活性(SinghVP等，ProstaglandinsOtherLipidMediat.2003;71(3-4):163-75)。因此，本發(fā)明的化合物具有抗炎癥的效果，能夠有效治療炎癥性腸病。<應用實施例3>風濕性關節(jié)炎本發(fā)明2-羥基苯曱酸衍生物在膠原誘導關節(jié)炎模型中，比曱氨蝶呤(對照)有相似或更好的治療效果。曱氨蝶呤用于治療關節(jié)炎，但有副作用。另外，本發(fā)明化合物對卡拉膠引起的痛覺過敏有止痛作用，也對酵母多糖引起的炎癥細胞因子產(chǎn)物有抑制作用。因此，本發(fā)明化合物與已知的抗炎藥有相近似的療效，同時具有良好的安全性，能夠作為治療關節(jié)炎的藥物。<應用實施例4〉胰腺炎急性胰腺炎是胰腺自身消化相關的炎癥，原因是胰液或者膽汁的消化酶倒灌進入胰腺中。胰腺炎表現(xiàn)出各種癥狀，從水鐘到嚴重出血，這些都損傷胰腺。有許多證據(jù)證明胰腺炎與炎癥有關，有報道COX抑制劑在胰腺炎模型中有保護作用，抑制炎癥因子TNF-a和前列腺素的產(chǎn)生(SongAM等，AmJPhysiolGastrointestLiverPhysiol.2002;283(5):G1166-74)。因此，本發(fā)明的化合物可以有效用于治療胰腺炎。<應用實施例5>糖尿病炎癥和疼痛炎癥和疼痛在二型糖尿病中正扮演越來越重要的角色。有許多文獻報道很多抗炎藥物能減輕二型糖尿病癥狀或者延遲二型糖尿病的發(fā)作(DeansKA等，DiabetesTechnolTher.2006;8(1):18-27)。Lisofylline,—種抗炎癥化合物，通過施用鏈脲霉素抑制IFN-y和TNF-a，減輕小鼠50。/。的糖尿病癥狀(Yangz等，Pancreas.2003;26(4):e99-104)。因此，本發(fā)明化合物能夠有效治療和預防糖尿病炎癥和疼痛。<應用實施例6>動脈硬化在栽脂蛋白￡-基因缺陷(&0￡(-/-))小鼠動脈粥樣硬化的形成初期，選擇性COX-2抑制劑(例如羅非昔布和NS-398)和非選擇性COX抑制劑(例如消炎痛)分別減少動脈硬化的約35-38%和約38-51%(BurleighMEJMolCellCardiol.2005Sep;39(3):443-52)。因此，本發(fā)明化合物的抗炎癥效果能夠有效治療動脈硬化。<應用實施例7〉阿爾茨海默病阿爾茨海默病是最常見的成人癡呆癥。阿爾茨海默病的特征為神經(jīng)元纖維紊亂、淀粉樣斑塊和嚴重神經(jīng)元壞死。也有大量的文獻表明阿爾茨海默病與炎癥有關。經(jīng)常有報道小膠質(zhì)細胞和炎癥因子在癡呆動物模型中被檢測到數(shù)量增加(MinghettiL.CurrentOpinioninNeurology2005,18:315-321)。在阿爾茨海默病動物模型中，抑制炎癥藥物的施用可能有保護效果(TownsendKP和PraticoD.FASEBJ.2005;19(12):1592-601)。因此，本發(fā)明化合物有細胞保護作用和抗炎癥作用，可以用于有效治療阿爾茨海默病。<應用實施例8〉ALS洛蓋赫里格病是肌萎縮側索硬化或運動神經(jīng)元病，運動神經(jīng)元的持續(xù)退化是該病的病理學特點。有大量的文獻表明ALS與炎癥有關。