具有抗真菌性的乳桿菌屬菌株的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及新的乳桿菌（Lactobacillus)屬菌株以及制備物和組合物，諸如僅具 有乳桿菌或與丙酸桿菌（Propionibacterium)屬的細(xì)菌組合的發(fā)酵培養(yǎng)液、保護(hù)性培養(yǎng) 物、最終食物或飼料產(chǎn)品。本發(fā)明還涉及通過使用這些新的乳桿菌菌株來控制污染物諸如 細(xì)菌、酵母或霉菌的生長的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 酵母和霉菌在不同的乳制品類型（比如酸奶、甜奶油和酸奶油以及新鮮干酪和熟 化干酪類型）的腐壞中起著重要作用，并因此可導(dǎo)致高昂的經(jīng)濟(jì)損失。比如有機(jī)酸及其鹽 (例如山梨酸鹽和丙酸鹽）的化學(xué)防腐劑用于保存乳制品，并保證和延長保質(zhì)期。使用化學(xué) 防腐劑的缺點(diǎn)是需要在標(biāo)簽上注明（通常作為E編號）以及對食品感官性質(zhì)的潛在不良影 響。
[0003] 已知乳酸菌產(chǎn)生多種抗微生物化合物，諸如有機(jī)酸、過氧化氫、二乙酰和細(xì)菌 素。已建議將乳酸菌和由乳酸菌產(chǎn)生的產(chǎn)品作為增加食物和動(dòng)物飼料保質(zhì)期的替代型 添加劑。商業(yè)抗微生物產(chǎn)品Nisaplin? (丹尼斯克公司Oanisco))基于從乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)純化而來的乳酸鏈球菌肽。
[0004]EP0302300涉及通過培養(yǎng)干酪乳桿菌（Lactobacilluscasei)菌種并從培養(yǎng)基中 分離產(chǎn)物來制備抑制酵母和抑制霉菌的低分子量產(chǎn)品的工藝。
[0005]US2008286406A1涉及具有針對青霉（Penicillium)屬霉菌的抗真菌活性的德氏 乳桿菌乳酸亞種（Lactobacillusdelbrueckiisubsp.lactis)菌株及其在動(dòng)物飼料中控 制霉菌的用途。
[0006]US2008299098A1 涉及約氏乳桿菌（Lactobacillusjohnsonii)菌株及其作為益 生菌、作為預(yù)防劑或作為針對多種人類和動(dòng)物病原體的材料表面處理方式的用途。
[0007]W02009130423涉及類干酪乳桿菌類干酪亞種（Lactobacillusparacaseisubsp. paracasei)菌株及其作為益生菌的用途。
[0008]DE202006014937涉及具有降低的脂肪含量的乳脂混合物，其包含黃油和來自乳酸 菌的生物保護(hù)性培養(yǎng)物，不含防腐劑。
[0009] 在1993年，維利奧公司（Valio)(-家芬蘭乳品公司）在EP0576780中描述了一 種具有酵母和霉菌控制效果的新的微生物菌株，即干酪乳桿菌鼠李糖亞種（Lactobacillus caseissp.rhamnosus)LC_705(作為DSM7061保藏于德國微生物保藏中心（Deutsche SammlungvonMikroorganismenundZellkulturenGmblDSlVCOoEP0576780還描述了保 護(hù)性培養(yǎng)物在抑制真菌生長方面的用途，其中使用干酪乳桿菌鼠李糖亞種菌株和費(fèi)氏丙酸 桿菌謝氏亞種（Propionibacteriumfreudenreichiisubsp.shermanii)菌株（DSM7067) 的混合物。該共培養(yǎng)物的特定特征是乳桿菌和丙酸桿菌的組合具有比單獨(dú)的鼠李糖乳桿菌 (Lactobacillusrhamnosus)更佳的抗真菌活性。該培養(yǎng)物由威爾斯比公司（Wiesby)以名 稱"BioProfit"商業(yè)化，并由丹尼斯克公司（Danisco)重命名為H0LDBAC?YM-B。
[0010]EP1308506 (瑞士蘇黎世的瑞士聯(lián)邦理工學(xué)院（SwissFederalInstituteof Technology(ETH)，Zurich，Switzerland))還描述了乳桿菌和丙酸桿菌的組合。來自ETH 的類干酪乳桿菌類干酪亞種菌株（DSM14514)作為與來自維利奧公司（Valio)的費(fèi)氏丙酸 桿菌謝氏亞種DSM7067的共混物以名稱HOLDBAC?YM-C商業(yè)化。
