專(zhuān)利名稱(chēng)：胡黃連提取物在制備治療糖尿病藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥新藥研發(fā)領(lǐng)域，具體而言，涉及胡黃連提取物在制備治療糖尿病藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
糖尿病是一種常見(jiàn)的代謝性疾病，主要表現(xiàn)為多飲、多食、多尿和消瘦。祖國(guó)醫(yī)學(xué)將糖尿病歸為“消渴”范疇。中醫(yī)認(rèn)為消渴病為熱盛陰傷之病，由于燥熱偏盛，陰津虧耗，燥熱可以傷陰，陰傷又可加重燥熱，兩者惡化后導(dǎo)致消渴病的發(fā)生。病程發(fā)展的特點(diǎn)是，初期陰虛熱盛，中期氣陰兩虛，后期為陰陽(yáng)兩虛。中醫(yī)治則滋陰清熱，益氣養(yǎng)陰。
目前西醫(yī)治療糖尿病的主要方法為胰島素治療和口服磺脲類(lèi)、雙胍類(lèi)等降血糖藥物，但胰島素治療價(jià)格昂貴，而其它類(lèi)型藥物或療效有限、或毒副作用明顯。
近年來(lái)，大量研究表明，中藥在治療糖尿病的臨床治療中顯示出很大優(yōu)勢(shì)，但現(xiàn)有中成藥大多有效成分不清楚，作用機(jī)理不明確，劑型落后，急待開(kāi)發(fā)出有效成分和作用機(jī)理清楚、質(zhì)量穩(wěn)定可控、劑型先進(jìn)、服用攜帶方便的中藥劑型。
胡黃連，異名割孤露澤、胡連，為玄參科植物胡黃連的干燥根莖。性寒，味苦。歸肝、胃、大腸經(jīng)。具有退虛熱，除疳熱，清濕熱的功效。有文獻(xiàn)報(bào)道胡黃連甲醇提取物能明顯降低正常禁食大鼠血糖值，能提高正常禁食大鼠的糖耐量，能降低四氧嘧啶誘導(dǎo)糖尿病大鼠的血糖水平。但對(duì)本發(fā)明所用乙醇提取、大孔樹(shù)脂純化方法制得的胡黃連提取物在制備治療糖尿病藥物中的應(yīng)用尚未有文獻(xiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供胡黃連提取物在制備治療糖尿病藥物的新應(yīng)用，其中胡黃連提取物的主要成分是胡黃連環(huán)烯醚萜總苷。
本發(fā)明另一個(gè)目的在于提供了含有胡黃連提取物的用于治療糖尿病的藥物組合物。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了以所述胡黃連提取物為活性成分，用于治療糖尿病的純中藥藥物制劑和相應(yīng)的藥物劑型。
本發(fā)明所用的胡黃連提取物可采用下述方法制備，但并不局限于下述制備方法。
取胡黃連藥材，乙醇滲漉提取，所得滲漉液減壓濃縮后用蒸餾水溶解，離心，上清液過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱，蒸餾水洗脫除雜后永乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，真空干燥，粉碎，得胡黃連提取物。
所述胡黃連提取物中主要有效部位為胡黃連環(huán)烯醚萜總苷，主要有效成分為胡黃連苷II(C23H28O13)。其中胡黃連環(huán)烯醚萜總苷以胡黃連苷II(C23H28O13)計(jì)，不得少于55.0％，胡黃連苷II(C23H28O13)不得少于35.0％。
本發(fā)明提供了以胡黃連提取物為活性成分，用于治療糖尿病的純中藥藥物制劑和相應(yīng)的藥物劑型。該中藥藥物制劑是以上述胡黃連提取物為有效活性成分，并包括了藥劑學(xué)上可接受的其他輔料組分。本發(fā)明的藥物制劑包括口服劑和針劑，其中口服劑包括膠囊劑、口服液、片劑、滴丸、顆粒劑等，注射劑型包括注射液劑型及注射用凍干粉針劑型等。在制備口服制劑時(shí)可選用的輔型劑可以是淀粉、糊精或環(huán)糊精、蔗糖、硬脂酸鹽等常規(guī)充填劑，要求胡黃連提取物中的胡黃連環(huán)烯醚萜總苷的含量在55％以上，胡黃連苷II含量在35％以上。在制備注射劑型時(shí)，要求所述胡黃連提取物中的胡黃連環(huán)烯醚萜總苷的含量在80％以上。凍干粉針劑可以通過(guò)無(wú)菌噴霧干燥、低溫真空干燥、冷凍干燥等方法制備。各制劑的后期制備工藝及設(shè)備均屬制藥領(lǐng)域的常規(guī)技術(shù)，本發(fā)明對(duì)此不作限定，故在此不予詳述。
