生脈散在抑制ras原癌基因過表達(dá)中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生脈散在抑制ras原癌基因過表達(dá)中的應(yīng)用，具體涉及在制備抑制 ras原癌基因突變后過表達(dá)的抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，屬于中藥領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 生脈散是中醫(yī)千古名方，首載于金代醫(yī)家張?jiān)厮夺t(yī)學(xué)啟源·卷下》"麥門冬" 條內(nèi)；內(nèi)外傷辨惑論及醫(yī)方考中也有記載。由人參、麥冬、五味子組成，意在取"人參之甘補(bǔ) 氣，麥門（即麥冬）苦寒瀉熱補(bǔ)水之源，五味子之酸清肅燥金"。
[0003] 生脈散最早用于治療暑熱汗多，氣陰兩傷之證，表現(xiàn)為汗多、身疲、體倦、氣短、咽 干、脈虛等癥狀。古代醫(yī)家也用于金葉耗傷，脈微欲絕等癥狀，又用作氣陰兩虛病人的補(bǔ)益 劑。此方經(jīng)過幾百年的長(zhǎng)期使用，安全有效，經(jīng)久不衰。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的發(fā)展，生脈散的臨 床應(yīng)用不斷擴(kuò)大，其劑型除散劑外，還有生脈飲、生脈注射液；該方劑經(jīng)加減變化后還發(fā)展 了參麥飲和生脈散黨參方等?，F(xiàn)在主要用于治療心血管病中的抗休克、抗心衰、抗心肌缺血 等癥狀、糖尿病、慢性支氣管炎，各類心源性休克、冠心病、心律失常等。
[0004] 湯銘新等發(fā)現(xiàn)生脈散可顯著抑制肺癌的自發(fā)轉(zhuǎn)移，但是實(shí)驗(yàn)證明這種抗腫瘤作用 并非生脈散直接作用于癌細(xì)胞，而是通過提高機(jī)體免疫功能間接實(shí)現(xiàn)抗腫瘤。中國(guó)專利 201010148044. 0公開了一種具有抗腫瘤作用的組合物及其在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用， 該專利將生脈散與其他中藥復(fù)方添加到以含主藥蟾酥的抗腫瘤藥物組合物中，生脈散減少 了蟾酥所帶來的心臟毒性問題；中國(guó)專利200510053562. 9公開了生脈注射液在制備治療 腫瘤減毒藥物中的用途，在對(duì)荷瘤小鼠化療過程中，同時(shí)應(yīng)用生脈散可保護(hù)肝腎功能。中國(guó) 專利03142266. 7公開了生脈注射液在制備治療腫瘤增效藥物中的用途。該專利中應(yīng)用生 脈散注射液處理結(jié)腸癌、乳腺癌、肝癌和胰腺癌細(xì)胞株，證明生脈注射液?jiǎn)为?dú)應(yīng)用時(shí)的抗腫 瘤作用效果時(shí)有時(shí)無，生脈散僅具較穩(wěn)定的協(xié)同增效作用。上述發(fā)明專利中涉及生脈散的 抗腫瘤應(yīng)用，均局限于將生脈散作為腫瘤治療過程中的輔助用藥應(yīng)用。
[0005] 約30%的人類腫瘤是由于ras原癌基因突變后激活導(dǎo)致Ras蛋白表達(dá)水平增高造 成的。若Ras蛋白持續(xù)處于活化狀態(tài)，可與下游的效應(yīng)蛋白結(jié)合，將信號(hào)傳遞到下游信號(hào)元 件，引起細(xì)胞的異常增殖，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。因此，Ras原癌基因已成為公認(rèn)的篩選抗相關(guān) 惡性腫瘤藥物的靶標(biāo)。
[0006] 研究表明組成生脈散的單味藥人參、五味子和麥冬均具有抗腫瘤作用，但將它們 組方成為生脈散后，人們對(duì)其在抗腫瘤應(yīng)用方面卻只發(fā)現(xiàn)了它具較穩(wěn)定的協(xié)同增效作用， 因此只能將該方劑作為治療腫瘤的輔助用藥。本發(fā)明公開了生脈散對(duì)Ras原癌基因突變后 所致的過表達(dá)具有顯著的抑制作用，而不作用于野生型ras原癌基因，因此毒性低，且無致 畸作用。本發(fā)明擺脫了傳統(tǒng)觀念的束縛，證明生脈散方劑具有顯著下調(diào)ras原癌基因過表 達(dá)活性，可在制備抑制ras原癌基因過表達(dá)的抗相關(guān)惡性腫瘤的藥物中應(yīng)用，而不僅僅是 輔助用途。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的是提供中藥復(fù)方生脈散在制藥中的新用途，涉及生脈散在抑制ras 原癌基因過表達(dá)中的應(yīng)用，具體涉及在制備抑制ras原癌基因過表達(dá)的抗腫瘤藥物中的應(yīng) 用，以期提供一種抗腫瘤活性高，毒性小，廉價(jià)的抗腫瘤藥物。
