專利名稱：患神經(jīng)退行性疾病的對(duì)象中抗體所識(shí)別的小分子的鑒定的制作方法
患神經(jīng)退行性疾病的對(duì)象中抗體所識(shí)別的小分子的鑒定
背景技術(shù)：
本申請(qǐng)要求與2009年6月2號(hào)提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng) 序列號(hào)61/183，260和于2010 年3月29日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)序列號(hào)61/318，655的優(yōu)先權(quán)，上述每個(gè)申請(qǐng)通過(guò)整體引用并入本文。本發(fā)明在國(guó)家心臟、肺和血液研究所(資助號(hào)N01-HV28185)和國(guó)立衛(wèi)生院(資助號(hào)DP10D00066301)的政府資助下完成。政府享有本發(fā)明的一些權(quán)益。
I.發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明一般性涉及分子生物學(xué)、免疫學(xué)和神經(jīng)生物學(xué)領(lǐng)域。更具體地，本發(fā)明涉及被神經(jīng)退行性疾病(neurodegenerative disease, ND)特異性抗體所識(shí)別的擬肽的鑒定。 這些擬肽可用于鑒定患有或有風(fēng)險(xiǎn)患ND的對(duì)象。II.相關(guān)技術(shù)描述阿爾茲海默病(Alzherimer’ s Disease, AD)是有多至530萬(wàn)美國(guó)人患病的進(jìn)行性致命腦疾病。AD破壞腦細(xì)胞，造成記憶、思考和行為問(wèn)題。這些癥狀隨時(shí)間加重，最終疾病是致命的。目前，在美國(guó)它是位列第六的致死原因，并且是癡呆的最常見形式，占所有癡呆病例的50-70%。不幸的是盡管有對(duì)癥狀的治療方法，但不能治愈。診斷阿爾茲海默病是涉及幾種類型評(píng)估的經(jīng)驗(yàn)性過(guò)程，并且可花費(fèi)許多天或幾周來(lái)完成。評(píng)估包括了解詳細(xì)病史和身體檢查。此外，設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)(包括血液、尿和 CSF檢測(cè))主要來(lái)幫助排除其他可能病癥。還進(jìn)行神經(jīng)心理學(xué)檢測(cè)，使用多種工具來(lái)評(píng)估記憶、問(wèn)題解決、注意力、視覺(jué)-運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)和抽象思維。還應(yīng)包括抑郁檢測(cè)。最后，推薦腦成像掃描來(lái)排除造成癥狀的腦腫瘤或腦中血液凝塊?？傊?，目前沒(méi)有確切診斷阿爾茲海默病的單個(gè)檢測(cè)，可能僅通過(guò)在死后檢查腦組織來(lái)確定地診斷阿爾茲海默病。帕金森氏病(PD)是另一種腦(中央神經(jīng)系統(tǒng))退行性疾病，它通常損害運(yùn)動(dòng)能力、語(yǔ)言和其他功能。它影響運(yùn)動(dòng)(運(yùn)動(dòng)癥狀)，但其他典型癥狀包括情緒、行為、思考和感覺(jué)障礙(非運(yùn)動(dòng)癥狀)。個(gè)體患者癥狀可有相當(dāng)?shù)牟煌?，并且疾病進(jìn)展也有個(gè)體差異。PD 的癥狀是由于黑質(zhì)致密區(qū)著色的多巴胺分泌(多巴胺能)細(xì)胞缺失(自發(fā)性或遺傳性、毒性或創(chuàng)傷性缺失)。這些神經(jīng)元影響紋狀體，并且它們的缺失導(dǎo)致調(diào)節(jié)運(yùn)動(dòng)的基底神經(jīng)節(jié)神經(jīng)回路的活性改變，本質(zhì)上抑制直接通路而激發(fā)間接通路。PD的診斷有類似但稍有不同的挑戰(zhàn)。當(dāng)進(jìn)行神經(jīng)病學(xué)檢查來(lái)評(píng)估有任何運(yùn)動(dòng)障礙的患者時(shí)，醫(yī)生應(yīng)了解病史并進(jìn)行身體檢查。