專利名稱：樹莓葉提取物的有效部位和其組合物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物提取物的有效部位及其組合物，尤其是樹莓葉提取物的有效部位及其組合物和其用于制備防治糖尿病的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
世界各國的糖尿病發(fā)病率呈上升趨勢，依據(jù)WHO報(bào)道近年來，全世界糖尿病病人大約有1.6億。我國糖尿病發(fā)病率也在增加，據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國目前的糖尿病人有4000萬(黃秋云等，糖尿病治療藥物的研究進(jìn)展和回顧，海峽藥學(xué)，200214(2)56-57)。在糖尿病人中，其中有90％的為非胰島素依賴型糖尿病，即II型糖尿病人。這類病人主要是利用口服降糖藥來控制血糖濃度。但目前的口服降糖藥都有或多或少的不良作用。因此，世界各國都從植物里面尋找強(qiáng)效、無毒的活性成分來開發(fā)新的降糖藥(Bellakhdar，摩洛哥標(biāo)準(zhǔn)植物藥報(bào)告，Journal ofEthnopharmacology 35，123-143，1997)。
樹莓屬于薔薇科懸鉤子屬植物，是一種新興的小漿果類果樹。近幾年來我國從國外引進(jìn)的樹莓品種大約有60多個，并在北京、黑龍江、吉林、江蘇等地都有較大規(guī)模的栽培(許奕華等，從國際市場看紅樹莓在我國的發(fā)展戰(zhàn)略，中國果菜，20046，31-32)。樹莓在栽培過程中生長量大，在生長季節(jié)修剪的枝葉多，因此，樹莓葉的來源穩(wěn)定，對其的加工成本也非常低廉。
源于摩洛哥的樹莓屬的一個野生種Rubus Fruticosus L.(RF)在摩洛哥民間被廣泛用于治療腹瀉、孕期嘔吐和糖尿病(Swanston-Flatt，治療糖尿病的傳統(tǒng)植物藥，Diabetologia 33(8)，462-464，1990)。Hassan Jouad(富魯克懸鉤子對正常和鏈佐菌素誘導(dǎo)糖尿病鼠的降血糖作用，Journal of Ethnopharmacology81351-356，2002)認(rèn)為RF的水提取物都能顯著降低正常大鼠和鏈佐菌素誘導(dǎo)的糖尿病大鼠的血糖，而對血中胰島素并沒有明顯影響，其降糖可能是通過胰島外的機(jī)制起作用。
另外，樹莓葉長期以來也制成茶飲用，且其急性毒理研究表明樹莓葉提取物的LD50為8.1g/Kg體重，可見，樹莓葉的提取物是安全無毒的。
因此，本發(fā)明的目的在于從植物提取物中篩選高效低毒價(jià)廉的具有降血糖作用的有效部位，并將所得的有效部位制成所需的組合物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的一是提供樹莓葉提取物的有效部位，該有效部位通過下述方法制備樹莓葉以低于70v/v％的醇溶劑提取，過濾并合并濾液，回收溶劑得干膏；將干膏混懸于蒸餾水或去離子水中，依次以石油醚、乙酸乙酯、水飽和正丁醇萃取，分別回收萃取液中的溶劑，得到其石油醚(RP)部位、乙酸乙酯(RE)部位、正丁醇(RB)部位和水(RW)部位。
優(yōu)選提取所用醇溶劑的濃度為50-60v/v％，優(yōu)選所用的醇溶劑為乙醇或甲醇，優(yōu)選提取所用溫度為50-90℃，還優(yōu)選所述的有效部位為正丁醇部位、水部位或其二者的混合物。
本發(fā)明所述的樹莓為薔薇科(Rosaceae)懸鉤子屬(Rubus L.)植物。
本發(fā)明的另一目的是提供一種用于防治糖尿病的藥物組合物，所述的組合物由1-99w/w％的樹莓葉提取物的正丁醇部位、水部位或其二者的混合物與藥學(xué)上可接受的載體組成。優(yōu)選組合物中正丁醇部位、水部位或其二者的混合物的重量百分比為20-70w/w％，更優(yōu)選組合物中正丁醇部位、水部位或其二者的混合物的重量百分比為40-50w/w％。
本發(fā)明的另一目的是提供一種用于防治糖尿病的藥物組合物，該組合物由第一組分為樹莓葉提取物的正丁醇部位和/或其水部位和第二組分來自人參提取物、黃芪提取物或麥冬提取物與藥學(xué)上可接受的載體組成。其中，組合物中各組分的重量百分比為約1-99w/w％的樹莓葉提取物的正丁醇部位；和/或約1-99w/w％的樹莓葉提取物的水部位；和/或約1-99w/w％的人參提取物；和/或約1-99w/w％的黃芪提取物；和/或約1-99w/w％的麥冬提取物。
