一種促進(jìn)茶樹提質(zhì)增產(chǎn)的復(fù)合乳酸菌菌劑及其應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種促進(jìn)茶樹提質(zhì)增產(chǎn)的復(fù)合菌劑及其應(yīng)用，該復(fù)合菌劑由植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)P?8、干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)Zhang和嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)CGMCC NO.10188組成。這三種菌對茶樹的生長代謝有明顯的影響，尤其可以協(xié)同促進(jìn)茶樹葉片中葉綠素、茶多酚、咖啡堿和氨基酸含量的提高，改善茶樹的生長狀況，使增產(chǎn)效果明顯，最終提高品質(zhì)、增加種植效益。
【專利說明】
-種促進(jìn)茶樹提質(zhì)増產(chǎn)的復(fù)合乳酸菌菌劑及其應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種微生物菌劑，尤其設(shè)及一種能顯著促進(jìn)茶樹產(chǎn)量和品質(zhì)提升的復(fù) 合乳酸菌菌劑，屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 作為茶葉生產(chǎn)大國，我國茶園面積大約有一百余萬公頃。近十幾年來，我國的茶園 面積、茶葉產(chǎn)量、茶葉效益均呈現(xiàn)快速增長趨勢，茶葉產(chǎn)業(yè)呈現(xiàn)出一派繁榮的景象。目前，山 東省茶樹主要分布在青島、日照、臨巧、泰安等地市，青島市茶葉消費市場活躍，不同規(guī)模的 茶市場眾多，茶年銷量已經(jīng)超過6000噸，年交易額超過3億元。隨著茶葉產(chǎn)量需求不斷增大， 種植面積不斷增加，化肥的施用量也成倍數(shù)增長(我國目前單位面積的化肥使用量是世界 平均水平的1.6倍，全年總用量約為1.2億噸）。但運種長期使用化肥的方法明顯降低了的± 壤有機質(zhì)含量，使±壤板結(jié)，產(chǎn)生環(huán)境污染和農(nóng)藥殘留問題，嚴(yán)重影響茶葉的產(chǎn)量和品質(zhì)。 隨著人們環(huán)保意識的逐步增強及對新技術(shù)研發(fā)的不斷深入，探尋新肥源(特別是生物菌肥） W部分替代化肥的研究引起了廣泛關(guān)注。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于通過探究不同乳酸菌對茶樹的生長性狀及品質(zhì)的影響，確定適 宜在茶樹中應(yīng)用的乳酸菌制劑，通過大量的試驗研究，提供了一種能顯著促進(jìn)茶樹生長的 復(fù)合乳酸菌菌劑及其應(yīng)用。
[0004] 為了實現(xiàn)本發(fā)明的目的，發(fā)明人通過大量試驗研究并不懈努力，最終獲得了如下 技術(shù)方案：
[0005] -種促進(jìn)茶樹提質(zhì)增產(chǎn)的復(fù)合菌劑，該復(fù)合菌劑由植物乳桿菌化actobacillus plantarum)P-8、干酪乳桿菌(Xactobacil lus casei)Zhang和嗜酸乳桿菌(Xactobacillus acidophilus)CGMCC NO. 10188組成。
[0006] 需要說明的是，本發(fā)明所采用的植物乳桿菌(Xactobacillus planta;rum)P-8,分 離自內(nèi)蒙古傳統(tǒng)自然發(fā)酵酸牛奶中，具有優(yōu)異的抗胃腸道消化液耐受能力，能夠存活于動 物腸道內(nèi)；該菌株已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中屯、，地址為中國 北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，保藏時間為2012年06月28日，保藏號為CGMCC No.6312。 另外，本發(fā)明所采用的干酪乳桿菌化actobacillus casei)Zhang，是從酸馬奶中分離的耐 酸和耐膽汁酸的益生菌菌株;該菌株于2006年4月21日保藏于中國微生物菌種保藏管理委 員會普通微生物菌種保藏中屯、，保藏號CGMCC No . 1697。嗜酸乳桿菌化actobaci llus acidophilus),具有發(fā)酵劑的能力，它是從青藏高原牧區(qū)發(fā)酵巧牛奶中分離提取出來的益 生菌，該菌株于2014年12月17日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物菌種保 藏中屯、，保藏號為CGMCC N0.10188。
