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具有最優(yōu)的礦物和金屬組成、低雜質(zhì)和低且穩(wěn)定的三甲胺水平的磷蝦油制劑的制作方法

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具有最優(yōu)的礦物和金屬組成、低雜質(zhì)和低且穩(wěn)定的三甲胺水平的磷蝦油制劑的制作方法
【專利摘要】一種磷蝦油制劑,其包含下降量的5mgN/100g或更低的三甲胺,或多于700ppm重量的內(nèi)源鈣和/或低于1200ppm重量的鈉。制備這樣的磷蝦油制劑的方法,其包括用一種或多種極性溶劑和一種或多種非極性溶劑的溶劑混合物從磷蝦中提取磷蝦油的步驟。治療需要治療的人體的方法,其包括向人體施用一定量的這樣的磷蝦油制劑。
【專利說(shuō)明】具有最優(yōu)的礦物和金屬組成、低雜質(zhì)和低且穩(wěn)定的三甲胺水 平的磷蝦油制劑
[0001 ]本發(fā)明要求在2014年2月11日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)系列第61/938,599號(hào)的優(yōu) 先權(quán),其公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用的方式整體并入本文。
技術(shù)領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明涉及具有低和穩(wěn)定量的三甲胺(TMA)和/或最優(yōu)的礦物和金屬含量和/或低 量的雜質(zhì)的磷奸油制劑。
【背景技術(shù)】
[0003] 流行病學(xué)和臨床研究已顯示食用魚類和海鮮的各種健康益處。這些積極的健康結(jié) 果歸因于在食物中長(zhǎng)鏈n-3多不飽和脂肪酸(LC-PUFA)的存在,包括二十碳五烯酸(EPA)和 二十二碳六烯酸(DHA) (Ruxton等人,2004)。研究已表明,連接至磷脂質(zhì)的n-3LC-PUFA的生 物利用度優(yōu)于連接至甘油的n-3LC-PUFA的生物利用度(ramprasath等人,2014 ; Schuchardt&Hahn 2013)〇
[0004] 礦物質(zhì)是正常的生理過(guò)程所必需的,且是健康飲食的必要部分。磷蝦累積金屬和 礦物并因此可在遞送這些營(yíng)養(yǎng)素方面發(fā)揮重要作用(Tou等人,2007)。
[0005] 鈣對(duì)于多種生理功能是一種必需的常量礦物質(zhì),且例如對(duì)于強(qiáng)壯骨骼的適當(dāng)形成 與維持和血管的收縮與舒張是必要的。鈣對(duì)于遍及人體的酶的正常運(yùn)作也是必要的(Power 等人,1999)。
[0006] 具有外源(合成的或來(lái)自其他來(lái)源)必要金屬和礦物例如鈣的純磷蝦油的補(bǔ)充具 有數(shù)個(gè)潛在的劣勢(shì):(1)在外源成分和磷蝦油之間的未知復(fù)合物的潛在形成,其可對(duì)磷蝦油 的消化、吸收和生物活性產(chǎn)生影響;(2)外源礦物或金屬和磷蝦油之間下降的協(xié)同作用;(3) 活性成分的潛在分解和儲(chǔ)存壽命穩(wěn)定性的下降;(4)可能由外源化合物產(chǎn)生的過(guò)程產(chǎn)生的 不合需要的污染物的累積;和(5)增加的引起過(guò)敏的可能性。
[0007] 另外一種對(duì)人體重要的礦物為鈉。人體需要少量的鈉以維持體液的平衡和用于器 官的正常運(yùn)作。然而,眾所周知的是過(guò)量的鈉攝入對(duì)人體健康有負(fù)面影響。飲食所引入的水 中的高水平的鈉進(jìn)入血流增加血壓(也稱為高血壓),因此,心臟病,腎病和中風(fēng)的風(fēng)險(xiǎn)增加 (Aburto等人,2013)。因此,世界衛(wèi)生組織鼓勵(lì)飲食(包括食物和膳食補(bǔ)充)的消費(fèi)只包含最 少量的鈉(世界衛(wèi)生組織:成人和兒童鈉攝入量指南,2012)。
[0008] 臨床試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),磷蝦油的食用通過(guò)顯著降低甘油三酯、總膽固醇和LDL-膽固醇水 平積極地控制高血脂患者中的血脂。同時(shí),磷蝦油的食用可增加 HDL-膽固醇水平并降低血 液中葡萄糖的水平。因此,磷蝦油消費(fèi)者代表特別易受鈉的血壓升高效果的影響的人群。因 此,在磷蝦油補(bǔ)充劑中鈉含量應(yīng)盡可能地最小化。
[0009] 決定磷蝦油質(zhì)量的另一個(gè)參數(shù)是存在的三甲胺(TMA)的量。TMA是包括在總揮發(fā)性 氮(TVN)中的一種分子并在死亡的生物體的分解過(guò)程中產(chǎn)生。因此,高水平的該化合物表明 所測(cè)試的海洋原料不新鮮。特別地,歐盟對(duì)魚衛(wèi)生的指令提供了一種指示,根據(jù)該指示,如 果魚的感官檢查顯示任何對(duì)其新鮮度的懷疑,檢查員必須實(shí)施基于TVN/TMA的化學(xué)測(cè)試 (1991年7月22日的理事會(huì)指令91/493/EEC;指定水產(chǎn)品的生產(chǎn)和放置于市場(chǎng)的衛(wèi)生條件; 官方雜志L268,24/09/1991,ρρ· 0015-0034)。因此,用于食品生產(chǎn)的海洋原料(例如,磷蝦) 的TMA水平經(jīng)常作為材料的腐敗/新鮮度和對(duì)于進(jìn)一步處理材料的潛在需要的指示物 (Baixas-Nogueras S et al.;Trimethylamine and total volatile basic nitrogen determination by flow injection/gas diffusion in Mediterranean hake (Merluccius merluccius);Journal of Agricultural and Food Chemistry Apr 49(4): 1681-1686;2001)〇
[0010]食物中較低的TMA水平是重要的且是有利的,具有多個(gè)原因:AIHA在2005年報(bào)道 TMA的吸附可導(dǎo)致人體的呼吸刺激。另一個(gè)來(lái)源(De i chmann和Gerarde 1969)報(bào)道了"甲胺" 吸入可導(dǎo)致鼻和喉的刺激、喉收縮、呼吸困難和肺水腫(ACUTE EXPO SURE GUIDE LI NE LEVELS(AEGLs)FOR TRIMETHYLAMINE(CAS Reg.No.75-50-3), INTERIM)〇
[0011]已知TMA作為當(dāng)酶或細(xì)菌仍然為活性時(shí)未加工的死亡海洋生物的降解的一部分而 形成(D.Greed and P.D.Tom,Measuring,Maintaining Freshness in Aquaculture Products ,Global Aquaculture Advocate,Sept/Oct 2006,p 40-42)。因此假定一旦海洋 材料被加工(通常通過(guò)加熱和干燥),則其不再包含酶和細(xì)菌活性,TMA水平將不增加。此外, 假定一旦使用溶劑提取、熱處理或二者從這樣的死亡海洋生物體中提取油,油中TMA的水平 將不增加。因此,一旦實(shí)現(xiàn)磷蝦油中低的TMA,則預(yù)期TMA水平在存儲(chǔ)過(guò)程中保持穩(wěn)定(因?yàn)?無(wú)任何酶或細(xì)菌活性的存在),并因此對(duì)于磷蝦油不實(shí)施TMA水平隨時(shí)間的單獨(dú)測(cè)試。現(xiàn)在 發(fā)現(xiàn)當(dāng)使用常規(guī)提取方法提取時(shí),TMA水平可隨時(shí)間而增加。因此,需要提供實(shí)現(xiàn)在存儲(chǔ)過(guò) 程中保持穩(wěn)定的低TM水平的提取方法。
[0012]還需要磷蝦油具有低的雜質(zhì)水平(例如膽堿、甜菜堿和氨基酸)、高內(nèi)部抗氧化能 力和最優(yōu)的脂肪酶活性。富含Omega-3的油例如海洋油和特別地磷蝦油是高度易于氧化為 脂質(zhì)過(guò)氧化物和其他二次氧化產(chǎn)物。氧化的油可具有改變的生物活性,使它們無(wú)效或有害。 因此,海洋油具有充分的內(nèi)部抗氧化能力以減少由在這些海洋油存儲(chǔ)過(guò)程中產(chǎn)生的自由基 導(dǎo)致的氧化過(guò)程是非常重要的。需要最優(yōu)的脂肪酶活性以使脂肪酸能夠水解和吸收。
[0013] 盡管遞送具有最優(yōu)的內(nèi)源礦物和金屬含量(特別地高鈣水平和低鈉水平)、低水平 的雜質(zhì)(例如膽堿、甜菜堿和氨基酸)和低且穩(wěn)定的TM水平的磷蝦油制劑非常重要,然而本 發(fā)明人驚訝地發(fā)現(xiàn)目前作為保健營(yíng)養(yǎng)品(nutraceutical)市售的磷蝦油產(chǎn)品不含最優(yōu)水平 的礦物和金屬且包含高量的TMA。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0014] 本發(fā)明涉及具有低和穩(wěn)定量的三甲胺(TMA)和/或最優(yōu)礦物和金屬含量和/或低量 的雜質(zhì)的磷蝦油制劑和組合物。
