專利名稱：一種復(fù)合乳酸菌凍干粉的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種復(fù)合乳酸菌凍干粉的制備方法。
背景技術(shù)：
生產(chǎn)發(fā)酵乳制品最重要的要素是發(fā)酵過程中使用的乳酸菌菌種，只有好的乳酸菌菌種才能生產(chǎn)出優(yōu)質(zhì)的酸奶和干酪等發(fā)酵乳制品。目前國內(nèi)酸奶和干酪乳酸菌發(fā)酵劑大多采用國外菌株。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種復(fù)合乳酸菌凍干粉的制備方法。
本發(fā)明的目的是按如下技術(shù)方案實現(xiàn)的，一種復(fù)合乳酸菌凍干粉的制備方法，包括以下步驟
A、菌種活化菌株甲為乳酸乳球菌乳酸亞種(jMctococcuslactis subsp.Jacii1S) 1-3-5,保藏號 CGMCC NO. 4776,菌株乙為干釀乳桿菌{Lactobacillus casei,保藏號CGMCC NO. 4775，將冷凍的以上兩菌株分別接種到MRS液體培養(yǎng)基中，25°C培養(yǎng)12h后再按體積比為3%的比例轉(zhuǎn)接到脫脂乳培養(yǎng)基中，25°C恒溫條件下培養(yǎng)至凝乳，重復(fù)以上操作4^6次以恢復(fù)菌株活力；
B、種子液制備兩菌株充分活化后，分別以接種量體積比為3%的比例分別接入MRS液體培養(yǎng)基，于25°C恒溫培養(yǎng)12 14h得到種子液；
C、增殖培養(yǎng)將菌株甲種子液和菌株乙種子液以體積比2:1的比例混合后按體積比為3%的接種量接入液體MRS培養(yǎng)基，在25°C培養(yǎng)14h ；
D、菌體收集將培養(yǎng)液在4°C、5000r/mim離心16 20 min得到菌泥；
E、預(yù)凍將得到的菌泥與保護劑以1:3比例混合，在_30°C預(yù)冷12小時；
F、真空低溫冷凍干燥將預(yù)凍后的菌泥加入凍干機，保持_30°C到_40°C，冷凍干燥16 24小時，得到復(fù)合乳酸菌凍干粉。作為本發(fā)明的進一步改進所述步驟E中采用的保護劑為甘氨酸、脫脂乳、蔗糖和谷氨酸鈉的混合物，重量比為甘氨酸脫脂乳蔗糖谷氨酸鈉是I :2 2 :1。青藏高原牧區(qū)具有非常特殊的地理生態(tài)環(huán)境，海拔高、晝夜溫差大。當(dāng)?shù)啬撩癫捎们О倌陙硌匾u古老而傳統(tǒng)的方法制作牦牛酸奶，將新鮮的牦牛乳加熱煮沸，冷卻后接種上次制作預(yù)留的酸奶(接種量一般是3% 5%)，在室內(nèi)放置(10 25°C )至凝乳，屬于典型的低溫發(fā)酵。在長期的自然進化過程中，牦牛乳酸奶中傳代性好、抗逆性強、凝乳狀態(tài)好、風(fēng)味獨特、低溫發(fā)酵的的優(yōu)良乳酸菌得到富集。本發(fā)明采用的菌株從甘肅省甘南自治州的發(fā)酵牦牛乳中分離得到。其中菌株甲為乳酸乳球菌乳酸亞種ilactococcus lactis subsp.lactis) 1-3-5，保藏號CGMCC NO. 4776，在CN102321550A專利申請中已經(jīng)保藏，該菌株在25°C下發(fā)酵12h即可凝乳，用該菌株生產(chǎn)的酸奶具有粘度高、貯藏時后酸化弱的特點。菌株乙為干酪乳桿菌(Lacio如&77心，保藏號CGMCC NO. 4775，在CN102367428A專利中已經(jīng)提交微生物保藏。在進一步的研究中，我們發(fā)現(xiàn)這兩株菌在復(fù)配發(fā)酵時具有良好的共生關(guān)系，可用于酸奶和干酪等發(fā)酵乳制品。本發(fā)明復(fù)合乳酸菌凍干粉的制備方法，具有方法簡單、易操作、活菌數(shù)高等優(yōu)點，生產(chǎn)的復(fù)合乳酸菌凍干粉活菌數(shù)達到10nCFU/g，適合應(yīng)用于酸奶和干酪等發(fā)酵乳制品的加工。