此外，進(jìn)行神經(jīng)病學(xué)檢查來(lái)完整評(píng)估神經(jīng)系統(tǒng)，包括患者的運(yùn)動(dòng)、協(xié)調(diào)和平衡狀況。有典型帕金森氏病癥狀的患者的血液實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)很少發(fā)現(xiàn)任何異常。腦電圖(EEG’ s)記錄腦電活性的一些狀態(tài)，但在確定PD方面不太有效。 腦部MRI和CAT掃描產(chǎn)生顯明和精細(xì)的尸檢學(xué)圖片，但PD疾病患者的腦甚至在這樣的精細(xì)檢查下也顯示正常，這是因?yàn)榕cPD相關(guān)的改變是顯微水平的并且這些掃描不能顯示。由于沒(méi)有確定性的診斷檢測(cè)來(lái)提供具體答案，醫(yī)生必須根據(jù)判斷來(lái)作出PD診斷。因此，仍需要對(duì)這兩種疾病和其他神經(jīng)性疾病的診斷方法其(i)準(zhǔn)確并且客觀，( )簡(jiǎn)單并且可重復(fù)，和(iii)可用于早期和晚期病例兩者。發(fā)明概述本發(fā)明提供了包含與指示神經(jīng)退行性疾病之抗體結(jié)合的擬肽的組合物和檢測(cè)包含抗體的樣品中抗體的方法，其包括將包含抗體的樣品與其上附加有擬肽的支持物接觸。 本發(fā)明的擬肽具有式
權(quán)利要求
1.檢測(cè)包含抗體的樣品中抗體的方法，其包括(a)將包含抗體的樣品與有擬肽附加其上的支持物接觸，所述擬肽具有⑴式(IA)
2.權(quán)利要求1的方法，其還包括從對(duì)象獲得所述樣品。
3.權(quán)利要求1的方法，其還包括如果抗體與所述擬肽的結(jié)合大于在對(duì)照未患病患者中觀察到的，則診斷從其獲得所述樣品的對(duì)象患阿爾茲海默病。
4.權(quán)利要求3的方法，其中一種或更多種擬肽選自
5.權(quán)利要求1的方法，其中所述樣品與多于一種的權(quán)利要求1的擬肽接觸。
6.權(quán)利要求5的方法，其中所述樣品與三種結(jié)構(gòu)不同的擬肽接觸。
7.權(quán)利要求6的方法，其中所述擬肽是AD1、AD2和AD3。
8.權(quán)利要求1的方法，其中所述支持物是珠、板、蘸棒、濾器、膜、針或孔。
9.權(quán)利要求1的方法，其中所述樣品是血液、血清、唾液或CSF。
10.權(quán)利要求1的方法，其中檢測(cè)包括RIA、FIA、ELISA、Western印跡、流式細(xì)胞術(shù)、FRET 或表面等離子共振。
11.檢測(cè)包含抗體的樣品中抗體的方法，其包括(a)將包含抗體的樣品與其上附加擬肽的支持物接觸，所述擬肽具有 ⑴式(2A)
12.權(quán)利要求11的方法，其中R26、R29、R31和/或R32是烷基胺或N-丁基胺。
13.權(quán)利要求11的方法，其中R3°是烯基或烯丙基。
14.權(quán)利要求11的方法，其中R35是烯丙基。
15.權(quán)利要求11的方法，其中R37是烷氧基。
16.權(quán)利要求15的方法，其中所述烷氧基是乙氧基。
17.權(quán)利要求11的方法，其還包括從對(duì)象獲得所述樣品。
18.權(quán)利要求11的方法，其還包括如果抗體與所述擬肽的結(jié)合大于在對(duì)照未患病患者中觀察到的，則診斷從其獲得所述樣品的對(duì)象患帕金森氏病。
19.權(quán)利要求18的方法，其中所述擬肽選自
20.權(quán)利要求11的方法，其中所述樣品與多于一種式2A或2B的擬肽接觸。
21.權(quán)利要求20的方法，其中所述樣品與三種結(jié)構(gòu)不同的擬肽接觸。
22.權(quán)利要求21的方法，其中所述擬肽是PD1、PD2和PD3。
23.權(quán)利要求11的方法，其中所述支持物是珠、板、蘸棒、濾器、膜、針或孔。
24.權(quán)利要求11的方法，其中所述樣品是血液、血清、唾液或CSF。
25.權(quán)利要求11的方法，其中檢測(cè)包括RIA、FIA、ELISA、Western印跡、流式細(xì)胞術(shù)、 FRET或表面等離子共振。
26.治療被懷疑患神經(jīng)退行性疾病(ND)的對(duì)象的方法，其包括(a)將來(lái)自所述對(duì)象的包含抗體的樣品與一種或更多種有擬肽附加其上的支持物接觸，所述擬肽包括 ⑴式(IA)
27.權(quán)利要求26的方法，其還包括從對(duì)象獲得所述樣品。
