專利名稱：一種棉籽糖的分離純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及化學(xué)工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種棉籽糖的分離純化方法。
背景技術(shù)：
棉籽糖(Raffinose)又稱蜜三糖(Melitriose)或棉子糖，它由半乳糖、葡萄糖和果糖結(jié)合而成，屬低聚糖，系非還原糖。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，棉籽糖是人體腸道中的雙歧桿菌、嗜酸乳酸桿菌等有益菌極好的營養(yǎng)源，能促進(jìn)它們的增殖，從而抑制腸道內(nèi)腐敗菌的生長，并減少有毒發(fā)酵產(chǎn)物的形成。雙歧桿菌發(fā)酵棉籽糖產(chǎn)生大量的短鏈脂肪酸，能刺激腸道蠕動(dòng)、增加糞便潤濕度并保持一定的滲透壓，從而防止便秘的產(chǎn)生。此外，棉籽糖能改善人體的消化功能，促進(jìn)人體對(duì)鈣的吸收，從而增強(qiáng)人體免疫力，對(duì)預(yù)防疾病和抗衰老具有明顯效果。棉籽糖還可作為人體和動(dòng)物活器官移植用保護(hù)輸送液的主要成分及延長活菌體在常溫下存活期的增效劑。棉籽糖的耐熱、耐酸性好，在90%的相對(duì)濕度下也不會(huì)吸濕結(jié)塊，其本身可作為食品添加劑使用，改善食品的加工特性，防止產(chǎn)品褐變，提高產(chǎn)品質(zhì)量，延長產(chǎn)品的保 質(zhì)期。棉籽糖因具有優(yōu)良的理化性能和生理活性，目前已被廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥及化妝品等行業(yè)。棉籽糖在自然界的分布很廣，是除蔗糖外在植物中的分布最廣的低聚糖，它廣泛存在于甜菜、棉籽、蜂蜜、卷心菜、酵母、馬鈴薯、葡萄、麥類、玉米以及豆科植物的種子中，其中在棉籽中的含量最高，約為4 9%。棉籽仁在被提取棉籽油后產(chǎn)生大量的副產(chǎn)品——脫脂棉籽柏，脫脂棉籽柏中棉籽糖的含量基本保持不變，因此，脫脂棉籽柏餅是工業(yè)上生產(chǎn)棉籽糖的極佳原料。脫脂棉籽柏中的成分包括棉籽糖、蛋白、鹽分、棉酚色素以及其他的單糖或蔗糖等。通常，從脫脂棉籽柏制備棉籽糖，是先通過溶劑提取，從脫脂棉籽柏中得到棉籽糖提取液，再通過對(duì)棉籽糖提取液脫棉酚色素、脫蛋白、脫鹽以及除去單糖或蔗糖等雜質(zhì)進(jìn)行提純，最后通過結(jié)晶或沉淀獲得最終產(chǎn)品。由于棉籽糖提取液經(jīng)脫色處理后，體系中除了棉籽糖之外，還存在以蛋白、鹽分等為主的雜質(zhì)，這些雜質(zhì)的存在會(huì)嚴(yán)重影響棉籽糖結(jié)晶產(chǎn)品的純度，很難獲得98%含量以上的棉籽糖，因此需要進(jìn)一步處理脫除。現(xiàn)有技術(shù)中，棉籽糖提取液脫蛋白主要采用超濾膜分離，如王興國等人(膜分離技術(shù)在棉籽糖糖液純化中的應(yīng)用，糧油加工與食品機(jī)械，2005，6，50-53)報(bào)道了一種應(yīng)用無機(jī)陶瓷膜對(duì)棉籽糖提取液中的蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)進(jìn)行有效脫除的方法，棉籽蛋白的脫除率達(dá)到87. 4%，同時(shí)棉籽糖的含量基本保持不變。梁立新等人(棉籽雙液相萃取工藝甲醇相中棉籽糖提取液的脫色，食品與發(fā)酵工業(yè)，2007，4，73-76)報(bào)道了一種棉籽糖提取液的脫蛋白的方法，該方法通過醋酸鉛使蛋白變性，再采用超濾膜完成脫蛋白的處理。其中，醋酸鉛的使用會(huì)帶來重金屬殘留，且膜容易污染、不易清洗，再生膜通量下降嚴(yán)重，所以這種方法有一定局限性。盡管超濾和蛋白變性等方法可有效去除棉籽糖中的棉籽蛋白，然而超濾法存在分離膜易污染、膜組件易污染導(dǎo)致膜通量嚴(yán)重下降且使用壽命短的問題，醋酸鉛的使用會(huì)帶來重金屬殘留等問題。