一株青春雙歧桿菌在制備活性雙歧桿菌發(fā)酵飲料中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一株雙歧桿菌在制備活性雙歧桿菌發(fā)酵飲料中的應(yīng)用，特別涉及一株 青春雙歧桿菌菌株發(fā)酵生產(chǎn)沙棘汁活菌飲料的工藝。
【背景技術(shù)】
[0002] 乳酸菌飲料可促進人體腸道消化吸收，維護人體腸道微生態(tài)平衡，抑菌抗病，增強 人體免疫系統(tǒng)等保健功效。隨著人們對發(fā)酵乳營養(yǎng)價值認識及消費能力的提高，"健康"概 念勢必將引領(lǐng)乳酸菌飲料成為乳制品市場中另一個消費熱點。
[0003] 雙歧桿菌（Bifidobacteriumspp.)是乳酸菌的一個重要分支，因其調(diào)節(jié)腸 道平衡，提高免疫力等眾多生理功能受到大眾的關(guān)注。目前，國內(nèi)外已開發(fā)的乳酸菌 飲料中，有少數(shù)也采用雙歧桿菌，如動物雙歧桿菌（Bifidobacteriumanimalis)、長雙 歧桿菌（Bifidobacteriumlongum)等，還未見任何青春雙歧桿菌（Bifidobacterium adolescentis)包括產(chǎn)細菌素菌株發(fā)酵活性飲料的專利及文獻報道。乳酸菌細菌素是乳酸 菌在代謝過程中通過核糖體合成機制產(chǎn)生的具有抑菌活性的多肽或蛋白類物質(zhì)，可抑制或 殺死部分食品腐敗菌和致病菌的生長，具有耐受一定熱和酸堿以及在人體內(nèi)可降解、無毒 無殘留的特點。且雙歧桿菌在許多方面對人體健康起到了不可替代的作用，如保持和恢復(fù) 人體正常腸道菌群的平衡，并刺激腸道蠕動，有免疫調(diào)節(jié)、延緩衰老、抗癌及抗腫瘤等生理 作用。其能經(jīng)受住胃酸和膽汁酸的環(huán)境存活下來并在人腸道內(nèi)定植，發(fā)揮對人體有益的及 重要生理作用。以產(chǎn)細菌素的雙歧桿菌發(fā)酵生產(chǎn)活菌飲料，不僅會極大增強其保健及生理 調(diào)節(jié)功能，提高其附加值；而且可以明顯延長產(chǎn)品的貨架期，保證產(chǎn)品安全性。
[0004] 沙棘學(xué)名（HippophaerhamnoidesLinn)，又名醋柳、墨刺，是沙棘為藥食同源植 物，果實含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)和生物活性物質(zhì)。沙棘果實中維生素C極高，同時含有人體8 種必需氨基酸及大量的非蛋白氮，可在一定程度促進雙歧桿菌的生長。
[0005] 以雙歧桿菌發(fā)酵沙棘汁制成活菌飲料，可同時發(fā)揮沙棘汁的營養(yǎng)及生理功效和雙 歧桿菌的保健作用，必將成為高附加值的活菌飲品。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種青春雙歧桿菌發(fā)酵沙棘汁活性飲料的制備方法。
[0007] 青春雙歧桿菌（Bifidobacteriumadolescentis)BL-8CGMCCNs? 7791 已于 2013 年06月21日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（簡稱CGMCCJfta 為：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研宄所），保藏登記號為：CGMCC N〇.7791〇
[0008] 本發(fā)明用于發(fā)酵的青春雙歧桿菌BL-8CGMCCN2 . 7791是一株具有廣譜抑菌效果 的產(chǎn)細菌素雙歧桿菌，其所產(chǎn)細菌素不僅對李斯特菌、葡萄球菌、芽孢桿菌等革蘭氏陽性菌 有明顯抑制作用，對大腸桿菌等陰性菌也表現(xiàn)出非常強烈的抑菌活性。同時，該菌株具有耐 受消化道逆環(huán)境、生物拮抗及抗氧化等保健功效，可用于制備雙歧桿菌活菌飲料。
