一種從南極磷蝦中提取及檢測己二酸二辛酯的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種從南極磷蝦中提取及檢測己二酸二辛酯的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]己二酸二辛酯(DOA)是一種聚氯乙烯的耐寒性增塑劑，其良好的耐寒功能使得南極磷蝦可以適應(yīng)南極寒冷的氣候；D0A具有一定的耐熱、耐光和耐水性，尤其它的毒性很低，對皮膚和眼睛的刺激小，可用于制造冷凍食品的包裝薄膜、耐寒農(nóng)用薄膜；此外DOA常用于塑料和橡膠制品加工和合成樹脂的增塑劑，是重要的化工中間體。
[0003]目前，通常己二酸二辛酸是由化學(xué)合成方法進(jìn)行合成制得，比如由己二酸和正辛醇在酸催化下直接酯化制得，目前多以濃硫酸和對甲苯磺酸為催化劑，這些化學(xué)方法合成己二酸二辛酸方法普遍存在以下缺陷:產(chǎn)品質(zhì)量差、對設(shè)備腐蝕嚴(yán)重、副反應(yīng)多、后處理復(fù)雜、對環(huán)境污染嚴(yán)重(產(chǎn)生各種廢水、廢渣)等問題。
[0004]因此，針對以上問題亟需探索一種清潔提取己二酸二辛酯的方法。
[0005]南極磷4下(學(xué)名Euphausia superba),是一種生活在南極洲水域的磷好，體形似小好，它們以微小的浮游植物作為食物，身長大約6厘米，重約2克，最長壽命可達(dá)6年。南極磷蝦是海洋哺乳動(dòng)物、鳥類和魚類等南極生物主要的食物來源，是南極生態(tài)系統(tǒng)的關(guān)鍵物種。南極磷蝦含有豐富的蛋白質(zhì)；磷蝦脂類所含的脂肪酸種類多，且多為不飽和脂肪酸；南極磷蝦還含有豐富的礦物質(zhì)元素，包括鈣、磷、鐵、鋅、砸等。除此之外，磷蝦還含有多種活性物質(zhì)，如酶類、蝦青素等。據(jù)統(tǒng)計(jì)，生活在南冰洋的南極洲水域的磷蝦的數(shù)量可以達(dá)到2 X 19噸，可能的捕獲量估計(jì)在5 X 10 6到7 X 10 6噸。南極磷蝦的壽命一般為5_7年，2齡以后即成熟，體長最大可達(dá)到60nm以上。南極磷蝦有結(jié)群的習(xí)性，經(jīng)常在200m左右的淺水層形成密集的群體。由于南極磷蝦具有生物量大、分布廣等特點(diǎn)，越來越多的研究者開始關(guān)注磷蝦的開發(fā)利用價(jià)值。
[0006]目前并沒有從南極磷蝦中提取己二酸二辛酯的相關(guān)報(bào)道，更沒有從南極磷蝦中提取及檢測己二酸二辛酯的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的是提供一種操作簡單、準(zhǔn)確、可靠的南極磷蝦己二酸二辛酯的提取及檢測方法。
[0008]本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
[0009].一種從南極磷蝦中提取己二酸二辛酯的方法，包括以下步驟:
[0010](I)以南極磷蝦為原料，采用乙醇為溶劑，在20?40°C、300?400W、20?40Hz的條件下超聲提取，過濾提取液，得濾液；
[0011](2)將濾液蒸干，得到己二酸二辛酯的粗提物；
[0012](3)利用柱層析對己二酸二辛脂的粗提物進(jìn)行精制；
[0013]①制備硅膠層析柱；
[0014]②將己二酸二辛脂的粗提物加入到硅膠床上；
[0015]③洗脫:洗脫劑為二氯甲烷和甲醇的混合溶液，控制洗脫體積，收集900?1500mL的洗脫液，并對洗脫液進(jìn)行濃縮、干燥，得到己二酸二辛脂。
