專利名稱：一種檢測鐘花報春花質(zhì)量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本 發(fā)明涉及一種檢測鐘花報春花質(zhì)量的方法，具體地，是采用HPLC指紋圖譜進(jìn)行檢測的方法。
背景技術(shù)：
鐘花報春(Primula sikkmensis Hook)屬于報春花科報春花屬植物，是一種常見的藏藥材，以花入藥，是藏藥“相相直吾”其中的一種原植物?；S色，鐘狀，聚生于花葶頂端，主產(chǎn)于西藏東部及南部、青海東南部、四川西部、云南西北部；生于海拔3750-4500米的林緣濕草地、水溝邊；分布于尼泊爾、錫金、不丹、緬甸。藏族民間用全草作止瀉藥，其療效獨(dú)特顯著。主要用于清熱，小兒熱痢、小兒肺炎等疾病，療效確切，經(jīng)幾個藏醫(yī)院的臨床醫(yī)生實(shí)踐證明，在治療小兒熱痢方面，有效率達(dá)到 80 %，在甘孜藏族地區(qū)，藏民們也廣泛使用，且資源十分豐富。雖然我國的報春花資源極其豐富，但已進(jìn)行研究的種類很少，王鳳英等應(yīng)用簡單序列重復(fù)區(qū)間(ISSR，Inter-simple sequence repeat)分子標(biāo)記對喜馬拉雅-橫斷山區(qū)鐘花報春居群遺傳多樣性及遺傳分化進(jìn)行了研究，研究結(jié)果表明喜馬拉雅-橫斷山區(qū)鐘花報春的13個居群具有很高的遺傳多樣性，并且居群間的分化也很大；朱惠芬等應(yīng)用ITS序列分析探討了偏花報春是屬于燈臺報春組還是鐘花報春組。在對鐘花報春花的研究中，彭騰等從鐘花報春花中分離鑒定了 7個化合物(彭騰， 等，鐘花報春花的化學(xué)成分研究，中藥材，2008年31卷1期.)，邱建平等利用正交試驗(yàn)研究了從鐘花報春花中提取總黃酮的優(yōu)選工藝(邱建平，等，正交設(shè)計(jì)優(yōu)化鐘花報春花總黃酮提取工藝，成都醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2009年4卷4期)。目前，尚未見對鐘花報春花的質(zhì)量檢測的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種高效、靈敏的檢測鐘花報春花質(zhì)量的方法。本發(fā)明提供了一種檢測鐘花報春花質(zhì)量的方法，方法如下(1)鐘花報春花樣品的測試溶液制備精密稱取鐘花報春藥材粗粉，加入15-30倍w/v的甲醇，靜置10-50min，超聲提取 20-60min,過濾，濾液定容至0. 8-1. 2g生藥/25ml，再取定容液，稀釋至原濃度的1/6，微濾， 濾液作為樣品溶液；(2)對照品溶液制備用甲醇或流動相溶液溶解2-苯基色原酮對照品，微濾，濾液作為對照品溶液；(3)色譜條件色譜柱以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；紫外檢測器，檢測波長為292士 IOnm ；流動相為乙腈-水系統(tǒng)，梯度洗脫，梯度條件如下
權(quán)利要求
1.一種檢測鐘花報春花質(zhì)量的方法，其特征在于方法如下(1)鐘花報春花的樣品溶液制備精密稱取鐘花報春藥材粗粉，加入15-30倍w/v的甲醇，靜置10-50min，超聲提取 20-60min,過濾，濾液定容至0. 8-1. 2g生藥/25ml，再取定容液，稀釋至原濃度的1/6，微濾， 濾液作為樣品溶液；(2)對照品溶液制備用甲醇或流動相溶液溶解2-苯基色原酮對照品，微濾，濾液作為對照品溶液；(3)色譜條件色譜柱以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；紫外檢測器，檢測波長為292士 IOnm ；流動相為乙腈-水系統(tǒng)，梯度洗脫，梯度條件如下
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于步驟(1)中，甲醇用量為20倍w/v； 靜置30min，超聲提取40min ；濾液定容至Ig生藥/25ml。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測方法，其特征在于步驟(1)的具體操作如下精密稱取鐘花報春花藥材粗粉lg，加入甲醇20ml，靜置30min，超聲提取40min，過濾，濾液冷卻至室溫后加甲醇定容至25ml，取定容液，稀釋至原濃度的1/6，微濾，濾液作為樣品溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任意一項(xiàng)所述的檢測方法，其特征在于所述微濾是采用0.45 μ m 微孔濾膜濾過。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于步驟(3)中，色譜柱為Diamonsil C18 柱，250mmX 4. 6mm, 5 μ m。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于步驟⑶中，檢測波長為292nm。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于步驟(3)中，柱溫為25°C。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于步驟(4)中，精密吸取樣品溶液 20 μ 1，注入高效液相色譜儀，檢測時間為45min。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于步驟(5)中，標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜特征如下有8個共有特征峰；以2-苯基色原酮的色譜峰的保留時間和峰面積為1計(jì)算其他峰的相對保留時間和相對峰面積，1號峰的相對保留時間為0. 1848 士 0. 0104， 相對峰面積為0. 0228 士 0. 00412 ；2號峰的相對保留時間為0. 3353 士 0. 00291， 相對峰面積為0. 0859 士 0. 0173 ；3號峰的相對保留時間為0. 4062 士 0. 00583，相對峰面積為0. 0182士0. 0073 ；4號峰的相對保留時間為0. 8345士0. 0020,相對峰面積為0. 1412 士 0. 0205 ；5號峰的相對保留時間為0. 8940 士 0. 00114，相對峰面積為0. 1831 士 0. 0261 ；6號峰的相對保留時間為1. 0341 士 0. 00122，相對峰面積為0. 0325士0. 0078 ；7號峰的相對保留時間為1. 2094士0. 00310,相對峰面積為 0. 0389士0. 0105 ；S峰的相對保留時間為1，相對峰面積為1。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的檢測方法，其特征在于所述標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜如圖2所示。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種檢測鐘花報春花質(zhì)量的方法，采用HPLC指紋圖譜技術(shù)，色譜圖中特征峰分離度良好，且相似度高，能夠有效用于對鐘花報春花藥材的質(zhì)量控制。
文檔編號G01N30/02GK102331459SQ20111016254
公開日2012年1月25日 申請日期2011年6月16日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月20日
發(fā)明者彭騰, 李鴻翔, 賀鋼民, 鄧赟, 邱建平, 陳裕 申請人:成都中醫(yī)藥大學(xué)