[0007] 進(jìn)一步優(yōu)選地，如上所述促進(jìn)茶樹生長的復(fù)合菌劑，該菌劑由植物乳桿菌 (Lactobacillus planta;rum)P-8和干酪乳桿菌(Xactobacillus casei)Zhang和嗜酸乳桿 菌化actobacillus acido地ilus)CGMCC NO. 10188按（1.5-2): (1.5-2): 1 的活菌數(shù)比例組 成。
[000引一種促進(jìn)茶樹提質(zhì)增產(chǎn)的微生物菌肥，該微生物菌肥包含基質(zhì)和復(fù)合菌劑，其中 的復(fù)合菌劑由植物乳桿菌化actobacillus planta;rum)P-8、干酪乳桿菌化actobacillus casei)Zhang和嗜酸乳桿菌（Lactobacillus acidophilus)CGMCC NO. 10188組成。
[0009] 進(jìn)一步優(yōu)選地，如上所述促進(jìn)茶樹提質(zhì)增產(chǎn)的微生物菌肥，其中的復(fù)合菌劑由植 物乳桿菌化actobacillusplanta;rum)P-8和干酪乳桿菌化actobacilluscasei)Zhang和 嗜酸乳桿菌化actobacillus acidopMlus)CGMCC NO. 10188按（1.5-2): (1.5-2): 1 的活菌 數(shù)比例組成。
[0010] 本發(fā)明人在篩選抑制茶樹病原菌的括抗菌時意外發(fā)現(xiàn)，含有植物乳桿菌 (Lactobacillus planta;rum)P-8、干酪乳桿菌(Xactobacillus casei)Zhang和嗜酸乳桿菌 化日(3扣6日(^11113日(^(1〇9}111113)〔61〇：^.10188的復(fù)合菌液對病原菌沒有明顯抑制作用， 但對茶樹的生長代謝有明顯的影響，尤其可W促進(jìn)茶樹中葉綠素、茶多酪、咖啡堿和氨基酸 含量的提高?；诖税l(fā)現(xiàn)，本發(fā)明人通過接種于MRS培養(yǎng)液中培養(yǎng)發(fā)酵，將運Ξ種菌制備成 了復(fù)合菌劑。因此，本發(fā)明提供了上述復(fù)合菌劑的應(yīng)用，即：上述的復(fù)合菌劑在同時提高茶 樹葉綠素、茶多酪、咖啡堿和氨基酸含量中的應(yīng)用。W及，上述的復(fù)合菌劑在制備同時提高 茶樹葉綠素、茶多酪、咖啡堿和氨基酸含量的生長液中的應(yīng)用。
[0011] 本發(fā)明設(shè)及的復(fù)合菌劑可W采用如下方法制備：
[0012] (1)首先將所述植物乳桿菌化actobaci 1 lus planta;rum)P-8和干酪乳桿菌 (Xactobacillus casei)Zhang各4-10% (v/w)的接種量接種于MRS液體培養(yǎng)基中，在37± 1 °C條件下培養(yǎng)26-28小時，用無菌生理鹽水離屯、洗涂2-4次，在菌體沉淀上加入8%-12%滅 菌脫脂乳液，并調(diào)整其菌數(shù)為1.8-2.0 X 109c化/ml，混勻后培養(yǎng)；
[0013] (2)將步驟（1)得到的菌株培養(yǎng)物與嗜酸乳桿菌(Xactobacillus acidophilus) CGMCC ^.10188進(jìn)行混合，并^8-12%(乂/^)的接種量接種于135培養(yǎng)液，并加入5〇1111/1的 挪汁，在37 ± rC條件下培養(yǎng)12-24小時，調(diào)整其菌數(shù)為2.5-3.0 X 109c化/ml，pH值為4.2- 5.5。
