一種經(jīng)血寧膠囊的質(zhì)量檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種中藥組合物制劑的質(zhì)量檢測方法，特別涉及經(jīng)血寧膠囊的質(zhì)量檢 測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 經(jīng)血寧膠囊是由廣西金秀圣堂藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)的中成藥，國藥準(zhǔn)字 B20020057。其主要功效為：祛瘀止血；適用于瘀血阻滯癥月經(jīng)過多，經(jīng)色紫黑有塊，腹痛 拒按等癥；也可用于輕中度消化道出血的輔助治療；也可用于輕中度消化道出血的輔助治 療。其由白背葉、扶芳藤二味藥材經(jīng)加工制成中藥膠囊制劑，廣西金秀圣堂藥業(yè)有限責(zé)任公 司和廣西大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院在文獻(xiàn)《經(jīng)血寧顆粒的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的篩選》一文(大眾科 技；2014年2月總第16卷174期）中確立了經(jīng)血寧顆粒的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，作者：許子競， 唐艷秀，龐國。該經(jīng)血寧顆粒以其中的主要原料之一白背葉，經(jīng)分離純化得到化合物I，通 過定性鑒定為黃酮苷類；HPLC檢測為單一純化合物；MS測定化學(xué)分子量為564 ;H NMR和C NMR數(shù)據(jù)分析與Corymboside -致，為傘房決明苷，分子式為C26H28O14故以化合物I作為經(jīng) 血寧顆粒的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。
[0003] 但單純以其中原料之一來定性或檢測經(jīng)血寧膠囊，并作為主要質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)還存 在諸多問題，發(fā)明人通過對經(jīng)血寧膠囊的物化性質(zhì)分析，同步定性鑒別白背葉和扶芳藤，并 結(jié)合紫外-分光光度法和高效液相色譜對其含有的有效物質(zhì)進(jìn)行含量檢測，可以有效控制 經(jīng)血寧膠囊產(chǎn)品的質(zhì)量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種能全面定性、定量檢測藥物成 分的經(jīng)血寧膠囊質(zhì)量檢測方法，本方法具有檢測手段簡單、檢測結(jié)果更加準(zhǔn)確、可靠的特 點(diǎn)。
[0005] 本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的： 經(jīng)血寧膠囊的質(zhì)量檢測方法，包括以下三種過程：用薄層色譜法鑒別定性；用紫外-分 光光度法測定總黃酮（以蘆丁計）成分的含量；用高效液相色譜法測定山奈酚-3，7-二鼠 李糖苷和芹菜素-7-0-β -D-葡萄糖苷兩種成分的含量。
[0006] (1)采用薄層色譜法鑒別扶芳藤、白背葉的方法：扶芳藤以山奈酚-3, 7-二鼠李糖 苷（C27H3qO16)計(還包括山奈酸_3，7-(f -乙酰基）-〇-a-L_二鼠李糖苷)，白背葉以序 菜素_7_〇_ β _D_匍萄糖苷計。
[0007] a供試品溶液制備： 取本品內(nèi)容物2g，置50ml圓底燒瓶中，加水4ml，攪拌，制成流動膏狀物，加乙酸乙酯 20ml，70°C水浴回流2小時，放冷，將濾液移至分液漏斗，吸取上層乙酸乙酯層，濃縮至4ml， 備用； b對照溶液制備： 取扶芳藤對照藥材2g，加70%乙醇30ml，置水浴上加熱回流1小時，濾過，藥渣用70% 乙醇洗3次，每次10ml，合并乙醇溶液，蒸干，殘?jiān)?0ml水溶解，用乙酸乙酯萃取3次，每 次20ml，回收乙酸乙酯，殘?jiān)蛹状糏ml使之溶解，制成扶芳藤對照藥材溶液，備用； 取白背葉對照藥材lg，按"扶芳藤對照藥材溶液的制備方法"制成白背葉對照藥材溶 液，備用； 取山奈酚-3, 7-二鼠李糖苷、山奈酚-3，7-(V -乙?