本發(fā)明的創(chuàng)造性在于通過(guò)系列實(shí)驗(yàn)證明胡黃連提取物具有明顯的治療糖尿病的作用。為便于理解本發(fā)明組合物在治療糖尿病方面的藥用價(jià)值，發(fā)明人使用上所述方法制得的胡黃連提取物及相應(yīng)的藥物劑型，采用了不同的動(dòng)物模型，全面觀察了胡黃連提取物對(duì)糖尿病狀態(tài)下、正常生理狀態(tài)下的血糖、糖耐量以及血脂代謝的影響。實(shí)驗(yàn)證明胡黃連提取物有明顯的治療糖尿病的效果，可明顯降低糖尿病動(dòng)物的血糖值，改善糖耐量的異常，改善脂質(zhì)代謝異常；對(duì)正常動(dòng)物口服葡萄糖后的血糖升高也具有抑制作用，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)療效肯定。胡黃連提取物對(duì)正常動(dòng)物血糖無(wú)明顯影響，說(shuō)明其誘發(fā)低血糖的可能性較小，用藥相對(duì)安全。故本發(fā)明所述的有效部位胡黃連提取物具有明顯的治療糖尿病作用。
為確定胡黃連提取物的藥用安全性，我們用上所述方法制得的胡黃連提取物及相應(yīng)的藥物劑型完成了一般藥理及毒理學(xué)研究。
我們采用藥效學(xué)劑量的2～8倍，進(jìn)行了胡黃連提取物的一般藥理學(xué)研究。結(jié)果表明胡黃連提取物對(duì)麻醉貓的心血管系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)沒(méi)有明顯的影響；催眠作用實(shí)驗(yàn)(觀察藥物對(duì)戊巴比妥鈉閾下催眠劑量的影響)、行為學(xué)實(shí)驗(yàn)(觀察藥物對(duì)共濟(jì)協(xié)調(diào)運(yùn)動(dòng)的影響)和鎮(zhèn)靜實(shí)驗(yàn)(觀察藥物對(duì)自發(fā)活動(dòng)的影響)的研究結(jié)果也表明胡黃連提取物對(duì)小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)沒(méi)有明顯的影響。
中藥相對(duì)于化學(xué)藥品而言毒性較低，但其無(wú)毒、低毒是相對(duì)的，因而嚴(yán)格合理的毒理學(xué)研究至關(guān)重要。胡黃連提取物的急毒實(shí)驗(yàn)表明，小鼠灌胃給藥的最大給藥量為50.4g/kg，毒性較低。靜脈注射給藥小鼠LD50值為2.253g/kg。胡黃連提取物大鼠和犬的長(zhǎng)毒實(shí)驗(yàn)表明，大劑量的胡黃連提取物(大鼠800mg/kg，犬400mg/kg)對(duì)動(dòng)物的體重增長(zhǎng)有抑制作用。停藥后，體重增長(zhǎng)快，與對(duì)照組相比，均無(wú)顯著性差異。
上述一般藥理和毒性結(jié)果表明胡黃連提取物的毒性較小，藥用安全性較高。
具體實(shí)施例用以下的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但本發(fā)明并不限于下列實(shí)施例包含的內(nèi)容。
本發(fā)明優(yōu)選劑型膠囊劑的制備方法[處方]胡黃連提取物100克，共制成1000粒。[制法]取胡黃連提取物100克(過(guò)80目篩)，加入60克微晶纖維素，過(guò)80目篩三遍，混合均勻，噴入95％乙醇溶液，制軟材，過(guò)40目篩制粒，60℃干燥半小時(shí)，分裝于3#膠囊中，鋁塑復(fù)合包裝，即得。本品每粒含胡黃連苷-II(C23H28O13)不得少于35.0mg。[功能與主治]清濕熱，健脾胃，用于II型糖尿病濕熱困脾證，臨床癥見(jiàn)胸脘腹脹，或食后飽滿(mǎn)，頭身困重，四肢倦怠，小便黃赤，大便不爽。舌紅苔黃膩，脈滑而數(shù)。[用法與用量]口服，一次1粒，一日3次。[規(guī)格]100g/粒。[貯藏]置陰涼干燥處。
本發(fā)明優(yōu)選劑型片劑的制備方法取胡黃連提取物粉末，加入物料量5～20％的干淀粉及1～5％的硬脂酸鎂等，經(jīng)混合，制粒，干燥，壓片，即制得片劑。
本發(fā)明優(yōu)選劑型口服液的制備方法取胡黃連提取物粉末，加入蔗糖水及常規(guī)量的防腐劑，穩(wěn)定劑等輔料。過(guò)濾、滅菌，分裝入10mL瓶中，制成口服液。
本發(fā)明優(yōu)選劑型注射液的制備方法取胡黃連提取物，加入注射用水溶解，加入2.0‰活性炭，攪拌，過(guò)濾，繼以用0.45μm、0.22μm微孔濾膜分級(jí)過(guò)濾，補(bǔ)充注射用水，分裝于西林瓶中，冷凍干燥，回充高純度氮?dú)?，加塞，壓蓋，包裝，即得。
胡黃連提取物對(duì)四氧嘧啶誘發(fā)小鼠高血糖的治療作用為觀察胡黃連提取物對(duì)四氧嘧啶誘發(fā)的高血糖小鼠血糖值的影響，選用健康ICR小鼠，尾靜脈注射四氧嘧啶(60mg/kg)造成化學(xué)性糖尿病小鼠模型，分別用胡黃連提取物14mg/kg、28mg/kg、56mg/kg三個(gè)劑量灌胃，以降糖靈為陽(yáng)性對(duì)照，每天1次，連續(xù)14天，于第7天、第14天取血，以空腹血糖值為指標(biāo)研究胡黃連提取物的降糖作用。結(jié)果見(jiàn)下表表1胡黃連提取物給藥后7天、14天各組動(dòng)物的空腹血糖值(x±s)

