本發(fā)明涉及一種從羊小腸中提取肝素鈉的方法，屬于肝素鈉制備技術領域。

背景技術：

肝素鈉是廣泛存在于動物器官(如：豬、牛的小腸粘膜、肝、胰臟及肺組織等)的一種葡萄胺聚糖，和大多數(shù)粘多糖一樣在體內作為蛋白質結合的復合物存在，這種復合物的抗凝活性隨著蛋白質的去除而增加。肝素納及其衍生物藥品是經典的抗凝、抗血栓藥物，在臨床上廣泛用于治療腎臟病患者的滲血，急性心肌梗塞癥，防止血栓形成，腦血管疾病，皮膚病，清除腎病形成的尿毒以及配合治療暴發(fā)性流腦敗血癥，腎炎等，同時，肝素鈉在降血脂和免疫等方面也有較好的作用，而且隨著對其逐漸深入了解，其醫(yī)療用途日益擴大，市場供不應求。

目前提取肝素鈉的方法主要有三種，第一種高錳酸鉀和過氧化氫兩步氧化法存在二氧化錳吸食肝素，使肝素活性損失大，回收率低；過濾困難，生產周期長，色澤不好，質量差等缺點；第二種過氧化氫分次加入的二次氧化法工藝，因產品色澤較好，目前被普遍采用，但該工藝主要存在二次氧化氫處理對肝素結構造成破壞，難以得到較高效價的精品肝素產品；第三種酶解結合氧化法工藝其存在雜質比較多，純度低。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術問題：針對目前提取肝素鈉的氧化法和酶解等方法制備的肝素鈉活性損失大，難以得到較高效價的肝素成品，且回收率低，純度低的問題，提供了一種從羊小腸中利用發(fā)酵，曝氣，煮沸，超濾膜濃縮干燥制備得肝素鈉的方法，本發(fā)明制備的肝素鈉其效價可達155～170u/mg，回收率達到97％以上。

為解決上述技術問題，本發(fā)明采用如下所述的技術方案是：

（1）取新鮮羊小腸，向其內部灌入清水，并用腸衣機擠壓出小腸粘膜，將小腸粘膜置于粉碎機中粉碎成70～80目粘膜顆粒，再按固液質量比1:5，將厭氧池中被處理的生活污水與粘膜顆粒進行攪拌混合，直至均勻。

（2）待混合均勻后，向其加入質量分數(shù)為30％的氫氧化鈉溶液調節(jié)其pH至8.5～9.0，并將調節(jié)后的混合濁液置于發(fā)酵罐中進行發(fā)酵處理，控制發(fā)酵溫度為35～38℃，發(fā)酵3～4天。

（3）待發(fā)酵完成后，向發(fā)酵罐中充入氧氣，充入量的為發(fā)酵罐容積的2/3，并在充氧的同時對發(fā)酵罐中的混合濁液進行攪拌，攪拌30～45min后，靜置1～2h，收集發(fā)酵罐中上浮物，并用去離子水對其沖洗2～3次后，置于烘箱中烘干，得干燥上浮物。

（4）按固液質量比1:3，將干燥上浮物與草酰乙酸進行混合，置于水浴鍋中進行加熱直至煮沸，待煮沸后，對其進行保溫1～2h，再靜置冷卻至室溫。

（5）待上述靜置冷卻至室溫后，向其中加入混合物質量10～15％的硫酸銨，攪拌至均勻后，進行超濾，控制混合物流速為5～6m/s，壓力為0.5～1.0MPa，收集超濾液，所述的超濾膜截留分子量為1000～2000。

（6）將上述收集的超濾液經沉淀，脫水，干燥，粉碎即可制備得肝素鈉。

本發(fā)明的應用方法：將上述制備的從羊小腸中提取的肝素鈉按照配制，過濾，灌封，滅菌，包裝等常規(guī)注射劑制備工藝制成供皮下注射的注射劑，來作為抗凝、抗血栓藥物，其用量為成人每天一次30～40mg，經測試，治療效果好抗凝血因子a的值為165～170IU/mg，抗凝血酶值為0.6～0.7IU/mg。

