專(zhuān)利名稱(chēng)：一種治療小兒肺熱咳嗽口服液的質(zhì)量檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種質(zhì)量檢測(cè)方法，特別是涉及一種治療小兒肺熱咳嗽口服液(金振口服液)的質(zhì)量檢測(cè)方法背景技術(shù)金振口服液是在制劑羚羊清肺散的基礎(chǔ)上去朱砂藥味后再經(jīng)工藝及制劑等方面的改革而研制成的新藥，用于治療小兒肺熱咳嗽。羚羊清肺散為散劑，作為小兒用藥，給藥不便，藥味較苦，兒童不易接受，且散劑為固體劑型，吸收差，不能迅速發(fā)揮療效。因此，在調(diào)查研究的基礎(chǔ)上，綜合現(xiàn)代的研究方法與研究成果，采用先進(jìn)的制劑工藝將散劑改為口服制劑，使其具有吸收快、療效好、服用方便等特點(diǎn)，在治療兒科疾患中發(fā)揮更大作用。金振口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高研究是新藥研究工作中的重要課題，發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的在于提供一種嚴(yán)謹(jǐn)控制金振口服液質(zhì)量的質(zhì)量檢測(cè)方法。
本發(fā)明目的是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的羚羊角9.45g平貝母47.45g大黃31.50g 黃芩15.75g青礞石15.75g 生石膏23.62g人工牛黃9.45g甘草31.50g蒸餾水適量 制成口服液1000ml。
本方為清肺止咳之劑。肺主氣、宜清肅下降，邪熱犯肺，痰熱壅阻，則氣逆不降，而為咳嗽。治當(dāng)清熱瀉肺，化痰止咳。方中用羚羊角咸寒瀉火，清熱解毒，以寧肺金；平貝母清熱散結(jié)，化痰止咳；肺與大腸相表里，故用大黃瀉熱通腑，開(kāi)門(mén)逐邪，使肺之痰熱由下而解。三藥共為君藥。黃芩、石膏協(xié)助君藥以清瀉肺熱，同為臣藥；牛黃清熱豁痰；青礞石墜痰下氣，為佐藥。甘草化痰止咳，調(diào)和諸藥，防寒涼傷胃，為使藥。全方容清熱、降氣、化痰、鎮(zhèn)咳諸法一爐，俾達(dá)邪去正安，肺寧咳止之效。
以上八味，羚羊角粉碎成細(xì)粉，加10倍量水及氫氧化鈉4g，回流水解24小時(shí)，濾過(guò)，藥渣加5倍量水及氫氧化鈉2g，回流水解，至幾乎全溶，濾過(guò)，合并兩次濾液，濃縮至相對(duì)密度為1.02～1.05(75℃～85℃)；青礞石、生石膏粉碎成粗粉，用10倍量水加熱煎煮2小時(shí)，濾過(guò)，藥渣加8倍量水煎煮1.5小時(shí)，濾過(guò)，合并兩次濾液，濃縮至相對(duì)密度為1.01～1.04(75℃～85℃)；人工牛黃用5倍量70％乙醇回流提取3小時(shí)，藥渣用5倍量70％乙醇回流提取1.5小時(shí)，濾過(guò)，合并兩次濾液，減壓回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.02～1.05(75℃～85℃)；其余平貝母等四味藥，加10倍量水煎煮2小時(shí)，濾過(guò)，藥渣加5倍量水加熱煎煮1.5小時(shí)，濾過(guò)，合并兩次濾液，濃縮至相對(duì)密度為1.10(85℃)，離心，上清液加4倍量乙醇，攪勻，靜置48小時(shí)，取上清液，濾過(guò)，減壓回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.08(85℃)。取上述濃縮液及0.2％甜葉菊苷混合，攪勻后，加水至1000ml，攪勻，加熱煮沸20分鐘，冷藏48小時(shí)，濾過(guò)，濾液加水調(diào)整總量至1000ml，調(diào)pH值為8.0～8.5，灌封，滅菌，即得。
鑒別因口服液的處方涉及范圍較廣，有植物藥、礦物藥和動(dòng)物藥，所以在確定其鑒別的指標(biāo)及方法摸索過(guò)程中進(jìn)行了大量的實(shí)驗(yàn)，已經(jīng)摸索成功并通過(guò)實(shí)踐證明有較好的重現(xiàn)性及專(zhuān)屬性的鑒別主要有甘草次酸、黃芩苷、膽酸的薄層色譜鑒別。
A、取口服液30ml，加5％硫酸溶液15ml，加熱回流0.5-1.5小時(shí)，放冷，用乙醚萃取2-4次，每次25ml，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)?5ml熱乙醇使溶解，放冷，加入中性氧化鋁2-4g(100～200目，105℃活化1小時(shí))，攪勻，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為供試品溶液。另取甘草次酸對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以0.5％羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯-冰醋酸(15-24∶6-8∶0.4-0.6)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％磷鉬酸乙醇溶液，在105℃烘約4-6分鐘。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)。
B、取口服液60ml，加入D101型大孔吸附樹(shù)脂柱(內(nèi)徑0.9cm，長(zhǎng)12cm)上，用水100ml洗脫，棄去洗脫液，再用甲醇80ml洗脫，收集甲醇洗脫液，濃縮至2ml，作為供試品溶液。另取黃芩苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以0.5％羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯-甲酸乙酯-甲酸(2-4∶2-4∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)。