[0011] W0 03/040349涉及作為不含代謝物的非起子培養(yǎng)物并且包含詹氏丙酸桿菌 (Propionibacteriumjensenii)和選自乳桿菌屬的第二細(xì)菌的細(xì)菌混合物。
[0012]本發(fā)明的目標(biāo)
[0013] 本發(fā)明實(shí)施例的目標(biāo)是提供改進(jìn)的乳桿菌菌株以及制備物和組合物，諸如僅包含 這樣的改進(jìn)乳桿菌或與丙酸桿菌屬細(xì)菌組合的發(fā)酵培養(yǎng)液、保護(hù)性培養(yǎng)物、最終食物或飼 料產(chǎn)品。
[0014] 本發(fā)明實(shí)施例的目標(biāo)是提供通過使用這些新的乳桿菌菌株來控制污染物諸如細(xì) 菌、酵母或霉菌的生長的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0015] 本發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)，新的乳桿菌菌株在能夠控制污染物諸如細(xì)菌、酵母或霉菌的生 長方面具有改進(jìn)的性質(zhì)。
[0016] 因此，在第一方面，本發(fā)明涉及選自以下列表的乳桿菌屬的細(xì)菌：
[0017]a.類干酪乳桿菌DSM25832
[0018]b?植物乳桿菌（Lactobacillusplantarum)DSM25833
[0019]c?植物乳桿菌DSM25834
[0020]d?植物乳桿菌DSM25835
[0021]e?植物乳桿菌DSM25836
[0022]f?植物乳桿菌DSM25837，
[0023] 及它們的功能等同物。
[0024] 在第二方面，本發(fā)明涉及細(xì)菌制備物，其特征在于包含單獨(dú)的或與丙酸桿菌屬的 細(xì)菌、與乳桿菌屬的任何其他菌株或與這兩者組合的選自以下列表的乳桿菌：
[0025]a.類干酪乳桿菌DSM25832
[0026]b?植物乳桿菌DSM25833
[0027]c?植物乳桿菌DSM25834
[0028]d?植物乳桿菌DSM25835
[0029]e?植物乳桿菌DSM25836
[0030]f?植物乳桿菌DSM25837，
[0031] 或它們的功能等同物。
[0032] 在第三方面，本發(fā)明涉及選自以下列表的乳桿菌屬的細(xì)菌在制備最終食物或飼料 廣品中的用途：
[0033]a.類干酪乳桿菌DSM25832
[0034]b?植物乳桿菌DSM25833
[0035]c?植物乳桿菌DSM25834
[0036]d?植物乳桿菌DSM25835
[0037]e?植物乳桿菌 DSM 25836
[0038]f?植物乳桿菌 DSM 25837，
[0039] 或它們的功能等同物。
[0040] 在又一個(gè)方面，本發(fā)明涉及包含選自以下列表的乳桿菌的細(xì)菌制備物在控制污染 物諸如細(xì)菌、酵母或霉菌的生長方面的用途：
[0041]a.類干酪乳桿菌DSM25832
[0042]b?植物乳桿菌 DSM 25833
[0043]c?植物乳桿菌 DSM 25834
[0044]d?植物乳桿菌 DSM 25835
[0045]e?植物乳桿菌 DSM 25836
[0046]f?植物乳桿菌 DSM 25837，
[0047] 或它們的功能等同物。
[0048] 在又一個(gè)方面，本發(fā)明涉及控制污染物諸如細(xì)菌、酵母或霉菌的生長的方法，其特 征在于使用包含單獨(dú)的或與丙酸桿菌屬的細(xì)菌、與乳桿菌的另一種菌株或與這兩者組合的 選自以下列表的乳桿菌的細(xì)菌制備物：
[0049]a.類干酪乳桿菌DSM25832
[0050]b?植物乳桿菌 DSM 25833
[0051]c?植物乳桿菌 DSM 25834
[0052]d?植物乳桿菌 DSM 25835
[0053]e?植物乳桿菌 DSM 25836
[0054]f?植物乳桿菌 DSM 25837，
[0055] 或它們的功能等同物。
[0056] 在一些實(shí)施例中，該方法還包括純化和/或濃縮所述乳桿菌屬細(xì)菌的步驟。
[0057] 在又一個(gè)方面，本發(fā)明涉及選自以下列表的活乳桿菌細(xì)菌的制備物在控制污染物 諸如細(xì)菌、酵母或霉菌的生長方面的用途：
[0058]a.類干酪乳桿菌DSM25832