28.權(quán)利要求26的方法，其還包括如果抗體與所述PD擬肽的結(jié)合大于在對(duì)照未患病患者中觀察到的，則診斷從其獲得所述樣品的對(duì)象患帕金森氏病。
29.權(quán)利要求26的方法，其還包括如果抗體與所述AD擬肽的結(jié)合大于在對(duì)照未患病患者中觀察到的，則診斷從其獲得所述樣品的對(duì)象患阿爾茲海默病。
30.權(quán)利要求26的方法，其中所述樣品與多于一種式(IA-D)和/或(2A-B)的擬肽接觸。
31.權(quán)利要求30的方法，其中所述樣品與對(duì)PD和AD各自抗體有反應(yīng)性的三種結(jié)構(gòu)不同的擬肽接觸。
32.權(quán)利要求26的方法，其中所述支持物是珠、板、蘸棒、濾器、膜、針或孔。
33.權(quán)利要求26的方法，其中所述樣品是血液、血清、唾液或CSF。
34.權(quán)利要求26的方法，其中檢測(cè)包括RIA、FIA、ELISA、Western印跡、流式細(xì)胞術(shù)、 FRET或表面等離子共振。
35.權(quán)利要求26的方法，其還包括對(duì)所述對(duì)象做出治療決定。
36.指示神經(jīng)退行性疾病的抗體的檢測(cè)試劑盒，所述試劑盒包含一種或更多種擬肽，其包括
37.權(quán)利要求36的試劑盒，其中所述擬肽與基質(zhì)偶聯(lián)。
38.權(quán)利要求36的試劑盒，其中一種或更多種擬肽選自
39.在被懷疑患阿爾茲海默病的對(duì)象中診斷AD的方法，其包括(a)將來(lái)自所述患者的血清樣品暴露至包含多個(gè)高親和性擬肽的微陣列，所述擬肽具有
40.分離的抗體組合物，其包含從患神經(jīng)退行性疾病對(duì)象的血清分離的抗體，其中所述抗體與包括以下結(jié)構(gòu)的擬肽特異性結(jié)合
41.用于檢測(cè)阿爾茲海默病或帕金森氏病相關(guān)抗原的試劑盒，其包含權(quán)利要求40的分離的抗體。
42.由包括以下的步驟分離的抗體(a)將樣品與免疫親和性基質(zhì)相接觸，所述樣品包含指示神經(jīng)退行性疾病的抗體，所述免疫親和性基質(zhì)包含權(quán)利要求1和/或11的結(jié)合神經(jīng)退行性疾病指示抗體的擬肽；(b)從所述親和性基質(zhì)洗脫所述結(jié)合抗體。
43.含有擬肽的組合物，所述擬肽具有下式 (a)式(IA)
44.權(quán)利要求43的組合物，其還包含指示神經(jīng)退行性疾病的抗體。
45.包括下式的擬肽組合物
46.權(quán)利要求45的組合物，其還包含指示神經(jīng)退行性疾病的抗體。
47.具有下式的分離的擬肽 (a)式(IA)
48.權(quán)利要求47的分離的擬肽，其中所述擬肽具有結(jié)構(gòu)
49.權(quán)利要求47的分離的擬肽，其中所述擬肽具有結(jié)構(gòu)
50.權(quán)利要求47的分離的擬肽，其中所述擬肽具有結(jié)構(gòu)
51.權(quán)利要求47的分離的擬肽，其中所述擬肽具有結(jié)構(gòu)
52.權(quán)利要求47的分離的擬肽，其中所述擬肽具有結(jié)構(gòu)
53.權(quán)利要求47的分離的擬肽，其中所述擬肽具有結(jié)構(gòu)
54.在生物流體中檢測(cè)抗體的方法，其包括(a)用包含濃度為0.5至2mg/ml的細(xì)菌裂解物的封閉緩沖液孵育擬肽陣列；(b)去除所述封閉緩沖液；(c)用包含細(xì)菌裂解物的樣品溶液孵育所述擬肽陣列；和(d)檢測(cè)結(jié)合至所述擬肽陣列的抗體。
全文摘要
本發(fā)明提供了患神經(jīng)退行性疾病(ND)的個(gè)體的鑒定。鑒定了帕金森氏病和阿爾茲海默病特異性抗體識(shí)別的擬肽，其能診斷或預(yù)測(cè)對(duì)象的ND。
文檔編號(hào)G01N33/68GK102439451SQ201080023987
公開日2012年5月2日 申請(qǐng)日期2010年6月1日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月2日
發(fā)明者史蒂文·康奈利, 德懷特·格曼, 托馬斯·科達(dá)德克, 約翰尼·威爾遜, 羅絲瑪麗·威爾遜, 雷迪·穆拉 申請(qǐng)人:奧普科健康公司, 德克薩斯大學(xué)系統(tǒng)董事會(huì)