專利名稱：一種苦參素、五味子和人參配伍的治療肝炎的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種由苦參素、五味子或其提取物和人參或其提取物制成的用于治療肝炎類疾病的藥物組合物及其制備方法，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
2、背景技術(shù)中國是病毒性肝炎的高發(fā)區(qū)，約有8％-10％的人群為乙肝病毒攜帶者，約為1.3億人，占全球乙肝病毒攜帶者的1/3，其中約有3000萬人患慢性肝炎，平均年發(fā)病例數(shù)約140萬左右，每年因肝炎病死亡約30萬人。丙型肝炎病毒攜帶者0.38億人，加上其他類型的肝炎，患肝炎的總?cè)藬?shù)近2億人，估計(jì)每年因病毒性肝炎導(dǎo)致直接經(jīng)濟(jì)損失300億～500億人民幣。因此，研究開發(fā)安全有效的治療肝炎的藥物，成為迫切需要解決的問題。
苦參素是從豆科植物苦豆子、苦參中提取的生物堿，主要成份是氧化苦參堿和極少量的氧化槐果堿?？鄥⑺鼐哂辛己玫目垢窝鬃饔脩?yīng)用苦參素治療慢性乙型肝炎的臨床癥狀，如乏力、納減和腹脹等，有效率在90％左右。肝、脾腫大有不同程度的回縮，對外周白細(xì)胞減少和血小板減少有一定的升高作用。特別是在肝功能作用的改善方面，取得良好療效。
苦參素五味子為木蘭科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz.) Baill.及華中五味子Schisandrasphenanthera Rehd.et Wils.的的干燥成熟果實(shí)。味酸、甘，性溫，歸肺，心、腎經(jīng)，具有收斂固澀，益氣生津，補(bǔ)腎寧心的功效?，F(xiàn)代研究表明，五味子具有如下藥理作用①能增強(qiáng)大腦皮層興奮和抑制過程，使其相互平衡。②明顯鎮(zhèn)靜作用，與戊巴比妥鈉、氯丙嗪等協(xié)同作用，拮抗興奮藥引起的驚厥，有安定藥的特點(diǎn)。③調(diào)節(jié)免疫、穩(wěn)定肝臟細(xì)胞膜、保護(hù)細(xì)胞器、細(xì)胞核，促進(jìn)病理修復(fù)、改善肝機(jī)能。
人參為五加科植物人參Panax ginseng C.A.Mey.的干燥根及根莖。味甘、微苦，性平；歸脾、肺、心經(jīng)；具有大補(bǔ)元?dú)?，?fù)脈固脫，補(bǔ)脾益肺，生津，安神的功效?，F(xiàn)代研究表明，人參有如下藥理作用①人參能興奮中樞神經(jīng)系統(tǒng)，加快神經(jīng)沖動(dòng)的傳導(dǎo)，增強(qiáng)條件反射，提高分析功能。②能興奮垂體-腎上腺皮質(zhì)系統(tǒng)，增強(qiáng)腎上腺皮質(zhì)功能，提高機(jī)體對外界不良條件刺激的抵抗力。③有強(qiáng)壯作用，能使機(jī)體對疾病抵抗力增強(qiáng)，提高工作效力，減少疲勞，增加體重，改善睡眠等。④本品小量適量可使心臟收縮力加強(qiáng)，心跳加快，有類似強(qiáng)心甙的作用。⑤人參還有促性腺激素樣作用，能促進(jìn)男女性腺機(jī)能。⑥降低血糖，并與胰島素有協(xié)同作用。⑦改善消化吸收功能，增進(jìn)食欲，促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成。⑧對代謝亦有影響，對高血糖有抑制作用，又能調(diào)節(jié)膽固醇代謝，抑制高膽固醇血癥的發(fā)生。⑨人參還能抗利尿，其作用與去氧皮質(zhì)酮相似，可能是由于使醛固酮分泌增加，從而促進(jìn)鈉潴留而使排尿減少。
目前，利用苦參素、五味子和人參的相互作用，配伍組方，用于制備治療肝炎方面的藥物，尚未見報(bào)道。
3、發(fā)明內(nèi)容為了滿足臨床需要，更好的治療肝炎等疾病，提高人民健康水平，本發(fā)明提供了一種新的藥物組合物及其制備方法。
本發(fā)明的藥物組合物主要由下列重量份的原料藥制成苦參素50～2000份、五味子500～20000份、人參500～20000份，優(yōu)選為苦參素100～800份、五味子1000～10000份、人參1000～10000份，最佳為苦參素400份、五味子3000份、人參4000份。
上述藥物組合物的原料藥中的五味子、人參可以用適宜的溶劑和方法制備得到提取物，總提取物再與其它原料藥和藥學(xué)上可接受的輔料混合制成任一制劑，總提取物中所含的主要有效成分為五味子木質(zhì)素類(如五味子醇甲)、人參多糖或人參總皂苷。
上文所述的五味子可以用適宜的溶劑經(jīng)過提取加工得到五味子提取物，其中的溶劑優(yōu)選水或醇，五味子的提取方法可以為浸漬法、滲漉法、煎煮法、超臨界CO2萃取法、回流提取法或連續(xù)提取法。如可通過水提醇沉、乙醇滲漉、醇提上柱制備得到五味子提取物。
本發(fā)明提供了一種五味子提取物的優(yōu)選提取工藝，具體過程如下取五味子藥材，粉碎成粗粉，加水煎煮二次，每2小時(shí)，濾過，濾液濃縮至相對密度1.10～1.15的濃縮液，加乙醇使含醇量達(dá)60％，冷藏放置24小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至相對密度1.10～1.15的濃縮液，再加乙醇使含醇量達(dá)80％，冷藏放置24小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至相對密度1.30～1.35的稠膏，真空干燥，即得。
通過本工藝制備的五味子提取物，得率為2～4％，五味子醇甲含量不低于10％，醚溶性浸出物含量不低于30％。
五味子還可由如下工藝制備，但不僅限于下述方法方法1取五味子藥材，粉碎成粗粉，加60％乙醇煎煮二次，每2小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至相對密度1.10～1.15的濃縮液，再加乙醇使含醇量達(dá)80％，冷藏放置24小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至相對密度1.30～1.35的稠膏，真空干燥，即得。通過本工藝制備的五味子提取物，得率為1～5％，五味子醇甲含量不低于6％，醚溶性浸出物含量不低于20％。
方法2取五味子藥材，粉碎成粗粉，加水煎煮二次，每2小時(shí)，濾過，濾液濃縮至相對密度1.10～1.15的濃縮液，加乙醇使含醇量達(dá)70％，冷藏放置24小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至相對密度1.10～1.15的濃縮液，再加乙醇使含醇量達(dá)90％，冷藏放置24小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至相對密度1.30～1.35的稠膏，真空干燥，即得。通過本工藝制備的五味子提取物，得率為1.5～5.5％，五味子醇甲含量不低于8％，醚溶性浸出物含量不低于25％。
上文所述的人參可以用適宜的溶劑經(jīng)過提取加工得到人參提取物，提取溶劑優(yōu)選水或乙醇，提取方法可以為浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取法或連續(xù)提取法，提取物的有效成分為人參多糖或人參總皂苷，有效成分的含量最好不低于50％。
人參的提取方法也可參照文獻(xiàn)方法制備如人參多糖可根據(jù)中國專利申請CN200410000209.4制備，人參總皂苷可根據(jù)中國專利申請CN00110418.7制備。