[0015] 在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中,磷蝦油制劑包含磷蝦油,其中所述磷蝦油具有5mgN/ l〇〇g或更低濃度的三甲胺。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中,所述磷蝦油在40°c或更低溫度下 存儲(chǔ)三個(gè)月,優(yōu)選六個(gè)月后具有5mgN/100g或更低濃度的TMA。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中, 所述磷蝦油具有多于700ppm重量的內(nèi)源鈣和/或少于1200ppm重量的鈉。在本發(fā)明的其他實(shí) 施方案中,所述磷蝦油具有多于500ppm重量的內(nèi)源鎂。在本發(fā)明的甚至其他實(shí)施方案中,所 述磷蝦油具有少于450ppm重量的游離膽堿和/或少于1000 ppm重量的甜菜堿和/或少于 0.3g/100g的總氨基酸和/或少于0.15g/100g的以下各氨基酸:丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、 胱氨酸、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、蛋氨酸、鳥氨酸、苯丙氨酸、脯 氨酸、絲氨酸、羥脯氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸和纈氨酸。
[0016] 本發(fā)明也提供包含磷蝦油的磷蝦油制劑,其中所述磷蝦油具有多于700ppm重量的 濃度的內(nèi)源鈣和/或少于1200ppm重量的鈉。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中,所述磷蝦油包括 多于500ppm重量的內(nèi)源鎂。在本發(fā)明的某些其他實(shí)施方案中,所述磷蝦油具有450ppm重量 的游離膽堿和/或少于1000 ppm重量的甜菜堿和/或少于0.3g/100g的總氨基酸和/或少于 0.15g/100g的以下各氨基酸:丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、胱氨酸、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、 異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、蛋氨酸、鳥氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、羥脯氨酸、蘇氨酸、 色氨酸、酪氨酸和纈氨酸。
[0017] 本發(fā)明也提供了包含磷蝦油制劑的磷蝦油組合物,其中所述磷蝦油制劑具有多于 700ppm重量的濃度的內(nèi)源鈣和/或少于1200ppm重量的鈉。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中,所 述磷蝦油制劑包括多于500ppm重量的內(nèi)源鎂。在本發(fā)明的某些其他實(shí)施方案中,所述磷蝦 油制劑具有450ppm重量的游離膽堿和/或少于1000 ppm重量的甜菜堿和/或少于0.3g/100g 的總氨基酸和/或少于0.15g/100g的以下各氨基酸:丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、胱氨酸、谷 氨酸、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、蛋氨酸、鳥氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨 酸、羥脯氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸和纈氨酸。
[0018] 本發(fā)明提供一種組合物、膠囊、保健營(yíng)養(yǎng)品或膳食補(bǔ)充劑,其包括本文描述的任一 磷蝦油制劑,或包括本文描述的任一磷蝦油制劑和一種或多種藥用輔料的藥物組合物。
[0019 ]本發(fā)明提供一種包含磷蝦油制劑的組合物,其中所述磷蝦油制劑具有5mgN/1 OOg 或更低濃度的三甲胺。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中,所述磷蝦油制劑在40°C或更低溫度下 存儲(chǔ)三個(gè)月,優(yōu)選六個(gè)月后具有5mgN/100g或更低濃度的三甲胺。
[0020] 本發(fā)明提供一種包含磷蝦油制劑的組合物,其中所述磷蝦油制劑具有多于700ppm 重量的內(nèi)源鈣和/或少于1200ppm重量的鈉。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中,所述磷蝦油制劑 包括多于500ppm重量的內(nèi)源鎂。在本發(fā)明的某些其他實(shí)施方案中,所述磷蝦油制劑包括 450ppm重量的游離膽堿和/或少于1000 ppm重量的甜菜堿和/或少于0.3g/100g的總氨基酸 和/或少于0.15g/100g的以下各氨基酸:丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、胱氨酸、谷氨酸、甘氨 酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、蛋氨酸、鳥氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、羥脯氨 酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸和纈氨酸。在本發(fā)明的某些其他實(shí)施方案中,所述組合物不包括 來(lái)自非磷蝦源的礦物或金屬。在本發(fā)明的某些其他實(shí)施方案中,所述組合物為膠囊、保健營(yíng) 養(yǎng)品、膳食補(bǔ)充劑或包括一種或多種藥物輔料的藥物組合物。
[0021] 本發(fā)明提供一種包括非磷蝦油制劑和磷蝦油制劑的組合物,并包含5mgN/100g或 更低的三甲胺。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中,所述磷蝦油制劑在40°C或更低溫度下存儲(chǔ)三 個(gè)月,優(yōu)選六個(gè)月后包括5mgN/100g或更低的TMA。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中,所述磷蝦油 包括多于700ppm重量的內(nèi)源鈣和/或少于1200ppm重量的鈉。在本發(fā)明的其他實(shí)施方案中, 所述磷蝦油制劑包括多于500ppm重量的內(nèi)源鎂。在本發(fā)明的再一些其他實(shí)施方案中,所述 磷蝦油制劑包括450ppm重量的游離膽堿和/或少于1000 ppm重量的甜菜堿和/或少于0.3g/ 100g的總氨基酸和/或少于0.15g/100g的以下各氨基酸:丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、胱氨 酸、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、蛋氨酸、鳥氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、 絲氨酸、羥脯氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸和纈氨酸。
[0022]本發(fā)明提供了一些制備磷蝦油制劑的方法,包括使用一種或多種極性溶劑和一種 或多種非極性溶劑的溶劑混合物從磷蝦中提取磷蝦油的步驟。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案 中,所述方法對(duì)于使磷蝦油制劑中的鈉降低為低于磷蝦油制劑中內(nèi)源鈣水平的水平是有效 的。在本發(fā)明的某些其他實(shí)施方案中,所述方法對(duì)于將磷蝦油制劑中的鈉降低至少于 1200ppm重量和維持磷蝦油制劑中的內(nèi)源鈣多于700ppm重量是有效的。
[0023]在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中,在所述方法中的溶劑混合物包含己烷和乙醇。在本 發(fā)明的某些其他實(shí)施方案中,所述溶劑混合物包含體積比為約9:1的己烷和乙醇。在本發(fā)明 的某些其他實(shí)施方案中,所述方法包括使用水洗滌提取的磷蝦油的一個(gè)或多個(gè)步驟。和在 本發(fā)明的某些其他實(shí)施方案中,當(dāng)實(shí)施所述至少一個(gè)洗滌步驟時(shí),所提取的磷蝦油溶解在 有機(jī)溶劑混合物中。
