修飾（一種或多種）。所述修飾 包括點突變，如核酸/基因/染色體中一個或多個堿基的轉換或易位、缺失/插入/添加 從而修飾核酸/基因/染色體，其可產生尤其是異?；虮磉_/轉錄/翻譯或失活基因產 物、組成型活性/非活性基因產物，導致例如顯性失活作用。優(yōu)選地，突變導致抑制真菌生 物體生長能力的增加。因此，也優(yōu)選的是保藏的微生物的突變體細胞在期望的基因（一種 或多種）具有突變（一種或多種），或通過本領域技術人員已知的方法誘導期望的基因（一 種或多種）中的突變（一種或多種）?，F(xiàn)有技術中也已知的是可通過任何適當?shù)姆椒?表 型來選擇突變的或基因工程化的細菌細胞。在本發(fā)明的背景中，可根據(jù)本文實施例中描述 的方法測試具有增加的抑制真菌生物體生長能力的突變體。但是，術語"突變體"也包括 本發(fā)明微生物的細胞，優(yōu)選地在它們的基因組中具有天然存在的、自發(fā)突變的已保藏微生 物的細胞，即細菌染色體。"自發(fā)突變"是天然出現(xiàn)的突變，即，沒有通過人工的直接基因操 作或通過暴露于誘變劑。自發(fā)突變體的選擇可通過培養(yǎng)菌株并按照例如突變體細菌顯示 改進的生長的能力進行選擇，從而實現(xiàn)。選擇自發(fā)突變體的方法是本領域熟知的（參見例 女日Sambrook,Russell"MolecularCloning,ALaboratoryManual",ColdSpringHarbor Laboratory,N.Y. (2001) ;Ausubel,"CurrentProtocolsinMolecularBiology",Green PublishingAssociatesandWileyInterscience,N.Y.(1989))。例如，運樣的突變可在 培養(yǎng)期間出現(xiàn)，例如，在和DM復制關聯(lián)的正常的細胞分裂過程期間或在本發(fā)明微生物的 突變體的傳代和/或保存期間出現(xiàn)。
[0109] 在另一方面中，本發(fā)明設及本發(fā)明的微生物的類似物或片段，其是熱失活的或凍 干的，其中所述類似物保持抑制真菌生物體生長的能力。
[0110] 根據(jù)本發(fā)明，術語"本發(fā)明的微生物的類似物"也包括本發(fā)明的微生物的死的或失 活的細胞，優(yōu)選本文公開的不再能夠在平板上形成對屬于乳桿菌屬微生物具有特異性的單 個菌落的乳桿菌種的死的或失活的細胞。所述死的或失活的細胞可具有完整的或破碎的 細胞膜。殺死或滅活本發(fā)明微生物的細胞的方法是本領域已知的。EI-Nezami等，J.Food Prot. 61 (1998)，466-468描述了通過UV-照射滅活乳桿菌種的方法。優(yōu)選地，本發(fā)明微生物 的細胞是熱失活的或冷凍干燥的。本發(fā)明細胞的冷凍干燥的優(yōu)勢是它們可被容易儲存和操 作，同時保持它們抑制真菌生物體生長的能力。而且，當在本領域已知的條件下施加至適當 的液體或固體培養(yǎng)基時，冷凍干燥的細胞可再次生長。通過本領域已知的方法進行冷凍干 燥。優(yōu)選地，在室溫下、即16°C和25°C之間的任何溫度下進行至少2小時。而且，本發(fā)明冷 凍干燥的微生物的細胞在4°C的溫度下穩(wěn)定至少4周，從而仍能抑制如本文所描述的真菌 生物體。可通過在170°C的溫度下溫育本發(fā)明微生物的細胞至少2小時來實現(xiàn)熱失活。但 是，優(yōu)選地通過在存在化ar大氣壓飽和蒸汽的情況下，在12rC的溫度下高壓滅菌所述細 胞至少20分鐘實現(xiàn)熱失活。在可選的方案中，通過在-20°C冷凍所述細胞至少4周、3周、 2周、1周、12小時、6小時、2小時或1小時實現(xiàn)本發(fā)明微生物的細胞的熱失活。優(yōu)選地至 少70 %、75 %或80 %，更優(yōu)選地85 %、90 %或95 %和尤其優(yōu)選的至少97 %、98 %、99 %和更 多，尤其優(yōu)選的 99. 1%、99. 2%、99. 3%、99. 4%、99. 5%、99. 6%、99. 7%、99. 8%或 99. 9% 和最尤其優(yōu)選的100 %的本發(fā)明的微生物的類似物的細胞是死的或失活的，但是，它們仍具 有抑制真菌生物體生長的能力?？赏ㄟ^本領域已知的方法，例如通過測試活力來測試本發(fā) 明的微生物的類似物或片段是否的確是死的或失活的。