本發(fā)明提供了人參的優(yōu)選提取工藝，具體過程如下以多糖為主要有效成分的人參提取物(以下簡稱人參多糖)的優(yōu)選制備工藝如下取人參藥材，切碎，用75％乙醇，回流提取4小時(shí)，濾過，藥渣晾干，加水煎煮五次，合并煎煮液，加入0.3％活性炭，攪拌30分鐘，靜置過夜，濾過，濾液過樹脂柱，收集流出液，減壓濃縮，加乙醇使含醇量達(dá)95％，冷藏，濾過，取沉淀用丙酮洗滌，抽干丙酮，取出沉淀于60～80℃干燥，粉碎，得粉末即得。
通過本工藝制備的人參提取物，得率為0.5～2％，人參多糖的含量不低于50％。
人參多糖還可由如下工藝制備，但不僅限于下述方法方法1取人參，切碎，加水回流提取三次，每次2小時(shí)，第一次加水10倍量，二、三次為8、8倍量，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.16～1.24，過大孔樹脂柱，收集流出液，減壓濃縮至稠膏狀，真空干燥，即得。通過本工藝制備的人參提取物，得率為4～6％，人參多糖的含量不低于40％。
方法2取人參，切碎，用80％乙醇，回流提取3小時(shí)，濾過，藥渣晾干，加水煎煮三次，每次1.5小時(shí)，加水10倍量，合并煎煮液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.15～1.20，過大孔樹脂，流出液減壓濃縮至稠膏狀，噴霧干燥即得。通過本工藝制備的人參提取物，得率為2～4％，人參多糖含量不低于45％。
本發(fā)明提供了以總皂苷為主要有效成分的人參提取物(以下簡稱人參總皂苷)的優(yōu)選制備工藝，具體如下取人參藥材，粉碎成細(xì)粒，加10倍量乙醇回流提取二次，每次3小時(shí)，合并提取液，冷藏，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至稠膏，加水至適量(使每1ml相當(dāng)于原藥材1g)，攪勻，冷藏，濾過，濾液加于已處理好的大孔樹脂柱上，先用2V～3V柱體積的水進(jìn)行洗脫，棄去水洗液，再用3倍柱體積的80％乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并減壓濃縮至相對密度1.30～1.35的稠膏，真空干燥，即得。
通過本工藝制備得到的人參總皂苷提取物，得率為1～2％，人參總皂苷含量不低于50％，人參皂苷Re、人參皂苷Rg1含量不低于30％。
人參總皂苷還可由如下工藝制備，但不僅限于下述方法方法1取人參藥材，粉碎成細(xì)粒，加乙醇回流提取二次，每次4小時(shí)，每次加醇10倍量，合并提取液，冷藏，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至稠膏，加水稀釋至相對密度為1.15～1.20，加1/2倍量水飽和正丁醇提取3次，合并正丁醇液，減壓回收正丁醇至稠膏狀，噴霧干燥即得。通過本工藝制備的人參提取物，得率為4～5％，人參總皂苷含量不低于35％，人參皂苷Re、人參皂苷Rg1含量和不低于20％。
方法2取人參藥材，粉碎成細(xì)粒，加乙醇回流提取三次，第一次加醇10倍量，二、三次為8、8倍量，每次2小時(shí)，合并提取液，濾過，回收乙醇并濃縮至稠膏，加水至適量，攪勻，冷藏，濾過，濾液加1/2倍量水飽和正丁醇提取3次減壓濃縮，合并正丁醇液，減壓回收正丁醇至稠膏狀，噴霧干燥即得。通過本工藝制備的人參提取物，得率為3～5％，人參總皂苷含量為不低于40％，人參皂苷Re、人參皂苷Rg1含量和不少于20％。
本發(fā)明的藥物組合物，還可以由苦參素、五味子提取物、人參多糖或人參總皂苷制成。按照提取物相對于藥材的得率計(jì)算，本發(fā)明復(fù)方藥物可以有以下兩種不同配比，按重量份數(shù)比分別為配比1苦參素50～2000份、五味子提取物15～600份、人參多糖6～240份；優(yōu)選為苦參素100～800份、五味子提取物30～300份、人參多糖12～120份；最優(yōu)為苦參素提取物400份、五味子提取物60～120份、人參多糖20～80份。
配比2苦參素50～2000份、五味子提取物15～600份、人參總皂苷6～240份；優(yōu)選為苦參素100～800份、五味子提取物30～300份、人參總皂苷12～120份；最優(yōu)為苦參素提取物400份、五味子提取物60～120份、人參總皂苷20～80份。
上述配比中，五味子提取物中五味子醇甲含量最好不低于5％，醚浸出物含量最好不低于15％；人參多糖含量最好不低于30％，人參總皂苷含量最好不低于30％，其中的人參皂苷Re和人參皂苷Rg1含量最好不低于15％。
以上組成是按重量份作為配比的，在生產(chǎn)時(shí)可按照相應(yīng)比例增大或減小，如大規(guī)模生產(chǎn)可以以千克為單位，或以噸為單位，小規(guī)模生產(chǎn)也可以以克為單位，重量可以增大或者減小，但各組成之間重量配比的比例不變。
以上組成，若以克為單位，可以制成100～10000次用量的制劑，如作為注射劑，可制成100～10000支，每次用量1～10支。如作為片劑，可制成100～10000片，每次服用1～10片。
以上重量配比的比例是經(jīng)過科學(xué)篩選得到的，對于特殊病人，可以相應(yīng)調(diào)整組成的比例，增加或者減少不超過100％。本發(fā)明藥物組分的用量是經(jīng)過發(fā)明人進(jìn)行大量摸索總結(jié)得出的，各組分用量在上述重量份范圍內(nèi)都具有較好療效。
本發(fā)明提供了一種用于制備治療肝炎類疾病的藥物，可用于甲肝、乙肝、丙肝等各種類型的肝炎。
本發(fā)明的藥物組合物可以加一種或多種藥學(xué)上可接受的載體，以口服、鼻吸入或腸胃外給藥的方式施用于需要這種治療的患者。用于口服時(shí)，可將其制成常規(guī)的固體制劑，如片劑、膠囊、軟膠囊、分散片、口服液、顆粒、咀嚼片、口崩片、滴丸、緩釋片、緩釋膠囊、控釋片、控釋膠囊，制成液體制劑如水或油懸浮劑或其它液體制劑如糖漿等；用于腸胃外給藥時(shí)，可將其制成注射用的溶液、水或油懸浮劑等，如水針、凍干粉針、無菌粉針、輸液等。本組合物的優(yōu)選的劑型是注射劑或口服制劑。
本發(fā)明的藥物組合物可采用現(xiàn)有制藥領(lǐng)域中的常規(guī)方法生產(chǎn)，需要的時(shí)候可以添加各種藥學(xué)上可接受的載體。所述的載體包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體、潤滑劑等。
本發(fā)明的藥物組合物在制成注射劑時(shí)，為了增加其溶解度，可以加入聚山梨酯-80等增溶劑。輸液中可以加入用于調(diào)節(jié)滲透壓的等滲調(diào)節(jié)劑，例如，氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂、氯化鈣、乳酸鈉、葡萄糖、木糖醇、山梨醇和右旋糖苷等，優(yōu)選氯化鈉或葡萄糖。粉針中可加入賦形劑，例如，甘露醇、葡萄糖等。
本發(fā)明的藥物組合物具有以下優(yōu)點(diǎn)(1)本發(fā)明提供了一種新的用于治療肝炎的藥物組合物，滿足了臨床需要。
(2)首次通過藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究證明本發(fā)明的藥物組合物對醋氨酚、四氯化碳所致的小鼠急性肝損傷有保護(hù)作用，可以抑制鴨乙肝病毒的繁殖，可抗四氯化碳所致的大鼠肝纖維化。三藥具有協(xié)同增效作用，療效顯著。這是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所預(yù)想不到的。
(3)對本發(fā)明組合物各配比進(jìn)行了藥效學(xué)研究，得出了本發(fā)明組合物的最優(yōu)配比。