具體實施例方式下面的實施例可以進一步說明本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。
實施例中菌株甲為乳酸乳球菌乳酸亞種(jMctococcus lactis subsp.Jacii1S) 1-3-5,保藏號 CGMCC NO. 4776,菌株乙為干釀乳桿菌{Lactobacillus casei,保藏號CGMCC NO. 4775 ;MRS液體培養(yǎng)基采用現(xiàn)有技術(shù)，保護劑為甘氨酸、脫脂乳、蔗糖和谷氨酸鈉的混合物，重量比為甘氨酸脫脂乳蔗糖谷氨酸鈉是I :2 2 :1。實施例I
將冷凍的菌株甲和菌株乙分別接種到MRS液體培養(yǎng)基中，25°C培養(yǎng)12h后再按3% (V/V)比例轉(zhuǎn)接到脫脂乳培養(yǎng)基中，25°C恒溫條件下培養(yǎng)至凝乳，重復(fù)以上操作4次以恢復(fù)菌株活力；脫脂乳培養(yǎng)基為脫脂乳加水配成12%的體積溶液。兩菌株充分活化后，將菌株甲種子液和菌株乙種子液以體積比2:1的比例混合后按體積比為3%的接種量接入液體MRS培養(yǎng)基，于25°C恒溫培養(yǎng)12h得到種子液。將種子液以球桿菌比例2:1 (V/V)、接種量3% (V/V)接入液體MRS培養(yǎng)基，在25°C培養(yǎng)14h。將培養(yǎng)液在4°C、5000 r/mim離心16 min得到菌泥。將得到的菌泥與保護劑以1:3比例混合，在_30°C預(yù)冷12小時。將預(yù)凍后的菌泥加入凍干機，保持_30°C到_40°C，冷凍干燥16小時，得到復(fù)合乳酸菌凍干粉，其活菌數(shù)達到4. 10X10nCFU/g。實施例2
將冷凍的菌株甲和菌株乙分別接種到MRS液體培養(yǎng)基中，25°C培養(yǎng)12h后再按3% (V/V)比例轉(zhuǎn)接到脫脂乳培養(yǎng)基中，25°C恒溫條件下培養(yǎng)至凝乳，重復(fù)以上操作5次以恢復(fù)菌株活力。脫脂乳培養(yǎng)基為脫脂乳加水配成12%的體積溶液。兩菌株充分活化后，將菌株甲種子液和菌株乙種子液以體積比2:1的比例混合后按體積比為3%的接種量接入液體MRS培養(yǎng)基，于25°C恒溫培養(yǎng)13h得到種子液。將種子液以球桿菌比例2:1 (V/V)、接種量3% (V/V)接入液體MRS培養(yǎng)基，在25°C培養(yǎng)14h。將培養(yǎng)液在4°C、5000 r/mim離心18 min得到菌泥。將得到的菌泥與保護劑以1:3比例混合，在-30 V預(yù)冷12小時。將預(yù)凍后的菌泥加入凍干機，保持-30 V到-40 V，冷凍干燥20小時，得到復(fù)合乳酸菌凍干粉，其活菌數(shù)達到4. 20X 10nCFU/g。實施例3