[0024] 本發(fā)明提供由包含使用一種或多種極性溶劑和一種或多種非極性溶劑的溶劑混 合物從磷蝦中提取磷蝦油的步驟的方法制備的磷蝦油制劑。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中, 所述溶劑混合物包含體積比為約9:1的己烷和乙醇。
[0025] 本發(fā)明提供方法和在方法中使用的組合物,所述方法降低心血管疾病或病況 (CVD)風(fēng)險(xiǎn)因子(例如降低總膽固醇、LDL-膽固醇或甘油三酯,或增加 HDL-膽固醇的量)和/ 或治療或預(yù)防CVD,和/或改善患有CVD患者的狀況,和/或改善患有認(rèn)知疾病或病況的患者 的狀況,和/或治療或預(yù)防認(rèn)知疾病或病況,和/或治療或預(yù)防炎癥或炎性疾病,和/或改善 患有炎癥或炎性疾病或病況的患者的狀況,和/或治療或預(yù)防抑郁癥,和/或改善患有抑郁 癥患者的狀況,和/或治療或預(yù)防經(jīng)前綜合征,和/或改善患有經(jīng)前綜合征的患者的狀況。所 述方法包括向有需要的人體施用有效量的一種磷蝦油制劑,其中所述磷蝦油制劑具有 5mgN/100或更低濃度的三甲胺,和/或一種磷蝦油制劑,其中所述磷蝦油制劑包含5mgN/100 或更低三甲胺。
[0026] 本發(fā)明提供方法和在方法中使用的組合物,所述方法降低CVD風(fēng)險(xiǎn)因子(例如降低 總膽固醇、LDL-膽固醇或甘油三酯,或增加 HDL-膽固醇的量)和/或治療或預(yù)防CVD,和/或改 善患有CVD患者的狀況,和/或改善患有認(rèn)知疾病或病況的患者的狀況,和/或治療或預(yù)防認(rèn) 知疾病或病況,和/或治療或預(yù)防炎癥或炎性疾病,和/或改善患有炎癥或炎性疾病或病況 的患者的狀況,和/或治療或預(yù)防抑郁癥,和/或改善患有抑郁癥患者的狀況,和/或治療或 預(yù)防經(jīng)前綜合征,和/或改善患有經(jīng)前綜合征的患者的狀況。所述方法包括向有需要的人體 施用有效量的一種磷蝦油制劑,其中所述磷蝦油制劑具有多于700ppm重量的濃度的內(nèi)源鈣 和/或少于1200ppm重量的鈉,和/或有效量的一種磷蝦油制劑,其中所述磷蝦油制劑具有多 于700ppm重量的濃度的內(nèi)源鈣和/或少于1200ppm重量的鈉。
[0027] 在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中,所述磷蝦油制劑是通過(guò)包含使用一種或多種極性溶 劑和一種或多種非極性溶劑的溶劑混合物從磷蝦中提取磷蝦油的步驟的方法制備。
【附圖說(shuō)明】
[0028]圖1是顯示本發(fā)明的磷蝦油制劑(根據(jù)實(shí)施例3B制備)和對(duì)照磷蝦油(品牌C)在 517nm處的DPPH吸收的圖。
【具體實(shí)施方式】
[0029] 本發(fā)明首次公開(kāi)具有最優(yōu)水平的礦物和金屬、低水平的雜質(zhì)和低且穩(wěn)定水平的 TM的磷蝦油及其制劑。
[0030] 術(shù)語(yǔ)"內(nèi)源鈣水平"或術(shù)語(yǔ)"內(nèi)源鎂水平"指從磷蝦生物質(zhì)中提取的鈣或鎂的水平, 不添加天然或合成的鈣或鎂。
[0031] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,所述磷蝦油包含高的內(nèi)源鈣水平,優(yōu)選多700ppm;低 的鈉水平,優(yōu)選< 1200ppm;和/或低的TM水平,優(yōu)選<5mgN/100g,其中所述TMA水平在室溫 下存儲(chǔ)一個(gè)月的時(shí)間的過(guò)程中穩(wěn)定保持在<5mgN/100g下。
[0032]根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案,在磷蝦油制劑中內(nèi)源鈣水平為高于700ppm,優(yōu)選 高于1000卩卩111,更優(yōu)選高于1200卩卩111,甚至更優(yōu)選高于2000且最優(yōu)選高于3000或400(^卩1]1。 [0033]根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案,在磷蝦油制劑中鈉的水平為低于1200ppm,優(yōu)選低 于1100卩卩111,更優(yōu)選低于1000,甚至更優(yōu)選低于900卩卩1]1且最優(yōu)選低于700或50(^卩1]1。
[0034]根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案,在磷蝦油制劑中鈣的水平為高于鈉的水平,優(yōu)選 Ca/Na的比率為>1,更優(yōu)選>2,甚至更優(yōu)選>3且最優(yōu)選>4。
[0035]在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,在存儲(chǔ)至少4個(gè)月后,磷蝦油制劑的TMA水平不增加 高于5mgN/100g,優(yōu)選4mgN/100g,更優(yōu)選3mgN/100g且最優(yōu)選lmgN/100g。在本發(fā)明的另一個(gè) 實(shí)施方案中,在存儲(chǔ)至少5個(gè)月后,至少6個(gè)月后,至少7個(gè)月后,至少8個(gè)月后,至少9個(gè)月后, 至少10個(gè)月后,至少11個(gè)月后,或至少一年后,磷4下油制劑的TMA水平增加不高于5mgN/ I OOg,優(yōu)選 4mgN/1 OOg,更優(yōu)選 3mgN/1 OOg 且最優(yōu)選 ImgN/1 OOg。
[0036]在本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中,在室溫下(20-30 °C )至少6個(gè)月的時(shí)間內(nèi),或在 40 °C或更低下至少3個(gè)月的時(shí)間內(nèi),磷蝦油制劑的TMA水平增加不高于5mgN/100g,優(yōu)選 4mgN/1 OOg,更優(yōu)選 3mgN/1 OOg 且最優(yōu)選 ImgN/1 OOg。
[0037]在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,磷蝦油制劑包含高的內(nèi)源鎂水平,高于500ppm,優(yōu)選 高于750ppm,更優(yōu)選高于1000 ppm和最優(yōu)選高于2000ppm。
[0038] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,磷蝦油制劑包含低的膽堿水平,優(yōu)選低于450ppm,更 優(yōu)選低于300ppm,甚至更優(yōu)選低于200ppm且最優(yōu)選低于lOOppm。
[0039] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,磷蝦油制劑包含低的甜菜堿水平,優(yōu)選低于 1000 ppm,更優(yōu)選低于750ppm或500ppm,甚至更優(yōu)選低于250ppm且最優(yōu)選低于50ppm或低于 IOppm0
[0040] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,磷蝦油制劑包含低的總氨基酸水平,優(yōu)選低于0.3g/ 100g,更優(yōu)選低于〇 · lg/l〇〇g和最優(yōu)選低于〇 · 〇5g/100g。
[0041] 根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案,磷蝦油制劑包含低水平的下面的氨基酸:丙氨酸、 精氨酸、天冬氨酸、胱氨酸、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、蛋氨酸、鳥 氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、羥脯氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸和纈氨酸。優(yōu)選地,所述 氨基酸中的每個(gè)的水平低于0.15g/100g或0 . lg/100g,優(yōu)選低于0.05g/100g,更優(yōu)選低于 0 · 04g/100g,甚至更優(yōu)選低于0 · 02g/100g且最優(yōu)選低于0 · 006g/100g。
[0042] 根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案,磷蝦油制劑包含至少2g/100g的磷脂質(zhì),優(yōu)選高于 10g/100g,更優(yōu)選高于25g/100g,且最優(yōu)選高于35g/100g或40g/100g的磷脂質(zhì)。
[0043] 根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案,磷蝦油制劑包含至少3%EPA,優(yōu)選多于5%EPA,更 優(yōu)選多于6%EPA且最優(yōu)選多于8%或11 %EPA。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案,磷蝦油制劑 包含至少2%DHA,優(yōu)選多于3%DHA且更優(yōu)選多于5%或9%DHA。