優(yōu)選組合物中各組分的重量百分比為約20-70w/w％的樹莓葉提取物的正丁醇部位；和/或約20-70w/w％的樹莓葉提取物的水部位；和/或約5-50w/w％的人參提取物；和/或約5-50w/w％的黃芪提取物；和/或約5-50w/w％的麥冬提取物。
更優(yōu)選組合物中各組分的重量百分比為約40-50w/w％的樹莓葉提取物的正丁醇部位；和/或約40-50w/w％的樹莓葉提取物的水部位；和/或約20-30w/w％的人參提取物；和/或約20-30w/w％的黃芪提取物；和/或約20-30w/w％的麥冬提取物。
還可在上述的組合物中加入20-70w/w％五味子(Schizandra chinensis)果實(shí)的提取物、刺五加(Acanthopanax senticosus)根的提取物和/或紅景天(Rhodiola rosea)根的提取物，以協(xié)同增強(qiáng)所述有效部位的降血糖作用。中藥藥理認(rèn)為人參具有補(bǔ)脾益肺的功效，黃芪具有健脾益氣的功效，麥冬具有益胃生津的功效。本發(fā)明的樹莓葉提取物的有效部位與上述中藥合用具有益氣養(yǎng)陰，調(diào)補(bǔ)脾腎，清熱生津，調(diào)其氣血，和其陰陽的功效，并且通過增強(qiáng)患者的糖代謝，以增強(qiáng)有效部位對糖尿病的防治效果。同時(shí)，現(xiàn)代藥理學(xué)研究也證明人參提取物、黃芪提取物、麥冬提取物、五味子(Schizandrachinensis)果實(shí)的提取物、刺五加(Acanthopanax senticosus)根的提取物和/或紅景天(Rhodiola rosea)根的提取物均具有降血糖作用(秦秀蘭，治療糖尿病的中藥之研究進(jìn)展，藥學(xué)研究，2001，10(3)57-58)。因此，人參提取物、黃芪提取物、麥冬提取物、五味子(Schizandra chinensis)果實(shí)的提取物、刺五加(Acanthopanax senticosus)根的提取物和/或紅景天(Rhodiola rosea)根的提取物與本發(fā)明的有效部位聯(lián)合使用，能顯著提高有效部位的降血糖作用，明顯提高對糖尿病的防治效果，二者合用具有顯著的協(xié)同作用。
所述的人參提取物、黃芪提取物、麥冬提取物、五味子的果實(shí)提取物、刺五加根的提取物和/或紅景天(Rhodiola rosea)根的提取物可由本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的提取方法制備得到。其制備方法可參見(董方言，現(xiàn)代實(shí)用中藥新劑型新技術(shù)，北京，人民衛(wèi)生出版社，200148-58)。即分別將人參、黃芪、麥冬、五味子的果實(shí)、刺五加的根或紅景天(Rhodiola rosea)根以水煎煮、浸漬或超聲提取，過濾取濾液，濾液經(jīng)醇沉后，再過濾取濾液，濃縮濾液即得所需的提取物。
本發(fā)明的組合物適合于口服給藥和注射給藥，也適合其他的給藥方法，例如經(jīng)皮給藥。
本發(fā)明的組合物可以是片劑、膠囊、粉劑、顆粒、錠劑、栓劑，或者為口服液或無菌胃腸外溶液或懸浮液等液體制劑形式。
本發(fā)明的組合物還可以是大或小容量注射劑、凍干粉針或無菌粉分裝等制劑形式。
本發(fā)明所述的“藥學(xué)上可接受的載體”為藥學(xué)上常規(guī)用于制備上述制劑所用的藥用輔料。比如，用于口服給藥的常規(guī)賦形劑有粘合劑，例如糖漿、阿拉伯膠、明膠、山梨醇、黃芪膠或聚乙烯吡咯烷酮；填充劑，例如乳糖、糖、玉米淀粉、磷酸鈣、山梨醇或甘氨酸；潤滑劑，例如硬脂酸鎂、滑石粉；崩解劑，例如淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、淀粉乙醇酸鈉或微晶纖維素；或藥學(xué)上可接受的濕潤劑，諸如十二烷基硫酸鈉等。
固體口服組合物可以用常規(guī)的混合、填充或壓片法制備。重復(fù)混合操作可將正丁醇部位、水部位或其二者的混合物在大量輔料填充的組合物中均勻分布。這樣的操作當(dāng)然是本領(lǐng)域中常規(guī)的。片劑可以按照常規(guī)制備方法制得包衣片或素片。
