專利名稱：大豆提取物和葉酸一起發(fā)酵產(chǎn)生的生物聚合物以及含有所述生物聚合物的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種通過使用微生物使包含葉酸和大豆提取物的培養(yǎng)物發(fā)酵而產(chǎn)生 的葉酰(folyl)發(fā)酵大豆提取物(extract offermented soybean, EFS)，以及包含所述葉 酰EFS的組合物。本發(fā)明的葉酰EFS或組合物具有抗組胺作用、抗過敏作用、加速鈣吸收的作用、加 速骨骼生長的作用、加速細(xì)胞生長的作用、加速膠原生物合成的作用、改善皺紋的作用以及 抑制由紫外線(UV)輻射引起的細(xì)胞損傷的作用。因此，本發(fā)明的葉酰EFS或組合物可用于 皮膚外用品或化妝品組合物、保健補(bǔ)充食品(health supplement food)組合物、飼料組合 物或藥學(xué)組合物中。
背景技術(shù)：
清蒴醬(Chungkookjang)和納豆(Natto)是代表性發(fā)酵食品，并且是通過使用枯 草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)使大豆發(fā)酵而制成。當(dāng)大豆發(fā)酵時，產(chǎn)生Y -聚谷氨 酸(γ-polyglutamate)和多聚果糖(polyfructan)聚合物。已知Y-聚谷氨酸具有保 濕和細(xì)胞活化功能，并且當(dāng)與如泰素(Taxol)等抗癌藥物一起使用時，使所用藥物的作用 增加。多聚果糖是一種膳食纖維，被用于減肥，當(dāng)投予時，使胃部有飽足感并抑制食欲，由 此可以防止肥胖。此外，據(jù)報(bào)導(dǎo)，多聚果糖抑制腸中有害細(xì)胞生長，而且有助于雙歧桿菌 (Bifidobacterium)生長(參看 Journal of Applied Microbiology，92，5，第 958-963 頁)。關(guān)于發(fā)酵大豆的專利包含有關(guān)化妝品材料的專利(參看韓國注冊專利第0451631 號)和有關(guān)皮膚外用品的專利(參看韓國公開專利第2001-0083876號)。Seong mun-hoe 等人開發(fā)了一種制造分子量為2，000千道爾頓(kDa)或更多的Y-聚谷氨酸的酶法技術(shù) (參看 App. & Environ. Microbiol. 2004 ；70 (7)，4249-4255 ；和韓國注冊專利第 10-0399091 號)。他們還注冊了一項(xiàng)專利，這項(xiàng)專利是基于關(guān)于其中抗壞血酸結(jié)合具有此類高分子量的 Y “聚谷氨酸的材料的研究結(jié)果(韓國注冊專利第10-0485727號)。然而，尚未開發(fā)出其 中葉酸(又稱維生素B9)結(jié)合Y-聚谷氨酸的一種新穎的發(fā)酵大豆聚合物，以及其應(yīng)用。已知葉酸是一種降低高半胱氨酸含量的物質(zhì)，而高半胱氨酸的含量與老年人的心 臟病和癡呆有關(guān)。因此，當(dāng)將葉酸用于老年人的食物中時，可以獲得明顯作用。葉酸天然以 聚谷氨酸形式存在，因此易于為動物和人體所吸收。


圖1是一系列顯微圖像，其顯示葉酰發(fā)酵大豆提取物(葉酰EFS)的抗組胺作用， 其中圖IA顯示正常細(xì)胞的顯微圖像，圖IB顯示用刺激物處理細(xì)胞30分鐘后細(xì)胞的顯微圖 像，而圖IC顯示用葉酰EFS和刺激物處理細(xì)胞30分鐘后細(xì)胞的顯微圖像。圖2是通過定量組胺和色甘酸(已知為哮喘治療劑)顯示葉酰EFS抑制組胺分泌 的作用的測試結(jié)果的柱形圖。
圖3是顯示葉酰EFS關(guān)于過敏性反應(yīng)(anaphylaxis)的測試結(jié)果的柱形圖，以腹 膜內(nèi)注射刺激物時各組的死亡率表示。圖4是顯示葉酰EFS在動物小腸中的鈣吸收促進(jìn)作用的測試結(jié)果的柱形圖，其中 在獲得所述結(jié)果的實(shí)驗(yàn)中，對動物給予添加有葉酰EFS的飼料，分離出動物的小腸并定量 各組的鈣量，并且以相對于所給飼料中未添加葉酰EFS的組的比率表示定量的結(jié)果。圖5是顯示葉酰EFS的生長促進(jìn)作用的測試結(jié)果的柱形圖，其中在獲得所述 結(jié)果的實(shí)驗(yàn)中，用葉酰EFS喂養(yǎng)大鼠預(yù)定的時間段，從各組取血，并利用酶聯(lián)免疫吸附 試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)定量血液中的胰島素樣生長因 子-1 (insulin-like growth factor 1,IGF_1)0圖6顯示成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)物與葉酰EFS或葉酸在成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基 (fibroblast culture medium, FGM, KDR公司)中培育24小時后得到的顯微圖像。圖7是顯示成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)物與葉酰EFS或葉酸在成纖維細(xì)胞生長培養(yǎng)基 (FGM，KDR公司)中培育24小時后，通過中性紅(neutral red,NR)試驗(yàn)定量活細(xì)胞的結(jié)果 的柱形圖。圖8是顯示葉酰EFS促進(jìn)膠原生物合成的作用的結(jié)果的柱形圖，其中在獲得所述 結(jié)果的實(shí)驗(yàn)中，使用成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)物促進(jìn)膠原的生物合成并利用ELISA定量膠 原，并且將葉酰EFS促進(jìn)膠原生物合成的作用與轉(zhuǎn)化生長因子-β (transforming growth factor beta, TGF-β)(已知為促進(jìn)膠原生物合成的物質(zhì))促進(jìn)膠原生物合成的作用相比較。圖9是顯示通過NR試驗(yàn)定量活細(xì)胞的結(jié)果的柱形圖，其中在獲得所述結(jié)果的實(shí)驗(yàn) 中，將人角化細(xì)胞的原代培養(yǎng)物與葉酸含量為約10重量％的葉酰EFS在人角化細(xì)胞生長培 養(yǎng)基(keratinocyte growth medium，KGM，KDR公司)中培育約72小時，用波長為306納米 (nm)的紫外線(UV)照射生長的細(xì)胞，隨后培育約24小時。
