專利名稱：一種流感a、b病毒抗原膠體金聯(lián)合檢測試紙條的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物檢測領(lǐng)域，具體涉及一種流感A、B病毒抗原檢測試紙條及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
目前流感A、B病毒的檢測以組織培養(yǎng)、雙份血清的抗體檢測作為“金標準”，但該方法操作繁瑣復雜，時間長，對流感的及時發(fā)現(xiàn)、及時預(yù)報和預(yù)防起不到指導作用，但對分析病毒種群的遺傳學和抗原性變化以及發(fā)現(xiàn)新病毒仍具有重要作用。流感快速檢測常用的方法有直接、間接熒光法(IFA/DFA)、酶免疫測定法(EIA)、酶活性測定法(神經(jīng)氨酸酶測定)、APAAP橋聯(lián)酶標檢測法、核酸擴增法(PCR)，但均存在需要昂貴的儀器、操作復雜、時間長、需專業(yè)人員等問題，不能同時檢測流感A、B病毒兩種抗原。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種方便、快捷地，能夠同時檢測流感A、流感B兩種病毒抗原的試紙條，發(fā)明人通過在硝酸纖維膜(NC膜)上同時包被流感A單克隆抗體FluA-McAb、流感B單克隆抗體FluB-McAb和抗鼠IgG三個條帶，并應(yīng)用結(jié)合膠體金標記的FluA-McAb、FluB-McAb兩種抗體，實現(xiàn)了在一個試劑條上同時檢測兩種抗原的目的，完成了本發(fā)明?？朔爽F(xiàn)有技術(shù)操作復雜、繁瑣、時間長、需要儀器、不能同時檢測兩種抗原的不足。
本發(fā)明提供了一種檢測試紙條，其特征在于，它包含(1)同時包被流感A單克隆抗體FluA-McAb、流感B單克隆抗體FluB-McAb和質(zhì)控抗鼠IgG三個條帶的硝酸纖維膜；
(2)含有膠體金標記FluA-McAb和膠體金標記FluB-McAb的玻璃纖維膜。
優(yōu)選的本發(fā)明所述試紙條，它還包含(1)反應(yīng)支持物；(2)吸水墊；(3)金標抗體保護膜，同時具有吸水功能。
其中反應(yīng)支持物優(yōu)選PVC板；吸水墊優(yōu)選濾油紙；金標抗體保護膜優(yōu)選用聚脂膜、玻璃纖維或濾紙纖維。
本發(fā)明還公開了所述試紙條在檢測流感A、流感B兩種病毒抗原中的應(yīng)用。
本發(fā)明的技術(shù)方案是采用純化的流感A、B單克隆抗體(FluA、B-McAb)和抗鼠IgG分別固相于硝酸纖維膜上(NC膜)，結(jié)合膠體金標記的FluA、B-McAb，應(yīng)用膜層析雙抗體夾心法的原理檢測鼻咽分泌物中的流感A、B病毒。
本發(fā)明的有益效果是一份標本，一個試紙條同時能檢測流感A、B兩種病毒抗原。省去二次檢測的手續(xù)，方便、快速、簡捷，不需特殊儀器設(shè)備，不需專業(yè)培訓，結(jié)果清晰易辨，操作簡單，易于推廣，適合基層，適合于突發(fā)事件的大批量檢測，適合流調(diào)，對流感的診斷起到輔助檢測作用。


圖1A本發(fā)明試紙條的正面示意圖；B本發(fā)明試紙條的側(cè)面示意圖；1吸水墊；2硝酸纖維膜(A包被FluA-McAb的條帶；B包被FluB-McAb的條帶；C包被抗鼠IgG的質(zhì)控條帶)；3含有膠體金標記FluA-McAb和膠體金標記FluB-McAb的玻璃纖維膜；4金標抗體保護膜；5反應(yīng)支持物。
圖2檢測結(jié)果示意圖；依次為流感A、B陽性；流感A陽性；流感B陽性；陰性；無效。
具體實施例方式
實施例1流感A、B病毒抗原聯(lián)合檢測試紙條(參見圖1)反應(yīng)支持物為6.2cm×0.4cm PCV板；吸水墊為2cm×0.4cm的濾油紙；1.8cm×0.4cm的硝酸纖維膜依次包被抗鼠IgG，F(xiàn)luA-McAb，F(xiàn)luB-McAb；含有0.4cm×0.4cm膠體金標記的FluA、B-McAb玻璃纖維膜；金標抗體保護膜為2.7cm×0.4cm的聚脂膜；即形成了流感A、B病毒抗原聯(lián)合檢測試紙條。