(4)本發(fā)明可以以原料或提取物直接投料，制備工藝簡單，可以使不同批次藥品間質(zhì)量差異小，藥品質(zhì)量更均勻穩(wěn)定。
(5)通過特殊安全性試驗(yàn)和穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)證實(shí)，本發(fā)明的藥物組合物注射劑安全穩(wěn)定。
(6)苦參素具有良好的抗肝炎作用，五味子和人參作輔助可顯著提高抗肝炎療效，合并用藥療效確切，且減小了相對用藥劑量，具有廣泛的應(yīng)用前景。
以下通過實(shí)驗(yàn)例來進(jìn)一步闡述本發(fā)明所述藥物的有益效果，這些實(shí)驗(yàn)例包括本發(fā)明的藥物組合物的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，苦參素、五味子提取物和人參多糖的組合物以下簡稱KWR組合物I，苦參素、五味子提取物和人參總皂苷的組合物以下簡稱KWR組合物II。實(shí)驗(yàn)例中所用的五味子提取物取自實(shí)施例1，人參多糖取自實(shí)施例2，人參總皂苷取自實(shí)施例3。
實(shí)驗(yàn)例1 KWR組合物合并用藥藥效研究供試品空白對照組0.9％生理鹽水注射液，自制；模型組0.9％生理鹽水注射液，自制；苦參素組苦參素注射液，天津市生物化學(xué)制藥廠；五味子組五味子提取物注射液，自制；人參多糖組人參多糖，自制，取自實(shí)施例1所制的人參多糖；人參總皂苷組人參總皂苷，自制，取自實(shí)施例2所制的人參總皂苷；KWR組合物I不同配比組KWR組合物I注射液(苦參素+五味子提取物+人參多糖)不同配比，自制(制備方法參見實(shí)施例4)；KWR組合物II不同配比組KWR組合物II注射液(苦參素+五味子提取物+人參總皂苷)不同配比，自制(制備方法參見實(shí)施例5)。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物ICR小鼠，體重18～25g，雌雄各半。
實(shí)驗(yàn)方法取小鼠180只，隨機(jī)分成18組，每組10只，組別見下表?？瞻讓φ战M和模型組每日尾靜脈注射生理鹽水20ml/kg鼠重，每日1次，連續(xù)10d；給藥組尾靜脈注射給藥，每日1次，劑量見下表，連續(xù)10d。空白對照組在最后一次尾靜脈注射6h后腹腔注射生理鹽水。模型組和給藥組在最后一次尾靜脈注射6h后腹腔注射醋氨酚300mg/kg鼠重，各組在腹腔注射生理鹽水及醋氨酚16h后斷頭，取血液、肝臟，進(jìn)行生化指標(biāo)血清ALT(谷丙轉(zhuǎn)氨酶)和肝組織LPO(過氧化脂質(zhì))的測試，結(jié)果見表1。
表1 KWR組合物對醋氨酚損傷小鼠肝組織ALT和LPO的影響
與空白對照組比較，◇◇P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與苦參素組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與五味子組比較，△P＜0.05，△△p＜0.01；與人參多糖組比較，☆P＜0.05，☆☆P＜0.01；與人參總皂苷組比較，&P＜0.05，&&P＜0.01。
結(jié)論與空白對照組相比，模型組ALT和LPO的活性顯著升高，差異顯著(P＜0.01)，說明造?？煽?。與模型組相比，苦參素組、五味子組、人參多糖組、人參總皂苷組和KWR組合物I和KWR組合物II各配比組ALT和LPO的活性明顯降低(P＜0.05，P＜0.01)，說明各藥均對醋氨酚所致小鼠肝損傷有保護(hù)作用。其中KWR組合物I和KWR組合物II各配比組療效更好(P＜0.01)，均優(yōu)于單用苦參素、五味子、人參多糖或人參總皂苷，說明苦參素、五味子和人參三藥合用，有協(xié)同增效作用。KWR組合物I和KWR組合物II各配比組中，均以苦參素+五味子+人參(400mg+3g+4g)組療效最為顯著。
實(shí)驗(yàn)例2 KWR組合物對四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用供試品空白對照組0.9％生理鹽水注射液，自制；模型組0.9％生理鹽水注射液，自制；苦參素組苦參素注射液，天津市生物化學(xué)制藥廠，2ml0.2g；KWR組合物I低、中、高劑量組KWR組合物I注射液，自制(制備方法參見實(shí)施例4)；KWR組合物II低、中、高劑量組KWR組合物II注射液，自制(制備方法參見實(shí)施例5)。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物ICR小鼠，體重22～24g，雌雄各半。
實(shí)驗(yàn)方法取小鼠90只，隨機(jī)分為9組，分別為空白對照組、模型組、苦參素組、KWR組合物I低、中、高劑量組和KWR組合物II低、中、高劑量組，每組10只?？瞻讓φ战M和模型組每日尾靜脈注射生理鹽水20ml/kg鼠重，每日1次，連續(xù)7d；給藥組尾靜脈注射給藥，每日1次，劑量見下表，連續(xù)7d?？瞻讓φ战M在最后一次尾靜脈注射2h后腹腔注射花生油10ml/kg，其余各組動(dòng)物均腹腔注射0.12％CCl4花生油溶液10ml/kg，禁食過夜。16h后斷頭處死動(dòng)物，取血清測試ALT、AST的值。斷頭取血后，立即剖腹取出肝臟、脾臟，吸去血液，剪去脂肪、系膜，精確稱重肝臟、脾臟的重量。結(jié)果見表2。
表2 KWR組合物對CCl4所致急性肝損傷小鼠肝、脾指數(shù)和血清ALT、AST含量的影響
與空白對照組比較◇P＜0.05，◇◇P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與苦參素組比較，#P＜0.05，##P＜0.01結(jié)論CCl4模型組小鼠肝指數(shù)、脾指數(shù)較正常對照組小鼠數(shù)值增高(P＜0.05)，CCl4模型組小鼠血清ALT、AST值較正常對照組小鼠數(shù)值增高(P＜0.01)，說明小鼠注射CCl4花生油溶液后肝臟損傷，造模成功，模型穩(wěn)定可靠。與模型組相比，KWR組合物I和KWR組合物II中、高劑量組小鼠肝指數(shù)、脾指數(shù)降低(P＜0.05)，肝、脾腫大減輕，KWR組合物I和KWR組合物II各劑量組血清ALT、AST值明顯降低(P＜0.05或P＜0.01)，說明本發(fā)明組合物對CCl4所致急性肝損傷有保護(hù)作用。其中組合物各劑量組療效均優(yōu)于單用苦參素，說明苦參素、五味子和人參三藥合用，有協(xié)同增效作用。
實(shí)驗(yàn)例3 KWR組含物抗鴨乙肝病毒作用供試品空白對照組0.9％生理鹽水注射液，自制；
苦參素組苦參素注射液，天津市生物化學(xué)制藥廠，2ml0.2g；陽性對照組注射用阿昔洛韋，石藥集團(tuán)中諾藥業(yè)(石家莊)有限公司；KWR組合物I低、中、高劑量組KWR組合物I注射液，自制(制備方法參見實(shí)施例4)；KWR組合物II低、中、高劑量組KWR組合物II注射液，自制(制備方法參見實(shí)施例5)。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物市售1日齡北京鴨；DHBV(乙型肝炎病毒)陽性血清，復(fù)旦大學(xué)醫(yī)學(xué)院微生物學(xué)教研室。
實(shí)驗(yàn)方法4.1動(dòng)物模型北京鴨經(jīng)足靜脈注射0.2mlDHBV陽性血清，7d后取血，分離血清，-20℃保存待檢。