中國專利ZL200810121281.0中公開了一種提高棉籽糖純度的方法，采用固定床式吸附分離的方法，通過單次吸附分離，實(shí)現(xiàn)棉籽糖與鹽分、蛋白、單糖和蔗糖等雜質(zhì)的分離，使得棉籽糖在干基中的質(zhì)量百分含量由30 50%提高至90%以上，同時(shí)，棉籽糖的損失率不超過3%。該方法具有工藝流程簡單、吸附劑再生方便、生產(chǎn)成本低、分離周期短，易于工業(yè)化生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)。該方法屬于吸附分離方法，是基于吸附劑對(duì)棉籽糖和不同雜質(zhì)吸附作用力的差異，選擇性吸附棉籽糖而實(shí)現(xiàn)提純之目的，具體操作時(shí)在上樣吸附直至吸附飽和需對(duì)吸附劑進(jìn)行再生處理，如想實(shí)現(xiàn)吸附劑的重復(fù)利用也需對(duì)吸附劑進(jìn)行再生處理。因此，建立一種快速、簡單、高效的棉籽糖分離純化工藝具有重要的工業(yè)應(yīng)用前
旦
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發(fā)明內(nèi)容
為克服現(xiàn)有超濾膜法及重金屬鹽使蛋白變性脫除蛋白等方法的缺陷，本發(fā)明提供了一種環(huán)境友好、工藝簡單、高效分離棉籽糖的方法，該方法利用凝膠填料對(duì)不同分子量溶質(zhì)的排阻功能實(shí)現(xiàn)棉籽糖與棉籽蛋白等大分子雜質(zhì)的高效分離。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的采用以下技術(shù)方案一種棉籽糖的分離純化方法，包括以下步驟I)以凝膠為填料，濕法裝填凝膠色譜柱；2)以棉籽糖濃縮液配制原料液，上樣于所述的凝膠色譜柱；3)以去離子水或乙醇水溶液為洗脫液進(jìn)行洗脫，收集含有棉籽糖的洗脫液，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后得到純化的棉籽糖；所述的棉籽糖濃縮液由脫脂棉籽柏經(jīng)水或醇的水溶液提取得到的棉籽糖提取液再經(jīng)活性炭脫色濃縮后得到；可采用現(xiàn)有方法得到(如可采用中國專利ZL200810121281. O中從脫脂棉籽柏制備脫色液的方法制備脫色液，再經(jīng)濃縮得到所述的棉籽糖濃縮液)或者采用市售產(chǎn)品。如可選用由脫脂棉籽柏用水或醇的水溶液滲濾提取得到棉籽糖提取液，再對(duì)棉籽糖提取液用活性炭脫色除去棉酚色素，然后對(duì)棉籽糖脫色液進(jìn)一步濃縮得到的棉籽糖濃縮液。 所述的凝膠選用本領(lǐng)域常規(guī)凝膠；優(yōu)選排阻分子量范圍為500 30000的凝膠，該類填料排阻分子量大小遠(yuǎn)小于蛋白等大分子雜質(zhì)的分子量，而接近棉籽糖的分子量，蛋白等大分子雜質(zhì)因?yàn)榉肿恿刻蟛荒苓M(jìn)入凝膠孔道內(nèi)而被排阻，棉籽糖分子較小并進(jìn)入孔道與凝膠親水基團(tuán)之間相互作用使獲得一定的保留，而原料液中無機(jī)鹽及單糖等更小分子則在孔道內(nèi)的擴(kuò)散傳質(zhì)的途徑最長而最晚被洗脫，依據(jù)上述原理使得棉籽糖與棉籽蛋白等雜質(zhì)的分離度得到提高，有效去除棉籽糖濃縮液中的蛋白，同時(shí)還能除去無機(jī)鹽和單糖等雜質(zhì)，顯著提高了棉籽糖的純度。為了達(dá)到更好的純化分離效果，所述的凝膠進(jìn)一步優(yōu)選為SephadexG-10、Sephadex G-25、 Sephadex G-50、 Sephadex G-75、 Sephadex G-100、 Sephadex LH-20(Sephadex LH-20是Sephadex G_25系列衍生物)等葡聚糖G系列凝膠中的一種，或者Toyopearl HW-40C、Toyopearl HW-40F等聚丙烯酸酯凝膠中的一種。為有效提高凝膠色譜柱的處理量和處理效率，所述的原料液中固形物濃度優(yōu)選為200mg/mL 800mg/mL。