專利名稱：：一種桑葉提取物及其在制備抗甲型流感病毒藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種桑葉提取物及其在制備抗甲型流感病毒藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：桑葉為桑科植物桑Ofo，a/ki/J的葉。桑樹的栽培已有五千多年的歷史，它的葉可以以其豐富的營養(yǎng)和特有的成分養(yǎng)育家蠶，結(jié)出蠶繭，繅出絲，并進(jìn)而促進(jìn)了人類社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展。隨著人類社會(huì)的進(jìn)步，人們逐步發(fā)現(xiàn)，桑葉應(yīng)用于人類，還可以治療某些疾病，最近幾年來更進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，桑葉具有非凡的保健功效。特別是對(duì)亞健康的逆轉(zhuǎn)，有著不可低估的作用。桑葉品性寒、味甘苦，具有疏散風(fēng)熱、清肺潤燥、清肝明目的功能，是常用的中藥之一?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》稱桑葉為"神仙葉"，具有滋陰補(bǔ)血、益肝通氣，降壓利尿之功效?！侗静菥V目》記載桑葉乃手足陽明之藥，葉煎代茗，能止消渴，明H長發(fā)?！秹凼辣Ｔ分幸陨Ｈ~為主的護(hù)桑至寶丹"久服不以自登上壽"。現(xiàn)代藥理研究證明桑葉具有很多化學(xué)成分和多種生物活性。流感病毒有甲(A)、乙(B)、丙(C)三種型別組成，其中乙型與丙型流感病毒的宿主范圍很窄，危害程度也很小。而甲型流感病毒的危害程度最大，宿主范圍也很廣泛，除可感染人會(huì)引起世界性流感大流行外，還會(huì)在動(dòng)物中廣泛存在而引起動(dòng)物流感致死亡。目前已知甲型流感病毒可感染數(shù)十種禽類以及馬、豬等動(dòng)物。甲型病毒屬于正黏病毒科(OythomyXoviridae)是一類對(duì)黏蛋白具有特殊親和性的RNA病毒，為此這種甲型流感病毒很容易侵入人體上呼吸道和肺部、腸道等對(duì)人類危害很大。目前雖有一些合成藥物也有一定療效，但對(duì)人體傷害很大容易造成免疫力下降和帶來其它疾病，由于這種病毒容易產(chǎn)生變異，給疫苗工作也會(huì)帶來一定的困難，中醫(yī)中藥多數(shù)是原料藥和部分沖劑，藥效有一定的緩慢性，且不便服用。因此從純天然植物中篩選對(duì)人體無害并具有抗病毒活性的物質(zhì)十分重要和必要，我們新文達(dá)研發(fā)中心對(duì)桑葉的研究已有二年多，特別是自從SARS病毒在我國發(fā)生后，更加引起了我們對(duì)篩選具有抗病毒天然產(chǎn)物的重視和責(zé)任感。我研發(fā)中心從桑葉中提取并分離出功效物質(zhì)(簡(jiǎn)稱WSHT)，經(jīng)體外細(xì)胞試驗(yàn)檢測(cè)有明顯的抗甲型流感病毒和殺菌抑菌的作用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是公開一種桑葉提取物WSHT，及其在制備抗甲型流感病毒藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的桑葉提取物WSHT，其提取方法為桑葉干燥、粉碎后，用乙醇提取。本發(fā)明中，所述的桑葉較佳的為中國魯桑葉。魯桑在中國分布很廣，如山東、江蘇、浙江等地均有大量種植。本發(fā)明中，所述的乙醇水溶液濃度較佳的為重量百分比40%98%，桑葉/乙醇水溶液的重量比較佳的為1:51:20。本發(fā)明中，所述的乙醇提取較佳的為提取2次，每次提取的時(shí)間較佳的為2小時(shí)，提取的溫度較佳的為3(TC8(TC。本發(fā)明實(shí)例中，為提高提取物活性，在用乙醇提取之后，再將提取物.匕大孔樹脂，用序列濃度的乙醇水溶液洗脫，分部收集。所述的序列濃度較佳的為重量百分比20%、30%、50%、60%、70%、80%。本發(fā)明中所用試劑均市售可得。本發(fā)明的另一目的是公開本發(fā)明的桑葉提取物WSHT在制備抗甲型流感病毒藥物中的應(yīng)用。所述的藥物可為固體、液體、粉劑或膠囊等形式。具體實(shí)施例方式實(shí)施例l桑葉提取物WSHT，其提取步驟如下(1)中國魯桑葉千燥、粉碎；(2)以桑葉/乙醇水溶液重量比h15的比例，用40%的乙醇水溶液提取2次，每次2小時(shí)，提取溫度為3(TC:(3)上大孔樹脂，用20%、30%、50%、60%、70%、80%乙醇水溶液洗脫，分部收集。實(shí)施例2桑葉提取物WSHT，其提取歩驟如下(1)中國魯桑葉干燥、粉碎；(2)以桑葉/乙醇水溶液重量比1:IO的比例，用80%的乙醇水溶液提取2次，每次2小時(shí)，提取溫度為8(TC;(3)上大孔樹脂，用20%、30%、50°/。