[0044] 本發(fā)明的磷蝦油制劑可為流體油、粉末、顆粒、蠟狀物、糊狀物、油或水性乳液形式 以及任何使其能夠使用的形式。在本發(fā)明的另一個(gè)方面中,所述磷蝦油制劑與營(yíng)養(yǎng)、藥物或 保健營(yíng)養(yǎng)組合物或功能或醫(yī)療食物結(jié)合使用或?yàn)樗鼈兊囊徊糠帧?br>[0045] 如本文所用,營(yíng)養(yǎng)組合物可為任何營(yíng)養(yǎng)組合物,包括但不限于,人乳脂替代品、嬰 兒配方產(chǎn)品、乳制品、奶粉、飲料、冰淇淋、餅干、大豆產(chǎn)品、烘焙食品(bakery)、面粉糕餅和 面包、醬汁、湯、預(yù)制食品、冷凍食品、調(diào)味品、糖食、油脂、人造黃油、豐盛的食物(spread)、 填料、谷類、即食產(chǎn)品、嬰兒食品、幼童食品、酒吧食品(bar)、快餐、糖果和巧克力產(chǎn)品。
[0046] 如本文所用,功能食品可為任何功能食品,包括但不限于,乳制品、冰淇淋、餅干、 大豆產(chǎn)品、烘焙食品、面粉糕餅、蛋糕和面包、即食產(chǎn)品、醬汁、湯、預(yù)制食品、冷凍食品、調(diào)味 品、糖食、油脂、人造黃油、豐盛的食物、填料、谷類、即食產(chǎn)品、飲料和混合飲料(shake)、嬰 兒食品、酒吧食品、快餐、糖果和巧克力廣品。
[0047] 如本文所用,保健營(yíng)養(yǎng)組合物可為任何保健營(yíng)養(yǎng)品,其可為可被認(rèn)為是食物或食 物的一部分并提供醫(yī)療或健康益處的任何物質(zhì),所述醫(yī)療或健康益處包括疾病或病況的預(yù) 防和治療。這樣的保健營(yíng)養(yǎng)組合物包括但不限于,食品添加劑,食品補(bǔ)充劑,膳食補(bǔ)充劑,基 因工程食品例如蔬菜,草藥食品,和加工食品例如谷類、湯類和飲料類和刺激性功能食品, 醫(yī)療食品和藥物食品(Pharmafood)。膳食補(bǔ)充劑可以軟凝膠膠囊、片劑、糖漿劑和其他已知 的膳食補(bǔ)充劑遞送系統(tǒng)的形式被遞送。
[0048] 藥物或保健營(yíng)養(yǎng)組合物可為本領(lǐng)域中通常使用的多種劑量遞送形式中任一種。適 合于口服的藥物組合物可呈現(xiàn)為離散劑量單元,例如丸劑、片劑、小球、糖衣藥丸(dragges) 或膠囊,或?yàn)榉勰┗蝾w粒,或?yàn)槿芤骸腋∫夯螋齽?br>[0049] 本發(fā)明組合物的合適的給藥途徑為口服、口腔含化給藥、舌下給藥、通過(guò)食管給 藥、局部給藥、經(jīng)皮給藥或腸胃外給藥(包括皮下給藥、肌肉給藥、靜脈內(nèi)給藥和皮內(nèi)給藥)。 在一個(gè)實(shí)施方案中,所述組合物是口服施用的。
[0050] 本發(fā)明還提供一種藥物組合物,其中磷蝦油制劑與(藥學(xué)上)可接受的輔助物和任 選的其他治療劑混合。所述輔助物從與組合物的其他成分相容的意義上說(shuō)必須是"可接受 的"且對(duì)于其受者是無(wú)毒害的。
[0051] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明的藥物組合物還包含至少一種額外的藥物活 性劑。
[0052]本發(fā)明提供一種方法,所述方法降低CVD風(fēng)險(xiǎn)因子(例如降低總膽固醇、LDL-膽固 醇或甘油三酯,或增加 HDL-膽固醇的量)和/或治療或預(yù)防CVD,和/或改善患有CVD患者的狀 況,和/或改善患有認(rèn)知疾病或病況的患者的狀況,和/或治療或預(yù)防認(rèn)知疾病或病況,和/ 或治療或預(yù)防炎癥或炎性疾病,和/或改善患有炎癥或炎性疾病或病況的患者的狀況,和/ 或治療或預(yù)防抑郁癥,和/或改善患有抑郁癥患者的狀況,和/或治療或預(yù)防經(jīng)前綜合征, 和/或改善患有經(jīng)前綜合征的患者的狀況。所述方法包括向有需要的人體施用有效量的一 種磷蝦油制劑,其中所述磷蝦油制劑包含5mgN/1 OOg或更低的三甲胺。
[0053]本發(fā)明提供一種方法,所述方法降低CVD風(fēng)險(xiǎn)因子(例如降低總膽固醇、LDL-膽固 醇或甘油三酯,或增加 HDL-膽固醇的量)和/或治療或預(yù)防CVD,和/或改善患有CVD患者的狀 況,和/或改善患有認(rèn)知疾病或病況的患者的狀況,和/或治療或預(yù)防認(rèn)知疾病或病況,和/ 或治療或預(yù)防炎癥或炎性疾病,和/或改善患有炎癥或炎性疾病或病況的患者的狀況,和/ 或治療或預(yù)防抑郁癥,和/或改善患有抑郁癥患者的狀況,和/或治療或預(yù)防經(jīng)前綜合征, 和/或改善患有經(jīng)前綜合征的患者的狀況。所述方法包括向有需要的人體施用有效量的一 種磷蝦油制劑,其中所述磷蝦油制劑包含多于700ppm重量的內(nèi)源鈣和少于1200ppm重量的 鈉。
[0054]如本文所用,術(shù)語(yǔ)"CVD風(fēng)險(xiǎn)因子"應(yīng)被理解為除其他外包含高血液LDL或總膽固醇 和甘油三酯水平,低血清HDL膽固醇,升高的血清同型半胱氨酸,高血壓,炎癥,糖尿病和超 重和肥胖(NHLBI.(2011 )What Are Coronary Heart Disease Risk Factors?)。
[0055]如本文所用,術(shù)語(yǔ)"CVD"應(yīng)被理解為包含任何心血管疾病或病況。這樣的心血管疾 病或病況的非限制性實(shí)例包括風(fēng)濕性心臟病、心臟瓣膜疾病、動(dòng)脈瘤、動(dòng)脈硬化、外周動(dòng)脈 疾病、心絞痛、冠狀動(dòng)脈疾病、冠心病、心肌梗死、猝死、腦血管疾病、中風(fēng)、短暫性腦缺血發(fā) 作、心肌癥、心包疾病、先天性心臟病和心力衰竭。
[0056]如本文所用,術(shù)語(yǔ)"認(rèn)知疾病或病況"應(yīng)被理解為包含任何認(rèn)知疾病或病況。這樣 的認(rèn)知疾病或病況的非限制實(shí)例為注意力缺失癥(ADD),注意缺失過(guò)動(dòng)癥(ADHD)、閱讀障 礙、年齡相關(guān)的記憶缺陷和學(xué)習(xí)障礙、健忘癥、輕度認(rèn)知障礙、認(rèn)知受損非癡呆、阿爾茨海默 病前疾病、阿爾茨海默病、帕金森氏病、癡呆前綜合癥、癡呆、與年齡有關(guān)的認(rèn)知減退、認(rèn)知 劣化、中度精神損害、由于變老的精神衰退、影響腦電波強(qiáng)度和/或腦葡糖糖利用的狀況、壓 力、焦慮、抑郁、行為障礙、集中和注意力障礙、情緒惡化、通常的認(rèn)知和心理健康、神經(jīng)退行 性疾病、激素失調(diào)或其任何組合。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中,所述認(rèn)知病況為記憶缺陷。
[0057]如本文所用,術(shù)語(yǔ)"炎性疾病"應(yīng)被理解為包含任何炎性疾病或病況。這樣的炎性 疾病或病況的非限制性實(shí)例包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、哮喘、前列腺炎、結(jié)腸炎、克羅 恩氏病、皮炎、憩室炎、血管球性腎炎、間質(zhì)性膀胱炎、腸道易激綜合癥、腎炎、盆腔炎、牙周 炎、再灌注損傷、結(jié)節(jié)病、移植排斥和血管炎。
[0058]如本文所用,術(shù)語(yǔ)"改善狀況"應(yīng)被理解為包含:減輕與疾病、病況相關(guān)的不需要的 癥狀,或病理狀況;在癥狀發(fā)生前預(yù)防癥狀的表現(xiàn);減緩疾病或病況的發(fā)展;減緩疾病或病 況的惡化;減緩在疾病或病況的漸進(jìn)性(或慢性)階段造成的不可逆性損害;延遲(漸進(jìn)性) 疾病或病況的發(fā)作;降低疾病或病況的嚴(yán)重性;治愈疾病或病況;阻止疾病或病況共同發(fā)生 (例如在通常有所述疾病傾向的個(gè)體中)或上述任何組合。
[0059] 本文所述的制劑的有效量是在所公開(kāi)的狀況或疾病的治療和管理中提供治療益 處的該制劑的劑量。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到所述有效量可變化,例如,根據(jù)已知的因素, 例如本發(fā)明制劑的藥效和藥代動(dòng)力學(xué)特征和其施用模式和途徑,接收所述制劑的受體的年 齡、性別、健康和體重,治療的頻率和所需的效果,和并發(fā)治療的類型。本領(lǐng)域技術(shù)人員還會(huì) 認(rèn)識(shí)到可基于在該專利申請(qǐng)書的公開(kāi)內(nèi)容和本領(lǐng)域中的常識(shí)確定制劑的有效量或劑量。