若原料液中固形物的濃度過高,盡管提高了單位填料的處理能力，但此時(shí)棉籽糖與棉籽蛋白的分離度顯著下降，使得棉籽糖純度和回收率大幅度下降；若原料液中固形物濃度過低，則原料處理量小，溶劑損耗大、工藝經(jīng)濟(jì)性差，不具有好的工業(yè)應(yīng)用價(jià)值。色譜分離時(shí)，綜合考慮產(chǎn)品純度、溶劑消耗、單位填料的處理能力等生產(chǎn)成本因素,步驟2)中，上樣體積為色譜柱床層體積(BV)的2°/Γ Ο%。由于上樣體積相對(duì)色譜柱床層體積較小，在色譜理論中，一般認(rèn)為上樣溫度對(duì)分離沒有太大的影響； 當(dāng)料液濃度很高時(shí)，因?yàn)榱弦吼ざ容^大，為方便上樣可適當(dāng)加溫。步驟3)中，所述的乙醇水溶液為體積分?jǐn)?shù)小于等于40%的乙醇水溶液，優(yōu)選體積分?jǐn)?shù)為20%的乙醇水溶液。步驟3)中，洗脫條件優(yōu)選為洗脫溫度為5°C 60°C，溫度低于5°C時(shí)，傳質(zhì)速率慢、分離效率低；溫度高于60°C時(shí)，凝膠色譜填料穩(wěn)定性變差，導(dǎo)致分離效率下降，工藝重復(fù)性差；此外，溫度過高，色譜分離選擇性和分離度均變差。所述的洗脫液的流速優(yōu)選為O. 5BV/h 3BV/h。其中BV為床層體積，指凝膠色譜柱中凝膠填料的床層體積，流速過慢，分離度雖好，但樣品處理效率低；流速過快，則床層壓降太高，由于凝膠機(jī)械強(qiáng)度較低，其三維孔易被破壞。洗脫液的用量沒有嚴(yán)格的限定，一般將色譜柱洗脫干凈即可。本發(fā)明含有棉籽糖的洗脫液根據(jù)棉籽糖流出曲線確定洗脫液收集起點(diǎn)和終點(diǎn)。本發(fā)明濕法裝填的方法采用本領(lǐng)域現(xiàn)有的濕法裝填方法，一般包括清洗色譜柱，測定色譜柱的內(nèi)徑和高度，計(jì)算所需填料的體積，根據(jù)所選填料的膨脹體積，計(jì)算所需干填料的質(zhì)量；稱取相應(yīng)質(zhì)量的干填料，采用洗脫液充分溶脹后用真空干燥器抽盡填料中空氣，并將填料上面過多的溶液傾出，得到薄漿狀的填料液；關(guān)閉色譜柱出水口，向色譜柱管內(nèi)加入約1/4柱容積的洗脫液，邊攪拌，邊將薄漿狀的填料液連續(xù)傾入柱中，使其自然沉降，等填料沉降約2-3cm后，打開色譜柱的出口，調(diào)節(jié)流速，使填料繼續(xù)沉積，待沉積的填料面上升到離柱的頂端約5cm處時(shí)停止裝柱，關(guān)閉出水口，通過2-3倍床層體積的洗脫液(流速
O.5mL/min lmL/min)使柱床穩(wěn)定。本發(fā)明采用高效液相色譜(HPLC)法對(duì)棉籽糖的濃度進(jìn)行定量分析，HPLC具體分析條件為=Waters NH2柱(4· 6X250mm，粒徑5 μ m)，柱溫35°C，流動(dòng)相為乙腈水=75 25(v:v),流速I. Oml/min,檢測器為示差檢測器,檢測器溫度為35°C。固形物濃度取一定體積的溶液通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑后，對(duì)殘留固體進(jìn)行稱重，殘留固體的質(zhì)量與所取溶液體積之比即為固形物濃度。本發(fā)明中的回收率和純度的計(jì)算方法如下回收率=洗脫液中棉籽糖的質(zhì)量/原料液中的棉籽糖的質(zhì)量X 100% ；純度=洗脫液中的棉籽糖的質(zhì)量/洗脫液中固形物的總質(zhì)量。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具備以下優(yōu)點(diǎn)(I)本發(fā)明采用凝膠色譜法從棉籽糖濃縮液中分離棉籽糖，該方法對(duì)分子量差別較大的棉籽糖與棉籽蛋白、鹽分和單糖等具有較高的選擇性分離能力，經(jīng)本發(fā)明分離方法獲得的棉籽糖純度>90%，收率高于85%。(2)本發(fā)明采用的凝膠色譜柱機(jī)械強(qiáng)度較高，穩(wěn)定性好，可重復(fù)利用，使用壽命長。(3)本發(fā)明采用的分離過程屬于凝膠排阻色譜分離方法，是利用凝膠孔道對(duì)不同分子尺寸的棉籽糖和雜質(zhì)的篩分功能實(shí)現(xiàn)提純目的。此外，操作過程中無需再生步驟。