具體實(shí)施例方式技術(shù)問題本發(fā)明提供一種新穎的發(fā)酵大豆，其特性優(yōu)良、價(jià)格便宜，并且能用于各種應(yīng)用 中。技術(shù)解決方案為此，本發(fā)明的發(fā)明人嘗試使包含葉酸和大豆提取物的組合物發(fā)酵，并制得新穎 的葉酰發(fā)酵大豆提取物(葉酰EFS)。有益作用本發(fā)明的葉酰發(fā)酵大豆提取物(葉酰EFS)抑制肥大細(xì)胞產(chǎn)生組胺，其中肥大細(xì)胞 產(chǎn)生組胺的現(xiàn)象是發(fā)生嚴(yán)重皮膚不良反應(yīng)(例如過敏(allergy))的人出現(xiàn)的一種癥狀。葉 酰EFS還對減輕過敏性反應(yīng)極為有效。此外，葉酰EFS促進(jìn)小腸中如鈣等礦物質(zhì)的吸收，并 且促進(jìn)哺乳動物股骨(大腿骨)生長。另外，葉酰EFS因具有細(xì)胞活化功能，而促進(jìn)膠原的 生物合成，由此當(dāng)施用于人皮膚時，可以獲得改善皺紋的作用，由此還可以獲得其它各種作 用，例如保濕和抗過敏作用。而且，葉酰EFS還保護(hù)細(xì)胞以免被紫外線(UV)輻射損傷。因 此，葉酰EFS和包含葉酰EFS的組合物可用于保健補(bǔ)充食品、化妝品、皮膚外用品、藥學(xué)產(chǎn)
5品和牲畜飼料中。此外，與具有類似作用的其它產(chǎn)品相比，本發(fā)明的葉酰EFS的生產(chǎn)成本更 低，而且產(chǎn)率更高。發(fā)明模式本發(fā)明針對一種通過使用微生物使包含葉酸和大豆提取物的培養(yǎng)物發(fā)酵而產(chǎn)生 的葉酰發(fā)酵大豆提取物(葉酰EFS)，和其應(yīng)用。當(dāng)使用微生物使大豆發(fā)酵時，產(chǎn)生Y-聚谷氨酸，它是一種谷氨酸的胺基肽連接 (P印tide-linked)到Y(jié) -羧基的聚合物。同時，葉酸(維生素B9或蝶酰谷氨酸(pteolyl glutamic acid))是谷氨酸與蝶酰環(huán)(pteolyl ring)結(jié)合的谷氨酸類似物。本發(fā)明的發(fā)明 人鑒別出，常規(guī)在大豆發(fā)酵時產(chǎn)生的Y-聚谷氨酸可由芽孢桿菌(Bacillus)屬微生物產(chǎn)生 的合成酶產(chǎn)生，并且根據(jù)當(dāng)使合成酶與葉酸(其中蝶酰環(huán)結(jié)合谷氨酸)接觸時合成酶傾向 于使葉酸聚合的事實(shí)，進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。由此，本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，當(dāng)使用微生物使大豆發(fā)酵 時添加葉酸，葉酸將通過微生物產(chǎn)生的酶并入Y -聚谷氨酸中，并由此可大量產(chǎn)生一種新 的聚合物，即，包含葉酸和谷氨酸的葉酰聚谷氨酸。相應(yīng)地，本發(fā)明提供一種葉酰EFS和大 量產(chǎn)生葉酰EFS的方法。本發(fā)明的葉酰EFS包含葉酰聚谷氨酸。本發(fā)明的葉酰EFS還可包 含大豆發(fā)酵時所產(chǎn)生的果聚糖(Ievan)(微生物多聚果糖)。并入葉酰EFS中的葉酸與葉酸本身的特性極為不同，并且具有極高的水溶性，并 由此可更為有效地用于工業(yè)應(yīng)用中，而且更易于為動物的小腸吸收。另外，由于本發(fā)明的葉酰EFS還可以包含大豆發(fā)酵時產(chǎn)生的果聚糖(微生物多聚 果糖)，故可促進(jìn)雙歧乳桿菌(bifidus lactobacillus)的生長，并由此可獲得胃腸清潔作 用以及防止肥胖的作用。本發(fā)明的葉酰EFS還具有與葉酰EFS的濃度成比例的較高的免疫刺激作用和抗過 敏作用，這已通過體外(in vitro)試驗(yàn)和動物試驗(yàn)鑒別。葉酸本身不具有所述免疫刺激和 抗過敏作用。本發(fā)明的葉酰EFS抑制組胺分泌(參看圖1和圖2)并減輕過敏性反應(yīng)(參 看圖3)。因此，本發(fā)明的葉酰EFS可用于食品中，以防止嬰兒和兒童急性過敏，并改善成人 的體質(zhì)(constitution)。另外，本發(fā)明的葉酰EFS可用于皮膚外用品或化妝品組合物中，以 減輕異位性皮炎(atopic dermatitis)或過敏。本發(fā)明的葉酰EFS促進(jìn)膠原的生物合成(參看圖6)，而且具有改善皺紋的作用 (參看表5)。因此，本發(fā)明的葉酰EFS可用于基于代謝活化的保濕、改善皮膚的外用品或化 妝品組合物中，而且具有改善皺紋的特性以及由此引起的作用。本發(fā)明的葉酰EFS促進(jìn)動物小腸的鈣吸收(參看圖4)。因此，葉酰EFS可以與如 鈣、鐵或錳等藥用金屬一起使用，并由此可產(chǎn)生各種產(chǎn)品，其除包含功能性產(chǎn)品外，還包含 藥品，例如營養(yǎng)補(bǔ)充劑、孕婦用抗貧血藥或糖尿病補(bǔ)充劑。另外，本發(fā)明的葉酰EFS促進(jìn)骨骼生長(參看表4)，并增加血液中的生長因子 (IGF-10)(參看圖5)。當(dāng)前可用的生長促進(jìn)物質(zhì)的實(shí)例是KI-180，它是由Highki生長診 所(Highki growth clinic)和韓國食品研究所(Korea FoodResearch Institute)共同研 發(fā)。由于KI-180是從草藥中提取出來的，故其價(jià)格昂貴，并因此被用于昂貴的藥品而非食 品中。因而，很難將KI-180商業(yè)化。然而，由于本發(fā)明的葉酰EFS可通過微生物發(fā)酵大量 產(chǎn)生，故可以將葉酰EFS用于多種應(yīng)用中，例如適于兒童的功能性食品、適于絕經(jīng)后婦女的 預(yù)防骨質(zhì)疏松癥的功能性食品，以及營養(yǎng)補(bǔ)充劑。由此，葉酰EFS可以比常規(guī)促進(jìn)生長的物質(zhì)容易商業(yè)化。