實施例2檢測方法(參見圖2)留取鼻咽部分泌物，放入裝有細胞裂解液的小瓶內(nèi)，將實施例1試紙條“4”處插入瓶內(nèi)(直至觀察完結(jié)果后方可取出試紙條)，樣品中的液體吸起上行，10-15分鐘判讀結(jié)果如含有流感A或B抗原，則與試紙條上膠體金標記的流感A或B-McAb形成相應(yīng)的復合物，上行與包被在硝酸纖維膜上的流感A或B-McAb結(jié)合，形成紅色線條，即在“A”或“B”處形成紅色條帶。
無論是否含有相對應(yīng)的抗原，膠體金標記McAb繼續(xù)向上爬行與包被在膜上的抗鼠IgG形成紅色沉淀線，即在“C”處形成紅色條帶。此線是質(zhì)控線，如膠體金失效，此線就不會出現(xiàn)，說明試紙條失效。
陽性結(jié)果會出現(xiàn)2條或3條紅色沉淀線，陰性結(jié)果出現(xiàn)1條紅色沉淀線，如不出現(xiàn)線條說明試紙條失效。
實驗例1臨床檢測結(jié)果經(jīng)檢測1005例流感樣病人樣本，流感A、B病毒同時感染，出現(xiàn)A、B、C三條帶1例，占0.01％；流感A病毒感染，出現(xiàn)A、C兩條帶374例，占37.2％；流感B病毒感染，出現(xiàn)B、C兩條帶413例，占41.1％。與目前常規(guī)應(yīng)用的間接熒光法相比較，靈敏度99.8％，特異度100％。
權(quán)利要求
1.一種檢測試紙條，其特征在于，它包含(1)同時包被流感A單克隆抗體FluA-McAb、流感B單克隆抗體FluB-McAb和質(zhì)控抗鼠IgG三個條帶的硝酸纖維膜；(2)含有膠體金標記FluA-McAb和膠體金標記FluB-McAb的玻璃纖維膜。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述試紙條，它還包含(1)反應(yīng)支持物；(2)吸水墊；(3)金標抗體保護膜。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述試紙條，其中反應(yīng)支持物選用PVC板。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述試紙條，其中吸水墊選用濾油紙。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述試紙條，其中金標抗體保護膜選用聚脂膜、玻璃纖維或濾紙纖維。
6.權(quán)利要求1-5之任一所述試紙條在檢測流感A、流感B兩種病毒抗原中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種能同時檢測流感A、B病毒抗原的快速檢測試紙條。它是在同一硝酸纖維膜(NC膜)上，分別包被流感A、流感B單克隆抗體(FluA－McAb、FluB－McAb)及抗鼠IgG，結(jié)合膠體金標記的FluA－McAb、FluB－McAb，應(yīng)用膜層析雙抗體夾心法，同時檢測標本中流感A、B兩種病毒抗原。應(yīng)用本發(fā)明試紙條檢測，減少了許多繁瑣的程序，且方便快捷，10－15分鐘判讀結(jié)果，不需特殊儀器也不需專業(yè)培訓，適合醫(yī)院等基層單位，適合大規(guī)模的流行病學調(diào)查及應(yīng)付突發(fā)事件。
文檔編號G01N33/547GK1904615SQ200510012268
公開日2007年1月31日 申請日期2005年7月28日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月28日
發(fā)明者劉明 申請人:北京莊笛浩禾生物醫(yī)學科技有限公司