口服液體制劑可以是乳劑、糖漿或酏劑，或者可以作為干燥產(chǎn)品存在，使用前再用水或其他合適的載體溶解制得適合使用的形式。這種液體制劑可以含有常規(guī)添加劑懸浮劑，例如山梨醇、糖漿、甲基纖維素、明膠、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素、硬脂酸鋁凝膠或氫化食用脂；乳化劑，例如卵磷脂、脫水山梨醇—油酸酯或阿拉伯膠；無水載體(可包括食用油)，例如杏仁油、餾化椰子油或油性酯，所述的油性酯包括甘油酯、丙二醇或乙醇；防腐劑，例如對羥基苯甲酸甲酯、羥基苯甲酸丙酯或山梨酸；如果需要，還可加入常規(guī)調(diào)味劑或著色劑。
對于胃腸外給藥，特別是注射劑，可將正丁醇部位、水部位或其二者的混合物與無菌載體制備單位液體劑型，并且根據(jù)所用的濃度將上述有效部位懸浮或溶解于載體中。在制備溶液時(shí)，可以將上述有效部位溶解于注射用水并過濾滅菌，之后灌注到小瓶或安瓿中并密封。并還可以將輔助劑，諸如局部麻醉劑、防腐劑和緩沖劑等溶解于該載體中。為了增強(qiáng)穩(wěn)定性，可以將該組合物冷凍后再填充到小瓶中，并在真空下除去水分。胃腸外懸液是用實(shí)質(zhì)上相同的方式制備而得，只是有效部位不是溶解于載體中，而是懸浮于載體中，且滅菌不是通過過濾完成。其有效部位可以通過與環(huán)氧乙烷接觸后，再懸浮于無菌載體中而進(jìn)行滅菌。有利的是，在該組合物中包含表面活性劑或濕潤劑，以促進(jìn)有效部位在制劑中的均勻分布。
另外，本領(lǐng)域技術(shù)人員還可按照常規(guī)方法將正丁醇部位、水部位或其二者的混合物和/或人參提取物、黃芪提取物、麥冬提取物、五味子的果實(shí)提取物、刺五加根的提取物和/或紅景天(Rhodiola rosea)根的提取物與緩控釋材料均勻混合后，按照本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的緩控釋制劑的制劑技術(shù)，將其制成其緩釋制劑或者控釋制劑，如緩釋微丸或控釋微丸等。
本發(fā)明的另一目的是提供上述有效部位和/或組合物在制備防治糖尿病藥物中的應(yīng)用。優(yōu)選用于制備防治II型糖尿病的藥物中的應(yīng)用。
為了達(dá)到給藥的一致性，本發(fā)明組合物優(yōu)選為單劑形式。組合物優(yōu)選以與相關(guān)日劑量制成單位劑量。合適單位劑量的組合物中含有正丁醇部位、水部位或其二者的混合物的劑量為50-3000mg，優(yōu)選劑量為200-1500mg，更優(yōu)選劑量為500-1000mg。組合物可以每天給藥1-6次，優(yōu)選每天注射給藥1次或口服給藥3次。
具體實(shí)施例方式
以下將結(jié)合實(shí)施例具體說明本發(fā)明，本發(fā)明的實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明的技術(shù)方案，并非限定本發(fā)明的實(shí)質(zhì)。
實(shí)施例1樹莓葉提取物的有效部位的制備樹莓葉于通風(fēng)環(huán)境內(nèi)陰干，將其粉碎成為1cm左右。稱取干燥粉碎后的樹莓葉10公斤，分別用80L，60L和40L60(v/v)％乙醇分別于80℃提取三次，每次提取2小時(shí)，2小時(shí)和1小時(shí)，過濾并合并提取濾液，用連續(xù)減壓薄膜蒸發(fā)裝置和旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)裝置回收乙醇后，得干膏備用。
取1.5Kg體重千膏混懸于10L蒸餾水中，依次以8倍體積的石油醚、乙酸乙酯、水飽和正丁醇萃取，分別回收萃取液中的溶劑后，得到其石油醚(RP)部位、乙酸乙酯(RE)部位、正丁醇(RB)部位和水(RW)部位。
實(shí)施例2含正丁醇(RB)部位的包衣片制備片劑的組成RB32克；糊精5克；95v/v％的乙醇8ml；滑石粉2克；硬脂酸鎂1克；將上述組成的材料按照常規(guī)的方法制得素片備用。通過在所得的素片上噴灑下述的包衣混懸液和包衣混合液3，即得含有正丁醇部位的包衣片。
