專利名稱：硫普羅寧凍干粉針注射劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物及其制劑領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及保肝藥物硫普羅寧及其凍干粉針注射劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
硫普羅寧(英文名稱Tiopronin)為一種代謝改善解毒劑，其分子式C5H9NO3S，分子量163.20，結(jié)構(gòu)式如下 其主要用于慢性肝病的肝功能改善。該產(chǎn)品的口服和水針注射劑目前已經(jīng)上市。現(xiàn)有注射劑為每1安瓿中裝入2ml或5ml濃度5％的硫普羅寧鈉鹽的水溶液劑，由于硫普羅寧在水中穩(wěn)定性差，易發(fā)生氧化反應(yīng)，故水溶液注射劑存在儲(chǔ)存時(shí)間短的弊端，使用有效期短，影響了該產(chǎn)品的安全和有效使用。粉針制劑可以解決上述問題，但由于硫普羅寧的熔點(diǎn)較低(96-99℃)及硫普羅寧的穩(wěn)定性差，故不宜采用高溫滅菌法制成注射用無菌粉未。
本發(fā)明經(jīng)過研究，發(fā)現(xiàn)采用冷凍干燥的方法將硫普羅寧制成注射用粉末制劑，不僅可以解決上述缺陷，而且本發(fā)明方法制備的凍干粉針注射劑具有很好的穩(wěn)定性。
發(fā)明目的因此，本發(fā)明的目的是提供了一種硫普羅寧凍干粉針注射劑；本發(fā)明的另一目的是提供了一種制備硫普羅寧凍干粉針注射劑的方法；本發(fā)明的另一目的是提供了一種用硫普羅寧凍干粉針注射劑制備治療肝炎藥物的用途。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的硫普羅寧凍干粉針注射劑由活性成分硫普羅寧和藥物可接受的載體成分組成，其中所述藥物可接受的載體可以選自低分子右旋糖酐、甘露醇、環(huán)糊精、可溶性淀粉、糖類物質(zhì)、氯化鈉、苯甲酸或纖維素類物質(zhì)中的一種或多種，優(yōu)選低分子右旋糖酐，尤其優(yōu)選右旋糖酐40。其中，硫普羅寧與藥物可接受的載體之間的重量比可以是1-10∶1，優(yōu)選1-2∶1。
本發(fā)明注射劑優(yōu)選組成為活性成分硫普羅寧和右旋糖酐40(低分子右旋糖酐)，其中硫普羅寧和右旋糖酐40的重量比為1-3∶1，優(yōu)選2∶1。本發(fā)明注射劑的規(guī)格為含活性化合物硫普羅寧1-1000mg，優(yōu)選含活性化合物硫普羅寧50mg，100mg或200mg。
本發(fā)明的凍干粉針注射劑用以下方法制備本發(fā)明的硫普羅寧凍干粉針注射劑的制備方法包括下列步驟a.配制藥液即將活性成分硫普羅寧加注射用水溶解，加入藥物可接受的載體混勻，加注射用水到規(guī)定量；b.除熱原在步驟a的藥液中加入注射劑用活性炭于60-80℃加熱30分鐘濾過；c.除菌將步驟b的濾液用除菌濾器進(jìn)行正壓除菌濾過；d.罐裝用管制西林瓶進(jìn)行無菌灌裝；e.凍干在低溫真空下進(jìn)行冷凍干燥。
以使用1000ml注射用水配制1000支硫普羅寧凍干粉針注射劑為例，制備硫普羅寧凍干粉針注射劑使用的物料重量范圍是硫普羅寧 5-500g右旋糖酐40(或其他可藥用載體) 50-250g注射用水 1000ml共制成凍干品 1000支具體步驟如下配制藥液稱取注射用硫普羅寧原料(硫普羅寧含量不得少于98.5％，含重金屬不得過百萬分之十五)，加注射用水，使其溶解，濃度為0.2g/ml。然后加入規(guī)定量的預(yù)先經(jīng)除菌除熱原處理的20％低分子右旋糖酐溶液混勻。再加注射用水至規(guī)定體積如1000ml，使硫普羅寧含量為0.1g/ml，右旋糖酐含量為0.05/ml。
除熱原上述藥液中加入注射劑用活性炭(活性炭用量是硫普羅寧原料重量的0.3-0.5％)，在60-80℃加熱30分鐘，過濾，收集濾液。
除菌將上述濾液按無菌操作法用除菌濾器進(jìn)行正壓除菌濾過，壓力在0.1Mpa以下，用0.22μ微孔濾膜，濾過前應(yīng)先進(jìn)行起泡點(diǎn)試驗(yàn)，濾液送樣進(jìn)行熱原檢查和半成品含量檢查然后分裝。