注與正常對(duì)照組比較△△△P＜0.001；與模型對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明給藥7天后，胡黃連提取物大劑量組血糖值與模型對(duì)照組比較明顯降低，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異有顯著性；給藥14天時(shí)，胡黃連提取物中、大劑量組與模型對(duì)照組比血糖值明顯降低，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異有顯著性。結(jié)論胡黃連提取物對(duì)四氧嘧啶誘發(fā)高血糖小鼠有明顯的降糖作用。
胡黃連提取物對(duì)四氧嘧啶誘發(fā)大鼠高血糖的治療作用觀察胡黃連提取物對(duì)四氧嘧啶誘發(fā)的高血糖大鼠血糖值的影響。Wistar大鼠尾靜脈注射四氧嘧啶(50mg/kg)造成高血糖模型，分別用胡黃連提取物10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg三個(gè)劑量組灌胃，每天1次，連續(xù)14天，于第7天、第14天測(cè)其血糖值。結(jié)果如下表表2胡黃連提取物給藥第7天、第14天各組動(dòng)物的血糖值(x±s)

注與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；與正常組比較△△△P＜0.001；
上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明給藥第14天，胡黃連提取物小、中和大劑量組與模型組比較血糖值明顯降低，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，差異具有顯著性。結(jié)論胡黃連提取物對(duì)四氧嘧啶誘發(fā)高血糖大鼠有明顯的治療作用。
胡黃連提取物對(duì)鏈脲佐菌素誘發(fā)小鼠高血糖的治療作用觀察胡黃連提取物對(duì)鏈脲佐菌素誘發(fā)的高血糖小鼠血糖值的影響。隨機(jī)選出10只小鼠為正常對(duì)照組，并尾靜脈注射檸檬酸溶液0.1ml/10g，其它小鼠均按照同體積尾靜脈注射2％的鏈脲佐菌素溶液，72小時(shí)后測(cè)空腹血糖值，選擇血糖值高于11.1mmol/L的小鼠，分5組，即模型組、陽(yáng)性組、胡黃連提取物小(14mg/kg)、中(28mg/kg)、大(56mg/kg)劑量組，按0.2ml/10g灌胃給藥，分別在給藥第7天、第14天眶后取血，測(cè)定血糖值。結(jié)果見(jiàn)下表表3 胡黃連提取物對(duì)鏈脲佐菌素誘發(fā)高血糖小鼠的空腹血糖值影響(x±s)