C、取膽酸對(duì)照品，加乙醇制成每1ml含1.0mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取B項(xiàng)下的供試品溶液和上述對(duì)照品溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一以0.5％羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以氯仿-乙醚-冰醋酸(1.5-2.5∶1.5-2.5∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％磷鉬酸乙醇溶液，105℃烘數(shù)分鐘。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)。
含量測(cè)定照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-0.1％磷酸溶液(77-85∶15-23)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。理論板數(shù)按大黃素峰計(jì)算應(yīng)不低于1500。
儀器與試藥儀器Agilent 1100；泵G1310A；檢測(cè)器WD G1314A；色譜柱Alltech(4.6μm×250mm，5μm)；對(duì)照品大黃素(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，供含量測(cè)定用，批號(hào)為0756-9707)大黃酚(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，供含量測(cè)定用，批號(hào)為796-200107)；試劑甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取大黃素、大黃酚對(duì)照品各5mg，置50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取該溶液3ml，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得(每1ml中含大黃素、大黃酚各6μg)。
供試品溶液的制備精密量取口服液25ml，置250ml燒瓶中，加20％-30％的硫酸溶液25ml，再加二氯甲烷50ml，水浴回流3-4小時(shí)，分取二氯甲烷液，酸液再加入二氯甲烷50ml，繼續(xù)回流2-4小時(shí)，分取二氯甲烷液。殘液加二氯甲烷洗滌3次，每次20ml，分取并合并上述二氯甲烷液，加水分次振蕩洗至中性，分取二氯甲烷液，回收至干。殘?jiān)蛹状既芙獠⒍ㄈ葜?5ml，作為供試品溶液。
測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
口服液每支含大黃以大黃素(C15H10O5)和大黃酚(C15H10O4)的總和計(jì)，應(yīng)不得少于70μg。
本研究中使用薄層掃描法對(duì)有效成分大黃素進(jìn)行含量控制，考慮到薄層掃描法誤差較大，因此在此次標(biāo)準(zhǔn)提高中，我們采用照高效液相色譜法對(duì)方中的有效成分大黃素、大黃酚之和進(jìn)行含量控制，提高了試驗(yàn)的準(zhǔn)確度、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、加樣回收，有很好的線(xiàn)性關(guān)系。
實(shí)驗(yàn)例1含量測(cè)定中提取條件的選定根據(jù)大黃中的羥基蒽醌衍生物主要以結(jié)合狀態(tài)存在，所以先要加酸將羥基蒽醌衍生物游離出來(lái)，而游離羥基蒽醌衍生物通常溶于苯、乙醚、氯仿等。原標(biāo)準(zhǔn)中采用氯仿回流4小時(shí)、3小時(shí)，考慮到氯仿的毒性，我們對(duì)試劑的選擇和提取方法進(jìn)行了一些摸索，設(shè)計(jì)了以下五種提取方案(1)樣品加酸后直接加乙醚進(jìn)行萃??；(2)樣品加酸后加乙醚回流提取2小時(shí)；(3)樣品加酸后加二氯甲烷回流分別提取4小時(shí)、3小時(shí)；(4)樣品加酸后加二氯甲烷回流分別提取2小時(shí)、1小時(shí)；(5)樣品加酸后加石油醚回流提取2小時(shí)；(6)樣品加酸后加氯仿回流分別提取4小時(shí)、3小時(shí)。結(jié)果見(jiàn)表2.1。
表2.1 提取條件的選擇提取方法 大黃素含量測(cè)定(μg/支) 大黃酚含量測(cè)定(μg/支)方案(1) 9.32 16.00方案(2) 22.02 27.47方案(3) 61.70 65.94方案(4) 39.93 27.57方案(5) 18.08 65.05方案(6) 61.75 65.84上述結(jié)果表明，方案(3)采用二氯甲烷分別回流4小時(shí)、3小時(shí)的結(jié)果與方案(6)用氯仿回流分別提取4小時(shí)、3小時(shí)結(jié)果相近，雖然二氯甲依舊有毒，但毒性要較氯仿小，而且其他類(lèi)型的試劑及不同的提取方法都不能完全將樣品中的大黃素和大黃酚完全提取出來(lái)。因此本法中采用二氯甲烷分別回流4小時(shí)、3小時(shí)的處理方法。