根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，本發(fā)明提供[1] 一種葉酰EFS，包含葉酸聚谷氨酸(folic acid polyglutamate)作為主要組 分，其中所述葉酰EFS是通過使用微生物使包含葉酸和大豆提取物的培養(yǎng)物發(fā)酵而產(chǎn)生；[2]根據(jù)[1]所述的葉酰EFS，其中所述微生物選自芽孢桿菌(bacillus)屬微生 物或棒桿菌(corynebacterium)屬微生物；[3]根據(jù)[1]所述的葉酰EFS，其中所述微生物是枯草芽孢桿菌 (Bacillussubtilis)；[4]根據(jù)[1]至[3]中任一項(xiàng)所述的葉酰EFS，其中所述葉酰EFS具有抗組胺作 用；[5]根據(jù)[1]至[3]中任一項(xiàng)所述的葉酰EFS，其中所述葉酰EFS具有抗過敏作 用；[6]根據(jù)[1]至[3]中任一項(xiàng)所述的葉酰EFS，其中所述葉酰EFS具有促進(jìn)鈣吸收 的作用；[7]根據(jù)[1]至[3]中任一項(xiàng)所述的葉酰EFS，其中所述葉酰EFS具有促進(jìn)骨骼生 長的作用；[8]根據(jù)[1]至[3]中任一項(xiàng)所述的葉酰EFS，其中所述葉酰EFS具有促進(jìn)膠原生 物合成的作用；[9]根據(jù)[1]至[3]中任一項(xiàng)所述的葉酰EFS，其中所述葉酰EFS具有改善皺紋的 作用；[10]根據(jù)[1]至[3]中任一項(xiàng)所述的葉酰EFS，其中所述葉酰EFS具有促進(jìn)細(xì)胞 生長的作用；[11] 一種用于皮膚外用品或化妝品的組合物，其包含根據(jù)[1]至[3]中任一項(xiàng)所 述的葉酰EFS作為活性組分；[12]根據(jù)[11]所述的用于皮膚外用品或化妝品的組合物，其中所述組合物用于 抗過敏或改善異位性皮炎；[13]根據(jù)[11]所述的用于皮膚外用品或化妝品的組合物，其中所述組合物用于 活化皮膚細(xì)胞的代謝、防止皺紋形成或改善皺紋外觀；[14]根據(jù)[11]所述的用于皮膚外用品或化妝品的組合物，其中所述組合物用于 抑制由紫外線(UV)輻射引起的細(xì)胞損傷；[15] 一種保健補(bǔ)充食品組合物，其包含根據(jù)[1]至[3]中任一項(xiàng)所述的葉酰EFS 作為活性組分；[16]根據(jù)[15]所述的保健補(bǔ)充食品組合物，其中所述保健補(bǔ)充食品組合物是用 于飲品中；[17]根據(jù)[15]所述的保健補(bǔ)充食品組合物，其中所述保健補(bǔ)充食品組合物具有 促進(jìn)生長的作用；[18]根據(jù)[15]所述的保健補(bǔ)充食品組合物，其中所述保健補(bǔ)充食品組合物具有 防止骨質(zhì)疏松癥的作用；[19]根據(jù)[15]所述的保健補(bǔ)充食品組合物，其中所述保健補(bǔ)充食品組合物具有
7促進(jìn)鈣吸收的作用；[20]根據(jù)[15]所述的保健補(bǔ)充食品組合物，其中所述保健補(bǔ)充食品組合物防止 發(fā)生過敏或改善體質(zhì)；[21] 一種飼料組合物，其包含根據(jù)[1]至[3]中任一項(xiàng)所述的葉酰EFS作為活性 組分；[22] 一種促進(jìn)細(xì)胞生長的藥用組合物，其包含根據(jù)[1]至[3]中任一項(xiàng)所述的葉 酰EFS作為活性組分；[23] 一種治療或預(yù)防骨質(zhì)疏松癥的藥用組合物，其包含根據(jù)[1]至[3]中任一項(xiàng) 所述的葉酰EFS作為活性組分；[24] 一種促進(jìn)鈣吸收的藥用組合物，其包含根據(jù)[1]至[3]中任一項(xiàng)所述的葉酰 EFS作為活性組分；和[25] 一種制造葉酰發(fā)酵大豆提取物(EFS)的方法，其是通過使用微生物使包含葉 酸和大豆提取物的培養(yǎng)物發(fā)酵而進(jìn)行的。本發(fā)明的葉酰EFS可使用大豆提取物制造?，F(xiàn)將詳細(xì)地描述制造大豆提取物的方 法。將大豆添加到蒸餾水中，其中大豆與蒸餾水的比率為約0. 到約50%。在100°C下加 熱混合物1到2小時，并緩慢冷卻，隨后從其中取出固體內(nèi)含物，由此完全制造出大豆提取 物。使用0. 到25%葡萄糖、0. 01%到10%磷酸氫二鈉(Na2HPO4)和0. 01%到10%磷酸 二氫鈉(NaH2PO4)制備培養(yǎng)基。隨后，將0. 到90%大豆提取物和0. 01%到10%葉酸添 加到培養(yǎng)基中，將所得培養(yǎng)基滅菌，接著將從食品中分離出來的枯草芽孢桿菌接種到培養(yǎng) 基中，并在10°C到60°C的溫度下，具體說來在35°C到55°C下，于pH 5. 5到pH 8.5下，在兼 性發(fā)酵條件中執(zhí)行發(fā)酵工藝，持續(xù)48小時到96小時。發(fā)酵工藝完成后，通過連續(xù)離心去除 不可溶的物質(zhì)，例如細(xì)胞，并使用2M鹽酸將所得溶液的pH值控制在pH 3到pH 5，具體說來 PH 4。接著，向其中添加乙醇，其中乙醇的量是pH值被控制溶液的2倍或更多倍。由此獲 得葉酰EFS，凍干并以粉末形式保存。使用常規(guī)方法，根據(jù)分子量執(zhí)行分組。例如，可利用色 譜法或使用錯流超濾單元(cross-flow ultrafiltration unit)執(zhí)行分組?？捎糜谑谷~酸和本發(fā)明所用的大豆提取物發(fā)酵的微生物可以是芽孢桿菌屬微生 物或棒桿菌屬微生物，其能夠產(chǎn)生Y-聚谷氨酸。芽孢桿菌屬微生物的實(shí)例包含枯草芽孢 ffIif、炭芽IfiffIif (Bacillus anthracis)、i也；^芽 包t干胃(Bacillus licheniformis)禾口 巨大芽孢桿菌(Bacillus megaterium)。例如，芽孢桿菌屬微生物可以是枯草芽孢桿菌。棒 桿菌屬微生物可以是谷氨酸棒桿菌(Corynebacterium glutamicum)，但不限于此。另外，葉酰EFS具有抗過敏作用，并促進(jìn)包含人在內(nèi)的動物的生長以及雙歧桿菌 和乳桿菌(Lactobacillus)的生長，由此產(chǎn)生高牲畜收益和高肉質(zhì)。因此，葉酰EFS可以在 動物飼料行業(yè)中用作飼料添加劑。本發(fā)明的組合物可以包含葉酰EFS，其中葉酰EFS的量可占組合物0. 01重量％到 60重量％，具體說來0. 1重量％到50重量％。在本發(fā)明的化妝品組合物中，葉酰EFS可以與適量的常規(guī)皮膚化妝品材料中所 用組分一起使用。此類組分的實(shí)例包含油料、水、表面活性劑、潤濕劑、低級醇、增稠劑、 螯合劑、著色劑、防腐劑和香料。