4.2藥物治療篩選出感染成功的陽性鴨54只，隨機(jī)分為9組，分別為空白對照組、苦參素組、陽性對照組、KWR組合物I低、中、高劑量組和KWR組合物II低、中、高劑量組，每組6只?？瞻讓φ战M每日灌胃生理鹽水20ml/kg，每日2次，連續(xù)14d；給藥組灌胃給藥，每日2次，劑量見下表，連續(xù)14d。陽性藥物作為治療對照組，以ACV按100mg/kg灌胃，2次/d，給藥2周。分別用于藥前(1d)、用藥第7天(T7)，用藥第14天(T14)和停藥后第7天(P7)。自鴨腿脛靜脈取血，分離血清，-20℃保存待檢。采用DHBV-DNADotBlot法，以雜交斑點(diǎn)吸光度值(A)作為標(biāo)本DHBV-DNA水平值。結(jié)果見表3。
表3 KWR組合物對DHBV-DNA的抑制作用
注與空白對照組比較◇P＜0.05，◇◇P＜0.01；與給藥前相比@P＜0.05，@@P＜0.01。
結(jié)論陽性對照(阿昔洛韋)組在給藥后第7天和第14天，與給藥前及與空白對照組比較，差異有顯著性(P＜0.01)，但停藥后又顯著升高，與給藥前比較差異無顯著性(P＞0.05)。不同劑量KWR組合物I和KWR組合物II均對DHBV有抑制作用，且停藥后無反跳，其中中、高劑量組抑制作用更為明顯。KWR組合物I和KWR組合物II各給藥組療效均優(yōu)子單用苦參素，說明苦參素、五味子和人參三藥合用，有協(xié)同增效作用。
實(shí)驗(yàn)例4 KWR組合物抗大鼠肝纖維化作用供試品空白對照組0.9％生理鹽水注射液，自制；
模型組0.9％生理鹽水注射液，自制；苦參素組苦參素注射液，天津市生物化學(xué)制藥廠，2ml0.2g；KWR組合物I低、中、高劑量組KWR組合物I注射液，自制(制備方法參見實(shí)施例4)；KWR組合物II低、中、高劑量組KWR組合物II注射液，自制(制備方法參見實(shí)施例5)。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar大鼠，體重180～230g，雄性。
實(shí)驗(yàn)方法取健康大鼠10只，皮下注射花生油3ml/kg，每日1次，共10周，作為對照組。肝纖維化模型組應(yīng)用40％CCl4花生油溶液按3ml/kg皮下注射，每周2次，共8周，誘導(dǎo)肝纖維化模型。取肝纖維化模型大鼠80只，隨機(jī)分為8組，分別為模型組、苦參素組、KWR組合物I低、中、高劑量組和KWR組合物II低、中、高劑量組，每組10只。除對照組外，其余各組繼續(xù)以40％CCl4花生油溶液3ml/kg皮下注射，每日1次?？鄥⑺亟M、KWR組合物I低、中、高劑量組和KWR組合物II低、中、高劑量組同時(shí)灌胃給藥相應(yīng)藥物，劑量見下表。繼續(xù)給藥2周。10周后宰殺大鼠，無菌操作取血2ml，分離血清，-20℃保存，用放射免疫法檢測肝纖維化指標(biāo)透明質(zhì)酸(HA)和層粘蛋白(LN)；用生化法檢測谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)，采用全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行檢測。結(jié)果見表4。
表4 KWR組合物對CCl4所致肝纖維化大鼠的血清學(xué)指標(biāo)的影響
與空白對照組比較◇◇◇P＜0.001；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01與苦參素組比較，#P＜0.05。
結(jié)論與空白對照組比較，模型組大鼠血清ALT、AST、HA、LN含量有顯著性差異，說明模型穩(wěn)定可靠?？鄥⑺?、KWR組合物I和KWR組合物II治療后肝纖維化大鼠血清ALT和AST均低于模型組，差異具有顯著性(P＜0.05或P＜0.01)，提示苦參素、KWR組合物I和KWR組合物II有降酶和保護(hù)肝功能的作用；苦參素、KWR組合物I和KWR組合物II治療后血清HA和LN水平均顯著低于模型組，差異具有顯著性(P＜0.05或P＜0.01)，提示苦參素、KWR組合物I和KWR組合物II均有改善肝纖維化血清學(xué)指標(biāo)，具有抗肝纖維化的作用。其中，KWR組合物I和KWR組合物II組療效優(yōu)于苦參素組，提示苦參素、五味子和人參三藥合用，有協(xié)同增效作用。
實(shí)驗(yàn)例5 小鼠注射給藥急性毒性實(shí)驗(yàn)
(1)實(shí)驗(yàn)方法供試品KWR組合物注射液I，劑型水針，規(guī)格5ml，來源于實(shí)施例4；KWR組合物注射液II，劑型水針，規(guī)格5ml，來源于實(shí)施例5。
受試動(dòng)物小鼠，每組雌雄各5只，雄性體重25～28g，雌性體重21～24g。
給藥途徑靜脈注射、腹腔注射。
觀察項(xiàng)目死亡數(shù)、一般狀態(tài)、體重、剖檢、半數(shù)致死劑量。
(2)實(shí)驗(yàn)結(jié)果按照急性毒性實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行預(yù)試，腹腔注射及靜脈注射兩給藥途徑皆無法測出藥物的半數(shù)致死量，也未見明顯的毒性反應(yīng)，故進(jìn)行一日內(nèi)最大給藥量實(shí)驗(yàn)。給藥劑量尾靜脈分別注射KWR組合物注射液I、KWR組合物注射液II各0.1ml/10g，腹腔分別注射KWR組合物注射液I、KWR組合物注射液II各0.1ml/10g，一日2次。
死亡數(shù)未出現(xiàn)死亡。
一般狀態(tài)未見異常變化。
體重于給藥前1天，給藥日，給藥后1、3、7、14天測量；未見異常變化。
剖檢心、肝、肺、腎等組織未見異常變化。
(3)結(jié)論本實(shí)驗(yàn)中未出現(xiàn)死亡，推測KWR組合物注射液I、II對雌雄小鼠靜脈和腹腔注射給藥的最大耐受量均為0.2ml/10g，相當(dāng)于50kg體重人日最大用量10ml的100倍。表明本品低毒，安全性高。
實(shí)驗(yàn)例6 KWR組合物注射液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)供試品KWR組合物注射液I，劑型水針，規(guī)格5ml，來源于實(shí)施例4；KWR組合物注射液II，劑型水針，規(guī)格5ml，來源于實(shí)施例5。
考察項(xiàng)目性狀、pH值、澄明度長期穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果將本品各組合物置溫度25℃±2℃、相對濕度60％±10％的條件下放置6個(gè)月、12個(gè)月，各項(xiàng)指標(biāo)均無明顯變化，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本品各組合物注射液長期放置基本穩(wěn)定。
具體實(shí)施方式
以下通過實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式
，對本發(fā)明的上述內(nèi)容作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)施例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。以下實(shí)施例中各劑型的輔料可以用藥學(xué)上可接受的輔料替換，或者減少、增加。實(shí)施例4～17中所用的五味子提取物取自實(shí)施例1，人參多糖取自實(shí)施例2，人參總皂苷取自實(shí)施例3。