實(shí)驗(yàn)例2含量測(cè)定中流動(dòng)相的選擇以《中國(guó)藥典》2000版一部大黃藥材含量測(cè)定項(xiàng)下提供的流動(dòng)相為參考，實(shí)驗(yàn)選用甲醇和0.1％磷酸溶液的四種不同配比的流動(dòng)相進(jìn)行考察，其比例分別為85∶15、80∶20、78∶22、77∶23，結(jié)果表明，四種不同配比的流動(dòng)相中，甲醇0.1％磷酸溶液(77∶23)分離效果最好，樣品分離度、拖尾因子均符合規(guī)定。
實(shí)驗(yàn)例3對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備精密稱(chēng)取大黃素對(duì)照品5.03mg，大黃酚對(duì)照品4.31mg置50ml的容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。
分別精密量取儲(chǔ)備液1.0ml、2.0ml l、3.0ml、4.0ml、5.0ml、6.0ml置50ml的容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VID)測(cè)定，分別精密吸取上述溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積(見(jiàn)表2.2)，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，得標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
表2.2 線(xiàn)性關(guān)系考察表濃度(μg/ml) 2.012 4.024 6.036 8.048 10.060 12.072大黃素 峰面積 70.49415 144.13612 221.35808 304.06290 374.75809 442.1826971.97012 146.77049 225.80351 03.91919375.41837 446.40793平均峰面積 71.23214 145.45330 223.58080 303.99104 375.08823 444.29531回歸方程 Y＝37.413X-2.8563r＝0.9997濃度(μg/ml) 1.724 3.448 5.172 6.896 8.620 10.344大黃酚 峰面積 74.12002 152.95204 231.67821 317.24994 390.38577 454.3987175.43958 155.13329 235.25040 316.77652 392.02579 458.13211平均峰面積 74.77980 154.04266 233.46430 317.01323 391.20578 456.26541回歸方程 Y＝44.787X+0.8819 r＝0.9993由回歸方程可見(jiàn)，大黃素在2.012～12.072μg/ml范圍內(nèi)，色譜峰峰面積與濃度之間有良好的線(xiàn)性關(guān)系；大黃酚在1.724～10.344μg/ml范圍內(nèi)，色譜峰峰面積與濃度之間有良好的線(xiàn)性關(guān)系。
實(shí)驗(yàn)例4含量測(cè)定的穩(wěn)定性試驗(yàn)取供試品溶液，照高效液相色譜法，3小時(shí)以?xún)?nèi)每隔50分鐘進(jìn)樣一次；3小時(shí)至11小時(shí)每隔2小時(shí)進(jìn)樣一次；24小時(shí)后進(jìn)樣一次，結(jié)果見(jiàn)表2.3。
表2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)次數(shù)間隔時(shí)間(小時(shí)) 大黃素峰面積大黃酚峰面積1 0 225.24413 287.728002 0.8226.82002 280.770873 1.7230.22137 277.835364 3.0229.39595 276.086365 5.0222.78317 278.185066 7.0224.27786 277.767407 9.0233.22845 274.850868 11.0 232.60870 276.091379 24.0 232.17610 268.54440平均峰面積 228.52953 277.53996RSD(％) 1.701.83大黃素RSD為1.70％、大黃酚RSD為1.83％。結(jié)果表明大黃素、大黃酚24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性較好。
實(shí)驗(yàn)例5含量測(cè)定的精密度試驗(yàn)精密吸取每1ml含大黃素6.036μg、大黃酚5.172μg的對(duì)照品溶液10μl注入高效液相色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣五次。結(jié)果見(jiàn)表2.4。
表2.4 精密度試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)次數(shù) 大黃素峰面積 大黃酚峰面積1 223.16127233.903792 223.86926233.672563 220.96983231.312824 223.54974234.224595 222.49982232.55559平均峰面積222.80998233.13387RSD(％) 0.52 0.51大黃素RSD為0.52％、大黃酚RSD為0.51％。結(jié)果表明，本法精密度良好。
實(shí)驗(yàn)例6含量測(cè)定的重復(fù)性試驗(yàn)分別精密量取同一批號(hào)樣品五份各25ml，按含量測(cè)定方法測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2.5。