(4)本發(fā)明方法操作簡單，所用洗脫液為純水或乙醇水溶液等環(huán)境友好溶劑，成本低，分離效率高，適合于工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I脫脂棉籽柏用體積分?jǐn)?shù)為75%的乙醇水溶液滲濾提取得到棉籽糖提取液，通過活性炭脫色方法對(duì)棉籽糖提取液中的棉酚等色素進(jìn)行脫除，脫色液再進(jìn)一步濃縮，得到棉籽糖濃縮液。棉籽糖濃縮液加水配成固形物濃度為200mg/mL的原料液，以S印hadex G-IO(葡聚糖凝膠，排阻分子量700)為填料，經(jīng)體積分?jǐn)?shù)為20%的乙醇水溶液充分溶脹后，采用濕法裝柱法裝填凝膠色譜柱，色譜柱尺寸為Φ I. 6cmX33cm,色譜柱體積(BV)為66. 3ml。取原料液O. 02BV,上樣于所裝填的凝膠色譜柱，上樣完成后在40°C下，用體積分?jǐn)?shù)為20%的乙醇水溶液以lBV/h的洗脫流速流經(jīng)凝膠色譜柱。棉籽蛋白最先洗脫，棉籽糖隨后被洗脫，少量鹽 分等低分子量雜質(zhì)的保留最長，收集含棉籽糖的洗脫液餾分，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到棉籽糖粗品，通過HPLC分析，計(jì)算所得粗品中棉籽糖的含量為91. 2%，回收率為85. 3%。實(shí)施例2脫脂棉籽柏用體積分?jǐn)?shù)為75%的乙醇水溶液滲濾提取得到棉籽糖提取液，通過活性炭脫色方法對(duì)棉籽糖提取液中的棉酚等色素進(jìn)行脫除，脫色液再進(jìn)一步濃縮，得到棉籽糖濃縮液。棉籽糖濃縮液加水配成固形物濃度為500mg/mL的原料液，以S印hadex LH-20(羥丙基葡聚糖凝膠，排阻分子量4000-5000)為填料，經(jīng)體積分?jǐn)?shù)為30%的乙醇水溶液充分溶脹后，采用濕法裝柱法裝填凝膠色譜柱，色譜柱尺寸為01.6CmX33Cm，色譜柱體積(BV)為66. 3ml。取原料液O. 1BV，上樣于所裝填的凝膠色譜柱，上樣完成后用體積分?jǐn)?shù)為30%的乙醇水溶液以O(shè). 5BV/h的洗脫流速流經(jīng)凝膠色譜柱，溫度控制在20°C，洗脫液用量為3BV。棉籽蛋白最先洗脫，棉籽糖隨后被洗脫，少量鹽分等等低分子量雜質(zhì)的保留時(shí)間最長，收集含棉籽糖的洗脫液餾分，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到棉籽糖粗品，通過HPLC分析，計(jì)算得到粗品中棉籽糖的含量為94. 1%，回收率為89. 2%。實(shí)施例3脫脂棉籽柏用體積分?jǐn)?shù)為75%的乙醇水溶液滲濾提取得到棉籽糖提取液，通過活性炭脫色方法對(duì)棉籽糖提取液中的棉酚等色素進(jìn)行脫除，脫色液再進(jìn)一步濃縮，得到棉籽糖濃縮液。棉籽糖濃縮液加水配成固形物濃度為800mg/ml的原料液，以S印hadex G_50(葡聚糖凝膠，排阻分子量范圍為1000 5000)為填料，經(jīng)體積分?jǐn)?shù)為30%的乙醇水溶液充分溶脹后，采用濕法裝柱法裝填凝膠色譜柱，色譜柱尺寸為01.6CmX33Cm，色譜柱體積(BV)為66. 3ml。取原料液O. 05BV，上樣于所裝填的凝膠色譜柱，上樣完成后在40°C下，用體積分?jǐn)?shù)30%乙醇的水溶液以I. 5BV/h的洗脫流速流經(jīng)凝膠色譜柱，洗脫劑用量為2BV。棉籽蛋白最先洗脫，棉籽糖隨后被洗脫，少量鹽分等等低分子量雜質(zhì)的保留時(shí)間最長，收集含棉籽糖的洗脫液餾分，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到棉籽糖粗品，通過HPLC分析，計(jì)算得到粗品中棉籽糖的含量為93. 8%,回收率為89. 7%。實(shí)施例4脫脂棉籽柏用體積分?jǐn)?shù)為75%的乙醇水液滲濾提取得到棉籽糖提取液，通過活性炭脫色方法對(duì)棉籽糖提取液中的棉酚等色素進(jìn)行脫除，脫色液再進(jìn)一步濃縮，得到棉籽糖濃縮液。