實(shí)施例1 五味子提取物的制備取五味子藥材，粉碎成粗粉，加水煎煮2次，每2小時(shí)，濾過，濾液濃縮至相對密度1.10～1.15的濃縮液，加乙醇使含醇量達(dá)60％，冷藏放置24小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至相對密度1.10～1.15的濃縮液，再加乙醇使含醇量達(dá)80％，冷藏放置24小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至相對密度1.30～1.35的稠膏，真空干燥，即得。
通過本工藝制得的五味子提取物，得率為2～4％。提取物中五味子醇甲含量不低于10％；醚溶性浸出物含量不低于30％。
五味子提取物的鑒別取本品粉末1g，加三氯甲烷20ml，加熱回流20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄?ml使溶解，作為供試品溶液。另取五味子對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。再取五味子甲素對照品，加三氯甲烷制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
五味子提取物的含量測定五味子醇甲的含量測定照高效液相色譜法(附錄VID)測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水(13∶7)為流動(dòng)相；檢測波長為250nm。理論板數(shù)按五味子醇甲峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
對照品溶液的制備取五味子醇甲對照品15mg，精密稱定，置50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml含五味子醇甲0.3mg)。
供試品溶液的制備取本品粉末約0.1g，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇約20ml，超聲處理(功率250W，頻率44kHz)20分鐘，取出，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
醚溶性浸出物的含量測定照揮發(fā)性醚浸出物測定法(附錄X)測定。
取本品粉末(過四號篩)4g，置五氧化二磷干燥器中干燥12小時(shí)，置索氏提取器中，加乙醚適量，加熱回流8小時(shí)，取乙醚液，置干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，放置，揮去乙醚，殘?jiān)梦逖趸赘稍锲髦懈稍?8小時(shí)，精密稱定，緩緩加熱至105℃，并于105℃干燥至恒重。其減失重量即為揮發(fā)性醚浸出物的重量。計(jì)算醚浸出物含量。
根據(jù)上述工藝，制得三批五味子提取物樣品，其含量和得率見下表。由結(jié)果可以看出，通過本工藝制備的五味子提取物，得率為2～4％，提取物中五味子醇甲的含量不低于10％，醚溶性浸出物含量不低于30％。
實(shí)施例2 以多糖為主要有效成分的人參提取物即人參多糖的制備取生曬參，切碎，用75％乙醇，回流提取4小時(shí)，濾過，藥渣晾干，加水煎煮五次，合并煎煮液，加入0.3％活性炭，攪拌30分鐘，靜置過夜，濾過，濾液過樹脂柱，收集流出液，減壓濃縮，加乙醇使含醇量達(dá)95％，冷藏，濾過，取沉淀用丙酮洗滌，抽干丙酮，取出沉淀于60～80℃干燥，粉碎即得。
人參多糖鑒別實(shí)驗(yàn)(1)取本品約0.2g，加水5ml溶解后，加堿性酒石酸銅試液5滴，加熱即產(chǎn)生紅色沉淀，冷卻，濾過，取濾液加鹽酸1滴使成酸性，水浴加熱10分鐘，放冷，調(diào)節(jié)pH值至中性，加堿性酒石酸銅試液0.5ml，水浴加熱即產(chǎn)生紅色的氧化亞銅沉淀。
(2)取本品約0.2g，加水2ml溶解后，加5％α-萘酚乙醇溶液0.5ml搖勻，緩緩加入硫酸3ml，兩液面交界處顯紫紅色環(huán)。
人參多糖的含量測定對照品溶液的制備 精密稱取60℃真空干燥至恒重的半乳糖醛酸約100mg，置100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。
供試品溶液的制備精密稱取本品50mg，置100ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定法精密量取對照品溶液、供試品溶液及水各1ml，分別精密加入0.25mol/L硼砂硫酸溶液6ml，置水浴中加熱30分鐘，放冷，再分別精密加入0.125％咔唑無水乙醇溶液0.4ml，置水浴中加熱10分鐘，放冷至室溫，照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄V B)實(shí)驗(yàn)，在530nm波長處測定吸收度，計(jì)算，即得。
根據(jù)上述工藝，制得人參提取物三批樣品，其含量和得率見下表。由結(jié)果可以看出，通過本工藝制備的人參多糖提取物中人參多糖，得率為0.5～2％，人參多糖的含量不低于50％。
實(shí)施例3 以總皂苷為主要有效成分的人參提取物即人參總皂苷的制備人參總皂苷制備工藝取人參藥材，粉碎成細(xì)粒，乙醇回流提取二次，每次3小時(shí)，每次加醇10倍量，合并提取液，冷藏，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至稠膏，加水至適量(使每1ml相當(dāng)于原藥材1g)，攪勻，冷藏，濾過，濾液加于已處理好的大孔樹脂柱上，先用2V～3V柱體積的水進(jìn)行洗脫，棄去水洗液，再用3倍柱體積的80％乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并減壓濃縮至相對密度1.30～1.35的稠膏，真空干燥，即得。
人參總皂苷的鑒別取本品0.5g，加水0.5ml攪拌潤濕，加水飽和正丁醇10ml，超聲處理30分鐘，吸取上清液加3倍量氨試液，搖勻，放置分層，取上層液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取人參皂苷Re、Rg1對照品，加甲醇制成每1ml含2mg的混合溶液，作為對照品溶液。吸取上述兩種溶液各2ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
人參總皂苷的含量測定對照品溶液制備取人參皂甙Rg1對照品約10mg，經(jīng)60℃真空干燥2小時(shí)，精密稱定，置100ml量瓶中，用無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制得每1ml含Rg1對照品0.1mg的溶液，即得。
供試品溶液制備精密稱取本品50mg，置50ml量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取2ml，置10ml量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定法 精密量取供試品溶液和對照品溶液各1ml，分別置10ml具塞試管中，在水浴上蒸干，放冷，加入5％香草醛冰醋酸溶液0.2ml，再加入高氯酸0.8ml，于60℃保溫15分鐘，冷卻至室溫，加冰醋酸5ml，搖勻；同時(shí)作空白對照。照分光光度法(中國藥典2000年版一部附錄V B)，在560nm波長處測定吸收度，計(jì)算，即得。
人參皂苷Re、人參皂苷Rg1含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水(22∶78)為流動(dòng)相；檢測波長為203nm。理論板數(shù)按人參皂苷Re峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