表2.5 重復(fù)性試驗(yàn)序號(hào)大黃素峰面積 大黃素含量(μg/支) 大黃酚峰面積 大黃酚含量(μg/支)1 237.93236 64.43 277.7803861.782 235.71957 63.83 275.3433961.243 240.95416 65.18 271.0716560.324 243.44287 65.79 273.3886160.475 237.35796 64.14 282.2698462.44X 64.67 61.25RSD(％)1.241.45大黃素RSD為1.24％、大黃酚RSD為1.45％。結(jié)果表明，本法重復(fù)性良好。
實(shí)驗(yàn)例7含量測(cè)定的加樣回收試驗(yàn)精密量取15ml已知含量的樣品(大黃素含量為6.467μg/ml，大黃酚含量為6.125μg/ml)五份，分別加入對(duì)照品溶液1ml(C大黃素＝68μg/ml、C大黃酚＝91.2μg/ml)，按含量測(cè)定依法操作，平行制備，進(jìn)行加樣回收實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表2.6。
表2.6 加樣回收試驗(yàn)序號(hào) 1 2 3 4 5樣品取樣 15ml大黃素加入量(μg) 68樣品中大黃素量(μg) 97.005測(cè)得樣品中大黃素總量(μg)162.18163.62162.17 163.16164.12大黃素回收率(％) 95.85 97.96 95.83 97.29 98.70大黃素平均回收率(％) 97.13RSD(％) 1.31大黃酚加入量(μg) 91.2樣品中大黃酚量(μg) 91.875測(cè)得樣品中大黃酚總量(μg)181.71178.66182.50 182.69181.27大黃酚回收率(％) 98.50 95.16 99.37 99.58 98.02大黃酚平均回收率(％) 98.13RSD(％) 1.81
回收試驗(yàn)結(jié)果表明本法準(zhǔn)確性較高。
實(shí)驗(yàn)例8十批樣品的含量測(cè)定按含量測(cè)定方法對(duì)十批樣品進(jìn)行了含量測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2.7表2.7 十批樣品含量測(cè)定結(jié)果批號(hào) 大黃素含量(μg/支) 大黃酚含量(μg/支) 大黃素和大黃酚含量總和(μg/支)030320 60.60 51.95 112.55030324 56.20 53.50 109.70030328 42.35 33.59 75.94030401 66.94 50.37 117.31030404 66.44 61.49 127.93030406 55.37 52.55 107.92030408 58.36 50.20 108.56030409 66.33 63.31 129.64030410 62.59 49.03 111.62030412 54.96 37.58 92.54對(duì)公司生產(chǎn)的十批金振口服液的大黃素含量進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)大黃素含量均符合原標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，即不低于0.4％mg/ml，故未對(duì)其限度進(jìn)行更改，只是按要求將限度更改為應(yīng)不低于40μg/支；對(duì)十批金振口服液的大黃酚含量進(jìn)行分析，將大黃酚限度定為應(yīng)不低于30μg/支。合計(jì)將大黃素和大黃酚總的含量限度定為應(yīng)不低于70μg/支。
實(shí)施例一種治療小兒肺熱咳嗽口服液(金振口服液)的質(zhì)量檢測(cè)方法鑒別A、取口服液30ml，加5％硫酸溶液15ml，加熱回流1小時(shí)，放冷，用乙醚萃取3次，每次25ml，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)?5ml熱乙醇使溶解，放冷，加入中性氧化鋁3g(100～200目，105℃活化1小時(shí))，攪勻，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為供試品溶液。另取甘草次酸對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以0.5％羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯-冰醋酸(20∶7∶0.5)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％磷鉬酸乙醇溶液，在105℃烘約5分鐘。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)。
B、取口服液60ml，加入D101型大孔吸附樹(shù)脂柱(內(nèi)徑0.9cm，長(zhǎng)12cm)上，用水100ml洗脫，棄去洗脫液，再用甲醇80ml洗脫，收集甲醇洗脫液，濃縮至2ml，作為供試品溶液。另取黃芩苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以0.5％羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯-甲酸乙酯-甲酸(3∶3∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)。