罐裝(1)管制西林瓶的處理管制西林瓶規(guī)格為5ml，預(yù)處理時(shí)用0.5-1.0HCl液將管制西林瓶灌滿，100℃下30分鐘進(jìn)行熱處理，生產(chǎn)用水洗管制西林瓶(粗洗)-----純水洗管制西林瓶(精洗)------注射用水洗管制西林瓶(終洗)，洗凈的管制西林瓶經(jīng)220℃下2小時(shí)烘烤，徹底除去熱原.降至60℃后移無菌室備用。
(2)灌裝在100級(jí)潔凈度超凈工作間進(jìn)行灌裝，半加塞。
凍干在專用凍干箱內(nèi)，在-40℃以下預(yù)凍1.5-2小時(shí)，然后在-25℃、1.33Pa(0.01托)真空度下升華，在游離水分去除90％以后，加溫干燥(最高溫度不得超過35℃)待溫度曲線和真空曲線分別重合成，即可視為凍干結(jié)束，凍干箱內(nèi)自動(dòng)全加塞。
封口管制西林瓶分批從凍干箱取出，加鋁蓋即可。
說明本品的pH為1.5-2.5，酸性較強(qiáng)，故管制西林瓶要經(jīng)過酸處理，以提高管制西林瓶的穩(wěn)定性和耐酸能力。
本發(fā)明的注射劑，使用時(shí)用2ml 5％NaHCO3注射液(專用溶媒)溶解，加入到輸液器中靜脈注射，也和其他治療肝病的藥物或輸液劑同時(shí)使用，一同注射，該注射劑可以每天使用，每日1-3次，一個(gè)療程為7-10天。
本發(fā)明的注射劑具有穩(wěn)定性好，療效優(yōu)良，使用方便的特點(diǎn)，比較水針具有更好的穩(wěn)定性，以下通過實(shí)驗(yàn)說明本發(fā)明的有益效果。
一.硫普羅寧凍干粉針及硫普羅寧水針、硫普羅寧鈉水針的初步穩(wěn)定性試驗(yàn)研究I、試驗(yàn)?zāi)康牧蚱樟_寧做為治療慢性遷延性肝炎的有效藥物，國內(nèi)外市場(chǎng)主要有兩種劑型。A)片劑日本參天制藥株式會(huì)社的治爾樂100片和河南新誼藥業(yè)股份有限公司的凱西萊片等，即硫普羅寧片(規(guī)格100mg).B)水針劑日本參天制藥株式會(huì)社的5％硫普羅鈉水針劑(規(guī)格2ml、5ml)。靜脈注射水針劑比口服片劑具有起效快，生物利用度高，療效好等優(yōu)點(diǎn)。但因硫普羅寧(CH3-CHSH-CONHCH2COOH)結(jié)構(gòu)中含有活潑-SH巰基，水溶液中易氧化變質(zhì)為二硫代物[結(jié)構(gòu)式(CH3CH)2SS(CONHCH2COOH)2]影響療效，因此硫普羅寧水針劑穩(wěn)定性較差。用特殊工藝將硫普羅寧制成凍干粉針劑，較好地解決了注射用硫普羅寧的穩(wěn)定性，保證了產(chǎn)品質(zhì)量，同時(shí)臨床應(yīng)用具有使用方便，起效快，生物利用度高，療效好的優(yōu)點(diǎn)。參照《醫(yī)療藥日本醫(yī)藥品集》第9版(1985)P558<硫普羅寧鈉5％水針劑>的方法制備了規(guī)格2ml的“5％硫普羅寧水針劑”、“5％硫普羅寧鈉水針劑”。并且將這些制劑在40℃、60℃溫度條件下完成了0-10天的影響因素穩(wěn)定性試驗(yàn)，強(qiáng)光照射影響因素穩(wěn)定性試驗(yàn)及室溫留樣穩(wěn)定性試驗(yàn)；同時(shí)完成了本發(fā)明“硫普羅寧凍干粉針”的40℃、60℃溫度條件下0-10天的影響因素穩(wěn)定性試驗(yàn)，強(qiáng)光照射影響因素穩(wěn)定性試驗(yàn)及室溫留樣穩(wěn)定性試驗(yàn)。然后進(jìn)行比較，考察“5％硫普羅寧水針劑”、“5％硫普羅寧鈉水針劑”、“硫普羅寧凍干粉針”的產(chǎn)品穩(wěn)定性。
II、樣品的配制A、5％硫普羅寧水針(2ml)取50g針用硫普羅寧原料藥，用注射用水定量稀釋至1000ml，用2ml安瓿灌裝成2ml針劑，封口，滅菌、燈檢即得500支產(chǎn)品。
B、5％硫普羅寧鈉水針劑稱取50g注射用硫普羅寧原料藥，先用100ml注射用水溶解，再用10％NaHCO3調(diào)pH6-7，然后再用注射水定量稀釋至1000ml用2ml安瓿灌裝成2ml針劑，封口，滅菌燈檢，即得500支產(chǎn)品。
C、100mg硫普羅寧凍干粉針取50g注射用硫普羅寧原料藥，25g右旋糖酐-40用注射用水溶解并稀釋至1000ml，加入1.5g注射劑用活性炭，在60-80℃下0.5小時(shí)除熱原，過濾，濾液用0.22ul濾膜正壓過濾除菌，無菌室內(nèi)收集無菌濾液，取2ml灌裝入西林瓶中，凍干箱真空凍干，壓蓋，檢查即得500支產(chǎn)品。
III、試驗(yàn)方法