[0060] 可通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)臨床技術(shù)來(lái)確定對(duì)本文公開(kāi)的狀況和疾病的治療和/或管理有效的制 劑的量。體外或體內(nèi)試驗(yàn)可任選地用于幫助確定最優(yōu)劑量范圍。本發(fā)明也提供一種制備磷 蝦油制劑的方法。描述由海洋生物質(zhì)制備海洋油的現(xiàn)有技術(shù)主要集中在優(yōu)化油的產(chǎn)率和脂 質(zhì)組分(PCT公開(kāi)WO 00/23546(Beaudoin)、W0 00/23546(根據(jù)Folch et al.,J Biol Chem. 1957; 226:497-509的提取),Yamaguchi等人,1986)。令人驚奇地,本發(fā)明的發(fā)明人已 發(fā)現(xiàn)對(duì)油在營(yíng)養(yǎng)、穩(wěn)定性和安全方面具有關(guān)鍵效果的非脂質(zhì)物質(zhì)可通過(guò)制備油制劑的過(guò)程 控制。驚奇地發(fā)現(xiàn)從磷蝦提取磷蝦油的方法顯著影響所形成磷蝦油制劑中礦物、金屬和雜 質(zhì)(例如膽堿、甜菜堿和氨基酸)的量。
[0061] 還驚奇地發(fā)現(xiàn)可通過(guò)提取過(guò)程和任選地通過(guò)后續(xù)的洗滌過(guò)程控制具體礦物和金 屬剖面。
[0062] 此外,本發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)從磷蝦中提取磷蝦油的過(guò)程隨時(shí)間影響油的TMA水平。 正如在實(shí)施例5中顯示的,常規(guī)提取方法形成含隨時(shí)間增加的TMA水平和不需要的礦物和金 屬組分的磷蝦油制劑。
[0063] 這些獨(dú)特的發(fā)現(xiàn)使本發(fā)明人能夠形成一種新型磷蝦油組合物,其包含最優(yōu)的礦物 和金屬組分、低的雜質(zhì)(例如膽堿、甜菜堿和氨基酸)和低水平的TMA,所述TM水平在長(zhǎng)的時(shí) 間內(nèi)保持為低。
[0064]根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案,所述憐4下油制劑具有提尚的抗氧化能力、提尚的脂 肪酶活性和提高的經(jīng)上皮鈣運(yùn)輸,相比較于現(xiàn)有技術(shù)中已知的磷蝦油制劑(其包含<700ppm 鈣、>1200ppm鈉和/或>5mgN/100g TMA)。
[0065] 本發(fā)明提供一種制備本發(fā)明的磷蝦油制劑的方法,包含提取過(guò)程和任選的洗滌。
[0066] 任選地和優(yōu)選地通過(guò)將一種或多種有機(jī)溶劑添加至磷蝦生物質(zhì)中以形成油提取 物來(lái)實(shí)施提取油的階段。所述磷蝦生物質(zhì)可為膳食的形式或新鮮或冷凍的磷蝦的形式,或 通過(guò)烹飪和傾析被處理以移除一些水含量的新鮮或冷凍的磷蝦的形式,或?yàn)槿魏纹渌孜r 形式。任選地且更優(yōu)選地,通過(guò)離心、過(guò)濾、重力分離或其他方法將液相與脫脂的生物質(zhì)分 離。任選地,通過(guò)重復(fù)上述過(guò)程從生物質(zhì)中提取與脫脂生物質(zhì)一起留下的殘留的磷蝦油:向 所述脫脂的磷蝦生物質(zhì)中添加一種或多種有機(jī)溶劑和通過(guò)相同的任選方法(即,離心、過(guò) 濾、重力分離等)分離液體。將由提取和再提取得到的液相結(jié)合起來(lái)以形成最終的液相。
[0067] 在選擇過(guò)濾作為分離方法的情況下,重復(fù)提取可優(yōu)選地通過(guò)簡(jiǎn)單地洗滌在從其移 除第一液相后作為"濾餅"留下的脫脂生物質(zhì)來(lái)實(shí)施。此次通過(guò)洗滌完成的再提取將再次通 過(guò)使用一種或多種有機(jī)溶劑來(lái)實(shí)施。將由提取和再提取得到的濾液即液相合并以形成最終 的液相。
[0068] 任選地通過(guò)添加水,也任選地添加有機(jī)溶劑,將所述水和所述有機(jī)溶劑與最終的 液相混合來(lái)洗滌最終的液相。在混合后,任選地通過(guò)重力或通過(guò)離心實(shí)施分離,形成兩個(gè)不 同的相:含磷蝦油的有機(jī)相和含大部分水的第二相(即,水相)。可任選地使用水和任選的有 機(jī)溶劑在相同的程序中洗滌有機(jī)相。最終的液相,無(wú)論是洗滌的或未洗滌的,任選地和優(yōu)選 地經(jīng)受蒸發(fā)階段以移除有機(jī)溶劑并得到油。優(yōu)選在減壓下實(shí)施蒸發(fā)。
[0069] 在提取和再提取階段溶劑和磷蝦生物質(zhì)的比率(V溶劑:W生物質(zhì))為小于10:1,任 選地小于5:1,更優(yōu)選地小于4:1。
[0070] 提取條件應(yīng)被控制且可任選地被保持在10-60 °C,優(yōu)選30-40 °C和1分鐘至10小時(shí), 優(yōu)選l-3h,且更優(yōu)選2-2.5h。提取可分批實(shí)施,例如在間歇反應(yīng)器中,或任選地通過(guò)連續(xù)提 取工藝實(shí)施。連續(xù)提取可以并流或逆流模式在連續(xù)提取系統(tǒng)例如本領(lǐng)域中已知的那些中實(shí) 施。在連續(xù)提供中溶劑和磷蝦生物質(zhì)的比率被看作是在所述系統(tǒng)中兩股流的流量間的比 率。
[0071] 也可任選地連續(xù)實(shí)施所述水洗滌階段。任選地,可通過(guò)液體連續(xù)混合器(in-line mixer)或通過(guò)CSTR或通過(guò)混合器-沉降器系統(tǒng)混合水和有機(jī)相?;旌系乃?有機(jī)相可穿過(guò)連 續(xù)或間歇重力分離槽或任選地通過(guò)連續(xù)離心分離。在連續(xù)洗滌的情況下,水、乙醇和有機(jī)相 之間的比率將被認(rèn)為是這些流的各流量間的比率。
[0072] 所述有機(jī)溶劑優(yōu)選地,但不限于,包含含任選地極性和非極性溶劑混合物的有機(jī) 溶劑。極性溶劑可包括:乙醇、甲醇、2-丙醇、丁醇等。非極性溶劑可來(lái)自一種或多種下列物 質(zhì)的組:己烷、庚烷、石油醚等。極性和非極性溶劑間的比率(體積:體積)為優(yōu)選1:99-99:1, 更優(yōu)選5:95-50:50,更優(yōu)選10:90-20:80。優(yōu)選的溶劑混合物為己烷乙醇混合物。
[0073] 在洗滌階段用于洗滌有機(jī)相(含溶解在有機(jī)溶劑中的油)的水相的體積為優(yōu)選地 小于100 %的最終液相體積,優(yōu)選小于50 %的最終液相,更優(yōu)選小于10 %的最終液相體積。
[0074] 在蒸發(fā)后得到的油任選地且優(yōu)選地經(jīng)受水洗滌階段,在水洗滌階段中所述油優(yōu)選 再溶解在有機(jī)溶劑中以形成有機(jī)相。水任選地與有機(jī)溶劑一起或任選地在其之后被添加至 有機(jī)相中,與有機(jī)相混合并通過(guò)重力分離或離心與有機(jī)相分離。水洗滌階段可任選地重復(fù) 一次或數(shù)次。通過(guò)從所洗滌的油中移除溶劑,任選地通過(guò)優(yōu)選在減壓條件下的有機(jī)溶劑蒸 發(fā),得到最終的磷蝦油制劑。
[0075] 油和在實(shí)施水洗滌時(shí)形成有機(jī)相的有機(jī)溶劑間的比率為優(yōu)選(油:有機(jī)溶劑w/v) 1:1-1:40,優(yōu)選 1:2-1:30,更優(yōu)選 1:3-1:10且最優(yōu)選1:5-1:8。
[0076] 所述有機(jī)溶劑優(yōu)選地,但不限于,包含有機(jī)溶劑,所述有機(jī)溶劑任選地包含極性或 非極性溶劑的混合物。極性溶劑可包括:乙醇、甲醇、丁醇等。非極性溶劑可來(lái)自一種或多種 下列物質(zhì)的組:己烷、庚烷等。極性和非極性溶劑間的比率(V:V)為優(yōu)選1:99-99:1,更優(yōu)選 5:95:50:50,更優(yōu)選10:90-20:80。優(yōu)選的溶劑混合物為己烷乙醇混合物。
[0077] 在洗滌階段用于洗滌有機(jī)相(包含油+有機(jī)溶劑)的水相的體積優(yōu)選小于100%的 有機(jī)相體積,優(yōu)選小于50 %的有機(jī)相,更優(yōu)選小于40 %的有機(jī)相,甚至更優(yōu)選小于30 %的有 機(jī)相和最優(yōu)選小于10%的有機(jī)相體積。
[0078] 通過(guò)外部實(shí)驗(yàn)室Norway的Nofima BioLab測(cè)試磷4下油樣品中的TMA水平。在Conway 餐具中根據(jù)Conway和Byrne微量擴(kuò)散法的改進(jìn)版本(Conway&0'Mal ley ,Microdiffusion Methods · Biochem,36,656-661 (1942))實(shí)施測(cè)試。
[0079] 通過(guò)P-NMR通過(guò)第三方實(shí)驗(yàn)室(Spectral Services)分析或由HPTLC分析計(jì)算磷奸 油樣品中的磷脂質(zhì)(PU含量。通過(guò)如下過(guò)程實(shí)施HPTLC分析:使用氯仿:甲醇95:5 v/v溶液溶 解樣品,和使用包括水、甲醇、乙酸、丙酮和氯仿的洗脫液使其在HPTLC二氧化硅凝膠板上運(yùn) 行,和使用含水、硫酸和無(wú)水磷酸銅的著色溶液著色所述板。通過(guò)氣相色譜-改進(jìn)的AOCS官 方方法Ce lb-89分析EPA和DHA含量。
