本發(fā)明涉及化合物制備與應(yīng)用，特別涉及一種地奧司明抗原及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、地奧司明，又稱香葉木苷，通用名為diosmin。cas登記號:520-27-4；分子式為：c28h32o15；相對分子量為：608.54。結(jié)構(gòu)式如下：

2、

3、地奧司明最早在1925年從玄參屬植物scrophularianodosa中被分離出來，也可以從天然產(chǎn)物橙皮苷經(jīng)半合成方法得到。它是一種典型的黃酮類化合物，大量存在于柑橘類水果中。在臨床上主要用于治療以下疾?。红o脈淋巴功能不全相關(guān)癥狀以及急性痔發(fā)作癥狀。在其他的一些研究中，地奧司明也顯示出抗氧化、抗炎、護(hù)肝、調(diào)節(jié)血糖、緩解神經(jīng)疼痛的作用。

4、目前，地奧司明提取方法主要有超聲提取法、索氏提取法、響應(yīng)面法優(yōu)化超聲提取、固相分散萃取法、高速逆流色譜法等。地奧司明含量分析方法有高效液相色譜法(hplc)、超高效液相色譜(uplc)、rp-hplc法、hplc-esi-ms/ms法、hplc-dad，其靈敏度高，準(zhǔn)確性好，但是這幾種檢測方法需要使用昂貴的儀器設(shè)備，檢測費(fèi)用高，耗時長，不適用于現(xiàn)場快速檢測。與儀器分析法相比，免疫分析法具有快速、簡便、實(shí)時、易于進(jìn)行現(xiàn)場檢測、樣品前處理簡單、靈敏度高、選擇性強(qiáng)、適合于高通量分析等優(yōu)點(diǎn)，而且還能大幅度降低檢測成本。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、基于上述目的，本申請的目的在于提供一種用于檢測地奧司明的抗原以及通過該抗原得到的抗體，使其可以通過免疫分析法快速檢測待測樣品中的地奧司明，具有快速、簡便、實(shí)時、易于進(jìn)行現(xiàn)場檢測、樣品前處理簡單、靈敏度高、選擇性強(qiáng)、適合于高通量分析等優(yōu)點(diǎn)，同時而且還能大幅度降低檢測成本。

2、為此，本申請的第一技術(shù)方案公開了一種地奧司明抗原，其具有如a1或a2所示的結(jié)構(gòu)通式：

3、

4、其中，protein為載體蛋白；

5、所示式a1中，n為1-6的整數(shù)；

6、所述式a2中，a為1-6的整數(shù)，b為0-6的整數(shù)，x為芳香環(huán)、芳香雜環(huán)化合物中的一種。

7、優(yōu)選的，所述載體蛋白為牛血清蛋白、卵清蛋白、血藍(lán)蛋白中的一種。

8、本申請的第二技術(shù)方案公開了上述地奧司明抗原的制備方法，其包括如下步驟：

9、s1.將香葉木素與含酯基化合物反應(yīng)得到中間體-1；

10、s2.將中間體-1與堿進(jìn)行水解反應(yīng)得到地奧司明半抗原；

11、s3.地奧司明半抗原與n-羥基琥珀酰亞胺、縮合劑經(jīng)偶聯(lián)反應(yīng)得到中間體-2；

12、s4.中間體-2與載體蛋白經(jīng)偶聯(lián)反應(yīng)得到地奧司明抗原；

13、其中，所述香葉木素具有如b所示結(jié)構(gòu)式：

14、

15、所述含酯基化合物具有如c1或c2所示結(jié)構(gòu)式：

16、y-(ch2)n-coo-(ch2)m-ch3?(c1)；

17、y-(ch2)a-x-(ch2)b-coo-(ch2)m-ch3?(c2)；

18、其中，x為芳香環(huán)、芳香雜環(huán)化合物中的一種，y為cl、br和i基團(tuán)中的一種，n為0-6的整數(shù)，m為0-6的整數(shù)，a為1-6的整數(shù)，b為0-6的整數(shù)；

19、所述中間體-1具有如d1或d2所示結(jié)構(gòu)式：

20、

21、所述地奧司明半抗原具有如e1或e2所示結(jié)構(gòu)式：

22、

23、所述中間體-2具有如f1或f2所示結(jié)構(gòu)式：

24、

25、進(jìn)一步的，s1所述反應(yīng)中，香葉木素與含酯基化合物的摩爾比為1：(0.1-10)，反應(yīng)溫度為0-100℃，反應(yīng)時間為6-48h。