制備方法(1)按實(shí)施例1方法制得RB部位；(2)取32克RB，將其粉碎成細(xì)粉，加入糊精5克，混合均勻后過100目篩；(3)在(2)步的混合物中加入8ml濃度為95v/v％的乙醇加以濕潤，過40目篩制成濕顆粒，于60℃烘箱中干燥顆粒，至其水分含量為5w/w％，以40目篩整粒，然后以80目篩除去細(xì)粉，得粒度為40-80目的干燥顆粒；(4)以2克滑石粉和1克硬脂酸鎂作潤滑劑，用單沖壓片機(jī)將干燥顆粒壓成片重約0.2克的素片；(5)取丙烯酸樹脂IV號10克和羥丙基甲基纖維素2.5克，將其溶于16ml濃度為95v/v％的乙醇，制成溶液1。
(5)取丙烯酸樹脂IV號10克和羥丙基甲基纖維素2.5克，將其溶于20ml濃度為70v/v％的乙醇，制成溶液2；混合溶液1和2，制得溶液3；(7)取28ml混合溶液3，依次加入蓖麻油4ml，吐溫-804ml，滑石粉20克，鈦白粉8克，并依次過膠體磨，反復(fù)研磨均勻，制得包衣混懸液；(8)取(4)步所得的素片100片加入至包衣鍋內(nèi)，預(yù)熱到35℃，噴入包衣混懸液進(jìn)行包衣；(9)最后噴6ml溶液3，拋光，低溫干燥，得薄膜包衣片。
本領(lǐng)域技術(shù)人員可參照實(shí)施例2的方法，制得其顆粒劑；或?qū)?3)步所得的干燥顆粒填充入膠囊，即得其膠囊劑。
本領(lǐng)域技術(shù)人員還可按照本領(lǐng)域熟知的制劑技術(shù)，將正丁醇部位、水部位或其二者的混合物與藥學(xué)上可接受的載體均勻混合，將其制成粉劑、顆粒劑、錠劑、栓劑、乳劑、糖漿、酏劑、口服液、無菌胃腸外溶液、凍干粉針、無菌粉分裝、懸浮液或注射劑，或與緩控釋載體混合按照緩控制劑技術(shù)制得其緩釋放制劑或控釋制劑。
為了驗(yàn)證本發(fā)明有效部位的降血糖活性及其對糖尿病的防治效果，將本發(fā)明所得的石油醚(RP)部位、乙酸乙酯(RE)部位、正丁醇(RB)部位和水(RW)部位等四個部位對正?；蛱悄虿≡炷Ｐ∈蠛痛笫蠊辔附o藥，觀察有效部位的降血糖作用。
試驗(yàn)例1樹莓葉提取物的四個部位對造模小鼠的降血糖作用成年雄性小鼠ICR(體重20-22克)，于標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)條件(23℃，12小時(shí)/12小時(shí)亮/暗周期，北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動物部)飼養(yǎng)。用鏈佐菌素(STZ)(Sigma，St.Louis，Mo)注射前溶于0.1mol/L檸檬酸溶液(pH＝4.5)，禁食10小時(shí)后腹腔注射100mg/Kg體重的STZ，3天后眼眶后靜脈叢取血，葡萄糖氧化酶法測定血糖濃度。
選取造模后血糖高于130mmol/dl的ICR小鼠50只，隨機(jī)分5組，每組10只。陰性對照組喂蒸餾水，陽性組灌胃給予500mg/Kg體重的二甲雙胍(Metformin)，治療組分別灌胃給予200mg/Kg體重的RE、200mg/Kg體重的RB和200mg/Kg體重的RW。然后，分別在給藥的第7天(Blood 1)、14天(Blood2)、15天(Blood3)取血，采用葡萄糖氧化酶法(中生公司試劑盒)測定血糖濃度。同時(shí)測定第3天(Day1)、7天(Day2)、10天(Day3)、13天(Day4)的飲水量、進(jìn)食量和體重增加量，并將前兩項(xiàng)分別換算成單位體重的飲水量、每增加單位體重的進(jìn)食量(即飼料消耗率)。
試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS11系統(tǒng)，以均值±方差表示，差異采用降低百分率和配對T-檢驗(yàn)處理，P值小于0.05認(rèn)為差異顯著，小于0.01為差異極顯著。
樹莓葉提取物的有效部位對造模糖尿病小鼠血糖水平的影響結(jié)果參見表1?？梢姡琑B和RW可明顯降低小鼠的血糖水平，且RW在14天時(shí)，差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
Tab.1 Effect of the Extraction of Leaf of Rubus Spp.(x±s)

△P＜0.05，△△P＜0.01，Compared with Diabetic Control.