[0080] 通過(guò)ICP方法通過(guò)加拿大的POS生物技術(shù)實(shí)施元素分析以測(cè)定磷蝦油樣品中的礦 物和金屬含量。
[0081 ] 通過(guò)德國(guó)Eurofins Analytik GmbH使用LC-MS-MS分析磷奸油樣品中的膽堿和甜 菜堿。通過(guò)Eurofins Analytik GmbH根據(jù)ISO 13903:2005、EU 152/2009(F)和ISO 13904: 2005、EU 152/2009(F)的參考方法分析總氨基酸含量。
[0082]加速的穩(wěn)定性測(cè)試是對(duì)于藥物物質(zhì)和產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)加速的儲(chǔ)存條件模型 ("Stability Testing of New Drug Substances and Products Q1A(R2)'',ICH Harmonised Tripartite Guideline,Feb 2003)。
[0083] 與化合物的量和濃度相關(guān)聯(lián)的如本文所用的術(shù)語(yǔ)百萬(wàn)分之幾(ppm)和百分比(%) 分別指重量百萬(wàn)分之幾和重量百分比。
[0084] 實(shí)施例
[0085] 實(shí)施例1:市售的磷蝦油膠囊的礦物和金屬組分和膽堿、甜菜堿和氨基酸的含量
[0086] 測(cè)試購(gòu)自商家的市售磷蝦油產(chǎn)品的膠囊以得到金屬和礦物組分(表1)。可以看出, 在測(cè)試的膠囊中的鈉的值高于1200ppm且|丐的值低于700ppm。在測(cè)試的兩種情況下,鈉水平 高于鈣水平。也可看出,膽堿水平高于450ppm,甜菜堿水平高于1000 ppm且氨基酸水平高于 在本發(fā)明的磷蝦油中得到的那些。
[0087] 產(chǎn)市售磷蝦油膠囊的金屬、礦物和氨基酸組分
[0090] NT =未測(cè)試
[0091] 實(shí)施例2:市售磷蝦油膠囊的TMA水平
[0092]測(cè)試購(gòu)自商家的市售磷蝦油產(chǎn)品的膠囊以得TMA水平。令人驚奇地,當(dāng)抽樣時(shí),發(fā) 現(xiàn)TMA水平高于5mgN/100g(表2)。因此,所測(cè)試的磷蝦油具有高的TM水平,盡管測(cè)試是在產(chǎn) 品的被推薦的保質(zhì)期內(nèi)(正如公開(kāi)宣布的有效期限)實(shí)施的。
[0093] 市售的磷蝦油膠囊的TMA組分
[0096] *穩(wěn)定性測(cè)試后測(cè)試的TMA水平從13mgN/100g增加至28mgN/100g,所述穩(wěn)定性測(cè)試 涉及在40°C下存儲(chǔ)一個(gè)月。
[0097] 實(shí)施例3:根據(jù)本發(fā)明的磷蝦油的生產(chǎn)
[0098] A.通過(guò)在間隙反應(yīng)器中添加43331溶劑至1300kg磷蝦膳食中并在約40°C下混合約 2h實(shí)施從磷蝦膳食中提取油。所述溶劑混合物包含體積比為90:10的己烷和乙醇。在反應(yīng)器 冷卻至約25°C后使用籃式離心機(jī)系統(tǒng)對(duì)包含提取的油的溶劑進(jìn)行過(guò)濾。將脫脂的膳食粉末 從籃式離心機(jī)中排出,并在相同的間歇反應(yīng)器中使用額外的25201的相同的溶劑混合物再 提取,然后在籃式離心機(jī)中再次過(guò)濾所形成的溶劑/油混合物。將所有的濾液合并在一起。 [0099]在含己烷、乙醇和水的混合物中洗滌所述油。在得到清楚的相分離后,移除底部 (水)相。在減壓下在約40-50°C下蒸發(fā)有機(jī)(上部)相的溶劑約12h以生產(chǎn)磷蝦油。
[0100] 所述的方法產(chǎn)生約250kg磷蝦油,所述磷蝦油包含:PL(磷脂質(zhì))=42.12g/100g, EPA=ll·4g/100g,DHA = 9·2g/100g,TMA測(cè)試顯示TMA〈lmgN/100g。在室溫下8個(gè)月的穩(wěn)定性 測(cè)試后,TMA水平保持〈lmgN/100g。表3中呈現(xiàn)了所產(chǎn)生油的元素分析結(jié)果。
[0101] B.通過(guò)添加1200ml溶劑至300gr磷蝦膳食中并在約40°C下振動(dòng)約2h實(shí)施從磷蝦膳 食中提取油。溶劑混合物包含體積比為90:10的己燒和乙醇。使用Buchner真空系統(tǒng)將包括 提取的油的溶劑從所述膳食粉末中濾出。使用額外600ml的相同溶劑混合物洗滌作為"濾 餅"留下的脫脂的膳食粉末,以進(jìn)一步提取留在脫脂的膳食中的油。在所有濾液被合并在一 起后,使用約50°C的浴在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中在減壓下蒸發(fā)溶劑約Ih直至得到小于IOmbar真空且 在油相中無(wú)看得見(jiàn)的沸騰。得到約65g的油。
[0102] 將65g所得到的油中的約30g溶解在約206ml包括己烷、乙醇和水的溶劑混合物中。 攪拌所述溶液并在分離漏斗中使有機(jī)相和水相分離。使用約50 °C的浴在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中在減 壓下蒸發(fā)有機(jī)(上部)相的溶劑約Ih直至得到小于IOmbar真空且在油相中無(wú)看得見(jiàn)的沸騰, 以產(chǎn)生磷蝦油。
[0103] 所述的方法產(chǎn)生包含如下物質(zhì)的磷蝦油:PL>25g/100g,EPA>8g/100g,DHA>4.5g/ l〇〇g。表3中呈現(xiàn)了所產(chǎn)生油的元素分析結(jié)果。
[0104] ^:實(shí)施例3A和3B中產(chǎn)生的磷蝦油的金屬和礦物組分

[0107] C.根據(jù)本發(fā)明,以與上面描述的實(shí)施例的方法B相同的方法制備磷蝦油。所述的方 法產(chǎn)生包含如下物質(zhì)的磷蝦油:PL = 40 · 95g/100g,EPA = 12· lg/100g,DHA = 6 · 7g/100g,游 離膽堿=323dot,甜菜堿<2OTm和下面的氨基酸組分:

L〇11〇」D.通過(guò)添加800ml溶劑至200gr磷蝦膳食中并在約40 °C下振動(dòng)約2h實(shí)施從磷蝦膳 食中提取油。溶劑混合物包含體積比為90:10的分別地己燒和乙醇。使用Buchner真空系統(tǒng) 將包括提取的油的溶劑從所述膳食粉末中濾出。使用額外400ml的相同溶劑混合物洗滌作 為"濾餅"留下的脫脂的膳食粉末,以進(jìn)一步提取留在脫脂的膳食中的油。在所有濾液被合 并在一起后,使用約50°C的浴在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中在減壓下蒸發(fā)溶劑約Ih直至得到小于IOmbar 真空且在油相中無(wú)看得見(jiàn)的沸騰。得到約50g的油。
[0111] 將50g所得到的油中的約30g溶解在約930ml溶劑混合物中,所述溶劑混合物包括 己烷、乙醇和水,其比例為87.1 %己烷、9.7 %乙醇、3.2 %水。攪拌所述溶液并在分離漏斗中 使有機(jī)相和水相分離。使用約50 °C的浴在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中在減壓下蒸發(fā)有機(jī)(上部)相的溶劑 約Ih直至得到小于IOmbar真空且在油相中無(wú)看得見(jiàn)的沸騰,以產(chǎn)生磷蝦油。
[0112] 所述的方法產(chǎn)生包含如下物質(zhì)的磷蝦油:PL = 25.8g/100g,EPA = 8.2g/100g,DHA =4.88/10(^<^]\^測(cè)試顯示了]\^〈111^/10(^。在40°(:下8個(gè)月的穩(wěn)定性測(cè)試后了]\^水平保持〈 lmgN/100g〇
[0113] E.使用連續(xù)工業(yè)裝置在逆流流中提取磷蝦油。使用包含體積比為90:10的分別地 己烷和乙醇溶劑混合物在約40°C下實(shí)施提取。設(shè)定系統(tǒng)參數(shù)以確保300kg/h磷蝦膳食和 1140L/h溶劑的流。通過(guò)重力連續(xù)地將含溶解的油的溶劑與脫脂的膳食分離。在約50°C下在 減壓下蒸發(fā)所述溶劑。將400kg接收的油溶解在約27481的包括己烷、乙醇和水的溶劑混合 物中。攪拌所述溶液并使有機(jī)相和水相分離。在減壓下蒸發(fā)有機(jī)(上部)相的溶劑以產(chǎn)生磷 蝦油。
[0114]所得到的油經(jīng)受使用由己烷、乙醇和水組成的相同的溶劑混合物的二次洗滌。
[0115] 所述方法產(chǎn)生包含下面物質(zhì)的磷蝦油制劑:PL = 36.4g/100g,EPA= 11.2g/100g, DHA = 6 · 5g/100g,TMA〈lmgN/100g,游離膽喊=87 · lppm,甜菜喊<2ppm,Ca= 1800ppm,Na = 400ppm和下面的氨基酸組分:

[0117] 實(shí)施例4:根據(jù)本發(fā)明的磷蝦油膠囊的制備