[0008] 本發(fā)明中藥復(fù)方生脈散的配方為： 配方1 :人參、麥冬、五味子的質(zhì)量比為9 :9 :6。
[0009] 配方2 :人參、麥冬、五味子的質(zhì)量比為9 :18 :9。
[0010] 配方3 :人參、麥冬、五味子的質(zhì)量比為9 :5. 4 :5. 4。
[0011] 本發(fā)明所述的生脈散方劑，其組方比例可以根據(jù)中藥組方原則合理改動(dòng)，而不改 變?cè)摲絼┰谥苽湟种苧as原癌基因過表達(dá)的抗腫瘤藥物中的用途，這是本領(lǐng)域技術(shù)人員可 以理解的。
[0012] 本發(fā)明所述的中藥復(fù)方生脈散在制備治療抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，可以將中藥復(fù)方 生脈散添加藥學(xué)上可接受的載體如填充劑、潤(rùn)滑劑、濕潤(rùn)劑、促進(jìn)吸收劑、吸附載體、稀釋 劑、賦形劑等，必要時(shí)可加人甜味劑、香味劑等，制備成注射劑、散劑、顆粒劑、粉劑、丸劑、口 服液、片劑等藥物的多種劑型，這是本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的。
[0013] 本發(fā)明提供一種生脈散方劑在制備抑制ras原癌基因過表達(dá)的抗腫瘤藥物的新 用途。本發(fā)明公開的生脈散方劑的應(yīng)用具有以下的優(yōu)勢(shì)： (1)生脈散方劑可以顯著抑制ras原癌基因過表達(dá)，可在制備治療由ras原癌基因過表 達(dá)導(dǎo)致的腫瘤藥物中應(yīng)用。
[0014] (2)生脈散方劑中人參、麥冬和五味子之間的組方配比可以根據(jù)中藥組方原則合 理改動(dòng)，其仍然可以顯著下調(diào)ras原癌基因過度激活，具有抗腫瘤活性。
[0015] (3)生脈散方劑僅僅作用于過表達(dá)的突變體Ras蛋白，而對(duì)野生型Ras蛋白無影 響。提示生脈散在應(yīng)用上安全，它僅作用于癌細(xì)胞，而不會(huì)作用于正常細(xì)胞。今后，我們有 望將生脈散應(yīng)用在抗相關(guān)惡性腫瘤藥物的制備中，其中，所述腫瘤是由ras原癌基因的過 表達(dá)導(dǎo)致的，從而為此類腫瘤患者提供更好的治療，為一些疑難癌癥的治療提供新的途徑。
[0016] (4)生脈散方劑顯著下調(diào)ras原癌基因過表達(dá)，并不是致突變引起的，不致畸。
[0017] (5)由于ras信號(hào)通路從線蟲到人高度保守，在秀麗隱桿線蟲中l(wèi)et-60基因編碼 保守的Ras蛋白，它與人類的Ras蛋白相比具有83%的同源性。如果ras突變，在秀麗隱桿 線蟲中會(huì)引起線蟲產(chǎn)生多陰門，在人類中則是引起細(xì)胞的惡性增殖，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。因 此，模式生物秀麗隱桿線蟲e/egafl^ORas/MAPK信號(hào)通路過度激活型突變 體被作為受試群體廣泛應(yīng)用于篩選抑制ras原癌基因通路過度激活的抗腫瘤藥物。因此， 本實(shí)驗(yàn)采用了秀麗隱桿線蟲突變株作為評(píng)估抑制ras原癌基因通路過度激活藥物的模型， 并得出了生脈散對(duì)ras原癌基因過表達(dá)有明顯下調(diào)作用、具有抑制ras原癌基因通路過度 激活的結(jié)論。
[0018] 以下提供具體實(shí)施例以實(shí)現(xiàn)本發(fā)明所述的生脈散方劑在制備抑制ras原癌基因 過表達(dá)的抗腫瘤藥物中應(yīng)用，但不限于這些實(shí)施例。
【具體實(shí)施方式】 實(shí)施例一生脈散方劑的制備 材料：人參、麥冬、五味子購(gòu)自蘭州黃河藥市。
[0019] 選用的不同的配方的生脈散，如下： 配方1人參：麥冬：五味子=9:9:6 (3:3:2) 配方2人參：麥冬：五味子=9:18:9 (1:2:1) 配方3人參：麥冬：五味子=9:5.4:5.4 (5:3:3) 先用蒸餾水浸泡20分鐘，然后文火煮沸，煎煮30min，定容，離心，棄去沉淀，將上清無 菌過濾，置4°C冰箱待用，使用時(shí)稀釋不同的濃度。