主要考察溫度，強(qiáng)光照射等影響因素試驗(yàn)條件下0-10天樣品的含量變化情況及樣品中硫普羅寧氧化產(chǎn)物二硫化物用HPLC法測(cè)定含量變化情況。
A、含量的測(cè)定方法精密稱取內(nèi)容物適量(約相當(dāng)于硫普羅寧300mg)加水30ml溶解后，加淀粉指示液1ml，用碘液(0.1mol/L)迅速滴定至溶液顯淺蘭紫色，并在30秒鐘內(nèi)不褪色。每1ml碘液(0.1mol/L)相當(dāng)于16.32mg的C5H9NO3S。

B、雜質(zhì)(二硫代物)HPLC法含量測(cè)定取內(nèi)容物少量，用蒸餾水稀釋成1mg/ml的供試液。HPLC色譜條件如下柱子C18柱250×4.6mm 5um流動(dòng)相甲醇∶水＝3∶7用磷酸調(diào)pH2.5檢測(cè)波長205nm流速1ml/分鐘進(jìn)樣量5ul硫普羅寧保留時(shí)間4分鐘。二流化物保留時(shí)間6分鐘，歸—化法測(cè)二硫代物雜質(zhì)的含量。
IV、測(cè)定結(jié)果A、硫普羅寧凍干粉針穩(wěn)定性試驗(yàn)a、室溫留樣穩(wěn)定性試驗(yàn)(見表1)表1

說明室溫留樣一年硫普羅寧凍干粉針產(chǎn)品含量穩(wěn)定。
b、40℃、60℃影響因素試驗(yàn)40℃、60℃條件下硫普羅寧凍干粉針劑(100mg)考察10天，現(xiàn)將含量測(cè)定結(jié)果匯總?cè)缦?見表2)表2

小結(jié)40℃、60℃本品考察10天，含量指標(biāo)穩(wěn)定，產(chǎn)品質(zhì)量在此考察條件下穩(wěn)定。
c、強(qiáng)光照射影響因素穩(wěn)定性試驗(yàn)取硫普羅寧凍干粉針適量，置注射劑澄明度測(cè)定儀下，以3000LX光照度照射10天，于0、1、3、5、10天分別取樣測(cè)定含量，同0天測(cè)定結(jié)果比較。測(cè)定結(jié)果見下表3表3

本品經(jīng)10天強(qiáng)光照射，含量測(cè)定無太大變化，符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，但從實(shí)測(cè)值看有逐步下降趨勢(shì)，貯存時(shí)本品應(yīng)避光保存。
d、高濕影響因素穩(wěn)定性試驗(yàn)本品為凍干制劑，嚴(yán)封于管制西林瓶中，濕度對(duì)其影響不大，故未做此項(xiàng)試驗(yàn)。
B、5％硫普羅寧水針劑(2ml)的穩(wěn)定性考察試驗(yàn)a、室溫留樣長期穩(wěn)定性考察試驗(yàn)5％硫普羅寧水針劑室溫留樣一年，現(xiàn)將0、3、6、9、12月樣品含量測(cè)定的結(jié)果如下表4
表4

說明5％硫普羅寧水針室溫留樣長期穩(wěn)定性極差，留置一年，含量由初配時(shí)99.60％下降到68.90％，完全失去藥用價(jià)值。不加抗氧化劑，5％硫普羅寧水針不能長期室溫貯存。
b.40℃、60℃條件下5％硫普羅寧水針劑(2ml)考察試驗(yàn)40℃、60℃條件下5％硫普羅寧水針劑(2ml)考察10天，現(xiàn)將含量測(cè)定結(jié)果匯總?cè)缦?見表5)表5

可以看出40℃、60℃影響因素條件下5％硫普羅寧水溶液很不穩(wěn)定，0天和10天相比含量由99.60％下降到91.50％、89.4雜質(zhì)二硫化物由0.4％升至8.5％，10.5％，已失去藥用價(jià)值。
c、強(qiáng)光照射影響因素穩(wěn)定性試驗(yàn)取5％硫普羅寧水針劑適量，置注射劑澄明度測(cè)定儀下，以3000LX光照度照射10天，于0、1、3、5、10天分別取樣測(cè)定，同0天測(cè)定結(jié)果比較測(cè)定結(jié)果見下表6表6

本品經(jīng)10天強(qiáng)光照射，含量由99.60％下降到89.10％，雜質(zhì)二硫代物由0.4％升到10.90％，已失去藥用價(jià)值，故5％硫普羅寧水針劑強(qiáng)光條件下不穩(wěn)定。
說明本品經(jīng)10天強(qiáng)光照射，含量下降明顯，已失去藥用價(jià)值。
d、高濕影響因素穩(wěn)定性試驗(yàn)因本品為安瓿包裝，濕度對(duì)其影響不大，故未做此項(xiàng)試驗(yàn)。
C、5％硫普羅寧鈉水針劑(2ml)的穩(wěn)定性試驗(yàn)a、室溫留樣長期穩(wěn)定性試驗(yàn)5％硫普羅寧鈉水針劑室溫留樣一年，現(xiàn)將0、3、6、9、12月樣品含量測(cè)定的結(jié)果如下表7表7