棉籽糖濃縮液加水配成固形物濃度為300mg/ml的原料液，以S印hadex G-IOO(葡聚糖凝膠，排阻分子量范圍為1500 30000)為填料，經(jīng)體積分?jǐn)?shù)為40%的乙醇水溶液充分溶脹后，采用濕法裝柱法裝填凝膠色譜柱，色譜柱尺寸為01.6CmX33Cm，色譜柱體積(BV)為66. 3ml。取原料液O. 1BV，上樣于所裝填的凝膠色譜柱，上樣完成后在60°C下，用體積分?jǐn)?shù)40%的乙醇水溶液以I. 5BV/h的洗脫流速流經(jīng)凝膠色譜柱，洗脫劑用量為2BV。棉籽蛋白最先洗脫，棉籽糖隨后被洗脫，少量鹽分等等低分子量雜質(zhì)的保留時(shí)間最長，收集含棉籽糖的洗脫液餾分，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到棉籽糖粗品，通過HPLC分析，計(jì)算得到粗品中棉籽糖的含量為92. 3%,回收率為85. 5%ο實(shí)施例5脫脂棉籽柏用體積分?jǐn)?shù)為75%的乙醇水溶液滲濾提取得到棉籽糖提取液，通過活性炭脫色方法對(duì)棉籽糖提取液中的棉酚等色素進(jìn)行脫除，脫色液再進(jìn)一步濃縮，得到棉籽糖濃縮液。棉籽糖濃縮液加水配成固形物濃度為600mg/ml的原料液，以Toyopearl HW-40F(聚丙烯酸酯凝膠，排阻分子量范圍為100 10000)為填料，經(jīng)體積分?jǐn)?shù)為40%的乙醇水 溶液充分溶脹后，采用濕法裝柱法裝填凝膠色譜柱，色譜柱尺寸為Φ1. 6cmX 33cm，色譜柱體積(BV)為66. 3ml。取原料液O. 02BV,上樣于所裝填的凝膠色譜柱，上樣完成后在20°C下，用體積分?jǐn)?shù)為40%的乙醇的水溶液以2BV/h的洗脫流速流經(jīng)凝膠色譜柱，洗脫劑用量為
I.5BV。棉籽蛋白最先洗脫，棉籽糖隨后被洗脫，少量鹽分等等低分子量雜質(zhì)的保留時(shí)間最長，收集含棉籽糖的洗脫液餾分，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到棉籽糖粗品，通過HPLC分析，計(jì)算得到粗品中棉籽糖的含量為94. 9%，回收率為86. 2%。實(shí)施例6脫脂棉籽柏用去離子水溶液滲濾提取得到棉籽糖提取液，通過常規(guī)的活性炭脫色方法對(duì)棉籽糖提取液中的棉酚等色素進(jìn)行脫除，脫色液再進(jìn)一步濃縮，得到棉籽糖濃縮液。棉籽糖濃縮液加水配成固形物濃度為200mg/mL的原料液，以葡聚糖凝膠S印hadex G-IO(葡聚糖凝膠，排阻分子量700)為填料，經(jīng)去離子水溶液充分溶脹后，采用濕法裝柱法裝填凝膠色譜柱，色譜柱尺寸為Φ I. 6cmX 33cm，色譜柱體積(BV)為66. 3ml。取原料液O. 02BV上樣于上述凝膠色譜柱，在40°C條件下，用去離子水溶液以lBV/h的洗脫流速流經(jīng)凝膠色譜柱。棉籽蛋白最先洗脫，棉籽糖隨后被洗脫，少量鹽分等低分子量雜質(zhì)的保留最長，收集含棉籽糖的洗脫液餾分，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到棉籽糖粗品，通過HPLC分析，計(jì)算所得粗品中棉籽糖的含量為81. 2%,回收率為84. 7%。實(shí)施例7脫脂棉籽柏用去離子水溶液滲濾提取得到棉籽糖提取液，通過常規(guī)的活性炭脫色方法對(duì)棉籽糖提取液中的棉酚等色素進(jìn)行脫除，脫色液再進(jìn)一步濃縮，得到棉籽糖濃縮液。棉籽糖濃縮液加水配成固形物濃度為300mg/mL的原料液，以Toyopearl HW-40C(聚丙烯酸酯凝膠，排阻分子量范圍為IO2 IO4)為填料，經(jīng)去離子水溶液充分溶脹后，采用濕法裝柱法裝填凝膠色譜柱，色譜柱尺寸為Φ1. 6cmX 33cm，色譜柱體積(BV)為66. 3ml。取原料液O. 05BV上樣于上述凝膠色譜柱，在40°C條件下，用去離子水溶液以O(shè). 5BV/h的洗脫流速流經(jīng)凝膠色譜柱。棉籽蛋白最先洗脫，棉籽糖隨后被洗脫，少量鹽分等低分子量雜質(zhì)的保留最長，收集含棉籽糖的洗脫液餾分，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到棉籽糖粗品，通過HPLC分析，計(jì)算所得粗品中棉籽糖的含量為85. 4%，回收率 為85. 6%。