[0014]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明設(shè)及的復(fù)合菌劑由植物乳桿菌化actobaci 1 lus plantarum)P-8、干酪乳桿菌(Xactobacil lus casei)Zhang和嗜酸乳桿菌(Xactobacillus acidopMlus)CGMCC NO. 10188組成，其比例為（1.5-2): (1.5-2): 1，且在培養(yǎng)液中加入了 50ml/l的挪汁，運Ξ種菌對茶樹的生長代謝有明顯的影響，尤其可W協(xié)同促進(jìn)茶樹葉中活 性成分含量的提高，改善茶樹的生長狀況，使增產(chǎn)效果明顯，最終提高品質(zhì)、增加種植效益。
【附圖說明】
[001引圖壞同乳酸菌對茶樹株高的影響；
[0016] 圖2不同乳酸菌對茶樹莖粗的影響；
[0017] 圖3不同乳酸菌對茶樹最大單葉面積的影響；
[0018] 圖4不同乳酸菌對茶葉葉綠素含量的影響；
[0019] 圖5不同乳酸菌對茶葉茶多酪的影響；
[0020] 圖6不同乳酸菌對茶葉咖啡堿的影響；
[0021 ]圖7不同乳酸菌對茶葉氨基酸的影響。
【具體實施方式】
[0022] W下通過實施例的形式對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但不應(yīng)將此 理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于W下的實施例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù) 均屬于本發(fā)明的范圍。另外，下述實施例中的實驗方法，如無特別說明，均為常規(guī)方法。
[0023] 實施例1:不同乳酸菌對茶樹生長的影響試驗
[0024] -、試驗?zāi)康?br>[0025] 茶葉普遍具有消暑、降脂減肥、促進(jìn)血液循環(huán)、清屯、明目等良好的保健和醫(yī)療功 效。近些年來受到人們越來越多的喜愛。現(xiàn)在市民對生活品質(zhì)的要求越來越高，茶樹的產(chǎn)量 及口感還有待進(jìn)一步提高。因此，本試驗用3種不同的乳酸菌對盆栽茶樹進(jìn)行噴施試驗，并 對各項生長指標(biāo)進(jìn)行測定，研究其對茶樹產(chǎn)量和品質(zhì)的影響，W期為茶樹的提質(zhì)增產(chǎn)，降低 環(huán)境污染提供科學(xué)依據(jù)。
[0026] 二、試驗時間
[0027] 2016年4 月-5 月 [002引 Ξ、試驗地點
[0029] 青島農(nóng)業(yè)大學(xué)實驗室
[0030] 四、試驗材料與分組處理
[0031] 試驗材料：W茶樹為試驗材料，供試品種Ξ年生'龍井43 '。
[003^ 分組；
[0033] 空白對照組:噴施清水；
[0034] 嗜酸乳桿菌：噴施嗜酸乳桿菌(Xactobacillus acidophilus)CGMCC NO. 10188(活 菌總數(shù)含量0.8-1.0 X l〇9cfu/ml);
[00；3日]復(fù)合菌1 :噴施植物乳桿菌化actobaci 1 lus plantarum P-8) +干酪乳桿菌 (Xactobacillus casei )Zhang菌液（活菌總數(shù)含量1.8-2.0 X 109cfu/ml，兩種菌的數(shù)量比 為 1:1);
[0036] 復(fù)合菌2:噴施植物乳桿菌+干酪乳桿菌液+嗜酸乳桿菌(活菌總數(shù)含量1.8-2.0 X 109cfu/ml，Ξ種菌的數(shù)量比為2:2:1)。
[0037] 試驗方法:從Ξ年生的茶樹春季新葉萌生的時候開始，2次/月誘施于植物根部，每 次按1:500的濃度進(jìn)行施用。
[0038] 五、試驗結(jié)果
[0039] (1)對株高的影響
[0040] 如圖1、表1所示，3種乳酸菌對茶樹株高較空白對照組均有不同程度的提高，初期 (4月17日）對其影響作用不明顯，后期（5月17日）3種乳酸菌處理過的茶樹株高分別達(dá)到 33.07cm、33.23cm、33.60cm，其中，復(fù)合菌2對株高的提升作用最大，較空白對照組提高了 1.97%，相比復(fù)合菌1或嗜酸乳桿菌的差異均有極顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。
[0041 ] (2)對莖粗的影響