經(jīng)常有報道小膠質(zhì)細胞和炎癥細胞因子在ALS動物模型G93A小鼠中增力口(WeydtP和MollerT.Neuroreport.2005，25;16(6):527-31)。在ALS動物模型中，抑制炎癥藥物的施用可能有保護效果(WestMetal.,JNeurochem.2004;91(1):133-43)。因此，本發(fā)明化合物可以用于有效治療ALS。<應用實施例9>帕金森病帕金森病，原型運動障礙，其臨床特點為震顫、僵化、運動徐緩和姿勢不穩(wěn)定，病理診斷學上表現(xiàn)為黑質(zhì)中的多巴胺神經(jīng)元的選擇性凋亡。有大量的文獻表明帕金森病與炎癥有關。有報道小細胞膠質(zhì)和炎癥細胞因子在帕金森病例中數(shù)量增加(GaoHM,TrendsPharmacolSci.2003;24(8):395-401;MinghettiL.CurrOpinNeurol.2005;18(3):315-21)。在帕金森病動物才莫型中，抑制炎癥藥物的施用有保護效果(GaoHM,TrendsPharmacolSci.2003;24(8):395-401)。因此，本發(fā)明化合物有細胞保護作用和抗炎癥作用，可以用于有效治療帕金森病。工業(yè)上的可利用性本發(fā)明提供了一種制藥學上的化合物，能有效預防和治療炎癥疾病，該化合物包含2-輕基苯曱酸衍生物，以其化學形式或其制藥上可以接受的鹽為代表，還提供了一種采用該制藥化合物治療或者預防炎癥疾病的方法。本發(fā)明的制藥上的化合物能夠非常有效地治療和預防炎癥疾病，例如胃炎、胰腺炎、結腸炎、關節(jié)炎、糖尿病的炎癥、動脈硬化、腎炎、肝炎、阿爾茨海默病、帕金森病和洛蓋赫里格病，同時，作為藥物也是安全的。權利要求1.一種用于治療或預防炎癥性疾病的藥物組合物，所述藥物組合物包含作為有效組分的、由化學式1表示的2-羥基苯甲酸衍生物或其藥學上可接受的鹽[化學式1]其中，n為2到5的整數(shù)；R1為氫或烷基；R2為氫、烷基或醛基；R3為氫或乙酰氧基；以及X獨立地為氫、硝基、鹵素、烷基、鹵代烷基、烷氧基、鹵代烷氧基。2.如權利要求1所述的藥物組合物，其中，所述2-羥基苯曱酸衍生物為選自以下列物質(zhì)構成的組中的任意一種2-羥基-5-苯乙氨基-苯曱酸、2-羥基_5_[2_(4-三氟曱基-苯基)-乙氨基]-苯曱酸、2-羥基-5-[2-(3-三氟曱基-苯基)-乙氨基]-苯曱酸、5-[2-(3,5-雙-三氟曱基-苯基)-乙氨基]-2-羥基-苯曱酸、2-羥基-5-[2-(2-硝基-苯基)-乙氨基]-苯曱酸、5-[2-(4-氯-苯基)-乙氨基]-2-羥基-苯曱酸、5-[2-(3,4-二氟-苯基)-乙氨基]-2-羥基-苯曱酸、5-[2-(3,4-二氯-苯基)-乙氨基]-2-羥基-苯曱酸、5-[2-(4-氟-2-三氟曱基-苯基)-乙tt]-2-羥基-苯曱酸、5-[2-(2-氟-4-三氟曱基-苯基)-乙氨基]-2-羥基-苯曱酸、2-羥基-5-[2-(4-曱氧基-苯基)-乙氨基]-苯曱酸、2-羥基-5-(2-o-曱苯基-乙氨基)-苯曱酸、2-羥基-5-(3-苯基-丙氨基)-苯曱酸、2-羥基_5_[3_(4-三氟曱基-苯基)-丙氨基]_苯曱酸、5-[3-(4-氟-苯基)-丙氨基]-2-羥基-苯甲酸、5-[3-(3，4-二氯-苯基)-丙氨基]-2-羥基-苯曱酸、2-羥基-5-(3-p-曱苯基-丙氨基》苯曱酸、2-乙酰氧基-5-[2-(4-三氟曱基-苯基)-乙氨基]-苯曱酸和5-[2-(2-氯-苯基)-乙氨基]-2-羥基-苯甲酸。