[0059]b?植物乳桿菌 DSM 25833
[0060]c?植物乳桿菌 DSM 25834
[0061]d?植物乳桿菌 DSM 25835
[0062]e?植物乳桿菌 DSM 25836
[0063]f?植物乳桿菌 DSM 25837，
[0064] 或它們的功能等同物。
[0065] 在又一個(gè)方面，本發(fā)明涉及控制組合物中諸如細(xì)菌、酵母或霉菌的污染物的生長 的方法，該方法的特征在于使所述組合物中存在選自以下的活乳桿菌細(xì)菌：
[0066]a.類干酪乳桿菌DSM25832
[0067]b?植物乳桿菌 DSM 25833
[0068]c?植物乳桿菌 DSM 25834
[0069]d?植物乳桿菌 DSM 25835
[0070]e?植物乳桿菌 DSM 25836
[0071]f?植物乳桿菌DSM25837，
[0072] 或它們的功能等同物。
【附圖說明】
[0073] 圖1至圖8是覆蓋層測定的結(jié)果。當(dāng)由乳桿菌產(chǎn)生抗真菌代謝物時(shí)，在LAB菌落 周圍可見到干凈的區(qū)域。
[0074] 圖1:植物乳桿菌DSM25834及其對青霉種（Penicilliumsp.)DCS436的抑制效 果。
[0075] 圖2:植物乳桿菌DSM25834及其對青霉種DCS1066的抑制效果。
[0076] 圖3:植物乳桿菌DSM25836及其對青霉種DCS435的抑制效果。
[0077] 圖4:植物乳桿菌DSM25836及其對青霉種DCS436的抑制效果。
[0078] 圖5:植物乳桿菌DSM25836及其對漢遜德巴利酵母（Debaryomyceshansenii) DCS1037的抑制效果。
[0079] 圖6:植物乳桿菌DSM25833及其對鐮刀菌種（Fusariumsp.)DCS1106的抑制效 果。
[0080] 圖7:植物乳桿菌DSM25833及其對青霉種DCS1540的抑制效果。
[0081] 圖8:植物乳桿菌DSM25835及其對青霉種DCS1540的抑制效果。
【具體實(shí)施方式】
[0082] 本發(fā)明涉及具有針對細(xì)菌、酵母和霉菌的抑制活性的改進(jìn)乳桿菌菌株。該細(xì)菌適 用于商品（例如食物或飼料）的保存。
[0083] 市售的抗真菌培養(yǎng)物HOLDBAC?YM-B和YM-C(丹麥杜邦公司（DuPont，Denmark)) 的抗真菌效果已經(jīng)在比如酸奶、新鮮干酪、酸奶油和白鹵干酪的不同類型發(fā)酵乳制品的各 種挑戰(zhàn)性研宄中得到證實(shí)。此外，在Gouda型干酪的內(nèi)部試驗(yàn)中評價(jià)了HOLDBAC?YM-B和 YM-C的應(yīng)用。結(jié)果證實(shí)，用YM-B或YM-C制備的干酪上的腐壞霉菌的長出比沒有添加保護(hù) 性培養(yǎng)物的參照延遲。據(jù)設(shè)想，只需存在丙酸桿菌菌株即可能誘導(dǎo)乳桿菌菌株形成抗真菌 代謝物。本發(fā)明的發(fā)明人已經(jīng)證實(shí)抗真菌活性的主要部分來自于乳桿菌。
[0084] 如在實(shí)例中所述，在瓊脂測定中篩選菌株。
[0085] 這些菌株可用于開發(fā)抗真菌培養(yǎng)物，特別是用于乳品應(yīng)用的抗真菌培養(yǎng)物。使用 本發(fā)明的抗真菌乳桿菌，基于HOLDBACYM共培養(yǎng)概念的用于例如酸奶（包括酸奶飲品）、 酸奶油、半硬和硬干酪、白軟干酪、新鮮干酪、奶油干酪和白鹵干酪的抗真菌培養(yǎng)物將成為 可能。比如酸面團(tuán)等其他食物應(yīng)用以及飼料產(chǎn)品（諸如青貯飼料）的保護(hù)可以是潛在性應(yīng) 用。
[0086]定義
[0087]如本文所用，術(shù)語"活的"是指具有活性代謝、存活、生長或繁殖的潛力的細(xì)菌細(xì) 胞。
[0088] 如本文所用，術(shù)語"乳桿菌的保護(hù)性培養(yǎng)物"是指包含活乳桿菌的組合物（純培養(yǎng) 物或培養(yǎng)物濃縮物），其不是適于食用的最終食物產(chǎn)品，但添加到食物產(chǎn)品中以期降低病原 性或產(chǎn)毒微生物導(dǎo)致的風(fēng)險(xiǎn)。該定義包括諸如發(fā)酵培養(yǎng)基及其濃縮制備物的組合物，其中 乳桿菌在合適的培養(yǎng)基中生長。
[0089] 歐洲食品與飼料培養(yǎng)物協(xié)會(huì)（EFFCA)將保