本發(fā)明包含葉酰EFS的化妝品組合物可用于保濕化妝 品、面部清潔產(chǎn)品或其它化妝品中，但不限于此。具體說來，本發(fā)明包含葉酰EFS的化妝品組合物可用于化妝品中，例如收斂化妝水(astringent cosmetic water)、柔膚化妝水 (emollient cosmeticwater)、營養(yǎng)化妝水(nutrient cosmetic water)、各禾中乳霜、精油、 面膜(pack)或粉底(foundation)；清潔產(chǎn)品；面部清潔產(chǎn)品；肥皂；修護(hù)品(treatment)； 或化妝液(cosmetic solution) 0更具體說來，本發(fā)明包含葉酰EFS的化妝品組合物可 用于潤膚乳液(skin lotion)、柔膚液(skin softener)、調(diào)膚液(skintoner)、收斂乳液 (astringent lotion)、牛奶乳液(milk lotion)、保、濕乳液(moisturizing lotion)、營養(yǎng) 乳液(nutrient lotion)、按摩乳霜(massage cream)、營養(yǎng)乳霜(nutrient cream)、保濕乳 霜(moisturizing cream)、潤手乳霜(handcream)、精油、營養(yǎng)精油、面膜、肥皂、洗發(fā)精、清 潔泡沫、清潔乳(cleansinglotion)、清潔霜(cleansing cream)、身體乳(body lotion)、潔 膚液(bodycleanser)、油料、粉餅(press powder)、散粉或眼影中。本發(fā)明的藥用組合物可以固體、半固體、溶液或油形式使用，或以分散劑、微胞或 脂質(zhì)體形式使用。藥用組合物可以包含適于腸或非口服投藥的有機(jī)或無機(jī)載劑或賦形劑； 以及本發(fā)明的葉酰EFS作為活性成分?；钚越M分可與適于例如片劑、丸劑、膠囊劑、栓劑、溶 液制劑、油制劑、懸浮液制劑、油膏劑或容易使用的任一類制劑的常規(guī)無毒的藥學(xué)上可接受 的載劑混合?？捎幂d劑可以是葡萄糖、乳糖、阿拉伯膠、明膠、甘露醇、淀粉糊、三硅酸鎂鹽、 滑石、玉米淀粉、角蛋白、膠狀二氧化硅、馬鈴薯淀粉、尿素、具有中等鏈長的甘油三酸酯，或 適于制造制劑的任一類載劑，其可以是固體、半固體或液體。藥用組合物可進(jìn)一步包含補(bǔ)充 劑、穩(wěn)定劑、增稠劑、著色劑或香料。包含活性組分的藥用組合物可形成為易于口服的任何 制劑，例如片劑、錠劑、菱形片劑、水性或油性懸浮液制劑、可分散粉劑、顆粒劑、油、硬或軟 膠囊劑、糖漿劑或酏劑。可使用用于制造藥用組合物并且此項(xiàng)技術(shù)中已知的任何方法，來制 備這些口服用組合物。為獲得優(yōu)良的藥用特性以及使這些口服用組合物的味道更吸引人， 所述口服用組合物可進(jìn)一步包含至少一種選自由以下組成的群組的功能劑甜味劑，例如 蔗糖、乳糖或糖精；調(diào)味劑，例如薄荷、鹿銜草(pyrola japonica)或櫻桃；著色劑；和防腐 劑?？墒褂贸Ｒ?guī)方法制備包含活性組分和無毒的藥學(xué)上可接受的賦形劑的片劑。無毒的藥 學(xué)上可接受的賦形劑可以是無活性賦形劑，例如碳酸鈣、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；成粒劑 或分解劑，例如玉米淀粉、馬鈴薯淀粉或海藻酸；粘合劑，例如黃芪膠(tragerkans rub)、玉 米馬鈴薯、明膠或阿拉伯膠(Acasia)；或潤滑劑，例如硬質(zhì)酸鎂、硬質(zhì)酸或滑石。片劑可以 未包覆包衣，或可使用常規(guī)方法包覆包衣以延遲片劑在胃腸中的分解或吸收，并由此使藥 物作用持續(xù)一段較長的時間。用于此目的的延遲材料可以是單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘 油酯。這些材料還可以用于形成滲透性治療片劑，以控制活性組分的放出。在一些情況下，口服制劑可以是硬明膠膠囊，其中活性組分與如碳酸鈣、磷酸鈣或 高嶺土(kaolin)等無活性固體稀釋劑混合；或軟明膠膠囊，其中活性組分與水或如花生 油、液體石蠟或橄欖油等油介質(zhì)混合。由于待治療的個體具有多種癥狀，并且藥物具有特定治療特性，故應(yīng)由專家來測 定個體對治療的反應(yīng)以及根據(jù)反應(yīng)來改變投藥劑量。通常，每天的投藥劑量可以是每公斤 體重約10微克到約200毫克，具體說來，每公斤體重約50微克到約100毫克。每天的投藥 頻率可以是4次或更少。包含本發(fā)明葉酰EFS的食品組合物可用于制造各種食品。此類食品的實(shí)例包含肉 類、香腸、面包、巧克力、糖果、點(diǎn)心、糖食(confectionary)、比薩餅(pizza)、各種面條、口
9香糖、乳制品(包含冰淇淋)、各種湯、飲料、茶、飲品、酒和復(fù)合維生素，但本發(fā)明不限于此。將參照以下實(shí)例及實(shí)驗(yàn)實(shí)例更詳細(xì)地描述本發(fā)明。這些實(shí)例和實(shí)驗(yàn)實(shí)例只是出于 說明的目的，而不打算限制本發(fā)明的范圍。< 實(shí)例 1>制造葉酰EFS為了制造葉酰發(fā)酵大豆提取物(葉酰EFS)，首先制備大豆提取物。具體地說，將 大豆添加到蒸餾水中，其中大豆與蒸餾水的比率為50%，并在100°C下加熱混合物1小時 并緩慢冷卻，隨后從其中取出固體內(nèi)含物，由此產(chǎn)生大豆提取物。使用2.0%葡萄糖、1.0% Na2HPO4和0. 5% NaH2PO4制備培養(yǎng)基。隨后，將90%大豆提取物和0. 5%葉酸添加到培養(yǎng) 基中，將所得培養(yǎng)基滅菌，隨后將從食品中分離出來的枯草芽孢桿菌接種到培養(yǎng)基中，并在 45°C溫度下執(zhí)行發(fā)酵工藝，持續(xù)72小時。發(fā)酵工藝完成后，通過連續(xù)離心去除不可溶的物 質(zhì)，例如細(xì)胞，并使用2M鹽酸將所得溶液的pH值控制在pH 4。接著，向其中添加乙醇，其 中乙醇的量是PH值被控制溶液的2倍或更多倍。由此獲得葉酰EFS，凍干并以粉末形式保 存。為了制備分子量為1000千道爾頓的聚合物，使用瓊脂糖凝膠(S印har0Se)4B去除分子 量為500千道爾頓或更低的聚合物，并使用錯流超濾單元(由Vivascience公司制造)將 所得溶液分成含有分子量為1，000千道爾頓或更高的聚合物的部分，以及含有分子量低于 1,000千道爾頓的聚合物的部分。通過凝膠滲透色譜法(gel permeationchromatography, GPC)，使用液相色譜(Liquid chromatography,^)測量具有分子量為1，000千道爾頓或更 高的聚合物的部分的平均分子量，并且所測得的平均分子量為2，500千道爾頓。將這兩部 分干燥，并使用相同的粉末量。< 實(shí)例 2>制造包含葉酰EFS的組合物制備包含0. 0重量％到10. 0重量％實(shí)例1中制備的葉酰EFS和可用于食品和藥 物中的添加劑的各種組合物。(1)制備實(shí)例1 包含葉酰EFS的食品組合物制備包含表1中所示組分和其量的食品組合物，以制造可飲用的保健補(bǔ)充食品。 在這些組合物中，根據(jù)天然防腐劑的量，適當(dāng)?shù)乜刂凭扑牧?。[表1]包含葉酰EFS的食品組合物(重量％)