[0016]一種從南極磷蝦中檢測己二酸二辛酯的方法，包括以下步驟:
[0017](I)以南極磷蝦為原料，采用乙醇為溶劑，在20?40°C、300?400W、20?40Hz條件下超聲提取，過濾提取液，得濾液；
[0018](2)將濾液蒸干，得到己二酸二辛酯的粗提物；
[0019](3)利用柱層析對己二酸二辛脂的粗提物進(jìn)行精制；
[0020]①制備硅膠層析柱；
[0021]②將己二酸二辛脂的粗提物加入到硅膠床上；
[0022]③洗脫:洗脫劑為二氯甲烷和甲醇的混合溶液，控制洗脫體積，分段收集洗脫液，收集若干次，并對洗脫液進(jìn)行濃縮、干燥，得到若干份樣品液；
[0023](4)初步檢測己二酸二辛脂:
[0024]取若干份樣品液進(jìn)行TLC初步檢測，將若干份樣品液點(diǎn)于高效薄層硅膠板上，以體積比為二氯甲烷:甲醇=3?4:1為展開劑，在展缸內(nèi)展開，展距為8?1cm(優(yōu)選為9cm)，展完后晾干展板，用茴香醛染色劑染色，然后置于100-105Γ下烘烤6_10分鐘，根據(jù)顏色，選擇顏色變化為藍(lán)紫色的樣品液，即為己二酸二辛脂；
[0025](5)采用氣相色譜-質(zhì)譜檢進(jìn)一步檢測己二酸二辛脂:
[0026]氣相色譜-質(zhì)譜檢測條件:
[0027]①氣相色譜柱型號(hào):DB-1，長度:30m，內(nèi)徑:0.25mm，膜厚度:0.25 μ m，載氣:He，流速:1mT,/mi η ；
[0028]②進(jìn)樣:進(jìn)氣溫度:250°C，模式:分流，分流比:50:1，注射方式:手動(dòng)；
[0029]③升溫程序:初始溫度50°C，以2°C /min升至60°C，再以30°C /min升至250°C，保持8min ；
[0030]④進(jìn)樣量:0.2 μ L，溶劑:ΕΑ ；
[0031]⑤電離方式:電子轟擊源(ΕΙ)，四級(jí)桿溫度150°C，離子源溫度200°C ;監(jiān)測方式:全掃面(40-400amu單位)；選擇離子掃描模式(SM);電離能量:70eV ;溶劑延遲:2.06min ；
[0032]得到樣品質(zhì)譜圖，確定藍(lán)紫色的樣品液為己二酸二辛酯，并計(jì)算己二酸二辛酯的含量。
[0033]步驟(I)中，所述南極磷蝦含水量為7?8%，南極磷蝦與乙醇的添加量比例為:Ig: (5?10)mL。經(jīng)過大量的實(shí)驗(yàn)證明，當(dāng)南極磷4下與乙醇的質(zhì)量體積比為Ig: (5?10)mL時(shí)，己二酸二辛酯樣品的提取效果最好。
[0034]步驟(I)中，所述乙醇是質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95%的乙醇溶液。
[0035]步驟(2)中，具體的操作步驟為:將步驟(I)中的濾液置于旋蒸儀中，為了防止己二酸二辛脂水解，在20°C條件下蒸干，得到己二酸二辛酯的粗提物。
[0036]步驟(3)①中，制備硅膠層析柱的具體方法是:
[0037]取60_70g、200-300目硅膠在100_110°C下活化8-10小時(shí)，冷卻到室溫；加入2-3
倍體積二氯甲烷攪拌，使硅膠懸浮成糊狀勻漿；將層析柱旋塞打開，將硅膠-二氯甲烷混合物沿玻璃棒緩緩地倒入層析柱中，用洗耳球輕輕敲擊層析柱管壁驅(qū)趕氣泡，邊敲擊邊滴加二氯甲烷直至硅膠柱完全沉降；當(dāng)二氯甲烷液面恰好到達(dá)硅膠床面時(shí)，關(guān)閉旋塞。