說明5％硫普羅寧鈉水針室溫留樣長期穩(wěn)定性極差，留置一年，含量由初始的99.80％下降到64.70％，完全失去藥用價(jià)值，不加抗氧化劑，特殊方法貯存，5％硫普羅寧鈉水針不能長期貯存。
b.40℃、60℃影響因素條件5％硫普羅寧鈉水針劑(2ml)的穩(wěn)定性試驗(yàn)40℃、60℃影響因素條件下0-10天5％硫普羅寧鈉水針劑(2ml)的穩(wěn)定性試驗(yàn)，含量測(cè)定結(jié)果如下(見表8)表8

可以看出40℃、60℃影響因素條件下，5％硫普羅寧鈉水針劑很不穩(wěn)定，0天和10天相比含量由99.80％下降到90.80％，和89.0％；雜質(zhì)二硫化物由0.2％升至9.1％、11.％。已失去藥用價(jià)值。
c、強(qiáng)光照射影響因素穩(wěn)定性試驗(yàn)取5％硫普羅寧鈉水針劑適量，置注射劑澄明度測(cè)定儀下，以3000LX光照度照射10天，于0、1、3、5、10天分別取樣測(cè)定含量，同0天測(cè)定結(jié)果比較測(cè)定結(jié)果見下表9表9

本品經(jīng)10天強(qiáng)光照射，含量由99.80％下降到87.30％，雜質(zhì)二硫代物由0.2％升到12.80％，已失去藥用價(jià)值，故5％硫普羅寧鈉水針劑強(qiáng)光條件下不穩(wěn)定。
d、高濕影響因素穩(wěn)定性試驗(yàn)因本品為安瓿包裝，濕度對(duì)其影響不大，故未做此項(xiàng)試驗(yàn)。
V、結(jié)論a.硫普羅寧凍干粉針室溫留樣一年含量測(cè)定穩(wěn)定，而5％硫普羅寧水針劑、5％硫普羅寧鈉水針劑室溫留樣一年含量測(cè)定極不穩(wěn)定，已失去藥用價(jià)值。
b.40℃、60℃影響因素條件下硫普羅寧凍干粉針含量測(cè)定穩(wěn)定，而5％硫普羅寧水針劑、5％硫普羅寧鈉水針劑含量由初始0天的99.60％和99.80％到10天下降到90％，雜質(zhì)二硫代物則由0.4％和0.2％升高到10％，產(chǎn)品含量嚴(yán)重不穩(wěn)定，已失去藥用價(jià)值。
c.3000LX硫普羅寧凍干粉針劑經(jīng)10天強(qiáng)光照射，含量測(cè)定無太大變化，符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，但從實(shí)測(cè)值看有逐步下降趨勢(shì)，貯存時(shí)本品應(yīng)避光保存。5％硫普羅寧水針劑，5％硫普羅寧鈉水針劑3000LX強(qiáng)光照射條件下極不穩(wěn)定，已失去藥用價(jià)值。
因此，硫普羅寧凍干粉針劑顯然比5％硫普羅寧水針劑、5％硫普羅寧鈉水針劑質(zhì)量穩(wěn)定，具有明顯的穩(wěn)定性優(yōu)勢(shì)。
二.對(duì)病毒性慢性肝損傷的療效實(shí)驗(yàn)受試藥物硫普羅寧針劑100mg/支凍干劑，按實(shí)施例1中方法制備對(duì)照藥品維生素K1針劑100mg/支水針，無錫第七制藥廠生產(chǎn)。批準(zhǔn)文號(hào)蘇衛(wèi)藥準(zhǔn)字(82)2689-2號(hào)，生產(chǎn)批號(hào)930417。遮光、涼暗處保存。
給藥方案治療組按200mg/日劑量靜點(diǎn)硫普羅寧針劑，連續(xù)給藥4周，停藥后隨訪觀察6個(gè)月。
對(duì)照組按40mg/日劑量靜點(diǎn)維生素k1針，連續(xù)給藥4周，停藥后隨訪觀察6個(gè)月。
觀察指標(biāo)1.癥狀乏力、納差、厭油、惡心嘔吐、腹脹、尿黃、發(fā)熱、肝區(qū)疼、鼻紐或齒齦出血等。治療前以+、-表示癥狀有無，治療中及治療后以-，±，+，++表示癥狀消失、減輕、不變和加重，由主管醫(yī)師于治療前、治療期間每2周、治療畢6個(gè)月，分別觀察記錄；2.體征鞏膜黃染、蜘蛛痣(數(shù)量)、肝掌、腹水、腹壁靜脈曲張、肝界(上界、右肋下)、肝質(zhì)地及觸叩痛、脾界(左肋下)、下肢浮腫，以及體溫、脈搏、血壓、心肺等，由主管醫(yī)師于治療前、治療期間每2周、治療畢6個(gè)月，分別觀察記錄；3.