權(quán)利要求
1.一種棉籽糖的分離純化方法，包括以下步驟 1)以凝膠為填料，濕法裝填凝膠色譜柱； 2)以棉籽糖濃縮液配制原料液，上樣于所述的凝膠色譜柱； 3)以去離子水或乙醇水溶液為洗脫液進(jìn)行洗脫，收集含有棉籽糖的洗脫液，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后得到純化的棉籽糖； 所述的棉籽糖濃縮液由脫脂棉籽柏經(jīng)水或醇的水溶液提取得到的棉籽糖提取液再經(jīng)活性炭脫色濃縮后得到。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的棉籽糖的分離純化方法，其特征在于，所述的凝膠的排阻分子量范圍為500 30000。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的棉籽糖的分離純化方法，其特征在于，所述的凝膠為葡聚糖G系列凝膠、聚丙烯酸酯凝膠中的一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的棉籽糖的分離純化方法，其特征在于，所述的凝膠為Sephadex G-IO> Sephadex G-25、 Sephadex G-50、 Sephadex G-75、 Sephadex G-100、Sephadex LH-20> Toyopearl HW-40C 或 ToyopearlHW-40F。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的棉籽糖的分離純化方法，其特征在于，步驟2)中，所述的原料液中固形物濃度為200mg/mL 800mg/mL。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的棉籽糖的分離純化方法，其特征在于，步驟2)中，上樣體積為凝膠色譜柱床層體積的2% 10%。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的棉籽糖的分離純化方法，其特征在于，步驟3)中，所述的乙醇水溶液為體積分?jǐn)?shù)小于等于40%的乙醇水溶液。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的棉籽糖的分離純化方法，其特征在于，步驟3)中，洗脫條件為洗脫溫度為5°C 60°C，洗脫液流速為O. 5BV/h 3BV/h。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的棉籽糖的分離純化方法，其特征在于，步驟3)中，洗脫條件為洗脫溫度為20°C 60°C，洗脫液流速為O. 5BV/h 2BV/h。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種棉籽糖的分離純化方法，包括1)以凝膠為填料，濕法裝填凝膠色譜柱；2)以棉籽糖濃縮液配制原料液，上樣于所述的凝膠色譜柱；3)以去離子水或乙醇水溶液為洗脫液進(jìn)行洗脫，收集含有棉籽糖的洗脫液，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后得到純化的棉籽糖；所述的棉籽糖濃縮液由脫脂棉籽粕經(jīng)水或醇的水溶液提取得到的棉籽糖提取液再經(jīng)活性炭脫色濃縮后得到。本發(fā)明方法通過凝膠色譜法分離棉籽糖與蛋白等，工藝流程簡單，操作簡便，分離效率高，填料可重復(fù)利用，具有廣闊的工業(yè)化應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)C07H1/06GK102875607SQ20121037170
公開日2013年1月16日 申請(qǐng)日期2012年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月28日
發(fā)明者鮑宗必, 劉聰, 邢華斌, 蘇寶根, 任其龍, 楊亦文, 楊啟煒 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)