[0118] 不僅作為散裝油,而且在軟膠囊封裝后,磷蝦油顯示TMA低水平的穩(wěn)定性。以與上 述實(shí)施例相同的方法根據(jù)本發(fā)明制備磷蝦油,并將其封裝在333mg軟凝膠膠囊中。所使用的 主要的殼成分是明膠、丙三醇和水。在環(huán)境條件下在干空氣室中干燥膠囊。
[0119] 膠囊中磷蝦油的TMA測(cè)試顯示TMA〈 ImgN/100g。在40 °C下5個(gè)月的穩(wěn)定性測(cè)試后, TM水平保持低于5mgN/100g。
[0120] 實(shí)施例5:根據(jù)本領(lǐng)域中已知的方法制備磷蝦油
[0121] 為了演示提取程序?qū)ψ罱K油組成的影響,我們基于已知的商業(yè)提取過(guò)程(磷蝦油 GRAS通知(GRN000371)(A)和PCT WO 00/23546(Beaudoin)(B))實(shí)施兩種不同的常規(guī)提取程 序。如下面所顯示的,所述常規(guī)提取方法產(chǎn)生不同于本發(fā)明的組成的磷蝦油組成。
[0122] A.通過(guò)向磷蝦膳食中加入乙醇并在400°C下振動(dòng)2h實(shí)施從磷蝦膳食中提取油。以 與上面給出的實(shí)施例中詳細(xì)說(shuō)明的方案相同的方式實(shí)施提取、過(guò)濾和蒸發(fā)程序。表4中呈現(xiàn) 了所產(chǎn)生的油的元素分析結(jié)果。
[0123] B.通過(guò)向磷蝦膳食中加入乙醇并在400°C下振動(dòng)2h實(shí)施從磷蝦膳食中提取油。以 與上面給出的實(shí)施例中詳細(xì)說(shuō)明的方案相同的方式實(shí)施提取、過(guò)濾和蒸發(fā)程序。制備后TMA 測(cè)試顯示 TMA = 21mgN/100g。
[0124] C.通過(guò)向冷凍的磷蝦中添加丙酮從未加工的磷蝦樣品中提取油。將混合物放置在 保持在4°C的振動(dòng)器中約2h。以與上面給出的實(shí)施例中詳細(xì)說(shuō)明的方案相同的方式實(shí)施提 取、過(guò)濾和蒸發(fā)程序。TMA測(cè)試顯示TMA =〈lmgN/100g,然而,在室溫下6個(gè)月的穩(wěn)定性測(cè)試 后,TMA水平驚人地增加至9mgN/100g。在400 °C下6個(gè)月的穩(wěn)定性測(cè)試后,TMA水平驚人地增 加至56mgN/l OOg。表4中呈現(xiàn)了所產(chǎn)生的油的元素分析結(jié)果。
[0125] 表4:實(shí)施例5A和5C中產(chǎn)生的磷蝦油的金屬和礦物組成

[0128] NT =未測(cè)試
[0129] 實(shí)施例6:通過(guò)DPPH試驗(yàn)評(píng)估磷蝦油自由基清除能力
[0130] DPPH(2,2-二苯基-1-苦基肼)是一種已知的自由基和對(duì)于其他自由基的陷阱("清 除劑")。因此,在添加 DPPH時(shí)化學(xué)反應(yīng)的速率下降用作該反應(yīng)的自由基性能的指示劑。由于 在以約517nm為中心的強(qiáng)的吸收帶,DPPH自由基在溶液中具有深紫色,且當(dāng)被中和時(shí)其變?yōu)?無(wú)色或淺黃色。該性質(zhì)使反應(yīng)的可視化檢測(cè),且可從在517nm處光學(xué)吸收中計(jì)數(shù)初始自由基 的數(shù)目。
[0131] 在20ml瓶中將5毫升的0.1 OmM在異辛烷(異辛烷可溶解在DPPH和磷蝦油樣品中)中 的DPPH與50mg油樣品混合,在黑暗中靜置30min后,使用紫外分光光度計(jì)(JASCO V-630)測(cè) 試在517nm處樣品混合物的吸光度。來(lái)自DPPH方法的自由基清除活性結(jié)果表達(dá)為DPPH溶液 的初始OD(517nm)的%。在異辛烷中(無(wú)磷蝦油)DPPH的初始吸光度值代表對(duì)照組(100 % )。 來(lái)自圖1的數(shù)據(jù)顯示根據(jù)本發(fā)明的磷蝦油制劑(根據(jù)實(shí)施例3B制備,且包含最優(yōu)水平的礦物 和金屬、低水平的雜質(zhì)和低且穩(wěn)定水平的TMA)顯著降低了 DPPH的吸光度。這表明了根據(jù)本 發(fā)明的磷蝦油制劑比對(duì)照的磷蝦油包含更高的自由基清除能力(參見(jiàn)表1中的品牌C)。
[0132] 實(shí)施例7:通過(guò)脂肪酶活性試驗(yàn)水解磷蝦油
[0133] 在25°C下在有機(jī)/水性兩相體系中溶解磷蝦油30min。通過(guò)添加不同量的脂肪酶衍 生物并在150rpm下攪拌來(lái)引發(fā)反應(yīng)。通過(guò)HPLC-GC方法在不同的時(shí)間下測(cè)定游離脂肪酸 (FFA)的濃度。結(jié)果顯示,相比較于常規(guī)磷蝦油制劑,在整個(gè)試驗(yàn)時(shí)間點(diǎn)中,根據(jù)本發(fā)明的磷 蝦油制劑表現(xiàn)較高的初始水解速率(較低的滯后時(shí)間),在水解試驗(yàn)過(guò)程中也具有較高的總 FFA水平。
[0134] 實(shí)施例8:使用Caco-2細(xì)胞模型評(píng)估經(jīng)上皮運(yùn)輸
[0135] 在塑料培養(yǎng)瓶中生長(zhǎng)Caco-2細(xì)胞(人結(jié)腸腺癌細(xì)胞系)。在達(dá)到90 %融合 (confluent)后,用本發(fā)明的磷蝦油或富有外源鈣鹽的常規(guī)磷蝦油(含<700ppm的鈣和〉 1200ppm的鈉)處理細(xì)胞,以評(píng)估經(jīng)上皮的鈣運(yùn)輸。結(jié)果顯示,相比較于富含外源鈣鹽的對(duì)照 磷蝦油,本發(fā)明的磷蝦油顯示出在更高的通過(guò)完全分化的Caco-2細(xì)胞的經(jīng)上皮鈣運(yùn)輸。
[0136] 實(shí)施例9:通過(guò)循環(huán)伏安法評(píng)估磷蝦油的還原活性
[0137] 循環(huán)伏安法是一種類型的電位-動(dòng)態(tài)電化學(xué)方法,其可用于有效地表征生物樣品 或食物提取物的還原能力。通過(guò)循環(huán)工作電極的電勢(shì)并測(cè)量作為結(jié)果的電流,例如氧化-還 原反應(yīng),來(lái)實(shí)施循環(huán)伏安法。因此,通過(guò)循環(huán)伏安的電化學(xué)方法分析磷蝦油樣品(與或不與 去離子水混合)的還原能力。數(shù)據(jù)顯示,相比較于常規(guī)磷蝦油制劑,本發(fā)明的磷蝦油制劑具 有顯著較高的還原能力。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 包含磷奸油的磷奸油制劑,其中所述磷奸油具有5mg氮/100g(mg N/100g)或更低的 三甲胺濃度。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的磷蝦油制劑,其中所述磷蝦油在40°C或更低溫度下存儲(chǔ)三個(gè) 月后具有5mgN/100g或更低的三甲胺濃度。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的磷蝦油制劑,其中所述磷蝦油具有大于700ppm重量的內(nèi)源 鈣濃度和/或低于1200ppm重量的鈉濃度。4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的磷蝦油制劑,其中所述磷蝦油具有大于500ppm重量 的內(nèi)源鎂濃度。5. 根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的磷蝦油制劑,其中所述磷蝦油具有小于450ppm重量 的游離膽堿濃度和/或小于lOOOppm重量的甜菜堿濃度和/或小于0.3g/100g的總氨基酸濃 度。6. 根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的磷蝦油制劑,其中所述磷蝦油具有小于450ppm重量 的游離膽堿濃度和/或小于lOOOppm重量的甜菜堿濃度和/或小于0.15g/100g的以下各氨基 酸的濃度:丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、胱氨酸、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、 賴氨酸、蛋氨酸、鳥氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、羥脯氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸和纈 氨酸。7. 包含磷蝦油的磷蝦油制劑,其中所述磷蝦油具有大于700ppm重量的內(nèi)源鈣濃度和/ 或小于1200ppm重量的鈉濃度。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的磷蝦油制劑,其中所述磷蝦油具有大于500ppm重量的內(nèi)源鈣 濃度。9. 根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的磷蝦油制劑,其中所述磷蝦油具有小于450ppm重量的游離 膽堿濃度和/或小于lOOOppm重量的甜菜堿濃度和/或小于0.3g/100g的總氨基酸濃度。