；?O-a-L-二鼠李糖苷和芹 菜素-7-0-β -D-葡萄糖苷對照品，加甲醇制成Iml各含Img的溶液，作為對照品溶液，備 用； 薄層色譜法試驗(yàn)：按（中國藥典2010版附錄VI Β)試驗(yàn)，吸取供試品溶液10μ1、上述 兩種對照藥材溶液和對照品溶液各2 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-乙 酸（40 : 10 : 0.1)為展開劑展開，取出晾干；在紫外燈（254nm)下觀察；在供試品色譜中， 與對照品及對照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)； (2) 紫外-分光光度法測定總黃酮（以蘆丁計）含量： a對照品洛液的制備 取干燥至恒重的蘆丁對照品30mg，精密稱定，置100mL容量瓶中，加無水乙醇至刻度， 搖勻，制成每1ml含0. 3mg的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液；精密量取IOml溶液，置50ml量瓶中，加60% 乙醇至刻度，搖勻，即得(每1ml含無水蘆丁 60 μ g); b標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 分別精密吸取蘆丁對照品溶液Iml、2ml、3ml、4ml、5ml分別置IOml量瓶中，各加 0· lmol/L三氯化鋁溶液2ml、lmol/L醋酸鉀溶液3ml，加60%乙醇至刻度，搖勾，放置30分 鐘；以相應(yīng)試劑為空白，立即照紫外-可見分光光度法（《中國藥典》2010年版一部，附錄 VA)，在420nm的波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線； c供試品溶液制備 取本品內(nèi)容物〇. lg，精密稱定，置IOml量瓶中，加60%乙醇7ml，置水浴上微熱，并時時 振搖30分鐘，放冷，加60%乙醇至刻度，搖勻；精密量取溶液Iml，置IOml量瓶中，加0.1mol/ L三氯化鋁溶液2ml、lmol/L醋酸鉀溶液3ml，加60 %乙醇至刻度，搖勻，放置30分鐘，離心 取上清液作供試品溶液，備用；另取本品內(nèi)容〇. lg，精密稱定，置IOml量瓶中，加60%乙醇 稀釋至刻度，精密量取Iml，置IOml量瓶中，加60%乙醇至刻度，搖勻，作為空白溶液，依法測 定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣品總黃酮的含量；每粒經(jīng)血寧膠囊（〇. 35g)含總黃酮以無 水蘆丁計，不得少于56. Omg ; (3) 高效液相色譜法測定山奈酚-3，7-二鼠李糖苷和芹菜素-7-0-β -D-葡萄糖苷的 含量： a色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-甲醇=10 :2 (V/V)為流動相A ;水-磷 酸=100 :0.05 (V/V)為流動相B，按如下方式進(jìn)行梯度洗脫：
檢測波長為340 nm，理論塔板數(shù)按山奈酚-3，7-二鼠李糖苷計算應(yīng)不低于3000 ; b對照品洛液的制備 分別精密稱取對照品山奈酚-3，7-二鼠李糖苷8. 8mg、芹菜素-7-0-β -D-葡萄糖苷 2. 5mg，分別置于IOml容量瓶中，加甲醇定容，搖勾，分別制成每1ml中含0. 88mg和0. 25mg 的溶液，作為對照品溶液； c供試品溶液的制備取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物約l.Og，精密稱定，置具塞錐形瓶中， 加60%甲醇25ml，稱定重量，水浴回流30分鐘，放冷，用60%甲醇補(bǔ)足減失質(zhì)量，搖勾，濾過， 即得； d測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各ιομL，注入液相色譜儀，測定，即得； 每粒經(jīng)血寧膠囊（0.35g)含扶芳藤以山奈酚-3,7-二鼠李糖苷（C27H31A6)計，不少 于0. 30mg;，每粒經(jīng)血寧膠囊（0. 35g)含白背葉以芹菜素-7-0-β-D-葡萄糖苷計，不少于 4. 5mg〇
[0008] 本發(fā)明還對扶芳藤和白背葉有效成分含量測定方法的方法學(xué)進(jìn)行了考察，結(jié)果如 下： (1)線性關(guān)系：精密量取山奈酚-3，7-二鼠李糖苷對照品母液（0. 88mg/ml)和芹菜 素-7-0- β -D-葡萄糖苷對照品母液（0· 25mg/ml) 0· 25，0· 5，1，2，5ml，置于IOml量瓶中， 加流動相稀釋至刻度，搖勻。按本發(fā)明的方法，注入高效液相色譜儀中，測定山奈酚-3， 7-二鼠李糖苷和芹菜素-7-0-β -D-葡萄糖苷峰面積。以進(jìn)樣量(m)為橫坐標(biāo)，峰面積（A) 為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回歸方程：山奈酚-3，7-二鼠李糖苷：A=153. 8m-126. 4， r=0. 9997 ;芹菜素-7-0-β-?-葡萄糖苷：A=2001.7m-2038. 3, r=0. 9994,說明山奈酚-3， 7-二鼠李糖苷在0. 22-4. 4mg/ml濃度下線性關(guān)系良好，芹菜素-7-0-β -D-葡萄糖苷在 0· 0625mg-l. 25mg/ml濃度下線性關(guān)系良好。