生化檢查SB(標(biāo)準(zhǔn)碳酸氫鹽)、T(血清蛋白總量)、A/G(白球蛋白比例)、ALT(血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶)、AST(谷草轉(zhuǎn)氨酶)、Y-GT(谷氨酰胺轉(zhuǎn)肽酶)、AKP(堿性磷酸酶)、膽固醇、BuN(尿素氮)等，治療前、治療期間每2周、治療畢6個(gè)月分別檢測(cè)、記錄；4.血清病毒學(xué)標(biāo)志HbsAg(乙型肝炎病毒表面抗原)\HbeAg(乙型肝炎病毒e抗原)、HbeAb(乙型肝炎病毒e抗體)、HbcAb(乙型肝炎病毒核心抗體)，治療前后、治療畢6個(gè)月分別檢測(cè)、記錄；5.B超觀察肝脾、門靜脈、脾靜脈形態(tài)學(xué)情況，治療前后各檢查、記錄一次；6.心電圖、血尿常規(guī)、尿三膽治療前后各檢測(cè)、記錄一次；7.CT、MRI、胃鏡等其它檢查由主管醫(yī)師根據(jù)情況決定；8.不良反應(yīng)由主管醫(yī)師根據(jù)實(shí)際情況，每2周歸納記錄一次；9.記錄患者飲酒史、飲酒習(xí)慣及飲酒量等。
10.療效判斷標(biāo)準(zhǔn)按中華人民共和國衛(wèi)生部頒布的《病毒性肝炎藥物療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)》執(zhí)行。
結(jié)果見表10和表11。
表10用藥后兩組患者癥狀改善情況比較(％)組別 例數(shù)癥狀消失減輕部 總好轉(zhuǎn)率(％) P值治療組107 51 34 79.4乏力＜0.05對(duì)照組48 13 15 58.3治療組98 35 33 69.4納差 ＜0.01對(duì)照組46 8 13 45.7治療組96 厭油33 31 67.4對(duì)照組39 惡心7 16 59.0治療組77 22 29 66.2腹脹＜0.05對(duì)照組33 4 12 48.5治療組79 26 30 70.9黃疸對(duì)照組37 10 15 67.6治療組56 11 19 53.6肝痛對(duì)照組28 4 10 50.0治療組38 7 15 57.9肝大＜0.01對(duì)照組20 1 530.0注例數(shù)指各組用藥前相應(yīng)癥狀陽性的患者數(shù)癥狀消失減輕以停藥6個(gè)月時(shí)癥狀改善情況為標(biāo)準(zhǔn)表11用藥后兩組肝功能指標(biāo)改善情況比較(X±SD)組別 例數(shù)肝功用藥前 停藥時(shí) P值停藥半年 P值治療組107 140±48.3 58±28.1 ＜0.00581±37.4 ＜0.01
ALT(u)對(duì)照組48 123±50.964±31.4＜0.0586±36.7＜0.05*P值 - -治療組66 94±27.9 49±18.6＜0.0160±22.4＜0.05AST(u)對(duì)照組30 96±28.4 54±22.2＜0.0186±31.4-*P值 ＜0.05治療組71 109±37.253±21.6＜0.0167±24.8＜0.05r-GT(u)對(duì)照組32 108±96.464±23.5＜0.0580±30.8＜0.05*P值 -- -治療組56 50±6.9 88±7.9 ＜0.0584±8.6 ＜0.05T(g/L)對(duì)照組25 48±7.1 47±6.1 - 48±6.8 -*P值 -＜0.05＜0.05治療組67 1.2±0.211.5±0.23 ＜0.051.5±0.27 ＜0.05A/G對(duì)照組32 1.2±0.191.2±0.17 - 1.2±0.19 -*P值 -＜0.05＜0.05治療組75 63±23.4 27±14.4＜0.0131±16.4＜0.05SB(umol/L)對(duì)照組36 57±18.9 28±15.6＜0.0533±19.7＜0.05*P值 -- -注例數(shù)指用藥前肝功異常病例數(shù)P值分別為停藥及停藥半年時(shí)肝功指標(biāo)與用藥前比較*P值為兩組間肝功指標(biāo)比較三.硫普羅寧凍干粉針與硫普羅寧水針劑和硫普羅寧片劑的藥理、藥效及藥代動(dòng)力學(xué)的特點(diǎn)與比較(一).硫普羅寧凍干粉針劑的藥理及藥效學(xué)研究實(shí)驗(yàn)動(dòng)物試驗(yàn)表明，本發(fā)明的硫普羅寧凍干粉針劑對(duì)TAA(硫代乙酰胺)、CCL4(四氯化碳)所造成動(dòng)物急性肝損傷模型中血清AST、ALT升高有降低作用，對(duì)慢性肝損傷模型引起的甘油三酯的蓄積有抑制作用?？梢源龠M(jìn)肝糖元合成，抑制膽固醇增高，有利于血清白蛋白/球蛋白比值回升。