10. 根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的磷蝦油制劑,其中所述磷蝦油具有小于450ppm重量的游 離膽堿濃度和/或小于lOOOppm重量的甜菜堿濃度和/或小于0.15g/100g的以下各氨基酸的 濃度:丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、胱氨酸、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨 酸、蛋氨酸、鳥氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、羥脯氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸和纈氨 酸。11. 包含權(quán)利要求1-10任一項(xiàng)所述的磷蝦油制劑的組合物。12. 包含權(quán)利要求1-10任一項(xiàng)所述的磷蝦油制劑的膠囊。13. 包含權(quán)利要求1-10任一項(xiàng)所述的磷蝦油制劑的保健營(yíng)養(yǎng)品。14. 包含權(quán)利要求1-10任一項(xiàng)所述的磷蝦油制劑的膳食補(bǔ)充劑。15. 包含權(quán)利要求1-10任一項(xiàng)所述的磷蝦油制劑和一種或多種藥用輔料的膳食補(bǔ)充 劑。16. 包含磷蝦油制劑的組合物,其中所述磷蝦油制劑具有5mg N/ 100g或更低的三甲胺 濃度。17. 根據(jù)權(quán)利要求16所述的組合物,其中所述磷蝦油制劑在40°C或更低溫度下存儲(chǔ)三 個(gè)月后具有5mgN/100g或更低的三甲胺濃度。18. 根據(jù)權(quán)利要求16或17所述的組合物,其中所述磷蝦油制劑具有大于700ppm重量的 內(nèi)源鈣濃度和/或低于1200ppm重量的鈉濃度。19. 根據(jù)權(quán)利要求16-18任一項(xiàng)所述的組合物,其中所述磷蝦油制劑具有大于500ppm重 量的內(nèi)源鎂濃度。20. 根據(jù)權(quán)利要求16-19任一項(xiàng)所述的組合物,其中所述磷蝦油制劑具有小于450ppm重 量的游離膽堿濃度和/或小于lOOOppm重量的甜菜堿濃度和/或小于0.3g/100g的總氨基酸 濃度。21. 根據(jù)權(quán)利要求16-19任一項(xiàng)所述的組合物,其中所述磷蝦油制劑具有小于450ppm重 量的游離膽堿濃度和/或小于lOOOppm重量的甜菜堿濃度和/或小于0.15g/100g的以下各氨 基酸的濃度:丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、胱氨酸、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨 酸、賴氨酸、蛋氨酸、鳥氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、羥脯氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸 和纈氨酸。22. 包含磷蝦油制劑的組合物,其中所述磷蝦油制劑具有大于700ppm重量的內(nèi)源鈣濃 度和/或低于1200ppm重量的鈉濃度。23. 根據(jù)權(quán)利要求22所述的組合物,其中所述磷蝦油制劑具有大于500ppm重量的內(nèi)源 鎂濃度。24. 根據(jù)權(quán)利要求22或23所述的組合物,其中所述磷蝦油制劑具有小于450ppm重量的 游離膽堿濃度和/或小于lOOOppm重量的甜菜堿濃度和/或小于0.3g/100g的總氨基酸濃度。25. 根據(jù)權(quán)利要求22或23所述的組合物,其中所述磷蝦油制劑具有小于450ppm重量的 游離膽堿濃度和/或小于lOOOppm重量的甜菜堿濃度和/或小于0.15g/100g的以下各氨基酸 的濃度:丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、胱氨酸、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴 氨酸、蛋氨酸、鳥氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、羥脯氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸和纈氨 酸。26. 根據(jù)權(quán)利要求16-25任一項(xiàng)所述的組合物,其中所述組合物不包含來(lái)自非磷蝦源的 礦物或金屬。27. 根據(jù)權(quán)利要求16-25任一項(xiàng)所述的組合物,其中所述組合物為膠囊。28. 根據(jù)權(quán)利要求16-25任一項(xiàng)所述的組合物,其中所述組合物為保健營(yíng)養(yǎng)品。29. 根據(jù)權(quán)利要求16-25任一項(xiàng)所述的組合物,其中所述組合物為膳食補(bǔ)充劑。30. 根據(jù)權(quán)利要求16-25任一項(xiàng)所述的組合物,其中所述組合物為藥物組合物并包含一 種或多種藥用輔料。31. 制備磷蝦油制劑的方法,其包含使用含一種或多種極性溶劑和一種或多種非極性 溶劑的溶劑混合物從磷蝦中提取磷蝦油的步驟。32. 根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法,其中所述方法對(duì)于使磷蝦油制劑中的內(nèi)源鈉水平降 低至低于磷蝦油制劑中內(nèi)源鈣水平是有效的。33. 根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法,其中所述方法對(duì)于將磷蝦油制劑中的內(nèi)源鈉降低至 少于1200ppm重量和/或維持磷蝦油制劑中的內(nèi)源鈣多于700ppm重量是有效的。34. 根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法,其中所述溶劑混合物包含己烷和乙醇。35. 根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法,其中所述溶劑混合物中己烷比乙醇的體積比為約9: 1〇36. 根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法,還包含至少一個(gè)用水洗滌所提取的磷蝦油的步驟。37. 根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法,其中當(dāng)實(shí)施所述至少一個(gè)用水洗滌所提取的磷蝦油 的步驟時(shí),所提取的磷蝦油溶解在有機(jī)溶劑混合物中。38. 磷蝦油制劑,其由包含使用一種或多種極性溶劑和一種或多種非極性溶劑的溶劑 混合物從磷蝦中提取磷蝦油的步驟的方法制備。39. 根據(jù)權(quán)利要求38所述的磷蝦油制劑,其中所述溶劑混合物中己烷比乙醇的體積比 為約9:1。40. 降低總膽固醇量的方法,所述方法包含向有需要的人體施用對(duì)降低人體內(nèi)總膽固 醇量有效的量的磷蝦油制劑,其中所述磷蝦油制劑包含5mgN/100g或更低的三甲胺。41. 降低甘油三酯量的方法,所述方法包含向有需要的人體施用對(duì)降低人體內(nèi)甘油三 酯量有效的量的磷蝦油制劑,其中所述磷蝦油制劑包含5mgN/100g或更低的三甲胺。42. 增加 HDL-膽固醇量的方法,所述方法包含向有需要的人體施用對(duì)增加人體內(nèi)HDL-膽固醇量有效的量的磷蝦油制劑,其中所述磷蝦油制劑包含5mgN/100g或更低的三甲胺。43. 降低總膽固醇量的方法,所述方法包含向有需要的人體施用對(duì)降低人體內(nèi)總膽固 醇量有效的量的磷蝦油制劑,其中所述磷蝦油制劑包含多于700ppm重量的內(nèi)源鈣和少于 1200ppm重量的鈉。44. 降低甘油三酯量的方法,所述方法包含向有需要的人體施用對(duì)降低人體內(nèi)甘油三 酯量有效的量的磷蝦油制劑,其中所述磷蝦油制劑包含多于700ppm重量的內(nèi)源鈣和少于 1200ppm重量的鈉。45. 增加 HDL-膽固醇量的方法,所述方法包含向有需要的人體施用對(duì)增加人體內(nèi)HDL-膽固醇量有效的量的磷蝦油制劑,其中所述磷蝦油制劑包含多于700ppm重量的內(nèi)源鈣和少 于1200ppm重量的鈉。46. 根據(jù)權(quán)利要求40-45任一項(xiàng)所述的方法,其中所述磷蝦油制劑由包含使用一種或多 種極性溶劑和一種或多種非極性溶劑的溶劑混合物從磷蝦中提取磷蝦油的步驟的方法制 備。
【文檔編號(hào)】A23D9/007GK105992588SQ201580008278
【公開(kāi)日】2016年10月5日
【申請(qǐng)日】2015年2月10日
【發(fā)明人】利亞蒂·羅內(nèi)恩, 拉恩·努馬, 蓋·本-德羅爾
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