本發(fā)明涉及免疫分析檢測(cè)領(lǐng)域，尤其涉及一種加快降鈣素原定量檢測(cè)的方法。

背景技術(shù)：

降鈣素原(procalcitonin，pct)是一個(gè)小分子蛋白，含有116個(gè)氨基酸殘基，分子量大約為13kda。pct的氨基酸序列首次在1984年被moullec等人發(fā)現(xiàn)。它屬于一類(lèi)相關(guān)蛋白的家族(capa肽家族)，包括降鈣素基因相關(guān)肽i和ii、淀粉不溶素、腎上腺髓質(zhì)素和降鈣素。類(lèi)似于capa家族的其他肽，pct來(lái)源于一個(gè)前體分子-降鈣素原前體。降鈣素原前體含有141個(gè)氨基酸，其n端去除25個(gè)氨基酸殘基后得到降鈣素原。

1993年，有報(bào)道發(fā)現(xiàn)pct水平在細(xì)菌系統(tǒng)感染患者中有所升高。如今pct已經(jīng)成為伴隨有全身性炎癥和敗血癥疾病的主標(biāo)記物。pct在臨床診斷中的價(jià)值，主要是基于pct濃度和炎癥嚴(yán)重程度的緊密相關(guān)。pct在正常人血中濃度低于0.05ng/ml，當(dāng)血清中pct濃度高于0.5ng/ml時(shí)出現(xiàn)重癥敗血癥和/或敗血癥休克的風(fēng)險(xiǎn)較低；血清pct濃度≥2ng/ml出現(xiàn)重癥敗血癥和/或敗血癥休克的風(fēng)險(xiǎn)較高，在膿毒血癥、敗血癥患者其濃度顯著增高，可達(dá)1000ng/ml，是正常人的2000倍。pct可在感染后2個(gè)小時(shí)后檢測(cè)到，對(duì)臨床早期診斷具有重要意義，且在感染后12-24小時(shí)達(dá)到高峰，體內(nèi)、外穩(wěn)定性好。

pct作為一種具有創(chuàng)新意義的嚴(yán)重細(xì)菌性感染等疾病的實(shí)驗(yàn)指標(biāo)，提高了臨床診斷的準(zhǔn)確性。因此，pct的診斷價(jià)值非常之高，使用單克隆抗體定量檢測(cè)患者血液中pct的重要性更是顯而易見(jiàn)。

目前主要采用電化學(xué)發(fā)光的方法和酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)法(elisa)進(jìn)行檢測(cè)，電化學(xué)發(fā)光法以羅氏為主，將待測(cè)標(biāo)本與包被抗體的順磁性微粒和發(fā)光劑標(biāo)記的抗體加在反應(yīng)杯中共同溫育，形成磁性微珠包被抗體-抗原-發(fā)光劑標(biāo)記抗體復(fù)合物。將復(fù)合物吸入流動(dòng)室，同時(shí)用tpa緩沖液沖洗。當(dāng)磁性微粒流經(jīng)電極表面時(shí)，被安裝在電極下的磁鐵吸引住，而游離的發(fā)光劑標(biāo)記抗體被沖走。同時(shí)在電極加電壓，啟動(dòng)電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，使發(fā)光試劑標(biāo)記物和tpa在電極表面進(jìn)行電子轉(zhuǎn)移，產(chǎn)生電化學(xué)發(fā)光。然而檢測(cè)成本較高。elisa主要采用抗原與抗體的特異反應(yīng)將待測(cè)物與酶連接，然后通過(guò)酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)，用于定量測(cè)定。然而該檢測(cè)方法的線性范圍較窄，樣本濃度高時(shí)需要二次稀釋?zhuān)^(guò)程繁瑣且檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)。因此，尋找縮短降鈣素原的檢測(cè)時(shí)間并提高其最低檢測(cè)限的新方法已成為目前亟待解決的問(wèn)題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種加快降鈣素原定量檢測(cè)的方法，所述方法包括利用振蕩和遠(yuǎn)紅外共同孵育抗原抗體，從而加快降鈣素原的定量檢測(cè)。

