本技術(shù)涉及分子生物學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種全人源抗體或其抗原結(jié)合片段及其用途。

背景技術(shù)：

1、心血管疾病(cvd)是導(dǎo)致人類(lèi)死亡的首要原因，居全球疾病負(fù)擔(dān)首位。急性心肌梗死(ami)是chd的嚴(yán)重類(lèi)型，當(dāng)冠狀動(dòng)脈急性和持續(xù)性缺血缺氧時(shí)引起心肌細(xì)胞壞死，是致死致殘的主要原因。目前的治療方法首要是盡快開(kāi)通梗死相關(guān)動(dòng)脈，恢復(fù)心肌的血液灌注，根據(jù)患者情況選擇溶栓、經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療(pci)或溶栓后pci。pci手術(shù)的普及改善了ami的治療，再灌注有效地阻止了心肌細(xì)胞進(jìn)一步壞死，但是仍然面臨兩方面問(wèn)題：首先，ami患者發(fā)病后平均到醫(yī)院時(shí)間為5.5小時(shí)，那么阻塞血管再通通常在心梗發(fā)生6小時(shí)之后，而這段時(shí)間心肌細(xì)胞由于缺血缺氧已經(jīng)發(fā)生了壞死，但是尚無(wú)早期救治藥物，可以降低心肌梗死面積；其次，血管再通之后也會(huì)引發(fā)再灌注損傷(i/r)，加之再通前部分心肌已經(jīng)發(fā)生壞死，心功能下降乃至心力衰竭的發(fā)生仍是一個(gè)突出問(wèn)題，目前的臨床藥物應(yīng)用無(wú)法改善這一狀況。

2、ami造成的心臟損傷，是多種細(xì)胞和病理過(guò)程協(xié)同作用的結(jié)果，例如無(wú)論是ami還是i/r都會(huì)引起大量炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中抑制炎癥可減輕心梗后損傷、改善心功能。然而，針對(duì)心?；颊叩亩囗?xiàng)抗炎治療臨床試驗(yàn)均以失敗告終，這提示廣譜的炎癥抑制在缺血性心臟疾病的治療中是不可取的，需要開(kāi)發(fā)更具特異性和針對(duì)性的靶點(diǎn)。

3、s100a8和s100a9(也被稱為mrp8和mrp14)屬于鈣結(jié)合蛋白s100家族。人s100a8蛋白由98個(gè)氨基酸組成，分子量10.8kd；s100a9由113個(gè)氨基酸組成，分子量13.2kd，二者可以形成異源二聚體，異源四聚體，寡聚體，主要以二聚體形式為主，同時(shí)各自分子又可以形成同源聚體形式。由于同源二聚體的穩(wěn)定性較差，在病理生理狀態(tài)下通常以異源二聚體、四聚體的形式發(fā)揮生物學(xué)功能。s100a8/s100a9主要由中性粒細(xì)胞表達(dá)，約占其胞漿蛋白的40％。當(dāng)炎癥細(xì)胞在受到應(yīng)激時(shí)，s100a8/s100a9被作為警報(bào)素釋放，作用于toll樣受體4(tlr4)和晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(rage)，調(diào)控免疫炎癥反應(yīng)。