*P＜0.05，**P＜0.01，Compared with Self Day 0.
以下表中表示相同。
樹莓葉提取物的有效部位對小鼠的體重影響結(jié)果參見表2?？梢姡琑B和RW對于小鼠體重的增加都有一定的抑制作用。
Tab.2 Weight Change of the Mice Feet with the Leaf Extract of Rubus Spp.(x±s)

樹莓葉提取物有效部位對小鼠飲水量的影響結(jié)果參見表3?？梢姡琑B組平均每克體重消耗水有明顯的下降，可能是RB緩解了糖尿病小鼠的口渴癥狀。
Tab.3 Drink Water Change(x±s)(g/g)

樹莓葉提取物的有效部位對小鼠每克體重所消耗的食物影響結(jié)果參見表4?？梢?，RB組和RW組的每克體重所消耗的食物都呈下降趨勢，對于糖尿病小鼠的高飼料消耗率有一定抑制的作用。
Tab.4 Food Change of Per Weight of the Mice Feet with Leaf Extract of Rubus Spp.(x±s)

結(jié)論樹莓葉提取物的有效部位RB組和RW組對糖尿病小鼠的血糖水平有一定的降低作用，顯示一定的降血糖活性。
試驗(yàn)例2有效部位RB和RW對造模小鼠血糖水平的降低作用成年雄性小鼠ICR(體重20-22克)，按照試驗(yàn)例1所述方法飼養(yǎng)、造模、給藥和測定血糖濃度。
選取造模后血糖高于130mmol/dl的ICR小鼠50只，隨機(jī)分5組，每組10只。陰性對照組喂蒸餾水，陽性組灌胃給予500mg/Kg體重的二甲雙胍(Metformin)，治療組分別灌胃給予200mg/Kg體重的RB、500mg/Kg體重的RB和200mg/Kg體重的RW。分別在第3天(Blood1)、6天(Blood2)、9天(Blood 3)取血，采用葡萄糖氧化酶法(中生公司試劑盒)測定血糖濃度。同時(shí)測定飲水量、進(jìn)食量和體重增加量，前兩項(xiàng)分別換算成10克體重的飲水量、每增加1克體重的進(jìn)食量(即飼料消耗率)。
試驗(yàn)結(jié)果參見表5。可見，RB在200mg/Kg體重/d劑量時(shí)可明顯降低血糖水平，在500mg/Kg體重/d時(shí)則導(dǎo)致了血糖的升高，RW在200mg/Kg體重/d時(shí)也具有降血糖的作用，其降血糖的作用在12天時(shí)較RB好。
Tab.5 Effect of the Extraction of Leaf of Rubus Spp.(x±s)

樹莓葉提取物的RB和RW有效部位對小鼠體重的影響結(jié)果參見表6。可見，RB和RW對糖尿病小鼠的抑制體重增加方面和陽性藥物Metformin作用相類似。RB在500mg/Kg體重/d和200mg/Kg體重/d時(shí)對體重均無明顯影響，說明該部位的安全范圍較大。
Tab.6 Weight Change of the Mice Feet with the Leaf Extract of Rubus Spp.(x±s)

樹莓葉提取物的RB和RW有效部位對小鼠飲水量的影響結(jié)果參見表7。可見，除糖尿病對照組外，各治療組平均每10克體重消耗水量都有下降，其中陽性藥物的消渴作用具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而RB在劑量500(mg/Kg體重/d)和200(mg/Kg體重/d)時(shí)對消渴呈現(xiàn)一定的劑量效應(yīng)關(guān)系。
Tab.7Drunk Water Change(x±s)(g/10g)

樹莓葉提取物的RB和RW有效部位對小鼠飼料消耗率的影響結(jié)果參見表8。可見，RB和RW的飼料消耗率都類同陽性藥物，呈下降趨勢。相對而言，RB和RW在同樣劑量條件下，RB的作用稍強(qiáng)于RW。
Tab.8Food Change of Per We ight of the Mice Feet with Leaf Extract of Rubus Spp.(x±s)