注與正常對(duì)照組比較△△△P＜0.001；與模型對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明藥后7天血糖值與模型組比較胡黃連提取物中、大劑量組血糖值明顯降低；藥后14天血糖值與模型組比較胡黃連提取物小、中、大劑量組血糖值均明顯降低。結(jié)論胡黃連提取物對(duì)鏈脲佐菌素誘發(fā)小鼠高血糖有明顯的降糖作用。
胡黃連提取物對(duì)鏈脲佐菌素誘發(fā)高血糖大鼠的治療作用觀察胡黃連提取物對(duì)鏈脲佐菌素誘發(fā)的高血糖大鼠血糖值的影響。Wistar大鼠腹腔注射60mg/kg鏈脲佐菌素造成高血糖模型，分別用胡黃連提取物10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg三個(gè)劑量組灌胃，每天1次，連續(xù)21天，于第7天、第14天測(cè)其血糖值，第21天測(cè)血糖值、糖耐量。結(jié)果見(jiàn)下表表4胡黃連提取物對(duì)鏈脲佐菌素誘發(fā)的高血糖大鼠給藥第7天、第14天血糖值的影響(x±s)

注與正常組比較△△△P＜0.001；與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
表5胡黃連提取物對(duì)鏈脲佐菌素誘發(fā)的高血糖大鼠給藥第21天血糖值、糖耐量曲線(xiàn)下面積的影響(x±s)

注與正常對(duì)照組比較△△△P＜0.001；與模型對(duì)照組比較*P＜0.05，***P＜0.001。
上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明給藥第7天，胡黃連提取物中、大劑量組與模型組比較血糖值明顯降低；給藥第14天，胡黃連提取物中、大劑量組與模型組比較，血糖值明顯降低；給藥第21天，胡黃連提取物中、大劑量組與模型組比較血糖值明顯降低。從糖耐量結(jié)果來(lái)看，胡黃連提取物各劑量組與模型組比較，糖耐量曲線(xiàn)下面積均明顯降低。結(jié)論胡黃連提取物對(duì)鏈脲佐菌素誘發(fā)的大鼠高血糖有明顯的治療作用。
胡黃連提取物對(duì)II型糖尿病大鼠的治療作用觀察胡黃連提取物對(duì)非胰島素依賴(lài)型糖尿病(II型糖尿病)大鼠糖、脂代謝的影響。構(gòu)建II型糖尿病動(dòng)物模型，隨機(jī)選取10只大鼠作為正常對(duì)照，給予普通飼料，其余大鼠尾靜脈快速注射STZ(30mg/kg)，輔以高熱量飼料喂養(yǎng)，自由飲水，5周后眶后采血進(jìn)行葡萄糖耐量試驗(yàn)，挑選空腹血糖超過(guò)11.1mmol/l且糖耐量異常大鼠作為II型糖尿病動(dòng)物模型，并分為模型對(duì)照組、陽(yáng)性藥對(duì)照組(降糖靈100mg/kg)、胡黃連提取物10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg三個(gè)劑量組，灌胃給藥，每天1次，連續(xù)6周，同時(shí)設(shè)立正常對(duì)照組。于給藥6周后進(jìn)行空腹血糖、空腹胰島素含量、糖耐量、血清總膽固醇(CHO)、甘油三酯(TG)、高(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)的檢測(cè)，計(jì)算糖耐量曲線(xiàn)下面積及胰島素敏感指數(shù)，并稱(chēng)重肝、腎，計(jì)算臟器系數(shù)。結(jié)果見(jiàn)下表表6胡黃連提取物對(duì)II型糖尿病大鼠藥后6周體重及糖耐量的影響(x±s)

注與正常對(duì)照組比較，△△△P＜0.001；與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01***P＜0.001。
表7胡黃連提取物對(duì)II型糖尿病大鼠藥后6周空腹血糖值、空腹胰島素含量及胰島素敏感指數(shù)的影響(x±s)

注與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，**P＜0.01；與正常對(duì)照組比較，△△△P＜0.001表8胡黃連提取物對(duì)II型糖尿病大鼠藥后6周血清CHO、TG含量的影響(x±s)


注與正常對(duì)照組比較，△△△P＜0.001；與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05**P＜0.01。
表9胡黃連提取物對(duì)II型糖尿病大鼠藥后6周血清LDL、HDL含量的影(x±s)

注與正常對(duì)照組比較，△P＜0.05；與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05。
表10胡黃連提取物對(duì)II型糖尿病大鼠藥后6周肝、腎系數(shù)的影響(x±s)