[0111] 術語"本發(fā)明的微生物的類似物"包括本發(fā)明的微生物的裂解物或組分，優(yōu)選地本 文公開的乳桿菌種的裂解物或組分。根據(jù)本發(fā)明，術語"裂解物"意思是本發(fā)明微生物的 已經破碎細胞在水性介質中的溶液或懸液。但是，術語決不應解釋為限制性的。細胞裂解 物包括例如大分子（如DNA、RNA、蛋白質、膚、碳水化合物、脂質等）和/或小分子（如氨基 酸、糖、脂肪酸等），或其組分。另外，所述裂解物包括可W是光滑或顆粒結構的細胞碎片。 制備微生物細胞裂解物的方法是本領域已知的，例如，通過采用法式壓碎機、使用玻璃珠或 鐵珠的細胞磨機、或酶細胞裂解等。另外，裂解細胞設及本領域已知的用于打開/破壞細胞 的各種方法。裂解細胞的方法不是重要的并且可采用能實現(xiàn)本發(fā)明微生物的細胞裂解的任 何方法?？捎杀绢I域技術人員選擇適當?shù)姆椒ǎ缈赏ㄟ^酶、化學或物理方式實現(xiàn)細胞的 打開/破壞。酶和復合酶的非限制性例子是蛋白酶，如蛋白酶K、脂酶或糖巧酶；化學品的 非限制性例子是離子載體、去污劑，如十二烷基硫酸鋼、酸或堿；并且物理方式的非限制性 例子是高壓，如法式壓碎、滲透、溫度，如熱或冷。另外，也可使用采用蛋白水解酶之外的酶、 酸、堿等適當?shù)慕M合的方法。例如，通過冷凍和融化來裂解本發(fā)明微生物的細胞，更優(yōu)選地 在小于-70°C溫度下冷凍和在大于30°C的溫度下融化，尤其優(yōu)選的在小-75°C的溫度下冷 凍和優(yōu)選的在大于35°C的溫度下融化，最優(yōu)選的是冷凍的溫度小于-80°C和融化的溫度大 于37°C。也優(yōu)選的是所述冷凍/融化重復至少1次，更優(yōu)選地至少2次，甚至更優(yōu)選地至少 3次，尤其優(yōu)選地至少4次和最優(yōu)選地至少5次。
[0112] 因此，本領域技術人員可通過參考上面的一般闡釋，并根據(jù)需要適當?shù)男揎椈蚋?變那些方法，來制備期望的裂解物。優(yōu)選地，用于所描述的裂解物的水性介質是水、生理學 生理鹽水，或緩沖液溶液。細菌細胞裂解物的優(yōu)勢是其可容易地W高性價比產生和儲存，因 為需要更少的技術設施。
[0113] 根據(jù)本發(fā)明，裂解物也是來自上述裂解物的分子組分的制劑。運些組分可通過本 領域技術人員已知的方法獲得，例如色譜，包括例如親和性色譜、離子交換色譜、尺寸排阻 色譜、反相色譜、和在柱中具有其他色譜材料的色譜，或分批方法，其他分饋方法，例如過濾 方法，例如超濾、透析、在離屯、中應用尺寸排阻的透析和濃縮、在密度梯度或分步矩陣（step matrices)中的離屯、，沉淀，例如親和性沉淀、鹽溶或鹽析（硫酸錠-沉淀）、乙醇沉淀，或其 他分離上述裂解物組分的蛋白質化學、分子生物學、生物化學、免疫學、化學或物理方法。
[0114] "本發(fā)明的微生物的片段"包括本發(fā)明微生物的細胞的任何部分。優(yōu)選地，所述 片段是通過膜制品獲得的膜組分。可通過本領域已知的方法獲得屬于乳桿菌屬的微生物 的膜制品，例如，通過采用下面描述的方法來獲得：R〇llan等，Int.J.FoodMicrobiol. 70 (2001), 303-301,Matsuguchi等，Clin.Diagn.L油.Immunol. 10 (2003), 259-266 或Stentz 等，Appl.Environ.Microbiol. 66(2000),4272-4278 或Varmanen等，J.Bacteriology 182(2000)，146-154?？蛇x地，也設想全細胞制品。優(yōu)選地，本文描述的本發(fā)明的微生物的 衍生物或片段保持本文詳細描述的抑制真菌生物體生長的能力。
[0115] 本發(fā)明首先基于發(fā)現(xiàn)了乳桿菌菌株能夠通過抑制真菌生長來延長酸奶的貨架期 限。通過使用運樣的乳桿菌菌株，可替換迄今采用的防腐劑山梨酸鐘。在實驗中，測試乳桿 菌細胞對青霉菌種、曲霉菌種和鏈格抱屬的真菌的抑制活性。首先，對于抗真菌的活性，使 用活乳酸菌細胞。鑒定乳桿菌菌株（短乳桿菌），其能夠抑制所測試的真菌菌株的生長。細 菌命名為"乳酸菌防霉劑"并且W名稱DSM22721于2009年6月26日提交至DSMZ值eutsche SammlungvonMikroorganismenundZeHkulturenGmbH(德國微生物菌種保藏中屯、））。