本發(fā)明通過(guò)利用振蕩和遠(yuǎn)紅外共同孵育抗原抗體，其中振蕩作用可使樣本中抗原抗體帶電分子以固定的頻率振動(dòng)，因而抗原抗體能在很短的時(shí)間內(nèi)結(jié)合；應(yīng)用它，可以極大地提高工作效率，縮短實(shí)驗(yàn)周期，達(dá)到快速定量的效果；而采用遠(yuǎn)紅外能夠加速抗原抗體結(jié)合，為抗原抗體反應(yīng)提供了最佳的反應(yīng)條件，大大縮短了反應(yīng)時(shí)間，除了能夠提高檢測(cè)效率外，同時(shí)可以大大降低最低檢測(cè)限。

優(yōu)選地，所述振蕩采用的振動(dòng)加速度為11.0～13.0m/s²，例如11.0m/s²、11.2m/s²、11.5m/s²、12.0m/s²、12.2m/s²、12.5m/s²、12.8m/s²或13.0m/s²，優(yōu)選11.5～12.5m/s²。

優(yōu)選地，所述振蕩采用的振動(dòng)速度為2.0～4.0cm/s，例如2.0cm/s、2.2cm/s、2.5cm/s、2.8cm/s、3.0cm/s、3.2cm/s、3.5cm/s、3.8cm/s或4.0cm/s，優(yōu)選2.5～3.8cm/s。

優(yōu)選地，所述振蕩采用的振動(dòng)位移為0.15～0.40mm，例如0.15mm、0.18mm、0.20mm、0.22mm、0.25mm、0.28mm、0.30mm、0.32mm、0.35mm、0.38mm或0.40mm，優(yōu)選0.20～0.35mm。

優(yōu)選地，所述遠(yuǎn)紅外采用的波長(zhǎng)為2μm～10μm，例如2μm、3μm、5μm、6μm、7μm、8μm、9μm或10μm，優(yōu)選3～8μm。

優(yōu)選地，所述遠(yuǎn)紅外采用的輸出功率＜250va，例如200va、210va、220va、230va或240va，優(yōu)選＜220va。

優(yōu)選地，所述抗原的孵育時(shí)間為5～30min，例如5min、6min、8min、10min、12min、15min、16min、18min、20min、22min、25min、28min或，優(yōu)選為6～20min，進(jìn)一步優(yōu)選為8min。

優(yōu)選地，所述抗體的孵育時(shí)間為5～30min，例如5min、6min、8min、10min、12min、15min、16min、17min、18min、20min、22min、25min、28min或30min，優(yōu)選為6～15min，進(jìn)一步優(yōu)選為8min。

優(yōu)選地，所述方法還包括利用恒溫空氣浴培養(yǎng)箱加熱。

優(yōu)選地，所述恒溫空氣浴培養(yǎng)箱的加熱溫度為37℃。

作為本發(fā)明優(yōu)選的技術(shù)方案，所述加快降鈣素原定量檢測(cè)的方法包括：

利用37℃恒溫空氣浴培養(yǎng)箱加熱，并且利用振蕩加遠(yuǎn)紅外對(duì)抗原抗體反應(yīng)加速；其中，所述振動(dòng)采用的振動(dòng)加速度為11.0～13.0m/s²，振動(dòng)速度為2.0～4.0cm/s，振動(dòng)位移為0.15～0.40mm；所述遠(yuǎn)紅外采用的波長(zhǎng)為2μm～10μm，輸出功率＜250va；抗原孵育5～30min，抗體孵育5～30min。

優(yōu)選地，所述方法采用微電流免疫芯片進(jìn)行。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明至少具有以下有益效果：

本發(fā)明依靠振蕩作用，使樣本中抗原抗體帶電分子以固定的頻率振動(dòng)，因而抗原抗體能在很短的時(shí)間內(nèi)結(jié)合；另外遠(yuǎn)紅外能夠加速抗原抗體結(jié)合，為抗原抗體反應(yīng)提供了最佳的反應(yīng)條件，大大縮短了反應(yīng)時(shí)間。本發(fā)明方法通過(guò)將震蕩和遠(yuǎn)紅外協(xié)同作用，再配合微電流免疫芯片進(jìn)行檢測(cè)，除了能夠提高檢測(cè)效率外，同時(shí)可以大大降低最低檢測(cè)限，可使最低檢測(cè)限在0.01ng/ml以下。

