專利名稱：一種異香豆素類化合物及其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種天然來源的異香豆素類(isocoumarin)新化合物及其制備方法, 以及其在制備抗細菌感染藥物、抗腫瘤藥物中的應用。
背景技術：
細菌對抗生素的耐藥尤其是多重藥物耐藥已成為全球關注的醫(yī)學與社會問題，嚴重威脅著感染性疾病的治療。目前，幾乎所有的病原菌，特別是“ESKAPE”病原菌(腸球菌、 金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、鮑曼不動桿菌、銅綠假單胞菌和腸道桿菌屬)均呈現出抗生素耐藥性。然而，批準應用于臨床的抗生素卻逐年減少，甚至到無藥可用的地步。因此， 探索新型結構的抗生素，特別發(fā)現針對“ESKAPE”耐藥菌的新型抗耐藥化合物分子是現在我國藥物領域的重點研究方向。
Amicoumacin是一類來源于微生物的異香豆素類化合物。該類化合物具有異香豆素(isocoumarin)類母核結構，自1975年發(fā)現第一個該類抗生素baciphelacin以來, 已報道了 20多種來源于微生物的Amicoumacin類化合物,它們具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤、 抗炎、抗?jié)兊葟V泛的生物活性，其中Amicoumacin A對耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌 (MRSA)具有強烈的抑制作用；BaCiphelaCin對革蘭氏陽性菌有專一抑制活性，特別是對青霉素、鏈霉素、大環(huán)內酯類抗生素多重耐藥的金黃色葡萄球菌具殺死作用；Xenocoumacins 對革蘭氏陰性菌如大腸桿菌、魯氏不動桿菌(Acinetobacter Iwoffi)有強效活性，另外 xenocoumacins I還對真菌新型隱球菌(Cyptococcus neoformans)具有強烈抑制作用， Sgl7-l-4、Y-05460M-A除了有部分抑菌作用外，還呈現一定的抗腫瘤活性。
本發(fā)明人從一株植物葉片內生枯草芽孢桿菌的次級代謝產物中分離得到 amicoumacin類抗生素-Hetiamacin A,經紫外光譜、紅外光譜、高分辨質譜及核磁共振等波譜學數據的仔細分析，確定Hetiamacin A為amicoumacin類新抗生素,該結構與迄今發(fā)現的所有amicoumacin類抗生素不同，其側鏈有一個獨特的六氫喃唳環(huán)。對Hetiamacin A進行抗菌活性評價發(fā)現，Hetiamacin A具有較廣譜的細菌抑制活性，對革蘭氏陽性菌如葡萄球菌屬(耐β_內酰胺抗生素的菌株)、革蘭氏陰性菌如肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)、福氏志賀氏菌(Shigella fIexneri)> 肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae)等在體外都具有強抑制作用。同時,Hetiamacin A對HeLa腫瘤細胞也具有良好的抑制作用。因此，Hetiamacin A有望成為新抗感染、抗腫瘤先導化合物并具有潛在的良好開發(fā)前景。發(fā)明內容
本發(fā)明提供了如式(I)所示結構的新活性化合物Hetiamacin A 2~ {5_輕基_4-[1-((3，4-二氫-8-羥基-I-氧-I氫-2-苯并吡喃)-3-甲基叔丁基)-氨基甲酰]-六氫嘧啶_6烷基}-乙酸，其化學式為
權利要求
1.一種異香豆素類化合物，其特征在干，具有如式(I)所示的結構
2.—種權利要求I所述的異香豆素類化合物的生產方法，其特征在于，包括如下步驟發(fā)酵培養(yǎng)保藏編號為CGMCC No. 6688的枯草芽孢桿菌菌株(Bacillus subtilis subsp.inaquosorum) PJS，收獲發(fā)酵物；然后從發(fā)酵物中提取并分離所述異香豆素類抗生素化合物。
3.如權利要求2所述的生產方法，其特征在干，異香豆素類抗生素化合物的發(fā)酵培養(yǎng)步驟為將枯草芽孢桿菌菌株PJS接種于種子培養(yǎng)基培養(yǎng)，然后轉入發(fā)酵培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)，培養(yǎng)成熟后收獲發(fā)酵液。
4.如權利要求2或3所述的生產方法，其特征在于，異香豆素類抗生素化合物的提取、分離步驟為將發(fā)酵液離心后，上清液用こ酸こ酯萃取，有機相經無水Na2SO4脫水、減壓濃縮，得粗提物；粗提物再經制備薄層層析，分離得到半純品；半純品溶于甲醇，用HPLC進行制備，冷凍干燥，得到成品。
5.如權利要求2或3所述的生產方法，其特征在于，異香豆素類抗生素化合物的提取分離步驟為上清液用こ酸こ酯萃取，有機相經無水Na2SO4脫水、減壓濃縮，得到油狀淺黃色粗提物；而后粗提物經制備薄層層析，以展開劑氯仿-甲醇=6(Γ70:3(Γ40進行分離得到半純品；半純品溶于甲醇，用HPLC進行制備，冷凍干燥，得到白色粉末狀的成品化合物。
6.如權利要求2或3所述的生產方法，其特征在于，所述的氯仿-甲醇展開劑中，氯仿甲醇比例為65:35，所述異香豆素類化合物在硅膠板上的Rf = O. 35。
7.權利要求I所述的異香豆素類化合物在制備抗生素藥物中的用途。
8.如權利要求7所述的用途，其特征在于，所述抗生素藥物為預防或治療耐β-內酰胺抗生素的革蘭氏陽性菌葡萄球菌屬、肺炎克雷伯菌、福氏志賀氏菌感染或肺炎鏈球菌造成感染的藥物。
9.權利要求I所述的異香豆素類化合物在制備抗腫瘤藥物中的用途。
10.如權利要求9所述的用途，其特征在于，所述腫瘤為白血病、肺癌、肝癌、胰腺癌或子宮頸癌。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種異香豆素類化合物及其制備方法和在制備抗生素藥物以及抗腫瘤藥物中的應用。該化合物側鏈具有六氫嘧啶環(huán)的獨特結構，通過對枯草芽孢桿菌菌株的發(fā)酵并分離而得，具有廣譜細菌抑制活性，對革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌均有較高抗菌活性，且顯示出對腫瘤的較強抗性。
文檔編號A61P31/04GK102977082SQ201210473479
公開日2013年3月20日 申請日期2012年11月20日 優(yōu)先權日2012年11月20日
發(fā)明者孫承航, 劉少偉, 靳婧, 陳川, 劉佳萌, 游雪甫, 王飛飛, 蔣忠科, 郭琳 申請人:中國醫(yī)學科學院醫(yī)藥生物技術研究所