10 (2)制備實(shí)例2 包含葉酰EFS的化妝品組合物配制包含表2中所示的組分和其量的化妝品組合物以及包含蒸餾水替代葉酰EFS 的對照組合物。在表2中，㈧表示水溶性物質(zhì)，而⑶表示油溶性物質(zhì)。根據(jù)防腐劑、調(diào) 味料和顏料的量，適當(dāng)?shù)乜刂茻o菌蒸餾水的量。[表2]包含葉酰EFS的化妝品組合物(重量％) (3)制備實(shí)例3 包含葉酰EFS的飼料組合物制備包含表3中所示的組分和其量的飼料組合物。[表3]包含葉酰EFS的飼料組合物(重量％) <實(shí)例3>抗過敏試驗(yàn)實(shí)例3-1 通過顯微鏡觀察肥大細(xì)胞來鑒別抗組胺作用為了鑒別葉酰EFS的抗組胺作用，將試驗(yàn)材料施用于肥大細(xì)胞(ATCCTIB-64， P815)，并通過顯微鏡觀察肥大細(xì)胞(參看George Chiang等人，TheJournal of Urology, 12月，164，2000年，第2119-2125頁)。圖IA顯示正常肥大細(xì)胞的圖像；圖IB顯示用10微 克/毫升C48/80 (sigma公司)作為刺激物處理并靜置30分鐘的肥大細(xì)胞的圖像；而圖IC 顯示用葉酰EFS和刺激物處理并靜置30分鐘的肥大細(xì)胞的圖像。參看圖IA到圖1C，正常 肥大細(xì)胞圓而光滑。當(dāng)發(fā)生免疫反應(yīng)時，肥大細(xì)胞變粗糙。然而，當(dāng)用C48/80作為刺激物 處理肥大細(xì)胞并靜置15分鐘時，肥大細(xì)胞變形而且其表面上具有突起，并且當(dāng)30分鐘過去 后，肥大細(xì)胞完全失去其初始形狀并破裂，由此分泌出組胺。肥大細(xì)胞表面變形是C48/80 刺激肥大細(xì)胞的細(xì)胞膜而分泌出各種信號遞送物質(zhì)并且細(xì)胞膜的穩(wěn)定性減低，由此使細(xì)胞 膜表面不穩(wěn)定的現(xiàn)象。因此，可根據(jù)C48/80處理后，肥大細(xì)胞的初始表面形狀維持的程度， 來鑒別抗組胺作用。然而，當(dāng)用葉酰EFS處理并靜置15分鐘時，肥大細(xì)胞保持其初始形狀， 并且甚至在30分鐘過去后，僅少數(shù)的細(xì)胞分泌組胺并且其細(xì)胞膜破裂。實(shí)例3-2 通過定量肥大細(xì)胞的組胺來鑒別抗組胺作用執(zhí)行本實(shí)驗(yàn)是為了鑒別葉酰EFS降低用刺激物處理肥大細(xì)胞時所分泌的組胺量 的程度。使用ELISA定量所分泌的組胺的量。將色甘酸鈉(已知為哮喘治療藥)用作 對照組，而C48/80用作刺激物來誘導(dǎo)肥大細(xì)胞活化(ATCC TIB-64, P815)。圖2是顯示實(shí) 驗(yàn)結(jié)果的柱形圖。參看圖2，當(dāng)使用約0. 5%作為哮喘治療藥的色甘酸鈉時，組胺分泌的抑制率為 50%，由此ED50(50%有效劑量)值為0. 5% ；而當(dāng)使用葉酰EFS時，ED50值為約0. 063%, 是使用色甘酸鈉時的1/8。如上文所述，可以看出，葉酰EFS具有優(yōu)良的抗組胺(抗過敏) 作用。實(shí)例3-3 抗過敏(抗過敏性反應(yīng))試驗(yàn)為了確認(rèn)葉酰EFS的抗組胺作用(已在實(shí)例3-1中鑒別)，用制備實(shí)例1中所用的 組合物1-6喂養(yǎng)小鼠7天，隨后對其經(jīng)腹膜內(nèi)注射C48/80以誘導(dǎo)抗過敏性反應(yīng)。圖3是顯 示實(shí)驗(yàn)結(jié)果的柱形圖。C48/80是一種當(dāng)經(jīng)腹膜內(nèi)注射時刺激免疫器官并在30分鐘內(nèi)誘導(dǎo)急性過敏性反 應(yīng)的物質(zhì)。在本實(shí)驗(yàn)中，計(jì)出腹膜內(nèi)注射C48/80后在預(yù)定時間段(24小時)內(nèi)死亡的試驗(yàn) 小鼠的數(shù)量。在本實(shí)驗(yàn)中，每組使用10只小鼠(BALB/C，雄性)，并且各組測試3次，并將三 次實(shí)驗(yàn)結(jié)果的平均值表示為死亡率(％ )。參看圖3，用未進(jìn)行添加的組合物1喂養(yǎng)的組的死亡率為93. 3%，在注射C48/80 后24小時內(nèi)10只小鼠中有9只死亡。用添加色甘酸鈉的組合物2喂養(yǎng)的組的死亡率(即， 對照組的死亡率)為20%。實(shí)驗(yàn)組分別用添加0. 05%到0. 3%的各種濃度葉酰EFS的組合物3到6喂養(yǎng)。添加0. 05%葉酰EFS的組合物3的實(shí)驗(yàn)組死亡率為33. 3%，組合物4的死 亡率為20%，組合物5的死亡率為6. 7%，而組合物6的死亡率為16. 7%。鑒于這些結(jié)果， 可以看出作為哮喘治療藥的色甘酸鈉對過敏性反應(yīng)發(fā)生的抑制高達(dá)80%，而且濃度為 0. 2%的葉酰EFS對過敏性反應(yīng)發(fā)生的抑制高達(dá)94%。然而，注射刺激物C48/80后24小時 內(nèi)存活的小鼠出現(xiàn)異常肛門腫脹。在約80%喂食包含色甘酸鈉的組合物2的小鼠，以及當(dāng) 分別使用包含各種濃度葉酰EFS的組合物3到6時于約10%、0%、0%和0%的小鼠中發(fā)現(xiàn) 此事件。因此，可以看出，色甘酸鈉抑制過敏性反應(yīng)的發(fā)生，并且防止小鼠死亡，但不抑制過 敏性反應(yīng)的后遺癥，而葉酰EFS抑制過敏性反應(yīng)的后遺癥以及小鼠死亡。