[0042] 3種乳酸菌對茶樹莖粗的影響如圖2、表1所示，不同乳酸菌對茶樹莖粗的作用不 同，試驗初期(4月17日），嗜酸乳桿菌對其影響較大，較對照組提高了5.37%，之后，復(fù)合菌2 對其影響作用逐漸顯著，4月27日、5月7日、5月17日對莖粗的影響較空白對照組分別提高了 6.48%、6.03%、5.89%。
[0043] (3)對最大單葉面積的影響
[0044] 圖3、表1顯示了不同乳酸菌對茶樹最大單葉面積的影響程度，結(jié)果表明，復(fù)合菌2 對茶樹最大單葉面積的影響最大，達(dá)到13.52cm2巧月17日），較對照組提高了 19.54%，其次 為復(fù)合菌1，達(dá)到12.40cm2,較對照組提高了9.64%，嗜酸乳桿菌為5.13%，因此，不同乳酸 菌對茶樹最大單葉面積的影響表現(xiàn)為復(fù)合菌2〉復(fù)合菌1〉嗜酸乳桿菌〉空白對照，尤其是4月 27日開始，復(fù)合菌2相比復(fù)合菌1或嗜酸乳桿菌的差異均有極顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。
[0045] (4)對葉綠素含量的影響
[0046] 如圖4、表1所示，試驗初期(4月17)嗜酸乳桿菌和復(fù)合菌1對茶樹葉綠素含量的影 響不明顯，之后明顯增強，到4月27日，嗜酸乳酸菌、復(fù)合菌1、復(fù)合菌2對葉綠素含量的影響 較對照組分別提高了 4.38%、3.80 %、5.83%，到5月17,復(fù)合菌2葉綠素含量達(dá)到 59.60SPAD，較對照組提高了4.29 %。3種乳酸菌對茶樹葉綠素含量的影響表現(xiàn)為復(fù)合菌2〉 復(fù)合菌1〉嗜酸乳桿菌〉空白對照。
[0047] (5)對茶多酪的影響
[0048] 不同乳酸菌對茶多酪含量的影響如圖5、表1所示，3種乳酸菌在試驗初期（4月17 日）對茶多酪含量的影響較低，之后效果明顯增強。5月17日，復(fù)合菌2處理過的茶樹其茶多 酪含量達(dá)到10.90%，其次為復(fù)合菌1處理的茶樹，達(dá)到了 10.47%，兩者較空白對照組分別 提高了 23.30%和18.44%。不同乳酸菌對茶多酪的影響表現(xiàn)為復(fù)合菌2〉復(fù)合菌1〉嗜酸乳桿 菌〉空白對照。
[0049] (6)對咖啡堿的影響
[0050] 如圖6、表1所示，不同乳酸菌對茶葉咖啡堿含量的影響不同，到了試驗后期（5月7 日、5月17日），嗜酸乳桿菌和復(fù)合菌1處理過的茶樹其咖啡堿含量差別不大，復(fù)合菌2對其影 響最大，分別達(dá)到10.67 X 10-3%、12.50 X 10-3%，較對照組分別提高了74.92%、51.52%， 效果顯著。尤其是4月27日開始，復(fù)合菌2相比復(fù)合菌1或嗜酸乳桿菌的差異均有極顯著的統(tǒng) 計學(xué)意義(P<〇.〇l)。
[0051] (7)對氨基酸的影響
[0052] 由圖7、表1可W看出，在試驗初期(4月17日），3種乳酸菌對茶葉氨基酸含量的影響 差別不大，到5月17日復(fù)合菌2、復(fù)合菌1和嗜酸乳桿菌處理過的茶樹其氨基酸含量分別為 2.71μg·g-l，2.7化g·g-l和2.75μg·g-l，較空白對照組分別提高了1.12%、1.49%和 2.61%。結(jié)果表明，不同乳酸菌對茶葉氨基酸的影響表現(xiàn)為復(fù)合菌2〉復(fù)合菌1〉嗜酸乳桿菌〉 空白對照。尤其是5月7日開始，復(fù)合菌2相比復(fù)合菌1或嗜酸乳桿菌的差異均有極顯著的統(tǒng) 計學(xué)意義(P<〇.〇l)。
[0053] 表1乳酸菌對茶樹各項指標(biāo)的影響(η = 30)
[0化4]
[Ο化5]
[0056]注:復(fù)合菌1為植物乳桿菌+干酪乳桿菌，復(fù)合菌2為植物乳桿菌+干酪乳桿菌+嗜酸 乳;與空白對照組比較，Ap<0.01;復(fù)合菌2與嗜酸乳桿菌組比較產(chǎn)P<0.01;復(fù)合菌2與復(fù)合 菌1組比較，·Ρ<〇.〇1。
[0化7] 六、結(jié)論與討論
[005引不同乳酸菌對茶樹生長的影響不同，總體表現(xiàn)為復(fù)合菌2〉復(fù)合菌1〉嗜酸乳桿菌〉 空白對照組。結(jié)果表明，植物乳桿菌化actobacillus planta;rum)P-8、干酪乳桿菌 (Lactobacillus casei )Zhang和嗜酸乳桿菌化actobacillus acidophilus)CGMCC NO. 10188可W協(xié)同促進(jìn)茶葉中活性成分含量的提高，對茶樹提質(zhì)增產(chǎn)能起到明顯的促進(jìn)作 用。