本發(fā)明與其他方法相比，有益技術效果是：

（1）本發(fā)明制備的肝素鈉其效價可達155～170u/mg，回收率達到97％以上；

（2）本發(fā)明制備的肝素鈉所需原材料成本，制備步驟簡單。

具體實施方式

首先取新鮮羊小腸，向其內部灌入清水，并用腸衣機擠壓出小腸粘膜，將小腸粘膜置于粉碎機中粉碎成70～80目粘膜顆粒，再按固液質量比1:5，將厭氧池中被處理的生活污水與粘膜顆粒進行攪拌混合，直至均勻，待混合均勻后，向其加入質量分數(shù)為30％的氫氧化鈉溶液調節(jié)其pH至8.5～9.0，并將調節(jié)后的混合濁液置于發(fā)酵罐中進行發(fā)酵處理，控制發(fā)酵溫度為35～38℃，發(fā)酵3～4天；待發(fā)酵完成后，向發(fā)酵罐中充入氧氣，充入量的為發(fā)酵罐容積的2/3，并在充氧的同時對發(fā)酵罐中的混合濁液進行攪拌，攪拌30～45min后，靜置1～2h，收集發(fā)酵罐中上浮物，并用去離子水對其沖洗2～3次后，置于烘箱中烘干，得干燥上浮物；按固液質量比1:3，將干燥上浮物與草酰乙酸進行混合，置于水浴鍋中進行加熱直至煮沸，待煮沸后，對其進行保溫1～2h，再靜置冷卻至室溫；待上述靜置冷卻至室溫后，向其中加入混合物質量10～15％的硫酸銨，攪拌至均勻后，進行超濾，控制混合物流速為5～6m/s，壓力為0.5～1.0MPa，收集超濾液，所述的超濾膜截留分子量為1000～2000；最后將上述收集的超濾液經沉淀，脫水，干燥，粉碎即可制備得肝素鈉。

實例1

首先取新鮮羊小腸，向其內部灌入清水，并用腸衣機擠壓出小腸粘膜，將小腸粘膜置于粉碎機中粉碎成80目粘膜顆粒，再按固液質量比1:5，將厭氧池中被處理的生活污水與粘膜顆粒進行攪拌混合，直至均勻，待混合均勻后，向其加入質量分數(shù)為30％的氫氧化鈉溶液調節(jié)其pH至9.0，并將調節(jié)后的混合濁液置于發(fā)酵罐中進行發(fā)酵處理，控制發(fā)酵溫度為38℃，發(fā)酵4天；待發(fā)酵完成后，向發(fā)酵罐中充入氧氣，充入量的為發(fā)酵罐容積的2/3，并在充氧的同時對發(fā)酵罐中的混合濁液進行攪拌，攪拌45min后，靜置2h，收集發(fā)酵罐中上浮物，并用去離子水對其沖洗3次后，置于烘箱中烘干，得干燥上浮物；按固液質量比1:3，將干燥上浮物與草酰乙酸進行混合，置于水浴鍋中進行加熱直至煮沸，待煮沸后，對其進行保溫2h，再靜置冷卻至室溫；待上述靜置冷卻至室溫后，向其中加入混合物質量15％的硫酸銨，攪拌至均勻后，進行超濾，控制混合物流速為6m/s，壓力為0.5～1.0MPa，收集超濾液，所述的超濾膜截留分子量為2000；最后將上述收集的超濾液經沉淀，脫水，干燥，粉碎即可制備得肝素鈉。

將上述制備的從羊小腸中提取的肝素鈉按照配制，過濾，灌封，滅菌，包裝等常規(guī)注射劑制備工藝制成供皮下注射的注射劑，來作為抗凝、抗血栓藥物，其用量為成人每天一次40mg，經測試，治療效果好抗凝血因子a的值為170IU/mg，抗凝血酶值為0.7IU/mg。