<實(shí)例4>促進(jìn)鈣吸收的作用使用小鼠(BALB/C，雄性)執(zhí)行本實(shí)驗(yàn)，并且每天兩次，使小鼠口服各飼料?？诜?為3天，并且在口服期后，分離出小鼠的小腸。用生理鹽水洗滌所得小腸3次或更多次，并 用特氟隆勻漿器(teflon homogenizer)研磨從各組分離的小腸組織。離心所得產(chǎn)物，并分 離上清液。隨后，使用鈣定量試劑盒(Wako公司)測量吸收到小腸中的鈣量。圖4是顯示 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的柱形圖。參看圖4，與給予未進(jìn)行添加的飼料的對照組相比較，給予添加有葉酰EFS的飼料 的組的鈣吸收率增加約84%到96%。給予添加有鈣鹽的飼料的組的鈣吸收率為約4. 7%， 給予添加有酪蛋白磷酸肽(casein phosphopeptide, CPP)的飼料的組為約21 %，而給予添 加有Y-聚谷氨酸的飼料的組為約56.8%。對于葉酰EFS，當(dāng)分子量為500到1，000千道 爾頓時，鈣吸收率比分子量高于1，000千道爾頓時高。這一結(jié)果可能歸因于當(dāng)葉酰EFS的 分子量過高時，鈣離子(一種二價(jià)離子)與帶負(fù)電荷的葉酰EFS反應(yīng)，并由此可能產(chǎn)生不可 溶的沉淀。因此，當(dāng)葉酰EFS的分子量較高時，理想的是產(chǎn)生可溶的鈣_葉酰EFS復(fù)合物。<實(shí)例5>促進(jìn)生長的作用由于如實(shí)例3中所述，葉酰EFS促進(jìn)鈣吸收到腸中，故執(zhí)行本實(shí)驗(yàn)以鑒別吸收到腸 中的鈣是否影響動物骨骼生長以及血液中的生長因子(IGF-I)。對哺乳動物給予添加有葉 酰EFS的飼料2周，并測量哺乳動物股骨(大腿骨)的長度和重量，并且取血測量生長因子 IGF-1。將結(jié)果與給予添加有生理鹽水的飼料的對照組相比較。試驗(yàn)的哺乳動物為4周齡 的大鼠(SD大鼠，雄性)。對比較組給予由P&B公司制造的“真生成長元(Kikerup gold)” 產(chǎn)品，其含有五力口(Acantopanax)、紅花軒(red flower seed)、熟地黃(Rehmann iaeradix preparata)(Poria cocos) > Lill^j (Dioscoreae rhizoma) > lll^lC (Corni fructus) > 鹿角(antler)等中藥提取物作為主要成分，并在與使用葉酰EFS時相同的條件下進(jìn)行試 驗(yàn)。結(jié)果如表4和圖5中所示。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)誤差為5%或更低時，用生理鹽水喂養(yǎng)的對照組的股骨(大腿骨)的平均長 度為29. 22毫米，用P&B公司的促生長產(chǎn)品喂養(yǎng)的比較組的股骨(大腿骨)的平均長度為 29. 63毫米，而用葉酰EFS喂養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)組的股骨(大腿骨)的平均長度為30. 04毫米。與對 照組相比較，比較組具有約1. 4%的促生長作用，而實(shí)驗(yàn)組具有約3. 的促生長作用(表 4)。利用ELISA定量IGF-I (已知為血液中的生長促進(jìn)因子)。由此，對照組具有1409. 5 微克/毫升IGF-I，比較組具有1566微克/毫升IGF-I，而實(shí)驗(yàn)組具有1637. 1微克/毫升 IGF-I。也就是說，比較組中的IGF-I比對照組中的IGF-I高11. 1%，而實(shí)驗(yàn)組中的IGF-I比對照組中的IGF-I高16. 2% (圖5)。比較組和實(shí)驗(yàn)組股骨(大腿骨)的重量分別比對 照組高約1. 3%和約2. 3%。鑒于這些結(jié)果，可以看出，葉酰EFS具有促進(jìn)動物生長的作用。 此外，當(dāng)將P&B公司的促生長產(chǎn)品的生產(chǎn)成本與葉酰EFS相比較時，考慮到P&B的促生長產(chǎn) 品(真生成長元)含有維生素和營養(yǎng)素，葉酰EFS的生產(chǎn)成本是所述促生長產(chǎn)品的約1/20。 因此，從包含生產(chǎn)成本在內(nèi)的各個方面看，推定葉酰EFS具有優(yōu)良的特性。表4.葉酸的促進(jìn)骨骼生長作用 * :P < 0. 05，鄧肯多重檢驗(yàn)(Ducan' s multiple test)<實(shí)例6>改善皺紋的作用以及愈合創(chuàng)傷的作用實(shí)例6-1 關(guān)于細(xì)胞活化和促進(jìn)膠原生物合成的試驗(yàn)本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，葉酰EFS具有較高細(xì)胞活化作用。術(shù)語“細(xì)胞活化作用”的 含義包含細(xì)胞生長的活化、代謝產(chǎn)物產(chǎn)生的活化、為解毒的細(xì)胞中線粒體的活化等。細(xì)胞活 化作用可誘導(dǎo)皮膚創(chuàng)傷愈合的作用和改善皺紋的作用。通過本實(shí)驗(yàn)鑒別出，葉酰EFS促進(jìn)細(xì)胞生長和膠原的生物合成。本實(shí)驗(yàn)中所用 細(xì)胞為成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)物(人新生兒皮膚成纖維細(xì)胞；(humandermal fibroblast neonatal, HDF-N ；Gibco, Cooper, Μ. L.等人，Biomaterialsl2 :243，1991))，并且所用培養(yǎng) 基為新生兒成纖維細(xì)胞生長培養(yǎng)基(FGM，KDR公司)。由于葉酰EFS包含并入有約10% 葉酸的聚谷氨酸作為主要組分，故將葉酰EFS與普通葉酸相比較。將1 X 105個細(xì)胞/孔 的人新生兒皮膚成纖維細(xì)胞與葉酸或葉酰EFS培育24小時，拍攝培育產(chǎn)物的照片(參看 圖6)，并通過中性紅(NR)試驗(yàn)定量活細(xì)胞(Sigma ;Shao-Zeng Ζ.等人，Cell Biology andToxicology,6 :2，1990)(參看圖 7)。當(dāng)使用葉酰EFS時，細(xì)胞生長速率較高，具體地說，當(dāng)使用相同濃度葉酸時，可以 獲得比僅使用葉酸時高的細(xì)胞生長速率。