對照品溶液的制備精密稱取人參皂苷Rg1對照品、Re對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的混合溶液。
供試品溶液的制備取本品0.2g，精密稱定，精密加入水飽和正丁醇30ml，密塞，放置過夜，超聲處理(功率250W，頻率50kHz)30分鐘，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液15ml，置蒸發(fā)皿中蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至5ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。
測定法 分別精密吸取對照品和供試品溶液各20ul，注入液相色譜儀，測定，即得。結(jié)果見下表。
根據(jù)上述工藝，制得人參總皂苷三批樣品，其含量和得率見下表。由結(jié)果可以看出，通過本工藝制備得到的人參總皂苷提取物得率為1～2％，人參總皂苷含量不低于50％，人參皂苷Re、人參皂苷Rg1含量不低于30％。
實(shí)施例4 KWR組合物I水針劑的制備處方苦參素400.0g五味子提取物 90.3g(相當(dāng)于五味子3g)人參多糖 48.0g(相當(dāng)于人參4g)聚山梨酯8010.0g注射用水 加至5000ml
共制備1000支制備工藝1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)將苦參素和人參多糖加入配液量30％的注射用水中加熱攪拌溶解完全。將五味子提取物加入少量注射用水，加入處方量的聚山梨酯80加熱攪拌溶解。
3)合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
6)經(jīng)0.45um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
8)將溶液熔封于玻璃安瓿中。
9)100℃流通蒸汽滅菌30分鐘。
10)趁熱將樣品放入0.01％的亞甲藍(lán)溶液中檢漏。
11)燈檢，成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例5 KWR組合物II水針劑的制備處方苦參素 400.0g五味子提取物90.3g(相當(dāng)于五味子3g)人參總皂苷 48.4g(相當(dāng)于人參4g)聚山梨酯80 20.0g注射用水加至5000ml
共制備 1000支制備工藝1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)將苦參素加入配液量30％的注射用水中加熱攪拌溶解完全。將五味子提取物和人參總皂苷加入少量注射用水，加入處方量的聚山梨酯80加熱攪拌溶解。
3)合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
6)經(jīng)0.45um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
8)將溶液熔封于玻璃安瓿中。
9)100℃流通蒸汽滅菌30分鐘。
10)趁熱將樣品放入0.01％的亞甲藍(lán)溶液中檢漏。
11)燈檢，成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例6 KWR組合物I粉針劑的制備處方苦參素 400.0g五味子提取物 90.3g(相當(dāng)于五味子3g)人參多糖 48.0g(相當(dāng)于人參4g)聚山梨酯80 10.0g甘露醇 400.0g無菌注射用水 加至3000ml
共制備 1000支制備工藝1)首先將配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，膠塞等進(jìn)行無菌處理。
2)按照處方量稱取原料和輔料。
3)將苦參素和人參多糖加入配液量30％的注射用水中加熱攪拌溶解完全。將五味子提取物加入少量注射用水，加入處方量的聚山梨酯80加熱攪拌溶解。合并上述溶液，補(bǔ)加無菌注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
6)經(jīng)0.22um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
8)分裝于抗生素玻璃瓶中，半壓塞。將樣品放入凍干機(jī)中冷凍干燥。預(yù)凍-45℃5小時(shí)，低溫真空干燥-45℃～0℃20小時(shí)，然后升溫至25℃真空干燥3小時(shí)。
9)凍干結(jié)束，壓塞，軋蓋。
10)成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施7 KWR組合物II粉針劑的制備處方苦參素 400.0g五味子提取物 90.3g(相當(dāng)于五味子3g)人參總皂苷 48.4g(相當(dāng)于人參4g)聚山梨酯80 20.0g甘露醇 400.0g無菌注射用水 加至3000ml
共制備 1000支制備工藝1)首先將配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，膠塞等進(jìn)行無菌處理。
2)按照處方量稱取原料和輔料。
3)將苦參素加入配液量30％的注射用水中加熱攪拌溶解完全。將五味子提取物和人參總皂苷加入少量注射用水，加入處方量的聚山梨酯80加熱攪拌溶解。合并上述溶液，補(bǔ)加無菌注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
6)經(jīng)0.22um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
8)分裝于抗生素玻璃瓶中，半壓塞。將樣品放入凍干機(jī)中冷凍干燥。預(yù)凍-45℃5小時(shí)，低溫真空干燥-45℃～0℃20小時(shí)，然后升溫至25℃真空干燥3小時(shí)。
9)凍干結(jié)束，壓塞，軋蓋。
10)成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例8 KWR組合物I氯化鈉輸液的制備處方苦參素 400.0g五味子提取物 90.3g(相當(dāng)于五味子3g)人參多糖 48.0g(相當(dāng)于人參4g)聚山梨酯80 10.0g氯化鈉 900g注射用水 加至100000ml
共制備 1000瓶制備工藝1)前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)將苦參素和人參多糖加入配液量30％的注射用水中加熱攪拌溶解完全。將五味子提取物加入少量注射用水，加入處方量的聚山梨酯80加熱攪拌溶解。將氯化鈉用適量注射用水溶解完全，合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。
3)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
4)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
5)經(jīng)0.45um的微孔濾膜精濾。
6)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
7)灌裝于100ml的輸液瓶中。
8)115℃熱壓滅菌30分鐘。