C、取膽酸對(duì)照品，加乙醇制成每1ml含1.0mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取B項(xiàng)下的供試品溶液和上述對(duì)照品溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一以0.5％羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以氯仿-乙醚-冰醋酸(2∶2∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％磷鉬酸乙醇溶液，105℃烘數(shù)分鐘。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)。
含量測(cè)定用照高效液相色譜法測(cè)定，色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-0.1％磷酸溶液(77∶23)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。理論板數(shù)按大黃素峰計(jì)算應(yīng)不低于1500。
對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取大黃素、大黃酚對(duì)照品各5mg，置50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取該溶液3ml，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得(每1ml中含大黃素、大黃酚各6μg)。
供試品溶液的制備精密量取口服液25ml，置250ml燒瓶中，加25％的硫酸溶液25ml，再加二氯甲烷50ml，水浴回流4小時(shí)，分取二氯甲烷液，酸液再加入二氯甲烷50ml，繼續(xù)回流3小時(shí)，分取二氯甲烷液。殘液加二氯甲烷洗滌3次，每次20ml，分取并合并上述二氯甲烷液，加水分次振蕩洗至中性，分取二氯甲烷液，回收至干。殘?jiān)蛹状既芙獠⒍ㄈ葜?5ml，作為供試品溶液。
測(cè)定法；分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
權(quán)利要求
1.一種治療小兒肺熱咳嗽口服液的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于該方法以對(duì)該口服液的鑒別和/或含量測(cè)定作為質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。
2.一種治療小兒肺熱咳嗽口服液的鑒別方法，其特征在于采用薄層色譜法對(duì)甘草次酸、黃芩苷、膽酸進(jìn)行鑒別。
3.如權(quán)利要求2所述的一種治療小兒肺熱咳嗽口服液的鑒別方法，其特征在于對(duì)甘草次酸采用薄層色譜鑒別時(shí)，供試品溶液的制備方法為取口服液30ml，加5％硫酸溶液15ml，加熱回流0.5-1.5小時(shí)，放冷，用乙醚萃取2-4次，每次25ml，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)?5ml熱乙醇使溶解，放冷，加入中性氧化鋁2-4g，攪勻，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為供試品溶液。
4.如權(quán)利要求3所述的一種治療小兒肺熱咳嗽口服液的鑒別方法，其特征在于對(duì)甘草次酸采用薄層色譜鑒別時(shí)，供試品溶液的制備方法為取口服液30ml，加5％硫酸溶液15ml，加熱回流1小時(shí)，放冷，用乙醚萃取3次，每次25ml，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)?5ml熱乙醇使溶解，放冷，加入中性氧化鋁3g，攪勻，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為供試品溶液。
5.如權(quán)利要求2所述的一種治療小兒肺熱咳嗽口服液的鑒別方法，其特征在于對(duì)黃芩采用薄層色譜鑒別時(shí)，展開(kāi)劑為2-4∶2-4∶1比例的甲苯-甲酸乙酯-甲酸。
6.如權(quán)利要求5所述的一種治療小兒肺熱咳嗽口服液的鑒別方法，其特征在于對(duì)黃芩采用薄層色譜鑒別時(shí)，展開(kāi)劑為3∶3∶1比例的甲苯-甲酸乙酯-甲酸。
7.如權(quán)利要求2所述的一種治療小兒肺熱咳嗽口服液的鑒別方法，其特征在于該方法為以下鑒別方法中的一種或幾種A、取口服液30ml，加5％硫酸溶液15ml，加熱回流0.5-1.5小時(shí)，放冷，用乙醚萃取2-4次，每次25ml，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)?5ml熱乙醇使溶解，放冷，加入中性氧化鋁2-4g，攪勻，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為供試品溶液；另取甘草次酸對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以0.5％羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以15-24∶6-8∶0.4-0.6比例的苯-醋酸乙酯-冰醋酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％磷鉬酸乙醇溶液，在105℃烘約4-6分鐘；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)；B、取口服液60ml，加入D101型大孔吸附樹(shù)脂柱上，用水100