防治果蔬采后病害的生物拮抗菌菌株、其制備方法及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及微生物和生物防治領(lǐng)域中的一種生物拮抗菌、其制備方法及其應(yīng)用。菌株名稱為Enterobacter?cowanii?B-6-1，屬于腸桿菌屬Enterobacteriaceae。其主要形態(tài)特征包括：桿狀，短棒狀，長0.8-1.2μm，寬1.0-1.6μm，革蘭氏染色陰性，菌落白色，表面光滑，在常溫下生長良好。本發(fā)明的菌株具有優(yōu)良的抗病性能，最佳配方為：拮抗菌菌液濃度為1×108cfu/mL以上，添加50m?mol/L的Na2SiO3，能夠達(dá)到最佳的抗病效果，對(duì)果蔬農(nóng)業(yè)的發(fā)展具有十分重要的價(jià)值。
【專利說明】防治果蔬采后病害的生物拮抗菌菌株、其制備方法及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及微生物和生物防治領(lǐng)域中的一種生物拮抗菌、其制備方法及其應(yīng)用，特別是涉及此生物拮抗菌在果蔬采后病害防治中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]果蔬采后 由真菌引起的腐爛而造成的損失非常巨大。目前，化學(xué)殺菌劑是防治果蔬采后真菌病害的主要手段之一。然而，長期使用化學(xué)殺菌劑，其殘留水平不斷升高，同時(shí)也導(dǎo)致具有抗性病原菌的產(chǎn)生。例如，許多殺菌劑可控制柑桔的青霉病和綠霉病的發(fā)生，但近年來由于大量使用殺菌劑引起指狀青霉和意大利青霉的獲得性抗性已經(jīng)成為采后病害防治的一大難題而引起人們的重視。許多殺菌劑具有異味，污染環(huán)境，不易降解，因此，尋找低毒性、高效、環(huán)境友好和殘留量低的殺菌劑的替代品或部分替代品就日漸迫切。
[0003]使用拮抗酵母菌防治果蔬采后病害，可以減少化學(xué)農(nóng)藥的用量和在果蔬產(chǎn)品上的殘毒，對(duì)保護(hù)人體健康和防止環(huán)境污染都極為重要。Aspire?、BiosavellO和Biosavelll是國外已經(jīng)注冊升記的酵母類微生物抗菌劑，主要用于控制柑橘類和仁果類果實(shí)的采后腐爛。這展示了利用拮抗菌來安全有效地防治水果采后病害具有廣闊的前景。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種能防治果蔬采后病害的菌株Enterobactercowanii B-6-1,同時(shí)提供此菌株的制備方法以及利用此菌株制備的抗病菌液。
[0005]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案如下。
[0006]防治果蔬采后病害的生物拮抗菌菌株B-6-1,其名稱為Enterobacter cowaniiB-6-1,屬于腸桿菌屬Enterobacteriaceae,保藏日期2012年10月11日，保藏號(hào)CCTCCM2012398 ;其主要特征見下表:
[0007]
【權(quán)利要求】
1.防治果蔬采后病害的生物拮抗菌菌株B-6-1,其名稱為EnterobactercowaniiB-6-1,屬于腸桿菌屬Enterobacteriaceae,保藏日期2012年10月11日，保藏號(hào)CCTCCM2012398 ;其主要特征見下表:
2.防治果蔬采后病害的生物拮抗菌菌株B-6-1的制備方法，其特征步驟包括:A、取一至多個(gè)番茄，將其放在盛有0.2M磷酸緩沖液的容器中，在IOOrpm旋轉(zhuǎn)振蕩器中洗滌lOmin，丟棄洗液；再用相同方法進(jìn)行二次清洗，二次清洗前，先對(duì)番茄進(jìn)行30秒超聲處理，保留洗液； B、然后對(duì)二次洗液進(jìn)行連續(xù)稀釋后，將稀釋液涂布在LB固體培養(yǎng)基上，每皿0.lmL，在28°C下培養(yǎng)24-48h至長出單菌落，依據(jù)不同的菌落特征隨機(jī)選取單菌落，在LB固體培養(yǎng)基上重復(fù)劃線后，挑取純化的單菌落與配制的灰葡萄孢孢子懸液在PDA平皿上做對(duì)峙試驗(yàn)，選擇可明顯抑菌作用的菌落； C、將有明顯抑菌作用的菌落于200r/min28°C下，在LB液體培養(yǎng)基中搖菌，48小時(shí)后進(jìn)行番茄的活體實(shí)驗(yàn)；每果刺5mmX 5mm傷口兩個(gè)，于傷口處分別接種懸浮液接種50 μ L，2h后再分別接種IXlO5孢子/mL的灰葡萄孢懸液20 μ L，將上述經(jīng)處理的果實(shí)于25°C下保濕，7d后統(tǒng)計(jì)發(fā)病率和病斑直徑； D、篩選出抑菌效果較好的菌株，再根據(jù)權(quán)利要求1所述的特征對(duì)其進(jìn)行鑒定，即得目的菌株。
3.利用權(quán)利要求1所述的生物拮抗菌菌株B-6-1制備的抗病菌液，其特征在于:拮抗菌菌液濃度為IX 107cfu/mL以上，添加25-100m mol/L的Na2Si03。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的抗病菌液，其特征在于:拮抗菌菌液濃度為IX108cfu/mL以上，添加 50m mol/L 的 Na2SiO30
5.權(quán)利要求3或4所述的抗病菌液的制備方法，其特征步驟包括: 挑取原種，將其接種在 LB液體培養(yǎng)基中，在28°C下?lián)u床培養(yǎng)1-2天后，得種子液； 種子液在28°C條件下，200rpm/min搖床培養(yǎng)，LB培養(yǎng)基中搖床培養(yǎng)24-36小時(shí)后即得目的菌液。
6.權(quán)利要求3或4所述的抗病菌液的使用方法，其特征在于:將果蔬浸泡于抗病菌液中，其腐爛即得到良好控制。
【文檔編號(hào)】C12R1/01GK103952327SQ201310344832
【公開日】2014年7月30日 申請(qǐng)日期:2013年8月3日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月3日
【發(fā)明者】施俊鳳, 孫常青, 王瀟冉, 王春生, 白云鳳, 郭志利 申請(qǐng)人:山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品貯藏保鮮研究所