[0009] (2)精密度試驗(yàn)：取濃度為0.88mg/ml的山奈酚-3，7-二鼠李糖苷和濃度為 0. 25mg/ml芹菜素-7-0-β -D-葡萄糖苷的對照樣品溶液，各精密吸取10ul，注入液相色譜 儀，測定兩個有效成分的峰面積，連續(xù)測定6次，結(jié)果見下表1。
[0010] 表1山奈酚-3，7-二鼠李糖苷精密度試驗(yàn)結(jié)果
表2芹菜素-7-0- β -D-葡萄糖苷精密度試驗(yàn)結(jié)果
以上結(jié)果表明，本方法精密度良好。
[0011] (3)穩(wěn)定性試驗(yàn)：取本品供試品溶液，每隔一定時間，注入液相色譜儀，測定山奈 酚-3，7-二鼠李糖苷和芹菜素-7-0- β -D-葡萄糖苷峰面積，結(jié)果見表3和表4。
[0012] 表3山奈酸-3，7-二鼠李糖苷穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果
表4芹菜素-7-0- β -D-葡萄糖苷穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果
以上結(jié)果表明，樣品在4小時內(nèi)穩(wěn)定，本方法穩(wěn)定性良好。
[0013] (4)重現(xiàn)性試驗(yàn)：取本品5份，按本發(fā)明方法測定，結(jié)果見表5。
[0014] 表5山奈酚-3，7-二鼠李糖苷重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果
表6芹菜素-7-0- β -D-葡萄糖苷重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果
以上結(jié)果表明，本方法重現(xiàn)性良好。
[0015] (5)回收率試驗(yàn)：精密量取本品2ml，精密加入對照品母液適量，按本發(fā)明方法測 定山奈酚-3, 7-二鼠李糖苷和芹菜素-7-0- β -D-葡萄糖苷含量，按下式計算回收率，結(jié)果 見表7。
[0016] 回收率=(測得量-已知量）/加入量*100 表7山奈酚-3，7-二鼠李糖苷回收率試驗(yàn)結(jié)果
表8序菜素-7-〇-β -D-匍萄糖苷回收率試驗(yàn)結(jié)果
以上結(jié)果表明，本方法回收率良好。
[0017] ( 6 )陰性干擾試驗(yàn)：取不含扶芳藤和白背葉藥材制成的陰性對照品，按本發(fā)明方法 測定山奈酚-3，7-二鼠李糖苷和芹菜素-7-0- β -D-葡萄糖苷的峰面積，結(jié)果表明無干擾。
[0018] (7)樣品測定：取本品5批，按本發(fā)明方法，測定山奈酚-3，7-二鼠李糖苷和芹菜 素-7-0- β -D-葡萄糖苷含量，結(jié)果見表 表9 5批清濁祛毒丸中有效成分含量測定結(jié)果
本發(fā)明有益效果是：使用薄層鑒別方法鑒別白背葉和扶芳藤兩種有效成分，使用紫 外-分光光度測定總黃酮含量，以無水蘆丁含量計；使用高效液相色譜法測定山奈酚-3， 7-二鼠李糖苷和芹菜素-7-0- β -D-葡萄糖苷含量，方法簡便、結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好?，F(xiàn)有文 獻(xiàn)中標(biāo)準(zhǔn)中只是對白背葉進(jìn)行了定性鑒別，而沒有對其進(jìn)行定量檢測，局限性大，難于控制 經(jīng)血寧膠囊的質(zhì)量，本發(fā)明建立了從定性、定量兩方面對經(jīng)血寧膠囊中的主要成分白背葉 和扶芳藤進(jìn)行質(zhì)量控制，大大提高了質(zhì)量控制的準(zhǔn)確性。通過以上檢測項(xiàng)目對藥品質(zhì)量進(jìn) 行了有效的控制，具有穩(wěn)定、快速、靈敏、可靠的特點(diǎn)，進(jìn)一步確保產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量，對促進(jìn)產(chǎn) 品銷售，保證患者用藥安全意義重大。
【具體實(shí)施方式】
[0019] 實(shí)施例1 采用以下質(zhì)量檢測方法對經(jīng)血寧膠囊進(jìn)行質(zhì)量控制。
[0020] (1)采用薄層色譜法鑒別扶芳藤、白背葉： a供試品溶液制備： 取經(jīng)血寧膠囊內(nèi)容物2g，置50ml圓底燒瓶中，加水4ml，攪拌，制成流動膏狀物，加乙酸 乙酯20ml，