ml洗脫，棄去洗脫液，再用甲醇80ml洗脫，收集甲醇洗脫液，濃縮至2ml，作為供試品溶液；另取黃芩苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以0.5％羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以2-4∶2-4∶1比例的甲苯-甲酸乙酯-甲酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)；C、取膽酸對(duì)照品，加乙醇制成每1ml含1.0mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取B項(xiàng)下的供試品溶液和上述對(duì)照品溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一以0.5％羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以1.5-2.5∶1.5-2.5∶1比例的氯仿-乙醚-冰醋酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％磷鉬酸乙醇溶液，105℃烘數(shù)分鐘；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)。
8.如權(quán)利要求7所述的一種治療小兒肺熱咳嗽口服液的鑒別方法，其特征在于該方法為以下鑒別方法中的一種或幾種A、取口服液30ml，加5％硫酸溶液15ml，加熱回流1小時(shí)，放冷，用乙醚萃取3次，每次25ml，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)?5ml熱乙醇使溶解，放冷，加入中性氧化鋁3g，攪勻，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為供試品溶液；另取甘草次酸對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以0.5％羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以20∶7∶0.5比例的苯-醋酸乙酯-冰醋酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％磷鉬酸乙醇溶液，在105℃烘約5分鐘。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)；B、取口服液60ml，加入D101型大孔吸附樹(shù)脂柱上，用水100ml洗脫，棄去洗脫液，再用甲醇80ml洗脫，收集甲醇洗脫液，濃縮至2ml，作為供試品溶液；另取黃芩苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以0.5％羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以3∶3∶1比例的甲苯-甲酸乙酯-甲酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵乙醇溶液；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)；C、取膽酸對(duì)照品，加乙醇制成每1ml含1.0mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取B項(xiàng)下的供試品溶液和上述對(duì)照品溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一以0.5％羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以2∶2∶1比例的氯仿-乙醚-冰醋酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％磷鉬酸乙醇溶液，105℃烘數(shù)分鐘；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)。
9.一種治療小兒肺熱咳嗽口服液的含量測(cè)定方法，其特征在于該方法為用照高效液相色譜法對(duì)方中的有效成分大黃素、大黃酚之和進(jìn)行含量控制。
10.如權(quán)利要求9所述的一種治療小兒肺熱咳嗽口服液的含量測(cè)定方法，其特征在于該方法為用照高效液相色譜法測(cè)定，色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；77-85∶15-23比例的甲醇-0.1％磷酸溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm；理論板數(shù)按大黃素峰計(jì)算應(yīng)不低于1500；對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取大黃素、大黃酚對(duì)照品各5mg，置50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取該溶液3ml，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；供試品溶液的制備精密量取口服液25ml，置250ml燒瓶中，加20％-30％的硫酸溶液25ml，再加二氯甲烷50ml，水浴回流3-4小時(shí)，分取二氯甲烷液，酸液再加入二氯甲烷50ml，繼續(xù)回流2-4小時(shí)，分取二氯甲烷液；殘液加二氯甲烷洗滌3次，每次20ml，分取并合并上述二氯甲烷液，加水分次振蕩洗至中性，分取二氯甲烷液，回收至干。殘?jiān)蛹状既芙獠⒍ㄈ葜?5ml，作為供試品溶液；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