9)燈檢，成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例9 KWR組合物II氯化鈉輸液的制備處方苦參素 400.0g五味子提取物 90.3g(相當(dāng)于五味子3g)人參總皂苷 48.4g(相當(dāng)于人參4g)聚山梨酯80 20.0g氯化鈉 900g注射用水 加至100000ml
共制備 1000瓶制備工藝1)前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)將苦參素加入配液量30％的注射用水中加熱攪拌溶解完全。將五味子提取物和人參總皂苷加入少量注射用水，加入處方量的聚山梨酯80加熱攪拌溶解。將氯化鈉用適量注射用水溶解完全，合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。
3)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
4)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
5)經(jīng)0.45um的微孔濾膜精濾。
6)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
7)灌裝于100ml的輸液瓶中。
8)115℃熱壓滅菌30分鐘。
9)燈檢，成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例10 KWR組合物I葡萄糖輸液的制備處方苦參素400.0g五味子提取物 90.3g(相當(dāng)于五味子3g)人參多糖 48.0g(相當(dāng)于人參4g)聚山梨酯8010.0g葡萄糖5000g注射用水 加至100000ml
共制備1000瓶制備工藝1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)將苦參素和人參多糖加入配液量30％的注射用水中加熱攪拌溶解完全。將五味子提取物加入少量注射用水，加入處方量的聚山梨酯80加熱攪拌溶解。合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。將葡萄糖用配液量40％的注射用水溶解完全，加熱煮沸15分鐘。
3)合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
6)經(jīng)0.45um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
8)灌裝于100ml的輸液瓶中。
9)115℃熱壓滅菌30分鐘。
10)燈檢，成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例11 KWR組合物II葡萄糖輸液的制備處方苦參素400.0g五味子提取物 90.3g(相當(dāng)于五味子3g)人參總皂苷48.4g(相當(dāng)于人參4g)聚山梨酯8020.0g葡萄糖5000g注射用水 加至100000ml
共制備1000瓶制備工藝1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)將苦參素加入配液量30％的注射用水中加熱攪拌溶解完全。將五味子提取物和人參總皂苷加入少量注射用水，加入處方量的聚山梨酯80加熱攪拌溶解。合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。將葡萄糖用配液量40％的注射用水溶解完全，加熱煮沸15分鐘。
3)合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測定并調(diào)節(jié)溶液的pH值。
6)經(jīng)0.45um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
8)灌裝于100ml的輸液瓶中。
9)115℃熱壓滅菌30分鐘。
10)燈檢，成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例12 KWR組合物片劑的制備KWR組合物I處方苦參素400.0g五味子提取物 90.3g(相當(dāng)于五味子3g)人參多糖 48.0g(相當(dāng)于人參4g)淀粉 40.0g微晶纖維素40.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂 5.0g羧甲淀粉鈉10.0g
共制備1000片KWR組合物II處方苦參素400.0g五味子提取物 90.3g(相當(dāng)于五味子3g)人參總皂苷48.4g(相當(dāng)于人參4g)淀粉 40.0g微晶纖維素40.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂 5.0g羧甲淀粉鈉10.0g
共制備1000片制備工藝1)將苦參素、人參多糖(或人參總皂苷)和五味子提取物分別粉碎過100目篩備用。
2)按照處方量稱取原料和輔料。
3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用。
4)將人參多糖(或人參總皂苷)、五味子提取物、苦參素、淀粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材。
5)過20目篩制顆粒。
6)顆粒在60℃的條件下烘干。
7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂和羧甲淀粉鈉，過18目篩整粒，混合均勻。
8)取樣，半成品化驗(yàn)。
9)按照化驗(yàn)確定的片重壓片。
10)成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例13 KWR組合物膠囊劑的制備KWR組合物I處方苦參素400.0g五味子提取物 90.3g(相當(dāng)于五味子3g)人參多糖 48.0g(相當(dāng)于人參4g)淀粉 20.0g微晶纖維素60.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂 5.0g
共制備1000粒KWR組合物II處方苦參素400.0g五味子提取物 90.3g(相當(dāng)于五味子3g)人參總皂苷48.4g(相當(dāng)于人參4g)淀粉 20.0g微晶纖維素60.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂 5.0g
共制備1000粒制備工藝1)將苦參素、人參多糖(或人參總皂苷)和五味子提取物分別粉碎過100目篩備用。
2)按照處方量稱取原料和輔料。
3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用。
4)將人參多糖(或人參總皂苷)、五味子提取物、苦參素、淀粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材。
5)過20目篩制顆粒。
6)顆粒在60℃的條件下烘干。
7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂，過18目篩整粒，混合均勻。
8)取樣，半成品化驗(yàn)。
9)按照化驗(yàn)確定的裝量裝入膠囊。