試驗(yàn)例3有效部位RB和RW對造模大鼠血糖水平的降低作用成年雄性大鼠SD(體重180-190克)。按照試驗(yàn)例1所述方法飼養(yǎng)、造模和測定血糖濃度。
選取造模后血糖高于130mmol/dl的成年雄性大鼠SD 40只，隨機(jī)分5組，每組8只。陰性對照組灌胃給予蒸餾水，陽性組灌胃給予500mg/kg體重得二甲雙胍，治療組分別灌胃給予100mg/kg體重的RB、200mg/kg體重的RB和200mg/kg體重的RW，分別在第3天(Blood1)、6天(Blood2)、9(Blood3)天取血，葡萄糖氧化酶法(中生公司試劑盒)測定血糖濃度。
有效部位RB和RW對大鼠血糖水平的影響結(jié)果參見表9?？梢?，RB和RW均有降血糖作用，相比較而言，在同樣的劑量(200mg/Kg體重/d)下，RB的作用稍強(qiáng)于RW。RB在200mg/Kg體重/d時(shí)的作用稍強(qiáng)于100mg/Kg體重/d，可見RB的降血糖作用呈現(xiàn)一定的劑量效應(yīng)關(guān)系。
Tab.9 Effect of the Extraction of Leaf of Rubus Spp.(x±s)

結(jié)論RB和RW都有一定的降血糖作用，且其降血糖作用要強(qiáng)于陽性藥物二甲雙胍。而二甲雙胍的降血糖是通過影響糖的吸收來發(fā)揮作用的(Bailey，1988)。相比較而言，在同樣的劑量條件下，RB的作用要強(qiáng)于RW。同時(shí)，RB在100mg/Kg體重/d和200mg/Kg體重/d劑量時(shí)呈現(xiàn)一定的劑量效應(yīng)關(guān)系，且其降血糖作用是明確可靠的。
試驗(yàn)例4有效部位RB和RW對正常小鼠血糖水平的影響選取正常ICR小鼠30只，按照試驗(yàn)例1所述方法飼養(yǎng)和測定血糖濃度。隨機(jī)分3組，每組10只。空白組灌胃給予蒸餾水，治療組灌胃給予RB(200mg/Kg體重)，陽性對照組灌胃給予二甲雙胍(500mg/Kg體重)，分別在第3天(Blood1)、6天(Blood2)、9天(Blood3)取血，葡萄糖氧化酶法(中生公司試劑盒)測定血糖濃度。同時(shí)測定體重增加量。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果參見表10?？梢?，RB同陽性藥物一樣，對正常小鼠的血糖水平也有降低作用。說明有效部位RB的降血糖作用可能是通過胰島素的增敏作用，或者是通過影響糖的吸收來發(fā)揮降血糖作用。且其降血糖作用不僅對胰島素抵抗類型有效，對正常胰島素也同樣有效。
Tab.10 Effect of the Extraction of Leaf of Rubus Spp.(x±s)

RB對正常小鼠的體重增加也有一定的影響，但不如陽性藥物明顯，說明該有效部位是安全有效的。
Tab.11Weight Change of the Mice Feet with the Leaf Extract of Rubus Spp.(x±s)

綜上所述，樹莓葉提取物的RB部位、RW部位或其二者的混合物對STZ誘導(dǎo)的糖尿病小鼠和大鼠具有明顯的降血糖作用，對正常小鼠也有一定的降血糖活性。其作用機(jī)理可能是胰島增敏作用或是通過影響糖的吸收來發(fā)揮其降血糖作用。RB部位、RW部位或其二者的混合物在降低糖尿病動物血糖的同時(shí)還能有效的緩解糖尿病患者的三多一少癥狀，具有綜合的改善作用。且患者的耐受性良好，無任何毒副作用。此外，本發(fā)明的有效部位的原料來源廣泛，制造成本低廉。
另外，發(fā)明人對RB的化學(xué)成分進(jìn)行了初步研究表明其中主要含黃酮類、皂苷類、寡糖類和多糖類等多種成分，天然產(chǎn)物的降血糖作用可能是單一的化學(xué)成分或者是多種化學(xué)成分的協(xié)同作用。
權(quán)利要求