具體實(shí)施方式

為便于理解本發(fā)明，本發(fā)明列舉實(shí)施例如下。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該明了，所述實(shí)施例僅僅是幫助理解本發(fā)明，不應(yīng)視為對(duì)本發(fā)明的具體限制。

實(shí)施例1

一種加快降鈣素原定量檢測(cè)的方法，包括以下步驟：

利用37℃恒溫空氣浴培養(yǎng)箱加熱，并且利用振蕩加遠(yuǎn)紅外對(duì)抗原抗體反應(yīng)加速；其中，所述振動(dòng)采用的振動(dòng)加速度為11.5m/s2，振動(dòng)速度為2.5cm/s，振動(dòng)位移為0.20mm；所述遠(yuǎn)紅外采用的波長(zhǎng)為3μm，輸出功率＜250va；抗原孵育8min，抗體孵育8min，采用微電流免疫芯片進(jìn)行檢測(cè)。

采用該實(shí)施例的方法檢測(cè)降鈣素原的最低檢測(cè)限為0.005ng/ml。

實(shí)施例2

一種加快降鈣素原定量檢測(cè)的方法，包括以下步驟：

利用37℃恒溫空氣浴培養(yǎng)箱加熱，并且利用振蕩加遠(yuǎn)紅外對(duì)抗原抗體反應(yīng)加速；其中，所述振動(dòng)采用的振動(dòng)加速度為12.0m/s²，振動(dòng)速度為3.0cm/s，振動(dòng)位移為0.30mm；所述遠(yuǎn)紅外采用的波長(zhǎng)為5μm，輸出功率＜250va；抗原孵育6min，抗體孵育6min，采用微電流免疫芯片進(jìn)行檢測(cè)。

采用該實(shí)施例的方法檢測(cè)降鈣素原的最低檢測(cè)限為0.008ng/ml。

實(shí)施例3

一種加快降鈣素原定量檢測(cè)的方法，包括以下步驟：

利用37℃恒溫空氣浴培養(yǎng)箱加熱，并且利用振蕩加遠(yuǎn)紅外對(duì)抗原抗體反應(yīng)加速；其中，所述振動(dòng)采用的振動(dòng)加速度為12.5m/s²，振動(dòng)速度為3.2cm/s，振動(dòng)位移為0.35mm；所述遠(yuǎn)紅外采用的波長(zhǎng)為7μm，輸出功率＜250va；抗原孵育15min，抗體孵育15min，采用微電流免疫芯片進(jìn)行檢測(cè)。

采用該實(shí)施例的方法檢測(cè)降鈣素原的最低檢測(cè)限為0.007ng/ml。

實(shí)施例4

一種加快降鈣素原定量檢測(cè)的方法，包括以下步驟：

利用37℃恒溫空氣浴培養(yǎng)箱加熱，并且利用振蕩加遠(yuǎn)紅外對(duì)抗原抗體反應(yīng)加速；其中，所述振動(dòng)采用的振動(dòng)加速度為13.0m/s²，振動(dòng)速度為4.0cm/s，振動(dòng)位移為0.15mm；所述遠(yuǎn)紅外采用的波長(zhǎng)為2μm，輸出功率＜250va；抗原孵育30min，抗體孵育30min，采用微電流免疫芯片進(jìn)行檢測(cè)。

采用該實(shí)施例的方法檢測(cè)降鈣素原的最低檢測(cè)限為0.01ng/ml。

實(shí)施例5

一種加快降鈣素原定量檢測(cè)的方法，包括以下步驟：

利用37℃恒溫空氣浴培養(yǎng)箱加熱，并且利用振蕩加遠(yuǎn)紅外對(duì)抗原抗體反應(yīng)加速；其中，所述振動(dòng)采用的振動(dòng)加速度為11.0m/s²，振動(dòng)速度為2.0cm/s，振動(dòng)位移為0.40mm；所述遠(yuǎn)紅外采用的波長(zhǎng)為10μm，輸出功率＜250va；抗原孵育5min，抗體孵育5min，采用微電流免疫芯片進(jìn)行檢測(cè)。