注與正常對(duì)照組比較，△＜0.05；與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05。
上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明給藥后第6周，胡黃連提取物中劑量組糖耐量曲線(xiàn)下面積明顯低于模型對(duì)照組，胰島素敏感指數(shù)高于模型對(duì)照組；胡黃連提取物大劑量組的糖耐量曲線(xiàn)下面積、血清CHO、LDL值明顯低于模型對(duì)照組，HDL值、胰島素敏感指數(shù)明顯高于模型對(duì)照組，肝臟系數(shù)明顯降低，腎臟系數(shù)無(wú)明顯變化。結(jié)論胡黃連提取物對(duì)II型糖尿病大鼠具有明顯的治療作用。
胡黃連提取物灌胃給藥對(duì)正常小鼠血糖值及糖耐量的影響觀察胡黃連提取物灌胃給藥對(duì)正常小鼠血糖值及葡萄糖耐量的影響。60只小鼠，隨機(jī)分為5組空白對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組(達(dá)美康)、胡黃連提取物小、中、大劑量組(14mg/kg、28mg/kg、56mg/kg)，連續(xù)灌胃給藥7天后，以不同時(shí)間點(diǎn)的血糖值為觀測(cè)指標(biāo)，采用穩(wěn)捷基礎(chǔ)型血糖儀及OneTouch試紙測(cè)定口服葡萄糖耐量和給藥1h后的血糖值，組間比較采用t檢驗(yàn)，研究藥物對(duì)正常小鼠血糖值及葡萄糖耐量的影響。結(jié)果見(jiàn)下表表11胡黃連提取物對(duì)正常小鼠給藥1h后血糖值的影響(x±s)


注各組與空白對(duì)照組比較，**P＜0.01。
表12胡黃連提取物對(duì)正常小鼠口服葡萄糖糖耐量的影響(x±s)

注與空白對(duì)照組比較，**P＜0.01，***P＜0.01上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明各給藥組同正常組比較，給藥后1h血糖值變化不明顯，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，差異沒(méi)有顯著性。達(dá)美康組同正常組比較，糖耐量曲線(xiàn)下面積值降低明顯，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，差異具有極顯著性；胡黃連提取物小、中、大劑量組同正常組比較，糖耐量曲線(xiàn)下面積值均降低明顯，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，差異具有極顯著性。結(jié)論胡黃連提取物對(duì)正常小鼠的血糖無(wú)明顯降低作用；對(duì)口服葡萄糖后引起的血糖升高有明顯的降低作用。
權(quán)利要求
1.胡黃連提取物的醫(yī)療用途，其特征是在制備治療糖尿病藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的醫(yī)療用途，其特征是在制備治療II型糖尿病藥物中的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物，其特征是含有胡黃連提取物的藥物組合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的胡黃連提取物，其特征是其中的有效部位是胡黃連環(huán)烯醚萜總苷。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的胡黃連提取物，其特征是其中胡黃連環(huán)烯醚萜總苷的含量大于55％，胡黃連苷II含量大于35％。
6.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一權(quán)利要求所述的藥物，其特征是該藥物可以以口服劑和注射劑等藥物劑型形式存在。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的藥物劑型，其劑型為口服劑，包括膠囊劑、口服液、片劑、顆粒劑、滴丸等。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的藥物劑型，其劑型為膠囊劑，所述胡黃連提取物中胡黃連環(huán)烯醚萜總苷含量大于55％，胡黃連苷II含量大于35％。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的藥物劑型，其劑型為注射劑，包括注射液劑型及注射用凍干粉針劑型等。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的藥物劑型，其劑型為注射用凍干粉針劑，所述的胡黃連提取物中胡黃連環(huán)烯醚萜總苷含量大于80％。
全文摘要
本發(fā)明屬于中藥新藥研發(fā)領(lǐng)域，具體而言，涉及胡黃連提取物在制備治療糖尿病藥物中的應(yīng)用，且所述的胡黃連提取物中有效部位是胡黃連環(huán)烯醚萜總苷。實(shí)驗(yàn)證明胡黃連提取物能明顯降低糖尿病動(dòng)物的血糖值，改善糖耐量的異常，改善脂質(zhì)代謝異常，并對(duì)正常動(dòng)物口服葡萄糖后的血糖升高也具有抑制作用，對(duì)正常動(dòng)物血糖無(wú)明顯影響。胡黃連提取物在制備治療糖尿病的藥物中用藥相對(duì)安全，降糖療效肯定。本發(fā)明還提供了胡黃連提取物治療糖尿病的藥物制劑及其相應(yīng)的藥物劑型。
文檔編號(hào)A61K125/00GK1788765SQ20041009864
公開(kāi)日2006年6月21日 申請(qǐng)日期2004年12月15日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月15日
發(fā)明者周亞偉 申請(qǐng)人:周亞偉