11.如權(quán)利要求10所述的一種治療小兒肺熱咳嗽口服液的含量測(cè)定方法，其特征在于該方法為用照高效液相色譜法測(cè)定，色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；77∶23比例的甲醇-0.1％磷酸溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm；理論板數(shù)按大黃素峰計(jì)算應(yīng)不低于1500；對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取大黃素、大黃酚對(duì)照品各5mg，置50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取該溶液3ml，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；供試品溶液的制備精密量取口服液25ml，置250ml燒瓶中，加25％的硫酸溶液25ml，再加二氯甲烷50ml，水浴回流4小時(shí)，分取二氯甲烷液，酸液再加入二氯甲烷50ml，繼續(xù)回流3小時(shí)，分取二氯甲烷液；殘液加二氯甲烷洗滌3次，每次20ml，分取并合并上述二氯甲烷液，加水分次振蕩洗至中性，分取二氯甲烷液，回收至干；殘?jiān)蛹状既芙獠⒍ㄈ葜?5ml，作為供試品溶液；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
12.一種治療小兒肺熱咳嗽口服液的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于該方法為鑒別A、取口服液30ml，加5％硫酸溶液15ml，加熱回流0.5-1.5小時(shí)，放冷，用乙醚萃取2-4次，每次25ml，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)?5ml熱乙醇使溶解，放冷，加入中性氧化鋁2-4g，攪勻，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為供試品溶液；另取甘草次酸對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以0.5％羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以15-24∶6-8∶0.4-0.6比例的苯-醋酸乙酯-冰醋酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％磷鉬酸乙醇溶液，在105℃烘約4-6分鐘。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)；B、取口服液60ml，加入D101型大孔吸附樹(shù)脂柱上，用水100ml洗脫，棄去洗脫液，再用甲醇80ml洗脫，收集甲醇洗脫液，濃縮至2ml，作為供試品溶液。另取黃芩苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以0.5％羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以2-4∶2-4∶1比例的甲苯-甲酸乙酯-甲酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵乙醇溶液；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)；C、取膽酸對(duì)照品，加乙醇制成每1ml含1.0mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取B項(xiàng)下的供試品溶液和上述對(duì)照品溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一以0.5％羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以1.5-2.5∶1.5-2.5∶1比例的氯仿-乙醚-冰醋酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％磷鉬酸乙醇溶液，105℃烘數(shù)分鐘；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)；含量測(cè)定用照高效液相色譜法測(cè)定，色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；77-85∶15-23比例的甲醇-0.1％磷酸溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm；理論板數(shù)按大黃素峰計(jì)算應(yīng)不低于1500；對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取大黃素、大黃酚對(duì)照品各5mg，置50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取該溶液3ml，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；供試品溶液的制備精密量取口服液25ml，置250ml燒瓶中，加20％-30％的硫酸溶液25ml，再加二氯甲烷50ml，水浴回流3-4小時(shí)，分取二氯甲烷液，酸液再加入二氯甲烷50ml，繼續(xù)回流2-4小時(shí)，分取二氯甲烷液；殘液加二氯甲烷洗滌3次，每次20ml，分取并合并上述二氯甲烷液，加水分次振蕩洗至中性，分取二氯甲烷液，回收至干。殘?jiān)蛹状既芙獠⒍ㄈ葜?5ml，作為供試品溶液；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