1.樹莓葉提取物的有效部位，通過如下方法制備樹莓葉以低于70v/v％的醇溶劑提取，過濾并合并濾液，回收溶劑得干膏；將干膏混懸于蒸餾水或去離子水中，依次以石油醚、乙酸乙酯、水飽和正丁醇萃取，分別回收萃取液中的溶劑，得到其石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位或水部位。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的有效部位，所述的醇溶劑為乙醇或甲醇。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的有效部位，提取所用醇溶劑濃度為50-60v/v％。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的有效部位，所述的有效部位為正丁醇部位、水部位或其二者的混合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的有效部位，所述的樹莓選自薔薇科(Rosaceae)懸鉤子屬(Rubus L.)植物。
6.一種用于防治糖尿病的藥物組合物，由1-99w/w％的樹莓葉提取物的正丁醇部位、水部位或其二者的混合物與藥學(xué)上可接受的載體組成；優(yōu)選正丁醇部位、水部位或其二者的混合物的重量百分比為20-70w/w％；更優(yōu)選正丁醇部位、水部位或其二者的混合物的重量百分比為40-50w/w％。
7.一種用于防治糖尿病的藥物組合物，由第一組分為1-99w/w％的樹莓葉提取物的正丁醇部位、水部位或其二者的混合物和第二組分為1-99w/w％的人參、黃芪或麥冬的提取物與藥學(xué)上可接受的載體組成；優(yōu)選第一組分的重量百分比為20-70w/w％，第二組分的重量百分比為5-50w/w％；更優(yōu)選第一組分的重量百分比為40-50w/w％，第二組分的重量百分比為20-30w/w％。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的藥物組合物，所述的組合物中還可含有人參、黃芪、麥冬、五味子果實(shí)的提取物、刺五加根的提取物和/或紅景天根的提取物。
9.根據(jù)權(quán)利要求6-8任一所述的藥物組合物，所述組合物的制劑形式選自片劑、膠囊、粉劑、顆粒劑、錠劑、栓劑、乳劑、糖漿、酏劑、口服液、無菌胃腸外溶液、凍干粉針、無菌粉分裝、懸浮液或注射劑。
10.權(quán)利要求1-5任一所述的有效部位或權(quán)利要求6-9任一所述的藥物組合物用于制備防治糖尿病的藥物中的應(yīng)用，優(yōu)選所述的糖尿病為II型糖尿病。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種樹莓葉提取物的有效部位及其組合物，以及其用于制備防治糖尿病的藥物中的應(yīng)用。通過溶劑萃取樹莓葉提取物后，將其分成RE、RB、RW和RP四個部位。其中RB、RW為有效部位，所述的有效部位可單獨(dú)或組合或加上一定比例的人參、黃芪、麥冬、五味子、刺五加和/或紅景天提取物與藥學(xué)上可接受的載體按照常規(guī)的方法制成片劑、膠囊劑、顆粒劑或注射劑等多種制劑形式。通過觀察有效部位對正?；蜴溩艟卣T導(dǎo)糖尿病造模小鼠、大鼠的血糖水平、飲水量、體重增加量和飼料消耗率的影響，發(fā)現(xiàn)RB、RW或其二者的混合物的降血糖作用明顯。所述的有效部位在降低糖尿病動物血糖的同時(shí)還能有效的緩解糖尿病患者的三多一少癥狀，具有綜合的改善作用。有效部位的降血糖的機(jī)理可能是胰島素增敏作用或者是影響糖的吸收。
文檔編號A61K9/00GK1788755SQ20041009858
公開日2006年6月21日 申請日期2004年12月14日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月14日
發(fā)明者許奕華, 張玉平, 陳梅香 申請人:北京市農(nóng)林科學(xué)院