4、我們前期發(fā)表的工作(circulation,2019,140(9):751-764)利用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序發(fā)現(xiàn)，小鼠心肌缺血后早期變化最明顯的是炎癥反應(yīng)相關(guān)基因，而炎癥相關(guān)的差異基因里s100a8和s100a9的升高最為顯著，在i/r后6小時(shí)達(dá)到峰值，隨后逐步下降，7天基本恢復(fù)基礎(chǔ)水平。其后多個(gè)團(tuán)隊(duì)的研究(circulation,2020,141(13):1080-1094；eur?heart?j,2019,40(32):2713-2723)均驗(yàn)證了我們結(jié)果：在心肌梗死的早期s100a8和s100a9即被大量釋放。同時(shí)，我們也觀察到ami患者pci術(shù)后1天血清s100a8/a9水平顯著升高，且s100a8/a9水平升高與主要不良心血管事件(mace)的發(fā)生率相關(guān)，是ami患者長(zhǎng)期mace發(fā)生率的獨(dú)立預(yù)測(cè)因素(circulation,2019,140(9):751-764)。此外，我們還證明了s100a8/a9作用在心肌細(xì)胞tlr4，調(diào)控線粒體功能障礙從而介導(dǎo)心肌損傷(circulation,2019,140(9):751-764)。s100a9基因敲除、s100a9中和抗體或抑制劑均可以減輕小鼠心?；蛐募∪毖?再灌注后心臟損傷和不良重塑，改善心功能(circulation,2019,140(9):751-764；circulation,2020,141(13):1080-1094；eur?heart?j,2019,40(32):2713-2723)。以上均證實(shí)s100a8/a9是心梗及心肌缺血/再灌注損傷早期干預(yù)治療的優(yōu)越靶點(diǎn)，相比于廣譜抗炎治療更具特異性和有效性。

5、然而將s100a8/a9這一靶點(diǎn)應(yīng)用于臨床治療依然有眾多問(wèn)題需要解決：首先，人和小鼠s100a8/a9的同源性不高，既往研究中應(yīng)用的針對(duì)小鼠的中和抗體難以作用于人體，并且現(xiàn)有的商品化s100a9抗體也沒(méi)有全人源或人源化單克隆抗體；其次，s100a8/a9主要以異源二聚體、異源四聚體的形式發(fā)揮致心臟損傷的作用，既往以s100a9為靶點(diǎn)的中和抗體不能特異性針對(duì)s100a8/a9二聚體、四聚體。因此，我們需要開(kāi)發(fā)針對(duì)人源s100a8/a9的中和抗體，并進(jìn)行在體治療效果的驗(yàn)證。

6、需要注意的是，在此部分中描述的方法不一定是之前已經(jīng)設(shè)想到或采用的方法。除非另有指明，否則不應(yīng)假定此部分中描述的任何方法僅因其包括在此部分中就被認(rèn)為是現(xiàn)有技術(shù)。類(lèi)似地，除非另有指明，否則此部分中提及的問(wèn)題不應(yīng)認(rèn)為在任何現(xiàn)有技術(shù)中已被公認(rèn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本技術(shù)提供了一種全人源抗體或其抗原結(jié)合片段，其根據(jù)kabat系統(tǒng)定義的互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)具有如下所示的氨基酸序列：重鏈cdr1的氨基酸序列包括gx1tx2sx3x4x5x6x7，其中x1為f或y，x2為f、h、y或w，x3為s或d，x4為y、h或f，x5為a或v，x6為m、i或l，x7為s或a；重鏈cdr2的氨基酸序列包括aisgx8ggsx9x10yx11x12svkg，其中x8為s或h，x9為t或h，x10為y、w或f，x11為a、h、v或l，x12為d、a或h；重鏈cdr3的氨基酸序列包括kx13rpx14rx15x16dx17，x13為y、f或h，x14為s、t或h，x15為v或a，x16為f、y、h或w，x17為s、a、f、c、h或y；輕鏈cdr1的氨基酸序列包括sgdalx18dkx19x20x21，其中x18為g或h，x19為y或f，x20為a或m，x21為s或a；輕鏈cdr2的氨基酸序列包括x22x23x24x25rx26x27，其中x22為e或q，x23為d、h或q，x24為s、a或h，x25為k、h、r、p或n，x26為p、q、d或n，x27為s、d、y或w；以及輕鏈cdr3的氨基酸序列包括x28sndx29dx30x31w，其中x28為q或d，x29為a、v、i或l，x30為s或a，x31為v、y、w或r。

2、根據(jù)本技術(shù)的一種實(shí)施方式，還提供了一種多核苷酸，所述多核苷酸編碼本技術(shù)所述的抗體或其抗原結(jié)合片段。

3、根據(jù)本技術(shù)的一種實(shí)施方式，還提供了一種重組載體，所述重組載體包含本技術(shù)所述的多核苷酸。

4、根據(jù)本技術(shù)的一種實(shí)施方式，還提供了一種宿主細(xì)胞，所述宿主細(xì)胞包含本技術(shù)所述的多核苷酸、和/或本技術(shù)所述的重組載體。