下面的實(shí)驗(yàn)說明本發(fā)明的硫普羅寧凍干粉針劑對(duì)肝損傷的保護(hù)作用1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康谋驹囼?yàn)主要觀察MPG對(duì)CCL4所致小鼠急性肝損傷的治療作用。為臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。
2、試驗(yàn)材料(1)受試藥硫普羅寧(MPG)(2)陽性對(duì)照藥還原型谷胱甘肽(GSH)(3)造模型藥四氯化碳(CCL4)(4)溶劑對(duì)照碳酸氫鈉(NaHCO3)(5)試驗(yàn)動(dòng)物昆明種健康小鼠，由河南醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心飼養(yǎng)并提供，體重20±2g，雌.雄各半.
3、試驗(yàn)方法將動(dòng)物隨機(jī)分成9組，每組30只，分別以ig(經(jīng)口灌胃)、ip(腹腔注射)兩種途徑給藥。各組用藥劑量、方法均與對(duì)抗試驗(yàn)相同。各試驗(yàn)組在第一天用藥后30分鐘(除溶劑對(duì)照組外)ipCCL4一次，繼續(xù)用藥至15天，同時(shí)在36小時(shí)、7天、15天分別自理各組動(dòng)物10只。取血及剖取肝組織，進(jìn)行生化及病理組織學(xué)檢查。(檢測(cè)的各項(xiàng)指標(biāo)與對(duì)抗試驗(yàn)相同)。
4、試驗(yàn)結(jié)果(1)給動(dòng)物一次ipCCL4后，CCL4組及各個(gè)治療組在15天內(nèi)動(dòng)物的存活情況見表12。
(2)給動(dòng)物一次ipCCL4與ipCCL4后再用MPG治療15天，各生化指標(biāo)詳見表13和表14。
(3)單用CCL4組動(dòng)物肝組織細(xì)胞出現(xiàn)明顯的灶性炎癥浸潤，灶性壞死及肝小葉中央壞死，經(jīng)用MPG治療后的各組動(dòng)物肝細(xì)胞，不同程度的損傷明顯減輕，治療7-15天后肝損傷細(xì)胞已基本恢復(fù)正常。MPG與GSH治療組相比其結(jié)果基本相擬。見表15。
5、結(jié)論(1)單用CCL4組(模型組)動(dòng)物在15天內(nèi)死亡率為23％，溶劑對(duì)照組ipCCL4一次后，受試藥大劑量組，(MPG、GSH)在15天的治療中動(dòng)物無一只死亡，小劑量組動(dòng)物死亡分別為7％、3％。本試驗(yàn)結(jié)果表明本品具有降低由CCL4所致急性肝損傷造成的死亡。
(2)單用CCL4組，肝功能ALT、AST，明顯增高，T值下降，A、C值倒置。用MPG治療15天，分別在36小時(shí)、7天、15天處理各組動(dòng)物測(cè)得ALT、AST均有不同程度降低，T值逐步升高。A、G值比值逐漸恢復(fù)正常。與單用CCL4組相比，兩者有明顯差異；GSH的治療作用與MPG相比，兩者基本相擬。結(jié)果表明MPG具有加速肝損傷功能恢復(fù)的作用。
(3)單用CCL4組與ipCCL4后，用MPG進(jìn)行治療組迪相比，肝損傷面積明顯縮小，并具有顯著性差異。GSH與MPG的治療作用兩者無明顯差異。結(jié)果表明MPG具有明顯加速由CCL4所致肝損傷細(xì)胞功能的恢復(fù)作用。
(二).硫普羅寧凍干粉針劑與硫普羅寧水針劑和硫普羅寧片劑的藥代動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)及比較給大鼠口服硫普羅寧片劑，自尿中排泄量較低(0.015％)，靜脈注射硫普羅寧凍干粉針后尿中排泄量則明顯增高(22.35％)，靜脈注射后30分鐘即可達(dá)到最大血藥濃度；口服后60分鐘達(dá)最大血藥濃度，直至120分鐘還可檢出。說明注射用硫普羅寧凍干粉針劑比硫普羅寧片劑起效快，生物利用度高，療效好。
在人體口服、肌肉注射后，尿中排泄量相近(肌注10-12％，15.47％)但肌注后排泄時(shí)間延長，需8-24小時(shí)，血漿水平較口服高但較靜脈注射低，說明靜注硫普羅寧凍干粉針比肌注硫普羅寧水針療效好。
因此，改變給藥途徑，制備成靜注的硫普羅寧凍干粉針比肌注硫普羅寧水針劑、口服硫普羅寧片劑具有起效快、生物利用度高、療效好等優(yōu)點(diǎn)。