【主權(quán)項】
1. 一種促進(jìn)茶樹提質(zhì)增產(chǎn)的復(fù)合菌劑，其特征在于，該復(fù)合菌劑由植物乳桿菌 (Lactobacillus plantarum)P_8、干酪乳桿菌（Lactobacillus casei)Zhang和嗜酸乳桿菌 (Lactobacillus acidophilus)CGMCC NO. 10188組成。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述促進(jìn)茶樹提質(zhì)增產(chǎn)的復(fù)合菌劑，其特征在于，該復(fù)合菌劑由植物 乳桿菌（Lactobacillus plantarum)P_8和干酪乳桿菌（Lactobacillus casei)Zhang和嗜 酸乳桿菌（Lactobacillus acidophilus)CGMCC NO. 10188按（1 ·5_2): (1 ·5_2): 1 的活菌數(shù) 比例組成。3. -種促進(jìn)茶樹提質(zhì)增產(chǎn)的微生物菌肥，其特征在于，該微生物菌肥包含基質(zhì)和復(fù)合 菌劑，所述的復(fù)合菌劑由植物乳桿菌（Lactobaci 1 lus plantarum)P_8、干酪乳桿菌 (Lactobacillus casei )Zhang和嗜酸乳桿菌（Lactobacillus acidophilus)CGMCC NO. 10188 組成。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述促進(jìn)茶樹提質(zhì)增產(chǎn)的微生物菌肥，其特征在于，所述的復(fù)合菌劑 由植物乳桿菌（Lactobaci llus plantarum)P_8和干酪乳桿菌（Lactobaci 1 lus casei) Zhang和嗜酸乳桿菌（Lactobacillus acidophilus)CGMCC NO. 10188按（1 · 5-2): (1 · 5-2): 1 的活菌數(shù)比例組成。5. 權(quán)利要求1或2所述的復(fù)合菌劑在同時提高茶葉葉綠素、茶多酚、咖啡堿和氨基酸含 量中的應(yīng)用。6. 權(quán)利要求1或2所述的復(fù)合菌劑在制備同時提高茶葉葉綠素、茶多酚、咖啡堿和氨基 酸含量中的生長液中的應(yīng)用。7. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述促進(jìn)茶樹提質(zhì)增產(chǎn)的復(fù)合菌劑的制備方法，其特征在于，該 方法包括如下步驟： (1) 首先將所述植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum)P_8和干酪乳桿菌 (Lactobacillus casei)Zhang各4-10% (v/w)的接種量接種于MRS液體培養(yǎng)基中，在37± 1 °C條件下培養(yǎng)26-28小時，用無菌生理鹽水離心洗滌2-4次，在菌體沉淀上加入8%-12%滅 菌脫脂乳液，并調(diào)整其菌數(shù)為1.8-2.0 X 109cfu/ml，混勻后培養(yǎng)； (2) 將步驟（1)得到的菌株培養(yǎng)物與嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)CGMCC NO. 10188進(jìn)行混合，并以8-12 % (v/w)的接種量接種于MRS培養(yǎng)液，并加入50ml/l的椰汁，在 37 ± 1°C條件下培養(yǎng)12-24小時，調(diào)整其菌數(shù)為2 · 5-3 · 0 X 109cfu/ml，pH值為4 · 2-5 · 5。
【文檔編號】A01N63/02GK106011028SQ201610586042
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年7月22日
【發(fā)明人】李海梅, 趙金山, 劉占民, 鄒曉霞, 張曉軍, 任貽超, 李士美, 謝寶琦
【申請人】青島科拓恒通乳酸菌產(chǎn)業(yè)化開發(fā)研究院有限公司