26、進(jìn)一步的，s3所述偶聯(lián)反應(yīng)以二環(huán)己基碳二亞胺或1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽為縮合劑，其中，地奧司明半抗原、n-羥基琥珀酰亞胺和縮合劑的摩爾比為1：(1-5)：(1-5)；反應(yīng)溫度為0-50℃，反應(yīng)時間為4-24h。

27、進(jìn)一步的，s4所述偶聯(lián)反應(yīng)中，中間體-2與載體蛋白的摩爾比為1：(50-30)，反應(yīng)溫度為0-50℃，反應(yīng)時間為8-36h，ph為5-9。

28、以及，根據(jù)上述制備方法制備得到的地奧司明抗原，其具有如a1或a2所示結(jié)構(gòu)式。

29、本申請的第三技術(shù)方案公開了一種通過上述地奧司明抗原作為免疫原得到的抗體。

30、本申請的第四技術(shù)方案公開了上述地奧司明抗體在檢測地奧司明中的應(yīng)用。

31、本申請的第五技術(shù)方案公開了上述地奧司明抗體在制備用于檢測地奧司明的試劑盒中的應(yīng)用。

32、本申請的有益效果為：本申請通過制備得到地奧司明抗原，以及通過該抗原得到地奧司明抗體，再將該抗原和抗體用于環(huán)境中地奧司明的檢測，相較于現(xiàn)有技術(shù)，本申請可以方便、快捷地獲得地奧司明抗原，合成步驟簡潔明了、合成成本低，效果好。通過地奧司明抗原進(jìn)行免疫，可以得到的特異性好、靈敏度高的地奧司明抗體，可簡單、方便、快速的檢測進(jìn)行地奧司明檢測，降低檢測成本。

技術(shù)特征：

1.地奧司明抗原，其具有如a1或a2所示的結(jié)構(gòu)通式：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述地奧司明抗原，其特征在于，所述載體蛋白為牛血清蛋白、卵清蛋白、血藍(lán)蛋白中的一種。

3.一種如權(quán)利要求1或2所述地奧司明抗原的制備方法，其包括如下步驟：

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述制備方法，其特征在于，s1所述反應(yīng)中，香葉木素與含酯基化合物的摩爾比為1：(0.1-10)，反應(yīng)溫度為0-100℃，反應(yīng)時間為6-48h。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述制備方法，其特征在于，s3所述偶聯(lián)反應(yīng)以二環(huán)己基碳二亞胺或1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽為縮合劑，其中，地奧司明半抗原、n-羥基琥珀酰亞胺和縮合劑的摩爾比為1：(1-5)：

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述制備方法，其特征在于，s4所述偶聯(lián)反應(yīng)中，中間體-2與載體蛋白的摩爾比為1：(50-30)，反應(yīng)溫度為0-50℃，反應(yīng)時間為8-36h，ph為5-9。

7.根據(jù)權(quán)利要求3-6所述任一所述制備方法制備得到的地奧司明抗原，其具有如權(quán)利要求1，a1或a2所示結(jié)構(gòu)式。

8.一種通過權(quán)利要求1-2或權(quán)利要求7任一所述地奧司明抗原作為免疫原得到的地奧司明抗體。

9.如權(quán)利要求8所述地奧司明抗體在檢測地奧司明中的應(yīng)用。

10.如權(quán)利要求8所述地奧司明抗體在制備用于檢測地奧司明的試劑盒中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及化合物制備與應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種地奧司明抗原及其制備方法與應(yīng)用。通過制備得到地奧司明抗原，以及通過該抗原得到地奧司明抗體，再將該抗原和抗體用于環(huán)境中地奧司明的檢測，相較于現(xiàn)有技術(shù)，本申請可以方便、快捷地獲得地奧司明抗原，合成步驟簡潔明了、合成成本低，效果好。通過地奧司明抗原進(jìn)行免疫，可以得到的特異性好、靈敏度高的地奧司明抗體，可簡單、方便、快速的檢測進(jìn)行地奧司明檢測，降低檢測成本。

技術(shù)研發(fā)人員：張耀海,崔永亮,劉一凡,王成秋,趙其陽,陳愛華,何悅,李晶
受保護(hù)的技術(shù)使用者：西南大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/30