本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及一種工程化環(huán)狀rna?circh19及其在制備抗腦膠質(zhì)瘤的藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、自2012年來(lái)，隨著高通量測(cè)序技術(shù)及生物信息學(xué)算法的發(fā)展，研究者在生物內(nèi)發(fā)現(xiàn)了大量存在的環(huán)狀的rna分子(circular?rna，circrna)。環(huán)狀rna在人類疾病及發(fā)病等多個(gè)生命進(jìn)程中發(fā)揮重要的作用，環(huán)狀rna的功能方式也存在多樣化，比如環(huán)狀rna可以和微小mirna及蛋白分子發(fā)生互作，作為mirna的海綿及和蛋白質(zhì)形成復(fù)合物發(fā)揮調(diào)控作用，另外生物體內(nèi)天然的環(huán)狀rna還可以作為翻譯的模版直接翻譯功能性蛋白。

2、環(huán)狀rna沒(méi)有暴露的5’和3’末端，可抵抗rna核酸外切酶切割，與線性mrna比，環(huán)狀rna閉合的結(jié)構(gòu)使其在生物體內(nèi)穩(wěn)定，經(jīng)過(guò)工程化元件序列設(shè)計(jì)可使環(huán)狀rna翻譯蛋白能力大幅度提高，使得環(huán)狀rna作為抗原表達(dá)載體開(kāi)發(fā)疾病治療性疫苗成為可能。

3、1984年pachnis等在小鼠胎肝cdna文庫(kù)中克隆發(fā)現(xiàn)了h19基因(v?pachnis.etc,doi:10.1073/pnas.81.17.5523,pmid:6206499,pnas)；1990年brannan等第一次報(bào)道h19不能翻譯蛋白，以非編碼rna的形式發(fā)揮發(fā)揮生物學(xué)功能。由于h19產(chǎn)物長(zhǎng)度超過(guò)了200nt，故將其定義為lncrna(c?i?brannan.etc,doi:10.1128/mcb.10.1.28-36.1990,pmid:1688465,mol?cell?biol)。lncrna?h19是最早發(fā)現(xiàn)的長(zhǎng)鏈非編碼rna之一，在機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育、腫瘤發(fā)生、發(fā)展等多種生物學(xué)功能方面發(fā)揮重要作用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、一方面，本發(fā)明提供了一種重組核酸分子，包含：

2、調(diào)節(jié)元件序列，和

3、編碼序列；

4、所述編碼序列編碼如seq?id?no：18所示的氨基酸序列。

5、在一些實(shí)施方案中，所述調(diào)節(jié)元件序列包含：內(nèi)含子自剪接核酶環(huán)化序列，內(nèi)含子序列，3’utr序列，ires序列，間隔序列，和/或kozac序列。

6、在一些實(shí)施方案中，所述內(nèi)含子自剪接核酶環(huán)化序列包含如seq?id?no：8，和/或seq?id?no：17所示的核苷酸序列；在一些實(shí)施方案中，所述內(nèi)含子序列包含如seq?id?no：9，和/或seq?id?no：16所示的核苷酸序列；在一些實(shí)施方案中，所述3’utr序列包含如seqid?no：15所示的核苷酸序列；在一些實(shí)施方案中，所述ires序列包含如seq?id?no：12所示的核苷酸序列；在一些實(shí)施方案中，所述間隔序列包含如seq?id?no：10所示的核苷酸序列；在一些實(shí)施方案中，所述kozac序列包含如seq?id?no：13所示的核苷酸序列；在一些實(shí)施方案中，所述編碼序列包含如seq?id?no：14所示的核苷酸序列。

7、一方面，本發(fā)明提供了一種重組核酸分子，所述重組核酸分子5’端到3’端依次包含可操作連接的以下序列：

8、第一內(nèi)含子自剪接核酶環(huán)化序列，5’內(nèi)含子序列，間隔序列，ires序列，kozac序列，編碼序列，3’utr序列，3’內(nèi)含子序列，第二內(nèi)含子自剪接核酶環(huán)化序列；所述編碼序列編碼如seq?id?no：18所示的氨基酸序列。

9、在一些實(shí)施方案中，所述間隔序列和ires序列之間還包括酶切位點(diǎn)序列。通過(guò)引入酶切位點(diǎn)序列，使得不同元件或同一元件的不同序列之間的替換成為可能。