此外，當(dāng)僅使用葉酸并且逐漸增加葉酸的濃度時， 細(xì)胞生長速率并未相應(yīng)增加。然而，當(dāng)使用葉酰EFS并逐漸增加葉酰EFS的濃度時，細(xì)胞生 長速率相應(yīng)明顯改變。所述結(jié)果可能源自葉酸和葉酰EFS水溶性的差異。具體地說，葉酰EFS具有高水溶性，并由此影響較多的細(xì)胞。所述促進(jìn)細(xì)胞生長作用在用于化妝品時，引起 改善皺紋的作用，而在用于藥品時，引起促進(jìn)創(chuàng)傷愈合的作用。將葉酰EFS和人新生兒皮膚成纖維細(xì)胞培育3天，并分離上清液，并且使用人1型 膠原 ELISA 試劑盒(human collagen type-lELISA kit ；Cosmo Bio 公司)定量膠原。本實(shí) 驗(yàn)中所用樣品為含有制備實(shí)例2中所用組合物2的溶液，并將4% 1，3-丁二醇添加到 樣品中，并保存。另外，為了與葉酰EFS的作用比較，制備葉酸濃度與葉酰EFS中相同的葉 酸溶液。此外，將10納克/毫升轉(zhuǎn)化生長因子β (TGF-β ；Sigma公司)(已知為膠原生物 合成的促進(jìn)因子)與葉酰EFS相比較。葉酰EFS的促進(jìn)膠原生物合成的作用顯示于圖8的柱形圖中。作為化妝品原料制 造的葉酰EFS是的液體產(chǎn)品。在圖8中，χ軸的濃度(％ )表示葉酰EFS的體積與整個培 養(yǎng)溶液的體積的比率(v/v，%)o結(jié)果表示為當(dāng)將未用任何物質(zhì)處理的組中膠原的平均值 設(shè)為100%時，各組中膠原的值相對于未用任何物質(zhì)處理的組中膠原平均值的比率。由此， 對于TGF-β，在0.63% (ν/ν, % )下，最大促進(jìn)率為22%;而對于葉酰EFS，在0.63% (ν/ ν，% )下，最大促進(jìn)率為109%。也就是說，葉酰EFS的促進(jìn)率是施用于比較組的TGF-β 的4倍，這表明可通過在人皮膚中產(chǎn)生過量膠原，獲得改善皺紋的效果。同時，當(dāng)僅使用葉 酸時，在誤差范圍內(nèi)未出現(xiàn)促進(jìn)膠原生物合成的作用。由此可以看出，葉酰EFS可以極為有 效地用作化妝品材料，具體說來，通過膠原生物合成來改善皺紋外觀的材料。實(shí)例6-2 有關(guān)化妝品組合物的改善皺紋效果的試驗(yàn)為了鑒別葉酰EFS的改善皺紋作用，將實(shí)例2中制備的組合物1(對照組)和制備 實(shí)例2中制備的組合物2 (實(shí)驗(yàn)組)施用于29位30歲女性的眼睛周圍的皺紋上，每天兩次， 持續(xù)1個月。1個月后，通過參考個體所回答的問卷以及關(guān)于皺紋營養(yǎng)素的分析結(jié)果，來評 估皺紋外觀改善的程度。在個體回答的問卷中，每個問題提供4個選項(xiàng)，S卩比較施用前和施 用后時“無改善”、“較少改善”、“明顯改善”和“很明顯的改善”。通過圖像分析評估皺紋。執(zhí)行試驗(yàn)前，使用Visioscan SV600 (CK公司)收集眼睛 下方的復(fù)制品(r印lica)，并且當(dāng)試驗(yàn)完成時，從同一位置收集復(fù)制品，通過圖像分析來測 量皺紋密度。結(jié)果表示為皺紋減少率。結(jié)果顯示于表5中，并且可以看出，當(dāng)將包含葉酰EFS的組合物2與組合物1比較 時，皺紋有所減輕，而且其外觀有所改善。此外，當(dāng)施用包含葉酰EFS的組合物2時，與施用 前相比，皺紋密度降低到約45%。所述結(jié)果表明，當(dāng)將本發(fā)明的組合物用作皮膚外用品時，可有效改善皮膚中形成 的皺紋的外觀。由此可以看出，可將葉酰EFS有效用作化妝品材料。表5.化妝品組合物引起的皮膚皺紋的改善程度和密度 <實(shí)例7>抑制由紫外線(UV)輻射引起的細(xì)胞損傷的作用在本實(shí)驗(yàn)中，本發(fā)明的發(fā)明人鑒別出，葉酰EFS抑制由UV輻射引起的細(xì)胞損傷。在人角化細(xì)胞生長培養(yǎng)基(KGM，KDR公司)中培育1 X IO5個細(xì)胞/孔的人角化細(xì) 胞原代培養(yǎng)物，連同葉酸量為約10重量％的葉酰EFS，持續(xù)約72小時，隨后用波長為306納 米的UV射線照射生長的細(xì)胞預(yù)定時間段。可通過調(diào)整發(fā)酵期間在葉酰EFS中并入葉酸的 濃度，來控制終產(chǎn)物中葉酸的濃度。在照射UV射線后，培育所得培養(yǎng)物約24小時，并通過 NR試驗(yàn)來定量活細(xì)胞。照射時間定義為在預(yù)備實(shí)驗(yàn)中約50%細(xì)胞死亡的時間。結(jié)果解釋 如下存活率(％) = (UV射線照射后各組的生長速率)/(未暴露于UV輻射的具有相同 濃度的組的生長速率)在生長各種濃度葉酰EFS的培養(yǎng)基中，對UV輻射誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷的抑制與所生長 細(xì)胞的濃度成比例。與實(shí)例6中促進(jìn)細(xì)胞生長試驗(yàn)的結(jié)果不同，當(dāng)葉酸濃度為0. 62%時獲 得最高存活率。此結(jié)果可能是因?yàn)楸M管在包含約0.62%葉酰EFS的培養(yǎng)基中生長的細(xì)胞 的生長速率低于在包含約0. 31%葉酰EFS的培養(yǎng)基中生長的細(xì)胞的生長速率，但當(dāng)使用約 0. 62%葉酰EFS時，對UV誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷的抑制率高于使用約0. 31 %葉酰EFS時的抑制 率。由此可以看出，當(dāng)將葉酰EFS添加到化妝品中時，可有效阻擋紫外線(UV)輻射。具體 地說，使用約0. 到6%葉酰EFS除有助于增加防曬產(chǎn)品的UV阻擋作用外，還有助于增加 常規(guī)制劑(例如乳液和乳霜)的UV阻擋作用。
1權(quán)利要求