采用該實(shí)施例的方法檢測(cè)降鈣素原的最低檢測(cè)限為0.009ng/ml。

實(shí)施例6

一種加快降鈣素原定量檢測(cè)的方法，包括以下步驟：

利用37℃恒溫空氣浴培養(yǎng)箱加熱，并且利用振蕩加遠(yuǎn)紅外對(duì)抗原抗體反應(yīng)加速；其中，所述振動(dòng)采用的振動(dòng)加速度為12.5m/s²，振動(dòng)速度為3.8cm/s，振動(dòng)位移為0.35mm；所述遠(yuǎn)紅外采用的波長(zhǎng)為8μm，輸出功率＜250va；抗原孵育10min，抗體孵育12min，采用微電流免疫芯片進(jìn)行檢測(cè)。

采用該實(shí)施例的方法檢測(cè)降鈣素原的最低檢測(cè)限為0.006ng/ml。

對(duì)比例1

與實(shí)施例1相比，除僅采用振動(dòng)對(duì)抗原抗體反應(yīng)外，其它與實(shí)施例1相同。

利用37℃恒溫空氣浴培養(yǎng)箱加熱，并且利用振蕩對(duì)抗原抗體反應(yīng)加速；其中，所述振動(dòng)采用的振動(dòng)加速度為11.5m/s2，振動(dòng)速度為2.5cm/s，振動(dòng)位移為0.20mm；抗原孵育8min，抗體孵育8min，采用微電流免疫芯片進(jìn)行檢測(cè)。

采用該對(duì)比例的方法檢測(cè)降鈣素原的最低檢測(cè)限為0.015ng/ml。

對(duì)比例2

與實(shí)施例1相比，除僅采用遠(yuǎn)紅外對(duì)抗原抗體反應(yīng)外，其它與實(shí)施例1相同。

利用37℃恒溫空氣浴培養(yǎng)箱加熱，并且利用遠(yuǎn)紅外對(duì)抗原抗體反應(yīng)加速；其中，所述遠(yuǎn)紅外采用的波長(zhǎng)為3μm，輸出功率＜250va；抗原孵育8min，抗體孵育8min，采用微電流免疫芯片進(jìn)行檢測(cè)。

采用該對(duì)比例的方法檢測(cè)降鈣素原的最低檢測(cè)限為0.02ng/ml。

對(duì)比例3

羅氏電化學(xué)發(fā)光測(cè)定pct濃度，采用該對(duì)比例的方法檢測(cè)降鈣素原的最低檢測(cè)限為0.02ng/ml。

通過(guò)將實(shí)施例1～6與對(duì)比例1～2進(jìn)行比較可以看出，采用實(shí)施例1～6的方法檢測(cè)降鈣素原的最低檢測(cè)限在0.010ng/ml以下，而采用對(duì)比例1、對(duì)比例2和對(duì)比例3的方法檢測(cè)降鈣素原的最低檢測(cè)限均高于0.010ng/ml，這說(shuō)明本發(fā)明采用振蕩加遠(yuǎn)紅外共同對(duì)抗原抗體反應(yīng)，其相比單獨(dú)采用振蕩或遠(yuǎn)紅外的處理方法，能夠大大降低最低檢測(cè)限，且采用微電流免疫芯片進(jìn)行檢測(cè)，有助于降低最低檢測(cè)限，使最低檢測(cè)限可控制在0.010ng/ml以下；由此說(shuō)明了振蕩與遠(yuǎn)紅外二者處理之間具有協(xié)同作用，在通過(guò)采用微電流免疫芯片進(jìn)行檢測(cè)共同提高了檢測(cè)效率，降低了最低檢測(cè)限。

綜上所述，本發(fā)明方法通過(guò)將震蕩和遠(yuǎn)紅外協(xié)同作用，再配合微電流免疫芯片進(jìn)行檢測(cè)，除了能夠提高檢測(cè)效率外，同時(shí)可以大大降低最低檢測(cè)限。

申請(qǐng)人聲明，本發(fā)明通過(guò)上述實(shí)施例來(lái)說(shuō)明本發(fā)明的詳細(xì)工藝設(shè)備和工藝流程，但本發(fā)明并不局限于上述詳細(xì)工藝設(shè)備和工藝流程，即不意味著本發(fā)明必須依賴(lài)上述詳細(xì)工藝設(shè)備和工藝流程才能實(shí)施。所屬技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)該明了，對(duì)本發(fā)明的任何改進(jìn)，對(duì)本發(fā)明產(chǎn)品各原料的等效替換及輔助成分的添加、具體方式的選擇等，均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍和公開(kāi)范圍之內(nèi)。