10、在一些實(shí)施方案中，所述酶切位點(diǎn)為xbai、ecori、bamhi、nhei、hind?iii酶切位點(diǎn)中的一種或多種；在一些實(shí)施方案中，所述酶切位點(diǎn)的序列包含如seq?id?no：11所示的核苷酸序列。

11、在一些實(shí)施方案中，所述重組核酸分子的序列如seq?id?no：4所示。

12、一方面，本發(fā)明提供了一種重組表達(dá)載體，包含所述的重組核酸分子。

13、一方面，本發(fā)明提供了一種環(huán)狀rna，由所述的重組核酸分子，或所述的重組表達(dá)載體環(huán)化形成。

14、在一些實(shí)施方案中，所述環(huán)狀rna包含間隔序列，酶切位點(diǎn)序列，編碼區(qū)序列，ires序列，kozac序列，編碼序列，和3’utr序列。

15、在一些實(shí)施方案中，所述環(huán)狀rna的序列如seq?id?no：7所示。

16、一方面，本發(fā)明提供了所述的重組核酸分子，所述的重組表達(dá)載體，或所述的環(huán)狀rna在制備或作為疫苗中的應(yīng)用。

17、一方面，本發(fā)明提供了一種疫苗，包括所述的重組核酸分子，所述的重組表達(dá)載體，或所述的環(huán)狀rna。

18、在一些實(shí)施方案中，所述疫苗為包含所述的環(huán)狀rna的脂質(zhì)納米顆粒復(fù)合物。

19、一方面，本發(fā)明提供了所述的環(huán)狀rna，或所述的疫苗在制備治療腦膠質(zhì)瘤的藥物中的應(yīng)用。

技術(shù)特征：

1.一種重組核酸分子，其特征在于，包含：

2.如權(quán)利要求1所述的重組核酸分子，其特征在于，所述調(diào)節(jié)元件序列包含：內(nèi)含子自剪接核酶環(huán)化序列，內(nèi)含子序列，3’utr序列，ires序列，間隔序列，和/或kozac序列；

3.一種重組核酸分子，其特征在于，所述重組核酸分子5’端到3’端依次包含可操作連接的以下序列：

4.如權(quán)利要求3所述的重組核酸分子，其特征在于，所述間隔序列和ires序列之間還包括酶切位點(diǎn)序列；

5.如權(quán)利要求1-4任一所述的重組核酸分子，其特征在于，所述重組核酸分子的序列如seq?id?no：4所示。

6.一種重組表達(dá)載體，其特征在于，包含如權(quán)利要求1-5任一所述的重組核酸分子。

7.一種環(huán)狀rna，其特征在于，由權(quán)利要求1-5任一所述的重組核酸分子，或權(quán)利要求6所述的重組表達(dá)載體環(huán)化形成；

8.如權(quán)利要求1-5任一所述的重組核酸分子，權(quán)利要求6所述的重組表達(dá)載體，或權(quán)利要求7所述的環(huán)狀rna在制備或作為疫苗中的應(yīng)用。

9.一種疫苗，其包括權(quán)利要求1-5任一所述的重組核酸分子，權(quán)利要求6所述的重組表達(dá)載體，或權(quán)利要求7所述的環(huán)狀rna；

10.如權(quán)利要求7所述的環(huán)狀rna，或權(quán)利要求9所述的疫苗在制備預(yù)防和/或治療腦膠質(zhì)瘤的藥物中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及一種工程化環(huán)狀RNA?CircH19及其在制備抗腦膠質(zhì)瘤的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明提供的工程化環(huán)狀RNA?CircH19，成功環(huán)化后可作為疫苗的免疫原成分通過(guò)肌肉注射，可有效激活機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)，并使得機(jī)體生命延長(zhǎng)，同時(shí)縮小腦質(zhì)瘤的體積，為腦膠質(zhì)瘤的精準(zhǔn)治療提供了有效的方案，在腦膠質(zhì)瘤治療方面有著廣泛的應(yīng)用前景。

技術(shù)研發(fā)人員：張弩,陳俊駒,張茂雷,黃努努
受保護(hù)的技術(shù)使用者：中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/30