13.如權(quán)利要求12所述的一種治療小兒肺熱咳嗽口服液的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于該方法為鑒別A、取口服液30ml，加5％硫酸溶液15ml，加熱回流1小時(shí)，放冷，用乙醚萃取3次，每次25ml，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)?5ml熱乙醇使溶解，放冷，加入中性氧化鋁3g，攪勻，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為供試品溶液；另取甘草次酸對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以0.5％羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以20∶7∶0.5比例的苯-醋酸乙酯-冰醋酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％磷鉬酸乙醇溶液，在105℃烘約5分鐘；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)；B、取口服液60ml，加入D101型大孔吸附樹(shù)脂柱上，用水100ml洗脫，棄去洗脫液，再用甲醇80ml洗脫，收集甲醇洗脫液，濃縮至2ml，作為供試品溶液；另取黃芩苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以0.5％羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以3∶3∶1比例的甲苯-甲酸乙酯-甲酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以2％三氯化鐵乙醇溶液；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)；C、取膽酸對(duì)照品，加乙醇制成每1ml含1.0mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取B項(xiàng)下的供試品溶液和上述對(duì)照品溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一以0.5％羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以2∶2∶1比例的氯仿-乙醚-冰醋酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％磷鉬酸乙醇溶液，105℃烘數(shù)分鐘。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯相同顏色的斑點(diǎn)；含量測(cè)定照高效液相色譜法測(cè)定，色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；77∶23比例的甲醇-0.1％磷酸溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm；理論板數(shù)按大黃素峰計(jì)算應(yīng)不低于1500；對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取大黃素、大黃酚對(duì)照品各5mg，置50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取該溶液3ml，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；供試品溶液的制備精密量取口服液25ml，置250ml燒瓶中，加25％的硫酸溶液25ml，再加二氯甲烷50ml，水浴回流4小時(shí)，分取二氯甲烷液，酸液再加入二氯甲烷50ml，繼續(xù)回流3小時(shí)，分取二氯甲烷液。殘液加二氯甲烷洗滌3次，每次20ml，分取并合并上述二氯甲烷液，加水分次振蕩洗至中性，分取二氯甲烷液，回收至干。殘?jiān)蛹状既芙獠⒍ㄈ葜?5ml，作為供試品溶液；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種治療小兒肺熱咳嗽口服液(金振口服液)的質(zhì)量檢測(cè)方法。該方法以對(duì)金振口服液的鑒別及含量測(cè)定作為金振口服液的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，包括對(duì)甘草中甘草次酸、黃芩中黃芩苷、人工牛黃中膽酸成分采用薄層色譜法進(jìn)行鑒別以及對(duì)大黃中大黃素和大黃酚成分進(jìn)行含量測(cè)定。該方法能?chē)?yán)格控制金振口服液質(zhì)量。
文檔編號(hào)G01N30/90GK1558229SQ20041000091
公開(kāi)日2004年12月29日 申請(qǐng)日期2004年1月14日 優(yōu)先權(quán)日2004年1月14日
發(fā)明者肖偉, 戴翔翎, 凌婭, 沈靜, 張孝法, 徐漣明, 肖 偉 申請(qǐng)人:江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司