[0009] 本發(fā)明提供一種青春雙歧桿菌發(fā)酵沙棘汁活性飲料的制備方法，即將青春雙歧桿 菌（Bifidobacteriumadolescentis)BL_8CGMCCNs. 7791 活化后接種在含有沙棘汁、乳粉 和蔗糖復(fù)合溶液的培養(yǎng)基中，在一定溫度下厭氧培養(yǎng)一定時間后，結(jié)束發(fā)酵，獲得雙歧桿菌 發(fā)酵沙棘汁活菌飲料。
[0010] 所述方法中，沙棘汁發(fā)酵培養(yǎng)基按下述方法制備：取新鮮沙棘和質(zhì)量比為1 : 1的 水混合打漿，用四層紗布過濾，得到質(zhì)量百分數(shù)為50 %的沙棘汁，并用Na2CO3調(diào)節(jié)其pH至 6. 0左右；將蔗糖100g溶于IOOmL水中得到蔗糖溶液；在IOOmL水中加入100g脫脂乳粉， 充分攪拌溶解，得脫脂復(fù)原乳。按照沙棘汁56%、蔗糖溶液16%、脫脂復(fù)原乳9%、水19% 配制，并用均質(zhì)機在SMPa條件下進行第一次均質(zhì)，12MPa條件下進行第二次均質(zhì)，得到復(fù) 合果汁發(fā)酵培養(yǎng)基；最后，在復(fù)合果汁發(fā)酵培養(yǎng)基里充氮，使氧還電位降至-〇. 〇3eV以下， 121°C、IOmin滅菌。
[0011] 所述方法中，青春雙歧桿菌（Bifidobacteriumadolescentis)BL-8CGMCC Ns. 7791的培養(yǎng)時間為24-26h，接種量為IX104cfu/mL，培養(yǎng)溫度為37°C。
[0012] 本發(fā)明利用上述青春雙歧桿菌，以極具營養(yǎng)保健價值的沙棘為發(fā)酵原料，同時添 加蔗糖及脫脂乳，制備了一種青春雙歧桿菌發(fā)酵沙棘汁活菌飲料。原料經(jīng)該雙歧桿菌菌株 發(fā)酵后可產(chǎn)生乙酸、乳酸、B族維生素和氨基酸類等具有重要生理活性的代謝產(chǎn)物，同時具 有良好的感官及營養(yǎng)品質(zhì)。發(fā)酵成品在4°C和室溫條件下分別可貯藏21天和7天。本發(fā)明 制備的雙歧桿菌發(fā)酵沙棘汁活菌飲料色澤溫和（圖1)，酸甜適口且活菌數(shù)高、貨架期長，是 具有良好營養(yǎng)保健效果和感官品質(zhì)的保健飲品。
【附圖說明】
[0013] 圖1為本發(fā)明的沙棘汁雙歧桿菌發(fā)酵飲料樣品（包裝形式之一）。
[0014] 圖2為沙棘汁雙歧桿菌發(fā)酵飲料分別在4°C和室溫下厭氧保藏時雙歧桿菌活菌數(shù) 隨時間的變化。
【具體實施方式】
[0015] 下述實施例中所述實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0016] 實施例1、青春雙歧桿菌（Bifidobacteriumadolescentis)BL_8的功效評價
[0017] 青春雙歧桿菌（Bifidobacteriumadolescentis)BL-8來源于新疆吐魯番地區(qū)長 壽老人糞便，并已于2013年06月21日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物 中心（簡稱CGMCC，地址為：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研宄所）， 保藏登記號為：CGMCCNs. 7791。
[0018] 1、耐消化道逆環(huán)境試驗
[0019] 模擬人體胃腸道環(huán)境，對BL-8耐消化道逆環(huán)境特性進行研宄。
[0020] (1)酸耐受性試驗：用37 %的濃鹽酸調(diào)節(jié)I3BS(pH7. 0)緩沖液pH至3. 0。接入活 化3代的雙歧桿菌BL-8液體培養(yǎng)物，接種量5%，37°C厭氧培養(yǎng)2h。分別于0和2h取樣， 以亨蓋特厭氧滾管法測定活菌數(shù)，計算存活率。
[0021] (2)膽汁酸鹽耐受性試驗：向改良MRS液體培養(yǎng)基中加入0. 5%牛膽酸鈉，121°C、 20min滅菌，接入活化3代的雙歧桿菌BL-8液體培養(yǎng)物，接種量2%，37°C厭氧培養(yǎng)12h。取 樣測定活菌數(shù)；同時以不含膽汁酸鹽的改良MRS液體培養(yǎng)基為對照。計算存活率。所用改良MRS培養(yǎng)基的配制（以1000 mL計）：葡萄糖20g，牛肉浸粉10g，蛋白胨10g，酵母浸粉5g，玉 米膏3g，無水乙酸鈉5g，梓檬酸三胺2g，磷酸氫二鉀2g，硫酸猛0. 25g，硫酸鎂0. 58g，L-半 胱氨酸鹽酸〇? 4g，吐溫-801mL。