一種葉酰發(fā)酵大豆提取物，其包括葉酸聚谷氨酸作為主要組分，其中所述葉酰發(fā)酵大豆提取物是通過使用微生物使包括葉酸以及大豆提取物的培養(yǎng)物發(fā)酵而產(chǎn)生。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的葉酰發(fā)酵大豆提取物，其特征在于，所述微生物選自芽孢桿 菌屬微生物或棒桿菌屬微生物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的葉酰發(fā)酵大豆提取物，其特征在于，所述微生物是枯草芽孢 桿菌。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一權(quán)利要求所述的葉酰發(fā)酵大豆提取物，其特征在于，所述 葉酰發(fā)酵大豆提取物具有抗組胺作用。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一權(quán)利要求所述的葉酰發(fā)酵大豆提取物，其特征在于，所述 葉酰發(fā)酵大豆提取物具有抗過敏作用。
6.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一權(quán)利要求所述的葉酰發(fā)酵大豆提取物，其特征在于，所述 葉酰發(fā)酵大豆提取物具有促進(jìn)鈣吸收的作用。
7.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一權(quán)利要求所述的葉酰發(fā)酵大豆提取物，其特征在于，所述 葉酰發(fā)酵大豆提取物具有促進(jìn)骨骼生長的作用。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一權(quán)利要求所述的葉酰發(fā)酵大豆提取物，其特征在于，所述 葉酰發(fā)酵大豆提取物具有促進(jìn)膠原生物合成的作用。
9.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一權(quán)利要求所述的葉酰發(fā)酵大豆提取物，其特征在于，所述 葉酰發(fā)酵大豆提取物具有改善皺紋的作用。
10.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一權(quán)利要求所述的葉酰發(fā)酵大豆提取物，其特征在于，所 述葉酰發(fā)酵大豆提取物具有促進(jìn)細(xì)胞生長的作用。
11.一種用于皮膚外用品或化妝品的組合物，其包括根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一權(quán)利要 求所述的葉酰發(fā)酵大豆提取物作為活性組分。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的用于皮膚外用品或化妝品的組合物，其特征在于，所述組 合物用于抗過敏或改善異位性皮炎。
13.根據(jù)權(quán)利要求11所述的用于皮膚外用品或化妝品的組合物，其特征在于，所述組 合物用于活化皮膚細(xì)胞的代謝、防止皺紋形成或改善皺紋外觀。
14.根據(jù)權(quán)利要求11所述的用于皮膚外用品或化妝品的組合物，其特征在于，所述組 合物用于抑制由紫外線輻射引起的細(xì)胞損傷。
15.一種保健補(bǔ)充食品組合物，其包括根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一權(quán)利要求所述的葉酰 發(fā)酵大豆提取物作為活性組分。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的保健補(bǔ)充食品組合物，其特征在于，所述保健補(bǔ)充食品組 合物是用于飲品中。
17.根據(jù)權(quán)利要求15所述的保健補(bǔ)充食品組合物，其特征在于，所述保健補(bǔ)充食品組 合物具有促進(jìn)生長的作用。
18.根據(jù)權(quán)利要求15所述的保健補(bǔ)充食品組合物，其特征在于，所述保健補(bǔ)充食品組 合物具有防止骨質(zhì)疏松癥的作用。
19.根據(jù)權(quán)利要求15所述的保健補(bǔ)充食品組合物，其特征在于，所述保健補(bǔ)充食品組 合物具有促進(jìn)鈣吸收的作用。
20.根據(jù)權(quán)利要求15所述的保健補(bǔ)充食品組合物，其特征在于，所述保健補(bǔ)充食品組合物具有防止發(fā)生過敏或改善體質(zhì)的作用。
21.—種飼料組合物，其包括根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一權(quán)利要求所述的葉酰發(fā)酵大豆 提取物作為活性組分。
22.一種促進(jìn)包含人在內(nèi)的動物的生長的藥用組合物，其包括根據(jù)權(quán)利要求1至3中任 一權(quán)利要求所述的葉酰發(fā)酵大豆提取物作為活性組分。
23.一種治療或預(yù)防骨質(zhì)疏松癥的藥用組合物，其包括根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一權(quán)利 要求所述的葉酰發(fā)酵大豆提取物作為活性組分。
24.一種促進(jìn)鈣吸收的藥用組合物，其包括根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一權(quán)利要求所述的 葉酰發(fā)酵大豆提取物作為活性組分。
25.一種制造葉酰發(fā)酵大豆提取物的方法，其是通過使用微生物使包括葉酸以及大豆 提取物的培養(yǎng)物發(fā)酵而進(jìn)行的。
全文摘要
本發(fā)明提供一種通過使用微生物使包含葉酸和大豆提取物的培養(yǎng)物發(fā)酵而產(chǎn)生的葉酰發(fā)酵大豆提取物(extract of fermented soybean，EFS)，以及提供包含所述葉酰EFS的組合物。所述葉酰EFS具有抗組胺作用、抗過敏作用、促進(jìn)鈣吸收的作用、促進(jìn)骨骼生長的作用、促進(jìn)細(xì)胞生長的作用、促進(jìn)膠原生物合成的作用、改善皺紋的作用以及抑制紫外線(UV)誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷的作用。因此，所述葉酰EFS可用于皮膚外用品或化妝品組合物、保健補(bǔ)充食品組合物、飼料組合物以及藥學(xué)組合物中。
文檔編號C12P1/04GK101883860SQ200880118877
公開日2010年11月10日 申請日期2008年10月2日 優(yōu)先權(quán)日2007年10月5日
發(fā)明者趙富仙, 金光年 申請人:株式會社多美化學(xué);金光年