將冷凍的菌株甲和菌株乙分別接種到MRS液體培養(yǎng)基中，25°C培養(yǎng)12h后再按3% (V/V)比例轉(zhuǎn)接到脫脂乳培養(yǎng)基中，25°C恒溫條件下培養(yǎng)至凝乳，重復(fù)以上操作6次以恢復(fù)菌株活力。脫脂乳培養(yǎng)基為脫脂乳加水配成12%的體積溶液。兩菌株充分活化后，將菌株甲種子液和菌株乙種子液以體積比2:1的比例混合后按體積比為3%的接種量接入液體MRS培養(yǎng)基，于25°C恒溫培養(yǎng)14h得到種子液。將種子液以球桿菌比例2:1 (V/V)、接種量3% (V/V)接入液體MRS培養(yǎng)基，在25°C培養(yǎng)14h。將培養(yǎng)液在4°C、5000 r/mim離心20 min得到菌泥。將得到的菌泥與保護劑以1:3比例混合，在_30°C預(yù)冷12小時。將預(yù)凍后的菌泥加入凍干機，保持_30°C到_40°C，冷凍干燥24小時，得到復(fù)合乳酸菌凍 干粉，其活菌數(shù)達到4. 30X 10nCFU/g。
權(quán)利要求
1.一種復(fù)合乳酸菌凍干粉的制備方法，其特征是它包括以下步驟 A、菌種活化菌株甲為乳酸乳球菌乳酸亞種(jMctococcuslactis subsp.Jacii1S) 1-3-5,保藏號 CGMCC NO. 4776,菌株乙為干釀乳桿菌{Lactobacillus casei,保藏號CGMCC NO. 4775，將冷凍的以上兩菌株分別接種到MRS液體培養(yǎng)基中，25°C培養(yǎng)12h后再按體積比為3%的比例轉(zhuǎn)接到脫脂乳培養(yǎng)基中，25°C恒溫條件下培養(yǎng)至凝乳，重復(fù)以上操作4^6次以恢復(fù)菌株活力； B、種子液制備兩菌株充分活化后，分別以接種量體積比為3%的比例分別接入MRS液體培養(yǎng)基，于25°C恒溫培養(yǎng)12 14h得到種子液； C、增殖培養(yǎng)將菌株甲種子液和菌株乙種子液以體積比2:1的比例混合后按體積比為3%的接種量接入液體MRS培養(yǎng)基，在25°C培養(yǎng)14h ； D、菌體收集將培養(yǎng)液在4°C、5000r/mim離心16 20 min得到菌泥； E、預(yù)凍將得到的菌泥與保護劑以1:3比例混合，在_30°C預(yù)冷12小時； F、真空低溫冷凍干燥將預(yù)凍后的菌泥加入凍干機，保持_30°C到_40°C，冷凍干燥16 24小時，得到復(fù)合乳酸菌凍干粉。
2.如權(quán)利要求I所述的制備方法，其特征在于所述步驟E中采用的保護劑為甘氨酸、脫脂乳、蔗糖和谷氨酸鈉的混合物，重量比為甘氨酸脫脂乳蔗糖谷氨酸鈉是I :2 2 :1。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種復(fù)合乳酸菌凍干粉的制備方法，將乳酸乳球菌乳酸亞種與干酪乳桿菌復(fù)合，經(jīng)過菌種活化、種子液制備、增殖培養(yǎng)、菌體收集、預(yù)凍和真空低溫冷凍干燥制得。具有方法簡單、易操作、活菌數(shù)高等優(yōu)點，生產(chǎn)的復(fù)合乳酸菌凍干粉活菌數(shù)達到1011CFU/g，適合應(yīng)用于酸奶和干酪等發(fā)酵乳制品的加工。
文檔編號C12R1/01GK102965321SQ20121052686
公開日2013年3月13日 申請日期2012年12月10日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月10日
發(fā)明者張衛(wèi)兵, 梁琪, 田菊梅, 米蘭, 張炎, 楊敏, 文鵬程 申請人:甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)