[0022] (3)耐胃蛋白酶試驗：向PBS(pH7.0)緩沖液中加入37 %的濃鹽酸，調(diào)節(jié)其pH至 3. 0，然后加入0. 5 %胃蛋白酶作為模擬胃液，接入菌種活化3代后的BL-8液體培養(yǎng)物，接種 量5%，于0和2h取樣測定活菌數(shù)，計算存活率。
[0023] (4)耐胰蛋白酶試驗：向PBS(pH7. 0)緩沖液中加入1 %胰蛋白酶作為模擬腸液，按 5%的接菌量無菌接種，37 °C厭氧培養(yǎng)12h，分別于Oh和12h取樣測定活菌數(shù)，計算存活率。
[0024] 表1不同處理對菌株BL-8存活率的影響
[0025]
【主權(quán)項】
1. 一種生產(chǎn)雙歧桿菌發(fā)酵沙棘汁活菌飲料的方法，是用產(chǎn)細菌素青春雙歧桿菌 (Bifidobacterium adolescentis)BL_8 CGMCC JVfs. 7791 發(fā)酵沙棘汁得到的活菌飲料。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述發(fā)酵沙棘汁培養(yǎng)基按下述方法制備： 取新鮮沙棘和質(zhì)量比為I : 1的水混合打漿，用四層紗布過濾，得到質(zhì)量百分數(shù)為50%的 沙棘汁，并用堿面（Na2CO3)調(diào)節(jié)其pH之6. 0左右；將蔗糖100g溶于IOOmL水中得到蔗糖 溶液；在IOOmL水中加入100g脫脂乳粉，充分攪拌溶解，得脫脂復(fù)原乳。按照沙棘汁56%， 蔗糖溶液16%，低脂復(fù)原乳9%，水19%配制，并用均質(zhì)機在SMPa條件下進行第一次均質(zhì)， 12MPa條件下進行第二次均質(zhì)，得到復(fù)合果汁發(fā)酵培養(yǎng)基；最后，在復(fù)合果汁發(fā)酵培養(yǎng)基里 充氮，使氧還電位降至 _〇. 〇3eV以下，121°C、IOmin滅菌。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述方法，其特征在于：所述沙棘汁為質(zhì)量百分數(shù)為50%的沙棘汁。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述方法，其特征在于：培養(yǎng)基組成為沙棘汁56 %，蔗糖溶液16 %， 低脂復(fù)原乳9%，水19% ;所述百分含量均為體積百分數(shù)。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1或2或3或4所述方法，其特征在于：所述培養(yǎng)時間為24-26h，接種 量為I X 104cfu/mL，培養(yǎng)溫度為37 °C。
6. 權(quán)利要求1-5中任意一項所述的方法制備的雙歧桿菌發(fā)酵沙棘汁活菌飲料。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一株青春雙歧桿菌在制備發(fā)酵沙棘飲料中的應(yīng)用。所采用青春雙歧桿菌(Bifidobacterium adolescentis)BL-8CGMCC No.7791，是一株具有廣譜抑菌效果的產(chǎn)細菌素雙歧桿菌，且具有很強的耐消化道逆環(huán)境、生物拮抗和抗氧化能力，可用于制備活菌發(fā)酵飲料。本發(fā)明制備的雙歧桿菌發(fā)酵沙棘汁活菌飲料色澤溫和(圖1)，口感好，風(fēng)味佳，活菌數(shù)高，貨架期較長，是具有良好保健效果的活菌飲品。CGMCC No.779120130621
【IPC分類】A23L2-38, A23L1-30, A23L2-52
【公開號】CN104643246
【申請?zhí)枴緾N201510109572
【發(fā)明人】劉國榮, 蘇航, 宋錚, 張彪, 王成濤
【申請人】北京工商大學(xué)
【公開日】2015年5月27日
【申請日】2015年3月13日