5、根據(jù)本技術(shù)的一種實(shí)施方式，還提供了一種藥物組合物，所述藥物組合物包括本技術(shù)所述的抗體或其抗原結(jié)合片段。

6、根據(jù)本技術(shù)的一種實(shí)施方式，還提供了一種試劑盒，所述試劑盒包括本技術(shù)所述的抗體或其抗原結(jié)合片段。

7、根據(jù)本技術(shù)的一種實(shí)施方式，還提供了一種多特異性抗體，其包含本技術(shù)所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其還包含一個(gè)或多個(gè)與其他抗原特異性結(jié)合的第二抗體或其抗原結(jié)合片段。

8、根據(jù)本技術(shù)的一種實(shí)施方式，還提供了一種抗體偶聯(lián)物，其包含本技術(shù)所述的抗體或抗原結(jié)合片段和第二功能性結(jié)構(gòu)，所述第二功能性結(jié)構(gòu)選自fc、放射性同位素、延長(zhǎng)半衰期的結(jié)構(gòu)部分、可檢測(cè)標(biāo)記物和藥物。

9、根據(jù)本技術(shù)的一種實(shí)施方式，還提供了本技術(shù)所述的抗體或其抗原結(jié)合片段、本技術(shù)所述的多特異性抗體、和/或本技術(shù)所述的抗體偶聯(lián)物在制備用于檢測(cè)、緩解、預(yù)防或治療疾病的藥物、試劑、試劑盒中的用途。

10、根據(jù)本技術(shù)的一種實(shí)施方式，還提供了本技術(shù)所述的抗體或其抗原結(jié)合片段、本技術(shù)所述的多特異性抗體、和/或本技術(shù)所述的抗體偶聯(lián)物在制備用于降低心肌梗死面積、改善心臟功能、或改善微循環(huán)功能的藥物、試劑、試劑盒中的用途。

11、根據(jù)本技術(shù)的一種實(shí)施方式，還提供了一種用于檢測(cè)、緩解、預(yù)防或治療疾病的方法，所述方法包括向有此需要的受試者施用本技術(shù)所述的抗體或其抗原結(jié)合片段、本技術(shù)所述的藥物組合物、本技術(shù)所述的試劑盒、本技術(shù)所述的多特異性抗體、和/或本技術(shù)所述的抗體偶聯(lián)物。

12、根據(jù)本技術(shù)的一種實(shí)施方式，還提供了一種降低心肌梗死面積、改善心臟功能、或改善微循環(huán)功能的方法，所述方法包括向有此需要的受試者施用本技術(shù)所述的抗體或其抗原結(jié)合片段、本技術(shù)所述的藥物組合物、本技術(shù)所述的試劑盒、本技術(shù)所述的多特異性抗體、和/或本技術(shù)所述的抗體偶聯(lián)物。

13、本技術(shù)提供的是一種全人源單克隆抗體，其可以阻斷s100a8/a9異源二聚體的生物學(xué)功能，。本技術(shù)中利用已構(gòu)建的s100a8和s100a9人源化小鼠模型驗(yàn)證了抗體對(duì)缺血性心臟疾病的在體治療效果，例如：mi和i/r急性期應(yīng)用該抗體，可以抑制靶分子引起的心臟損傷，減少心肌梗死面積及后期纖維化程度，并改善實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的心功能。因此，本技術(shù)提供的抗體或抗原結(jié)合片段有望開(kāi)發(fā)成一種臨床藥物，以期減小ami患者的心臟梗死面積，降低心力衰竭的發(fā)生，使ami患者終身受益，具有重要的臨床意義和開(kāi)發(fā)價(jià)值。

14、應(yīng)當(dāng)理解，本部分所描述的內(nèi)容并非旨在標(biāo)識(shí)本技術(shù)的實(shí)施例的關(guān)鍵或重要特征，也不用于限制本技術(shù)的范圍。本技術(shù)的其它特征將通過(guò)以下的說(shuō)明書(shū)而變得容易理解。