[0116] 在另一實驗中，在食品中測試乳桿菌菌株。為了該目的，將乳桿菌菌株與酸奶起子 培養(yǎng)物一起添加至起始培養(yǎng)基，用于酸奶生產。在酸奶的發(fā)酵之后，添加真菌抱子，并且酸 奶儲存在TC。相比添加和不添加山梨酸鐘作為防腐劑的對照批次，在本發(fā)明的乳桿菌的批 次中發(fā)現(xiàn)實現(xiàn)了顯著延長的耐久性，即可在比山梨酸鐘明顯更長的時間段內抑制真菌的生 長。
[0117] 使用運樣的乳桿菌菌株用于保存食品、動物飼料、或藥學組合物或化妝品組合物， 相比常見的保存方法具有明確的優(yōu)勢。其是不改變食品的風味或質地的生物防腐劑。
[0118] 本發(fā)明進一步設及根據(jù)本發(fā)明的微生物細胞在生產防腐食品、動物飼料、或藥學 組合物或化妝品組合物的用途，其中向食品、動物飼料、或藥學組合物或化妝品組合物添加 微生物細胞；并且設及保存食品、動物飼料、或藥學組合物或化妝品組合物的方法，其中向 食品、動物飼料、或藥學組合物或化妝品組合物添加根據(jù)本發(fā)明的微生物細胞。
[0119] 根據(jù)本發(fā)明的微生物細胞的應用是簡單的，在食品的情況下，本發(fā)明細菌的（活） 細胞或片段或類似物W指定量添加至食品。類似的考慮適合動物飼料或藥學組合物。 實施例
[0120] 下面，參考實施例更詳細描述本發(fā)明，但不限于運些實施例。
[0121] 圖1顯示實施例2的結果。
[0122] 圖2顯示本發(fā)明冷凍干燥的乳酸菌的穩(wěn)定性。經每g的菌落形成單位（C化）測量 穩(wěn)定性。
[0123] 圖3顯示本發(fā)明深凍冷藏的乳酸菌在-20°C儲存之后的穩(wěn)定性。
[0124] 圖4顯示本發(fā)明深凍冷藏的乳酸菌在-80°C儲存之后的穩(wěn)定性。
[0125] 實施例1:抑制食品中的真菌。
[0126] 使用的材料：
[0127] 使用的培養(yǎng)物是：酸奶起子培養(yǎng)物化-Mix401值anisco,丹麥），乳桿菌DSM 22721、團青霉、類地青霉、鏈格抱菌種和其他自身分離物，比如曲霉菌。
[012引使用的化學品或培養(yǎng)基是：
[0129] 超高溫處理的均質奶，1. 5%脂肪，例如來自CampinaMarkBrandenburg，
[0130] 來自GranovitaGmbH,D-87751Heimertingen的速溶脫脂奶粉"frema Reform"(可從ReformhausDemski獲得），
[0131] 山梨酸鐘溶液 20mg/ml(VWRInternationalGmbH,Darmsta化），無菌過濾的，
[0132] YDA肉湯（酵母提取物PTlKOhlyGmbH) 25.Og/1、D(+)葡萄糖一水化物 (Merck,Darmsta化）20.Og/1、Tween80 (Merck,Darmsta化）1.0g/l、巧樣酸氨二錠 (Merck,Darmsta化)2.Og/1、醋酸鋼（Merck,Darmsta化)5.Og/1、屯水硫酸儀（Merck， Darmsta化)0.lg/1、硫酸儘（II) 一水化物（Sigma-Al化ich，Seelze)0. 05g/l、憐酸氨二鐘 (Merck,Darmsta化)2.Og/1，在12TC高壓滅菌20分鐘，高壓滅菌之后抑5. 7，
[0133] 人工酸奶培養(yǎng)基（aYH培養(yǎng)基）、D(+)葡萄糖一水化物（Merck，Darmsta^)22g/l、 Biospringer0207/0-MG-L酵母提取物度iospringer，Maisons-Afo;rtCedex，法國）15g/ 1、脫脂奶粉（GranovitaGmbH,Heime;rtingen)20g/l、TweenSO(Merck)Darmsta化）1.Og/1、 巧樣酸氨二錠（Merck,Darmsta化)2.Og/1、醋酸鋼（Merck,Darmsta化)5.Og/1、屯水硫酸儀 (Merck,Darmsta化)0.lg/1、硫酸儘（II) 一水化物（Sigma-Al化ich，Seelze)0. 05g/l、憐酸 氨