表12MPG對(duì)CCL4所致動(dòng)物死亡的影響

注各試驗(yàn)組+CCL4的量均為0.25％的濃度10ml/kg，ip
表13MPG治療CCL4所致小鼠肝ALT、AST改變的影響

**P＜005*** P＜0.01與CCL4組相比；△ΔP＜0.01，與溶劑對(duì)照組相比。
注各試驗(yàn)組+CCL4的量均為10ml/kg(0.25％)，ip一次。
表14MPG治療由CCL4所致小鼠肝T、A、G改變的影響

ΔP＜0.05，與溶劑對(duì)照組相比，**P＜0.05，與CCL4組相比。
注各試驗(yàn)組+CCL4的量均為10ml/kg(0.25％)，ip一次。
表15MPG治療CCL4所致小鼠肝損傷的影響(7D)

***P＜0.01，均與CCL4組相比。注各試驗(yàn)組+CCL4的量均為10ml/kg.ip。
Δ1、在光鏡下以10/20放大照像。2、以10×8cm的透明塑料膜，分為900個(gè)小方格為單位，對(duì)上述照片中的病灶進(jìn)行測(cè)量，比較各組的病灶大小。
下面通過實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明。應(yīng)該理解的是，本發(fā)明的實(shí)施例是用于說明本發(fā)明而不是對(duì)本發(fā)明的限制。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)質(zhì)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行的簡(jiǎn)單改進(jìn)都屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。除非另有說明，本發(fā)明中的百分?jǐn)?shù)是重量百分?jǐn)?shù)。
實(shí)施例1制備硫普羅寧凍干粉針注射劑硫普羅寧 100g右旋糖酐40 50g注射用水 1000ml共制成凍干品 1000支制備工藝配制藥液稱取處方量的注射用原料(硫普羅寧含量不得少于98.5％，含重金屬不得過百萬分之十五)，加無菌無熱原蒸餾水，使溶解，濃度為0.2g/ml。然后加入處方量的預(yù)先經(jīng)除菌除熱原處理的20％右旋糖酐40溶液混勻。再加水至1000ml，使硫普羅寧含量為0.1g/ml，右旋糖酐40含量為0.05/ml；除熱原上述藥液中加入注射劑用活性炭(活性炭用量是硫普羅寧原料重量的0.3-0.5％)，在60-80℃加熱30分鐘，過濾，收集濾液。
滅菌將上述藥液按無菌操作法進(jìn)行正壓除菌濾過。壓力在0.1Mpa以下，用0.22μ微孔濾膜，濾過前應(yīng)先進(jìn)行起泡點(diǎn)試驗(yàn)，濾液送樣進(jìn)行熱原檢查和半成品含量檢查然后分裝；灌裝管制西林瓶的處理管制西林瓶，規(guī)格為5ml。預(yù)處理時(shí)用0.5-1.0HCl液將管制西林瓶灌滿，100℃下30分鐘進(jìn)行熱處理，生產(chǎn)用水洗管制西林瓶(粗洗)-----純水洗管制西林瓶(精洗)------注射用水洗管制西林瓶(終洗)洗凈的管制西林瓶經(jīng)220℃下2小時(shí)烘烤，徹底除去熱原，降至60℃后移無菌室備用；灌裝在100級(jí)潔凈度超凈工作間進(jìn)行灌裝，半加塞。
凍干在-40℃以下預(yù)凍1.5-2小時(shí)，然后在-25℃、1.33Pa(0.01托)真空度下升華，在游離水分去除90％以后，加溫干燥(最高溫度不得超過35℃)待溫度曲線和真空曲線分別重合成，即可視為凍干結(jié)束，凍干箱內(nèi)自動(dòng)全加塞；封口管制西林瓶分批從凍干箱取出，加鋁蓋。
實(shí)施例2制備硫普羅寧凍干粉針注射劑硫普羅寧 100g乳糖 50g甘露醇 50g注射用水 1000ml共制成凍干品 1000支制備方法除加入的輔料不同外，其他同實(shí)施例1實(shí)施例3制備硫普羅寧凍干粉針注射劑硫普羅寧 100g乳糖 50g注射用水 1000ml共制成凍干品 1000支制備方法除加入的輔料不同外，其他同實(shí)施例1實(shí)施例4制備硫普羅寧凍干粉針注射劑硫普羅寧 100g環(huán)糊精 50g注射用水 1000ml共制成凍干品 1000支制備方法除加入的輔料不同外，其他同實(shí)施例1實(shí)施例5制備硫普羅寧凍干粉針注射劑硫普羅寧 100g羥丙基纖維素鈉 50g注射用水 1000ml共制成凍干品 1000支制備方法除加入的輔料不同外，其他同實(shí)施例1。