[0020] 實(shí)施例二中藥復(fù)方生脈散對(duì)秀麗隱桿線蟲MT2124 (let-60過度激活突變)的作用 Ras是一種小分子蛋白，參與調(diào)控動(dòng)物發(fā)育過程中的很多重要環(huán)節(jié)。ras信號(hào)通路 從線蟲到人高度保守，在秀麗隱桿線蟲中l(wèi)et-60基因編碼保守的Ras蛋白，它與人類的 Ras蛋白相比具有83%的同源性。如果ras突變，在秀麗隱桿線蟲中會(huì)引起線蟲產(chǎn)生多陰 門，在人類中則是引起細(xì)胞的惡性增殖，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。因此，模式生物秀麗隱桿線蟲 e/egafls) Ras/MAPK信號(hào)通路過度激活型突變體被作為受試群體廣泛應(yīng) 用于篩選抑制原癌基因 ras通路過度激活的抗腫瘤藥物。
[0021] MT2124是let-60/ras過度激活的秀麗隱桿線蟲，會(huì)產(chǎn)生多陰門的表型。將中藥復(fù) 方稀釋一定的濃度，作用于秀麗隱桿線蟲MT2124,如果能夠抑制受試線蟲群體多陰門產(chǎn)生 個(gè)體的比例，而只有一個(gè)真陰門的野生型線蟲個(gè)體比例上升，則說明藥物作用于ras通路， 下調(diào)了該通路的過度激活，具有抗腫瘤活性。群體中野生型線蟲的比例越高，則藥物作用效 果越顯著。如以突變體比例表示則相反，其中，野生型比例（％) =100%-突變體比例（％) 實(shí)驗(yàn)材料：秀麗隱桿線蟲MT2124,基因型：let-60(nl046) IV，購(gòu)自CGC (Caenorhabditis Genetics Center);大腸桿菌0P50,尿啼陡滲漏突變株，作為秀麗隱桿線 蟲的食物，購(gòu)自CGC。
[0022] 試劑：固體NGM培養(yǎng)基成分與制作（以1升為例）：
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 生脈散在抑制ras原癌基因過表達(dá)中的應(yīng)用。
2. 生脈散在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，所述的腫瘤是由ras原癌基因突變后過表達(dá)導(dǎo) 致的。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的生脈散在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于生脈散所含 的人參、麥冬、五味子的質(zhì)量比為4. 5~9:4. 5~9:3~6。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的生脈散在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于生脈散中所 含的人參、麥冬、五味子的質(zhì)量比為9 :9 :6。
5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的生脈散在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于生脈散中人 參、麥冬、五味子的質(zhì)量比為9 :5. 4 :5. 4。
【專利摘要】本發(fā)明屬中藥領(lǐng)域，涉及生脈散在抑制ras原癌基因過表達(dá)中的應(yīng)用，具體涉及在制備抑制ras原癌基因過表達(dá)的抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。研究表明約90%胰腺、50%結(jié)腸癌、30%-40%肺腺癌及5%-40%的白血病是由于ras基因過表達(dá)造成的，Ras蛋白已成為公認(rèn)的篩選抗相關(guān)惡性腫瘤藥物的靶標(biāo)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明生脈散可特異性下調(diào)ras原癌基因突變后所致的過表達(dá)，而不作用于野生型ras原癌基因，因此毒性低，且無致畸作用。本發(fā)明提供了一種生脈散的新用途，可在制備由ras原癌基因過表達(dá)導(dǎo)致的腫瘤藥物中應(yīng)用，有望開發(fā)成新一代的抗腫瘤藥物。
【IPC分類】A61K36-8968, A61P35-00
【公開號(hào)】CN104706937
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201310688526
【發(fā)明人】李紅玉, 李孟惠, 萬鳳奇, 支德娟, 李洋, 黃堅(jiān), 張占欣, 陳曉雨, 李瑩輝
【申請(qǐng)人】蘭州大學(xué)
【公開日】2015年6月17日
【申請(qǐng)日】2013年12月17日