實例2

首先取新鮮羊小腸，向其內部灌入清水，并用腸衣機擠壓出小腸粘膜，將小腸粘膜置于粉碎機中粉碎成70目粘膜顆粒，再按固液質量比1:5，將厭氧池中被處理的生活污水與粘膜顆粒進行攪拌混合，直至均勻，待混合均勻后，向其加入質量分數(shù)為30％的氫氧化鈉溶液調節(jié)其pH至8.5，并將調節(jié)后的混合濁液置于發(fā)酵罐中進行發(fā)酵處理，控制發(fā)酵溫度為35℃，發(fā)酵3天；待發(fā)酵完成后，向發(fā)酵罐中充入氧氣，充入量的為發(fā)酵罐容積的2/3，并在充氧的同時對發(fā)酵罐中的混合濁液進行攪拌，攪拌30min后，靜置1h，收集發(fā)酵罐中上浮物，并用去離子水對其沖洗2次后，置于烘箱中烘干，得干燥上浮物；按固液質量比1:3，將干燥上浮物與草酰乙酸進行混合，置于水浴鍋中進行加熱直至煮沸，待煮沸后，對其進行保溫1h，再靜置冷卻至室溫；待上述靜置冷卻至室溫后，向其中加入混合物質量10％的硫酸銨，攪拌至均勻后，進行超濾，控制混合物流速為5m/s，壓力為0.5MPa，收集超濾液，所述的超濾膜截留分子量為1000；最后將上述收集的超濾液經沉淀，脫水，干燥，粉碎即可制備得肝素鈉。

將上述制備的從羊小腸中提取的肝素鈉按照配制，過濾，灌封，滅菌，包裝等常規(guī)注射劑制備工藝制成供皮下注射的注射劑，來作為抗凝、抗血栓藥物，其用量為成人每天一次30mg，經測試，治療效果好抗凝血因子a的值為165IU/mg，抗凝血酶值為0.6IU/mg。

實例3

首先取新鮮羊小腸，向其內部灌入清水，并用腸衣機擠壓出小腸粘膜，將小腸粘膜置于粉碎機中粉碎成75目粘膜顆粒，再按固液質量比1:5，將厭氧池中被處理的生活污水與粘膜顆粒進行攪拌混合，直至均勻，待混合均勻后，向其加入質量分數(shù)為30％的氫氧化鈉溶液調節(jié)其pH至8.7，并將調節(jié)后的混合濁液置于發(fā)酵罐中進行發(fā)酵處理，控制發(fā)酵溫度為37℃，發(fā)酵3天；待發(fā)酵完成后，向發(fā)酵罐中充入氧氣，充入量的為發(fā)酵罐容積的2/3，并在充氧的同時對發(fā)酵罐中的混合濁液進行攪拌，攪拌40min后，靜置2h，收集發(fā)酵罐中上浮物，并用去離子水對其沖洗2次后，置于烘箱中烘干，得干燥上浮物；按固液質量比1:3，將干燥上浮物與草酰乙酸進行混合，置于水浴鍋中進行加熱直至煮沸，待煮沸后，對其進行保溫2h，再靜置冷卻至室溫；待上述靜置冷卻至室溫后，向其中加入混合物質量12％的硫酸銨，攪拌至均勻后，進行超濾，控制混合物流速為5m/s，壓力為0.7MPa，收集超濾液，所述的超濾膜截留分子量為2000；最后將上述收集的超濾液經沉淀，脫水，干燥，粉碎即可制備得肝素鈉。

將上述制備的從羊小腸中提取的肝素鈉按照配制，過濾，灌封，滅菌，包裝等常規(guī)注射劑制備工藝制成供皮下注射的注射劑，來作為抗凝、抗血栓藥物，其用量為成人每天一次35mg，經測試，治療效果好抗凝血因子a的值為167IU/mg，抗凝血酶值為0.65IU/mg。