技術(shù)特征：

1.一種偽狂犬病病毒gd重組蛋白，其氨基酸序列為序列表中序列1所示的氨基酸序列。

2.權(quán)利要求1所述偽狂犬病病毒gd重組蛋白的編碼基因，其核苷酸序列為序列表中序列2所示的核苷酸序列。

3.權(quán)利要求1所述的偽狂犬病病毒gd重組蛋白的真核表達載體，其特征在于，將權(quán)利要求2所述的偽狂犬病病毒gd基因和偽狂犬病病毒gg信號肽的編碼基因克隆到出發(fā)載體pcdna3.1中，獲得表達偽狂犬病病毒gd基因的重組真核表達質(zhì)粒；其中，偽狂犬病病毒gg信號肽氨基酸序列如序列3所示，偽狂犬病病毒gg信號肽核苷酸序列如序列4所示。

4.權(quán)利要求1所述的偽狂犬病病毒gd重組蛋白的制備方法，其特征在于，將權(quán)利要求3所述偽狂犬病病毒gd重組蛋白真核表達載體轉(zhuǎn)染hek293哺乳動物細胞，通過培養(yǎng)、純化后得到偽狂犬病病毒gd蛋白。

5.一種偽狂犬病重組亞單位疫苗的制備方法，其特征在于，將權(quán)利要求4獲得的偽狂犬病病毒gd重組蛋白與藥學(xué)上可接受的佐劑充分混勻后得到偽狂犬病重組亞單位疫苗。

6.權(quán)利要求1所述或權(quán)利要求3或4制備獲得的偽狂犬病病毒gd重組蛋白在制備預(yù)防或治療豬偽狂犬病亞單位疫苗中的應(yīng)用或者在制備檢測診斷偽狂犬病病毒的試劑盒中的應(yīng)用。

7.一種偽狂犬病病毒gd蛋白抗體酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，包括酶聯(lián)反應(yīng)板、酶標二抗、其中所述酶聯(lián)反應(yīng)板包被有權(quán)利要求1所述的偽狂犬病病毒gd蛋白。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，其特征在于：所述酶聯(lián)反應(yīng)板的獲得方法是將所述偽狂犬病病毒gd蛋白溶于100μl的ph9.6的碳酸鹽溶液，然后加到96孔聚苯乙烯酶聯(lián)反應(yīng)板，每孔0.1μg偽狂犬病病毒gd蛋白，2～8℃下放置8～12小時，使包被抗原與酶聯(lián)反應(yīng)板充分結(jié)合，然后按照300μl/孔加入含有10mg/ml酪蛋白ph7.4的pbs緩沖液，37℃封閉處理2～3小時，甩干后，待酶聯(lián)反應(yīng)板干燥后4℃密封保存。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，其特征在于：、陽性對照血清和陰性對照血清；所述陽性對照血清為豬偽狂犬滅活疫苗免疫后采集的豬血清；所述陰性對照血清為無特定病原體(spf)豬血清。

10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，其特征在于：所述酶標二抗為辣根過氧化物酶標記兔抗豬igg抗體；

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種偽狂犬病病毒變異株gD蛋白及其制備方法和應(yīng)用。所述偽狂犬病病毒變異株gD蛋白，其氨基酸序列如序列表中序列1所示，核苷酸序列如序列表中序列2所示。該偽狂犬病病毒變異株gD蛋白用于間接ELISA，可檢測豬血液中是否存在偽狂犬病病毒變異株gD蛋白抗體，檢測簡便快速，特異性強，靈敏度高，準確可靠。該偽狂犬病病毒變異株gD蛋白可制備成亞單位疫苗，免疫豬后可誘導(dǎo)產(chǎn)生高水平抗偽狂犬病病毒變異株中和抗體，具有免疫原性強、安全性號且與當前流行毒株相匹配的優(yōu)點，同時能夠通過鑒別診斷區(qū)分疫苗免疫和野毒感染動物，可用于預(yù)防和控制偽狂犬病的傳播和流行。本發(fā)明的偽狂犬病病毒變異株gD蛋白既可用于偽狂犬病的檢測診斷又可用于偽狂犬病的預(yù)防，在開發(fā)偽狂犬病病毒新型診斷試劑和亞單位疫苗中具有較好的生產(chǎn)應(yīng)用前景。

技術(shù)研發(fā)人員：李玲,張艷賓,李欣,劉新月,王洪海,張欣,高曉藝,肖東,李靜,潘貝貝,于之清,王飛,肖進
受保護的技術(shù)使用者：中牧實業(yè)股份有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/30