[0038]步驟(3)②中，具體方法是:用膠頭滴管沿層析柱管壁將己二酸二辛脂粗提物緩慢滴加在硅膠床面上，注意減少對床面的擾動(dòng)。打開旋塞，使樣品慢慢進(jìn)入頂面，再用l_2mL二氯甲烷洗滌上部柱壁。
[0039]步驟(3)③中，所述二氯甲烷和甲醇體積比為8:1。采用此比例的洗脫劑洗脫效率高，洗脫時(shí)間短。
[0040]控制洗脫體積，每250?300mL收集一次洗脫液，收集若干次，收集次數(shù)大于5次，并對洗脫液進(jìn)行濃縮、干燥，得到若干份樣品液。采用此種方法，使洗脫液的收集和后續(xù)的檢測效率都得到提尚。
[0041]一種較佳的洗脫方法是:當(dāng)樣品液面恰好到達(dá)硅膠床層頂面時(shí)，加入洗脫劑開始洗脫；用體積比為二氯甲烷:甲醇=8:1的洗脫液進(jìn)行洗脫，控制洗脫體積，每300mL收集一次洗脫液，收集5次，編號(hào)1-5，并對洗脫液進(jìn)行濃縮、干燥。
[0042]步驟(4)中，所述高效薄層硅膠板的型號(hào)為GF254，對不同型號(hào)的高效薄層硅膠板進(jìn)行考察，得到型號(hào)為GF254的高效薄層硅膠板分離效果最好。
[0043]本發(fā)明的有益效果是:
[0044]本發(fā)明的方法操作簡單、準(zhǔn)確、可靠和環(huán)保，為南極磷蝦提取及檢測己二酸二辛脂提供了完整方法。
[0045]本發(fā)明從南極磷蝦中提取及檢測己二酸二辛脂，進(jìn)一步開發(fā)了南極磷蝦的利用價(jià)值，同時(shí)也為清潔的可再生能源利用提供方向。
【附圖說明】
[0046]圖1:A為實(shí)施例1中樣品的氣相色譜保留時(shí)間圖像為實(shí)施例1中標(biāo)準(zhǔn)品的氣相色譜保留時(shí)間圖像。
[0047]圖2:A為實(shí)施例1中樣品的質(zhì)譜圖為實(shí)施例1中標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)譜圖。
[0048]圖3:A為實(shí)施例2中樣品的氣相色譜保留時(shí)間圖像為實(shí)施例2中標(biāo)準(zhǔn)品的氣相色譜保留時(shí)間圖像。
[0049]圖4:A為實(shí)施例2中樣品的質(zhì)譜圖為實(shí)施例2中標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)譜圖。
[0050]圖5:A為實(shí)施例3中樣品的氣相色譜保留時(shí)間圖像為實(shí)施例3中標(biāo)準(zhǔn)品的氣相色譜保留時(shí)間圖像。
[0051]圖6:A為實(shí)施例3中樣品的質(zhì)譜圖為實(shí)施例3中標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0052]下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)一步說明。
[0053]實(shí)施例1
[0054]取干燥南極磷蝦2g，置于200mL、直徑為6cm的燒杯中，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95%乙醇10mL，在室溫、350w、40kHz超聲提取，提取10分鐘，過濾提取液，將濾液置于旋蒸儀中20°C
蒸干，得到己二酸二辛酯的粗提物。
[0055]取60g、200-300目硅膠在100°C下活化10小時(shí)，冷卻至室溫；加入2倍體積二氯甲烷攪拌，使硅膠懸浮成糊狀勻漿；將層析柱旋塞打開，將硅膠-二氯甲烷混合物沿玻璃棒緩緩地倒入層析柱中，用洗耳球輕輕敲擊層析柱管壁驅(qū)趕氣泡，邊敲擊邊滴加