10)成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施14 KWR組合物顆粒劑的制備KWR組合物I處方苦參素 400.0g五味子提取物 90.3g(相當(dāng)于五味子3g)人參多糖 48.0g(相當(dāng)于人參4g)糖粉 1000.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備 1000包KWR組合物II處方苦參素 400.0g五味子提取物 90.3g(相當(dāng)于五味子3g)人參總皂苷 48.4g(相當(dāng)于人參4g)糖粉 1000.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備 1000包制備工藝1)將蔗糖粉碎過100目篩備用。將苦參素、人參多糖(或人參總皂苷)和五味子提取物分別粉碎過100目篩備用。
2)按照處方量稱取原料和輔料。
3)將苦參素、人參多糖(或人參總皂苷)、五味子提取物與糖粉以等量遞加的方法混合均勻，加入2％HPMC50％乙醇溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材，4)過20目篩制顆粒。
5)顆粒在60℃的條件下烘干。
6)干顆粒過18目篩整粒。
7)取樣，半成品化驗(yàn)顆粒中主藥的含量，確定裝量。
8)包裝，成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例15KWR組合物滴丸劑的制備KWR組合物I處方苦參素400.0g五味子提取物 90.3g(相當(dāng)于五味子3g)人參多糖 48.0g(相當(dāng)于人參4g)聚乙二醇6000 1000gKWR組合物II處方苦參素400.0g五味子提取物 90.3g(相當(dāng)于五味子3g)人參總皂苷48.4g(相當(dāng)于人參4g)聚乙二醇6000 1000g
制備工藝將苦參素、人參多糖(或人參總皂苷)和五味子提取物粉碎過100目篩后備用。將聚乙二醇6000在水浴中加熱熔融，待全部熔融后加入苦參素、人參多糖(或人參總皂苷)和五味子提取物，攪拌溶解，60目篩過濾，保持60℃滴入冷至10℃以下的液體石蠟中制成丸。
實(shí)施例16 KWR組合物軟膠囊劑的制備KWR組合物I處方苦參素400.0g五味子提取物 90.3g(相當(dāng)于五味子3g)人參多糖 48.0g(相當(dāng)于人參4g)大豆油300.0g大豆磷脂 40.0g蜂蠟 20.0g
共制備1000粒KWR組合物II處方苦參素400.0g五味子提取物 90.3g(相當(dāng)于五味子3g)人參總皂苷48.4g(相當(dāng)于人參4g)大豆油300.0g大豆磷脂 40.0g蜂蠟 20.0g
共制備1000粒制備工藝將處方量的大豆油和大豆磷脂、蜂蠟加熱熔融，混勻，放冷，加入人參多糖(或人參總皂苷)、五味子提取物、苦參素研勻，壓制成軟膠囊即可。
實(shí)施例17 KWR組合物口服液體劑的制備KWR組合物I處方苦參素400.0g五味子提取物 90.3g(相當(dāng)于五味子3g)人參多糖 48.0g(相當(dāng)于人參4g)聚山梨酯8010g苯甲酸鈉 15g甜菊甙10g純化水加至10000ml
共制備1000支
KWR組合物II處方苦參素400.0g五味子提取物 90.3g(相當(dāng)于五味子3g)人參總皂苷48.4g(相當(dāng)于人參4g)聚山梨酯8020.0g苯甲酸鈉 15g甜菊甙20.0g純化水加至10000ml
共制備1000支制備工藝1)將苦參素和人參多糖(或人參總皂苷)加入配液量30％的水中加熱攪拌溶解完全。將五味子提取物加入少量水，加入處方量的聚山梨酯80加熱攪拌溶解。合并上述溶液，補(bǔ)加純化水至全量。
2)將苯甲酸鈉和甜菊甙用配液量20％的水溶解完全。
3)合并上述兩個(gè)溶液，補(bǔ)加水至全量。
4)過0.8um的微孔濾膜過濾。
5)半成品化驗(yàn)。
6)灌裝。成品全檢，包裝入庫。
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，其特征在于該組合物主要由下列重量份的原料藥制成苦參素50～2000份、五味子500～20000份、人參500～20000份。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于原料藥的重量份數(shù)為苦參素100～800份、五味子1000～10000份、人參1000～10000份。
3.如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于原料藥的重量份數(shù)為苦參素400份、五味子3000份、人參4000份。
4.如權(quán)利要求1-3所述的任一藥物組合物的制備方法，其特征在于，其中的五味子、人參可以用適宜的溶劑和方法制備得到提取物，總提取物再與其它原料藥和藥學(xué)上可接受的輔料混合制成任一制劑，總提取物中所含的主要有效成分為五味子木質(zhì)素類、人參多糖或人參總皂苷。
5.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，該組合物還可以由下列原料藥制成苦參素、五味子提取物、人參多糖或人參總皂苷，其重量配比為苦參素50～2000份、五味子提取物15～600份、人參多糖6～240份；或者為苦參素50～2000份、五味子提取物15～600份、人參總皂苷6～240份。
6.如權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其原料藥的重量配比為苦參素100～800份、五味子提取物30～300份、人參多糖12～120份；或者為苦參素100～800份、五味子提取物30～300份、人參總皂苷12～120份。
7.如權(quán)利要求7所述的藥物組合物，其原料藥的重量配比為苦參素400份、五味子提取物60～120份、人參多糖20～80份；或者為苦參素400份、五味子提取物60～120份、人參總皂苷20～80份。
8 .如權(quán)利要求5-7所述的任一藥物組合物，其特征在于，所述的五味子提取物中五味子醇甲含量不低于5％，醚浸出物含量不低于15％；人參多糖含量不低于30％；人參總皂苷含量不低于30％，其中的人參皂苷Re和人參皂苷Rg1含量不低于15％。
9.如權(quán)利要求1-3、5-7所述的任一藥物組合物，其特征在于該藥物組合物可以與藥學(xué)上可接受的輔料混合制成任何一種臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型。
10.如權(quán)利要求9所述的藥物組合物，其特征在于臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型為注射劑或口服制劑。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種藥物組合物及其制備方法，該藥物組合物主要由苦參素、五味子和人參制成，其重量配比為苦參素50～2000份、五味子500～20000份、人參500～20000份。該組合物還可以由下列原料藥制成苦參素、五味子提取物、人參多糖或總皂苷，其重量配比為苦參素50～2000份、五味子提取物15～600份、人參多糖6～240份，或者為苦參素50～2000份、五味子提取物15～600份、人參總皂苷6～240份。該藥物組合物可以制成任何一種臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型。該藥物組合物具有抗肝炎作用，可用于甲肝、乙肝、丙肝等各種類型的肝炎。
文檔編號A61P1/00GK1970001SQ20051010455
公開日2007年5月30日 申請日期2005年11月22日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月22日
發(fā)明者黃振華 申請人:黃振華