權(quán)利要求
1.一種用于制備治療慢性肝病藥物的凍干粉針注射劑的硫普羅寧化合物，其具有下面的結(jié)構(gòu)式
2.一種治療慢性肝病的硫普羅寧凍干粉針注射劑，其含有作為活性成分的硫普羅寧化合物和藥物可接受的載體。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的注射劑，其中藥物可接受的載體選自低分子右旋糖酐、甘露醇、環(huán)糊精、可溶性淀粉、糖類物質(zhì)、氯化鈉、苯甲酸或纖維素類物質(zhì)中的一種或多種。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的注射劑，其中硫普羅寧化合物與藥物可接受的載體之間的重量比可以是1-10∶1。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的注射劑，其中硫普羅寧化合物與藥物可接受的載體之間的重量比可以是1-2∶1。
6.根據(jù)權(quán)利要求3的注射劑，其中藥物可接受的載體為低分子右旋糖酐。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的注射劑，其中低分子右旋糖酐是右旋糖酐40。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的注射劑，其中硫普羅寧化合物與右旋糖酐40的重量比可以是1-3∶1。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的注射劑，其中硫普羅寧化合物與右旋糖酐40的重量比可以是2∶1。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的注射劑，其中硫普羅寧化合物的含量規(guī)格是1-1000mg。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的注射劑，其中硫普羅寧化合物的含量規(guī)格是50mg，100mg或200mg。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的注射劑，其中每支注射劑含有100mg硫普羅寧，50mg右旋糖酐40。
13.根據(jù)權(quán)利要求2-12之一的注射劑的制備方法，其特征在于包括下列步驟a.配制藥液即將活性成分硫普羅寧加注射用水溶解，加入藥物可接受的載體混勻，加注射用水到規(guī)定量；b.除熱原在步驟a的藥液中加入注射劑用活性炭于60-80℃加熱30分鐘濾過；c.除菌將步驟b的濾液用除菌濾器進(jìn)行正壓除菌濾過；d.罐裝用管制西林瓶進(jìn)行無菌灌裝；e.凍干在低溫真空下進(jìn)行冷凍干燥。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的制備方法，其中藥物可接受的載體是右旋糖酐40，除菌采用除菌濾器正壓濾過法，壓力在0.1Mpa以下。
15.權(quán)利要求2-12之一的硫普羅寧凍干粉針注射劑用于制備治療慢性肝病的藥物的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于制備治療慢性肝病藥物的凍干粉針注射劑的硫普羅寧化合物以及含有作為活性成分的硫普羅寧化合物和藥物可接受載體的凍干粉針注射劑，其規(guī)格為含活性化合物硫普羅寧1－1000mg，可以是例如50mg，100mg或200mg等，其中藥物可接受的載體選自低分子右旋糖酐、甘露醇、環(huán)糊精、可溶性淀粉、糖類物質(zhì)、氯化鈉、苯甲酸、纖維素類物質(zhì)或水中的一種或多種。本發(fā)明還涉及制備硫普羅寧凍干粉針注射劑的方法，該方法包括配制藥液、除熱原、除菌、罐裝和凍干等步驟。
文檔編號(hào)A61K31/195GK1488343SQ0215941
公開日2004年4月14日 申請(qǐng)日期2002年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2002年10月8日
發(fā)明者穆來安, 楊波, 劉晨江, 邵長青, 宋祥林 申請(qǐng)人:河南省新誼藥業(yè)股份有限公司