、60%、70%、80%乙醇水溶液洗脫，分部收集。實(shí)施例3桑葉提取物WSHT，其提取步驟如下(1)中國魯桑葉十燥、粉碎；(2)以桑葉/乙醇水溶液重量比1:20的比例，用98%的乙醇水溶液提取2次，每次2小時(shí)，提取溫度為5(TC:(3)上大孔樹脂，用20%、30%、50%、60%、70%、80%乙醇洗脫，分部收集。實(shí)施例4桑葉提取物WSHT，其提取步驟為桑葉干燥粉碎后，以桑葉/乙醇水溶液重量比l:5的比例，用50%的乙醇水溶液提取2次，每次2小時(shí)，溫度為50°C。效果實(shí)施例1桑葉提取物WSHT抗流感甲型病毒活性測(cè)試測(cè)試原理以MDCK(狗腎)細(xì)胞為病毒宿主，測(cè)定樣品抑制病毒引起細(xì)胞病變程度(CPE)。測(cè)試材料1.病毒株流感甲型病毒(濟(jì)防190-15)在雞胚尿囊腔內(nèi)培養(yǎng)傳代(2002.10)，-8(TC保存。2.樣品處理樣品溶于DMSO，再用培養(yǎng)液配成適宜初始濃度，用培養(yǎng)液作3倍稀釋，各8個(gè)稀釋度。3.陽性對(duì)照藥病毒唑(RBV)浙江康裕藥業(yè)有限公司(批號(hào)960501)。測(cè)試方法MDCK細(xì)胞接種96孔培養(yǎng)板，置5%0)2，37t:培養(yǎng)24小時(shí)。MDCK細(xì)胞分別加入流感甲型病毒10-4(100倍TCID50)，37t:吸附2小時(shí)后傾去病毒液，分別加入不同稀釋度藥物。設(shè)病毒對(duì)照和細(xì)胞對(duì)照，37"C培養(yǎng)36小時(shí)，觀察結(jié)果，記錄CPE,計(jì)算各樣品抗流感病毒半數(shù)抑制濃度(IC50)。測(cè)試結(jié)果表1桑葉提取物WSHT抗甲型流感病毒活性測(cè)試結(jié)果<table><row><column>樣品濃度</column><column>TC5(ug/ml)</column><column>IC50(ug/ml)</column><column>SI</column></row><row><column>原液的1/30倍</column><column>1200</column><column>307.23.87</column></row><table>注表中TC50為藥物半數(shù)有毒濃度；IC50為藥物對(duì)病毒半數(shù)抑制濃度，SI為選擇指數(shù)，SI=TC50/IC50。測(cè)試結(jié)論由TC5藥物半數(shù)有毒濃度和IC50病毒半數(shù)抑制濃度分別為1200ug/ml和307.2ug/ml，SI為3.87的數(shù)據(jù)可得桑葉提取物WSHT具有明顯的抗流感甲型病毒活性。權(quán)利要求1.一種桑葉提取物，由下述方法制得將桑葉干燥、粉碎后，用乙醇水溶液提取即得。2.如權(quán)利要求1所述的桑葉提取物，其特征在于:所述的桑葉為中國魯桑葉。3.如權(quán)利要求1所述的桑葉提取物，其特征在于所述的乙醇水溶液的濃度為重量百分比40%98%。4.如權(quán)利要求1所述的桑葉提取物，其特征在于乙醇水溶液提取時(shí)，桑葉/乙醇水溶液的重量比為1:51:20。5.如權(quán)利要求1所述的桑葉提取物，其特征在于所述的乙醇提取步驟為提取2次。6.如權(quán)利要求1所述的桑葉提取物，其特征在于所述的乙醇提取步驟每次提取的時(shí)間為2小時(shí)。7.如權(quán)利要求1所述的桑葉提取物，其特征在于所述的乙醇提取的溫度為30℃80℃。8.如權(quán)利要求1所述的桑葉提取物，其特征在于提取之后，將提取物上大孔樹脂，用序列濃度的乙醇水溶液洗脫，分部收集。9.如權(quán)利要求8所述的桑葉提取物，其特征在于所述的序列濃度為重量百分比20%、30%、50%、60%、70%、80%。10.如權(quán)利要求1所述的桑葉提取物在制備抗甲型流感病毒藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開了一種桑葉提取物，其提取方法為桑葉干燥粉碎后，用乙醇提取。本發(fā)明還公開了這種桑葉提取物在制備抗甲型流感病毒藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的桑葉提取物具有明顯的抗甲型流感病毒的作用，可用于制備各種形式的抗甲型流感病毒藥物。文檔編號(hào)A61K36/185GK101172127SQ200610117820公開日2008年5月7日申請(qǐng)日期2006年10月31日優(yōu)先權(quán)日2006年10月31日發(fā)明者劉桂云申請(qǐng)人:上海市新文達(dá)生物科技有限公司