3.如權利要求1所述的藥物組合物，其中，所述炎癥性疾病為選自以下列疾病構成的組中的任意一種胃炎、大腸炎、胰腺炎、關節(jié)炎、糖尿病炎癥、動脈硬化、腎炎、肝炎、阿爾茨海默病、帕金森病和肌萎縮性脊髓側索硬化癥。4.一種用于治療或預防炎癥性疾病的方法，該方法包括給予有需要的主體治療有效量的、由化學式1表示的2-羥基苯曱酸衍生物或其藥學上可接受的鹽[化學式1]其中，n為2到5的整數(shù)；為氬或烷基；R2為氫、烷基或醛基；R3為氫或乙酰氧基；以及X獨立地為氫、硝基、卣素、烷基、卣代烷基、烷氧基、卣代烷氧基。5.如權利要求4所述的方法，其中，所述2-羥基苯曱酸衍生物為選自以下列物質(zhì)構成的組中的任意一種2-羥基-5-苯乙氨基-苯曱酸、2-羥基-5-[2-(4-三氟曱基-苯基)-乙氨基]-苯曱酸、2-羥基-5-[2-(3-三氟曱基-苯基)-乙氨基]-苯曱酸、5-[2-(3,5-雙-三氟曱基-苯基)-乙氨基]-2-羥基-苯曱酸、2-羥基-5-[2-(2-硝基-苯基)-乙氨基]-苯曱酸、5-[2-(4-氯-苯基)-乙氨基]-2-羥基-苯曱酸、5-[2-(3,4-二氟-苯基)-乙氨基]-2-羥基-笨曱酸、5-[2-(3,4-二氯-苯基)-乙氨基]-2-羥基-苯曱酸、5-[2-(4-氟-2-三氟曱基-苯基)-乙氨基]-2-羥基-苯甲酸、5-[2-(2-氟-4-三氟曱基-苯基)-乙氨基]-2-羥基-苯曱酸、2-羥基-5-[2-(4-曱氧基-苯基)-乙氨基]-苯曱酸、2-羥基-5-(2-0-曱苯基-乙氨基)-苯曱酸、2-羥基-5-(3-苯基-丙氨基)-苯曱酸、2-羥基-5-[3-(4-三氟曱基-苯基)-丙氨基]-苯曱酸、5-[3-(4-氟-苯基)-丙氨基]-2-羥基-苯曱酸、5-[3-(3，4-二氯-苯基)-丙氨基]-2-羥基-苯曱酸、2-羥基-5-(3卞-甲苯基-丙氨基)-苯甲酸、2-乙酰氧基-5-[2-(4-三氟曱基-苯基)-乙氨基]-苯曱酸和5-[2-(2-氯-苯基)-乙氨基]-2-羥基-苯曱酸。6.如權利要求4所述的方法，其中，所述炎癥性疾病為選自以下列疾病構成的組中的任意一種胃炎、大腸炎、胰腺炎、關節(jié)炎、糖尿病炎癥、動脈硬化、腎炎、肝炎、阿爾茨海默病、帕金森病和肌萎縮性脊髓側索硬化癥。全文摘要本發(fā)明涉及用于治療或預防炎癥性疾病和細胞損傷的藥物組合物，和一種治療或預防炎癥性疾病和細胞損傷的方法。本發(fā)明使用由具體化學式表示的2-羥基苯甲酸衍生物或其藥學上可接受的鹽。本發(fā)明的化合物用于治療或預防細胞損傷和炎癥性疾病，包括胃炎、胃潰瘍、胰腺炎、大腸炎、關節(jié)炎、糖尿病炎癥、動脈硬化、腎炎、肝炎、阿爾茨海默病、帕金森病和肌萎縮性脊髓側索硬化癥。文檔編號A61P19/02GK101426484SQ200780013120公開日2009年5月6日申請日期2007年4月13日優(yōu)先權日2006年4月13日發(fā)明者任斗淳,卞漢烈,咸基白,安春山,尹福仙,權寧培,李晉煥,李英愛,柳根寶,趙成益,趙濟英,郭秉周申請人:紐若泰克株式會社